MATERIALES Y METODOS.

MATERIAL BIOLOGICO. En la investigacin se utilizo como material

biolgico las hojas de naranja, limon, t, recolectado del Departamento Cusco,
Prov. La convencion, Dist. Quillabamba.

Hojas de t, limon, naranja

MUESTREO DE LAS HOJAS. El muestreo se realizo Departamento Cusco,

Prov. La convencion, Dist. Quillabamba. En horas de la maana.

PREPARACION DE LA MUESTRA.
Una vez colectada la planta se llev a secar a medio ambiente siendo la
temperatura promedio de 20C a 25C aproximadamente.
Durante el periodo de secado se tuvo especial cuidado para evitar la
proliferacin de microorganismos, luego se seleccion hojas enteras y los que
estn en buenas condiciones, y se someti a molienda cada una de las
muestras. Para una mejor extraccin de la planta algunos autores recomiendan
desmenuzar la materia vegetal con el fin de tener mayor superficie de contacto
con el solvente.

METODO DE EXTRACCION DE LA RUTINA.

La extraccin de la rutina de las hojas de t, naranja, limn, se realiz por
mtodo extraccin por coccin, utilizando como solvente agua, este mtodo se
utiliza por que la rutina tiene la propiedad de disolverse en caliente y en frio
tiene la propiedad de precipitar, uego se filtr con papel Whatman N1
Para esto antes se ha desengrasado las muestras con un solvente apolar
(bencina) por maceracion, para que tenga un buen contacto la muestra con
agua o para una extraccin completa de la rutina.
 ASPECTOS FISICOS DE LOS EXTRACTOS.
EXTRACTO COLOR APARIENCIA
T mbar cristalino amorfo
Naranja amarillo cristalino amorfo
Limn amarillo amorfo

ANALISIS FITOQUIMICO CUALITATIVO.

Shinoda: Se toma 0.5 mL (10 gotas) de la muestra, se agrega pequeos trozos

de magnesio metlico y dos gotas de HCI concentrado. La coloracin rojiza nos
indica la presencia de flavonoides. Los flavonoides al ser tratados con HCI y
magnesio dan complejos coloreados (de rojo plido a oscuro).

HO
OH

O
HO
HO
OH O RUTINOSIDO

O
HO Mg
++
Mg HCl
HO + +
O RUTINOSIDO O RUTINOSIDO
O
HO
O

OH
HO
COMPLEJO ROJO OSCURO

Resultado de prueba de shinoda

PORCENTAJE DE EXTRACCION.
De cuarenta gramos de muestra se obtuvo:
9.2331 mg de rutina de las hojas de T
2.0820 mg de rutina de las hojas de naranja
ANALISIS DE CROMATOGRAFIA
Posteriormente se le elabor el extracto metanlico, una cromatografa de capa
fina, lo cual permitir determinar el grado de pureza del compuesto.

Corra una CCD utilizando las siguientes condiciones:

- Adsorbente: cromatofolios de slica gel
- Dimensin: 4 x 10 cm
- Volumen aplicado: 5 uL (10 mg del extracto 1 en mL de metanol)
- El sistema de solventes empleado como fase mvil fue
- Revelador: luz UV
Se observaron manchas color naranja reveladas al UV.
con Rf = para hojas de t y naranja es:
Rf = 0.8 hojas de t
Rf = 0.88 hojas de naranja

Datos de cromatograficos

Rf = 0,75 respectivamente, coincidentes con los Rf obtenidos con el estndar

bobliograficos
UV= COLOR NARANJA
UV. = COLOR AMARILLO

Cmara de cromatografica
 Resultados de cromatografa

ANALISIS UV

Espectros de absorcin disueltas en metanol de hojas de T y Naranja

Rutina (3, 3, 4, 5, 7-pentahidroxiflavona 3--ramnosilglucsido)

DATOS TEORICOS DE ESPECTRO UV.

Espectro UV- VIS DE HOJAS DE NARANJA
ESPECTRO UV-VIS DE LAS HOJAS DE T

REACTIVOS DE CORRIMIENTO
1) MeONa
2) a- AlCl3
b-AlCl3/HCl
3) a-CH3COONa
b-H3BO3
Espectro en NaOMe
Hidroxilo en C3 se desplaza la Banda I de 45-65 nm y
baja su intensidad.
Hidroxilo en C4 se desplaza la banda I de 45-65 pero
su intensidad no decrece.
Hidroxilo en ambas posiciones, se decompone el
espectro.

Espectro en AlCl3y HCl

El AlCl3 forma quelatos con los hidroxilos adyacentes al
carbonilo tanto en C5 como C3.
El AlCl3 tambin forma quelatos con hidroxilos en orto,
el que es inestable en medio cido .
Flavonoles > 5OH flavona > ortodiOH
>3OHdihidroflavonol
Espectro en Acetato de Sodio y H3BO3
FORMACION DE UN QUELATO CON LOS ORTO
DIHIDROXILOS
El AcONa es una base dbil
El agregado de H3BO3 a la solucin Bsica tiene dos
posibles efectos:
PROTONACIN DEL OH EN C7
Discusin.
El anlisis de los espectros UV, permiti definir las caractersticas estructurales
siguientes: