FACULTAD DE INGENERA QUMICA Y METALRGICA

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERA QUMICA

Ing. Modesto L. Vega Tang
EJERCICIO BIOTECNOLOGICO 05.

Un grupo de investigadores biotecnlogos alimentarios vienen estudiando el efecto de la

concentracin del sustrato polihidroxivalerato (de 2000 unidades promedio) un sustrato utilizado
en la produccin de PHA.
Una simplificacin en los experimentos cinticos consiste en medir la velocidad inicial (Vo). Si el
tiempo es suficientemente corto la disminucin de sustrato ser mnima y sta podr considerarse,
por tanto, casi constante. Este comportamiento es caracterstico de la mayora de las enzimas y fue
estudiado por Michaelis y Menten en 1913. En la cintica enzimtica se distinguen tres fases:
Para una concentracin baja de sustrato, la velocidad de la reaccin es directamente
proporcional a la concentracin del sustrato (relacin lineal), la cintica es de primer orden.
Para una concentracin alta de sustrato, la velocidad de la reaccin se hace prcticamente
constante e independiente de la concentracin de sustrato, la cintica se considera de orden cero.
Para concentraciones de sustrato intermedias la velocidad del proceso deja de ser lineal, y a esta
zona se la denomina de cintica mixta.
La velocidad de una reaccin catalizada (V) nos indica la cantidad de sustrato consumido, o
producto formado, por unidad de tiempo. En el Sistema Internacional se designa por U (unidad
de actividad enzimtica) y corresponde a los moles de sustrato consumidos en 1 min, o bien a los
moles de producto formado en 1 min.

U M S/min M P/min
La curva que expresa la relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad inicial tiene la
misma forma para la mayora de las enzimas; se trata de una hiprbola rectangular, cuya expresin
algebraica viene dada por la ecuacin de Michaelis-Menten, donde muestra la relacin entre la
velocidad inicial (Vo) y la concentracin de sustrato, S.

A baja [S], es decir si Km >>> [S], el trmino Km+[S] podemos aproximarlo a la Km, quedando un
expresin del tipo: V = k [S]
A altas [S], es decir, Km<<<<[S], despreciaramos Km frente a [S], con lo que V = Vmax (que sera
constante); la cintica es de orden cero y se habra alcanzado la saturacin por sustrato, como
ocurre en la fase final.
El tramo intermedio, en el que la [S] Km correspondiente a una cintica de orden mixto y se
ajusta a la ecuacin de Michaelis.

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Fig. 01. Cintica enzimtica. Modelo Michaelis-Menten
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PROBLEMAS
Los investigadores trabajaron en un biorreactor que tiene la capacidad de 10 litros y con
refrigeracin instalada para alimentar el sustrato a valores bajos y medios.
Presentaron el siguiente cuadro resumen de sus trabajos:

Alimentacin de sustratos de baja concentracin

N Concentrac de Veloc inicial Observaciones
Experim sustrato (mol/min)
(moles/min)
1 0.003 0.0000014 Inicio a 40C
2 0.0025 0.0000015 Mantenim a 40C
3 0.002 0.00000165 Mantenim a 40C
4 0.0014 0.00000175 Mantenim a 40C
5 0.0011 0.00000183 Mantenim a 40C
6 0.001 0.00000186 Mantenim a 40.2C
7 0.0009 0.00000188 Mantenim a 39.8C
8 0.0009 0.0000016 Mantenim a 40C
9 0.0008 0.0000014 Mantenim a 39.8C
10 0.0008 0.000001 Mantenim a 40C
Alimentacin de sustratos considerados medianamente altos
N Concentrac de Veloc inicial Observaciones
Experim sustrato (mol/min)
(moles/min)
1 0.028 0.00001 Inicio a 40C
2 0.0245 0.000013 Mantenim a 40C
3 0.0198 0.000015 Mantenim a 40C
4 0.015 0.000016 Mantenim a 40C
5 0.012 0.0000168 Mantenim a 40C
6 0.01 0.0000172 Mantenim a 39.9C
7 0.0095 0.000014 Mantenim a 40C
8 0.0095 0.00001 Mantenim a 40.1C
9 0.009 0.000003 Mantenim a 40.2C
10 0.009 0.000002 Mantenim a 40C

Determinar el valor de la Constante de Michaelis (Km), el cual permite conocer en forma

matemtica el comportamiento del crecimiento enzimtico.
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PARTE II

Pero existen mtodos grficos ms fiables que facilitan el clculo preciso de la Km y la Vmax. Los
clculos se hacen en base a transformaciones matemticas de la ecuacin de Michaelis; una de las
expresiones ms utilizadas es la representacin de Lineweaver-Burk (Figura 2).
En esta forma de clculo se representa 1/V frente a 1/S, esto es la inversa de la velocidad frente a
la inversa de la concentracin (de ah que tambin la representacin sea conocida como de dobles
inversos)
As se obtiene una recta cuya interseccin con el eje X es 1/Km y con el eje Y es 1/Vmax, siendo la
pendiente Km/Vmax.

Fig. 02. Cintica enzimtica.

Representacin de Lineweaver-Burk.

Con este mtodo determinar la constante de Michaelis y el porcentaje de error, considerando

este mtodo grfico de mayor exactitud.