Tema de Investigacin para Estudios de Doctorado

Alumno: Mario Alberto Ynga Durand

Comit tutorial: Dr. Aldo Arturo Resndiz Albor

Dra. Ivonne Maciel Arciniega Martnez

Dr. Rafael Campos Rodrguez

Dr. Sal Rojas Hernndez

Dra. Judith del Carmen Pacheco Yepez

Efectos Inmunoreguladores de la Administracin Sublingual de Lisados Bacterianos en un Modelo

Murino de alergia
Introduccin

El Asma es la patologa respiratoria baja ms frecuente en el mundo con un impacto en la calidad de vida y costo econmico-social muy
alto. Es considerada una enfermedad inflamatoria crnica caracterizada por hiperreactividad bronquial, sobreproduccin de moco y
remodelacin de la va area. Existen guas internacionales para el tratamiento del asma, sin embargo, a pesar de su implantacin existe
un grupo importante no logran un adecuado control de la sintomatologa. Se ha propuesto la administracin de lisados bacterianos como
inmunoregulador, reportndose su utilidad en infecciones respiratorias recurrentes, enfermedades alrgicas e inmunodeficiencias. A
pesar de su amplio uso, no existen datos respecto al mecanismo efector de esta intervencin, ni acerca de la importancia del sitio de
induccin. Esta brecha de conocimiento impide la formulacin de intervenciones optimizadas o la estandarizacin de los productos
teraputicos.

Hiptesis

La administracin de lisados bacterianos disminuir la inflamacin respiratoria inducida por alergia.

Objetivos

1. Caracterizar el efecto de los lisados bacterianos en un modelo murino de va respiratoria alrgica.

2. Establecer la diferencia entre vas de administracin del lisado bacteriano (SL vs ORAL)
3. Determinar el rol de la IgA en la regulacin inducida por lisados bacterianos en la mucosa

Enfoque Experimental

Tras la induccin del modelo murino de asma se realizar la intervencin con el lisado bacteriano por va intragstrica vs sublingual y se
comparar los efectos inmunolgicos e histolgicos en varios niveles

Lisado Bacteriano y Modelo Murino de Asma Alrgico

Se obtendr una concentracin final de 0.5 g/ml a partir de 200 millones de organismos de cada uno de las siguientes bacterias:
Streptococcus pneumoniae, Branhamella catarrhalis, Klebsiella pneumoniae, y Micrococcus spp. y 100 millones de organismos de
Haemophilus influenzae y Streptococcus spp. (S. anhemoliticus y S. viridans). Se realizar la sensibilizacin de ratones BALB/C (seis
semanas de edad) con ovoalbmina (OVA) adyuvado con Hidrxido de Aluminio a travs de dos aplicaciones intraperitoneales en el da
0 y 14. Entre los das 25 a 34 se inducir la inflamacin de la va area mediante nebulizaciones con OVA al 1% por 30 minutos diarios.
Treinta minutos antes de las nebulizaciones con OVA, se administrar nebulizaciones con solucin salina (control) o budesonida
(intervencin estndar).

Inmunizacin Sublingual e Intragstrica

Se anestesiar a los ratones con ketamina intraperitoneal y se administrar el lisado bacteriano a diferentes dosis (o solucin salina
como placebo) en el espacio sublingual en una solucin de carmelosa al 3% por espacio de dos horas todos los das entre el da 25 y
34. La inmunizacin intragstrica se realizar a travs de una sonda directamente en el espacio gstrico a diferentes dosis entre el da
25 y 34.

Evaluacin del Estado inflamatorio de la Va Area y Sensibilizacin Sistmica

Se realizar lavado bronco alveolar al final de la intervencin para anlisis de la composicin celular y perfil citocnico. Se analizar
cambios patolgicos tisulares al examinar mediante microscopia ptica la presencia de clulas inflamatorias y fibrosis.

Medicin de IgA en la va area

Se medir la IgA total, IgA secretora y especfica para OVA y el Lisado Bacteriano en el lquido broncoalveolar. Se examinar los cortes
histopatolgicos con microscopia de inmunofluorescencia en bsqueda de IgA.