MEDIOS DE

CULTIVO
 REQUERIMIENTOS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Requerimientos energticos y no energticos
Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios
artificiales de laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le
proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y
multiplicacin. De acuerdo con esto, siempre se requerir una
fuente de energa y una fuente no energtica como son las sales,
factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energa son
necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energticos son los nutrientes de ese medio
de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su
crecimiento. Van a ser fuentes de energa en un medio de cultivo,
al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrgeno, y
fuentes no energticas pueden ser una fuente de fsforo,
determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el zinc, el
magnesio, etc.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

Entre los requerimientos energticos de los medios

de cultivo tenemos:
1. Fuente de Carbono
2. Fuente de Nitrgeno
 REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
1. Fuentes de carbono
Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto est ligado al
metabolismo energtico de la especie microbial; por ejemplo:
Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como
cido actico, alcohol, citrato sdico, etc.
En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono
corresponde a azcares en forma de mono o disacridos, como glucosa,
lactosa, maltosa, etc.,
Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azcares ms complejos
para obtener energa, como es el caso del almidn.
 REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS

1. Fuentes de carbono
Existen tambin bacterias capaces de utilizar el
gas carbnico CO2 hecho que es caracterstico de
las bacterias fotosintetizantes y quimiolittrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a expensas
del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos
como fuente de energa: Ejemplo: Cladosporium.
Por ltimo, existen especies como Pseudomonas,
que pueden utilizar como fuente de energa un
gran nmero de componentes hidrocarbonados
diferentes.
En general, conocer el tipo de azcar utilizado por
cada bacteria es muy til para su identificacin
bioqumica y consiguiente clasificacin
taxonmica.
 REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrgeno
Es una fuente bastante menos energtica que la fuente de carbono pero es
necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo tambin energa.
Esta fuente de nitrgeno la van a formar las protenas, pptidos o
aminocidos. Pueden presentarse como protenas completas, que sera el
caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la actividad
proteoltica o gelatinasa del microorganismo problema, o incluso protenas
an ms complejas, como es el caso de los extractos de carne, sales de
amonio, etc.
Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrgeno que
corresponden a pptidos o polipptidos dependiendo de su complejidad
pero en cualquier caso son tambin protenas que estn parcialmente
hidrolizadas, aunque no se las deba considerar como tal.
 REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y son
excelentes fuentes de nitrgeno.
Entre las ms frecuentes y conocidas se
encuentran los extractos de levadura que
son extractos hidrosolubles preparados a
partir de un lisado de levadura que se utiliza
en muchos medios de cultivo.
El bio-Thione, es una denominacin
comercial correspondiente a una peptona
ppsica de carne empleada para la
preparacin, por ejemplo, del medio lquido
Sabouraud.
Tiene una alto contenido de azufre y de ah
que en los medios de cultivo que la
contengan se pueda utilizar para investigar
la produccin de sulfuro de hidrgeno (SH2)
por parte de la bacteria problema.
 REQUERIMIENTO
S ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
La caseina corresponde a una peptona
sometida al proceso de digestin cida muy
utilizada en muchos medios de cultivo, sobre
todo, en forma de peptona tripsica de caseina;
por ejemplo: para estudiar la formacin de
indol por parte de la bacteria debido al alto
contenido de triptfano que posee este tipo de
peptona.
Tambin es utilizada para estudiar la reduccin
de los nitratos e incluso para el cultivo de
algunos protozoos.
La peptona papanica de soja, es una fuente
de nitrgeno especialmente para hongos y
ciertos grmenes exigentes como en el caso
de las Neisserias.
Otra fuente de nitrgeno sera la utilizacin de
nitratos, nitrgeno orgnico, amoniaco, sales
de amonio, aminocidos, etc.
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS

Entre los requerimientos no energticos de los

medios de cultivo tenemos:
1. Fuente de azufre
2. Fuente de fsforo
3. Iones metlicos
4. Factores de crecimiento
5. Factores de arranque
6. Factores inhibidores
 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre lo
hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en forma de
tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a partir de algn
aminocido, ejemplo: metionina, cisteina, tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD

Agar TSI o KIA SIM XLD

 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
2. Fuente de fsforo
En general, las bacterias que utilizan el fsforo lo suelen hacer en
forma de fosfatos.
 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
3. Iones metlicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de
iones a concentraciones muy bajas. Por ej: el
Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
Tambin se encuentra otro tipo de iones metlicos a
Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento
microbiano y dependiendo de su concentracin
pueden inhibir el crecimiento de otros, como el
caso del sodio que a concentraciones altas inhibe el
crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite
el crecimiento de Staphylococous.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite
el crecimiento del Enterococus.
 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO

4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se
encuentran cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que an as no crecen en tales medios o, si lo hacen, es
muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta adems una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
s solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algn tipo de aminocido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases pricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, cido glutmico y cido nicotnico
para el crecimiento de Xanthomonas.
 AGAR CHOCOLATE

HAEMOPHYLLUS
El Agar Chocolate permite el desarrollo
de colonias hmedas, lisas y grises del
Haemophylus influenzae.
Este medio contiene hematina (factor
X) y est enriquecido con otros
cofactores, como el NAD (factor V),
que permite el desarrollo de este
microorganismo.
 AGAR SANGRE

BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en gotas de
mercurio brillantes es fcil de
apreciar.
 AGAR SANGRE

FLAVOBACTERIUM
Agar sangre enriquecido con
nitrgeno suplementario y vitaminas
del complejo B para el crecimiento
del Flavobacterium.
 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO

5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir
a la bacteria en estudio, salir de su
fase de latencia y comenzar su
fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energa glucosa que es utilizado
por las bacterias.
Un factor de arranque puede ser
una fuente no energtica como
algn in que estimule el
crecimiento.
 REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO

6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algn tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metablicos.
Los antibiticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sdica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento
bacteriano de los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy tiles para la identificacin y
tipificacin de pruebas bioqumicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
 AGAR MAC CONKEY

TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de cido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeas y
transparentes.
 AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

El medio EMB contiene

Eosina y azul de metileno
que son colorantes de anilina
y van a inhibir el crecimiento
de los microorganismos
Grampositivos, permitiendo
el crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan
la lactosa y/o sacarosa se
observan de un color
prpura. Las que no
fermentan lactosa ni sacarosa
se observan incoloras.
La Escherichia coli se
observa de color prpura y
con brillo metlico.
CLASIFICACION DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
 PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOS
DE CULTIVO

Existen muchos tipos distintos de medios de cultivo, as como

diferentes clasificaciones. De acuerdo a esto y segn criterios se
podran dividir:

1. SEGN SU PROPORCION EN AGUA

2. SEGN SU USO O UTILIZACIN

3. SEGN LA COMPOSICIN QUE PRESENTEN

4. SEGN SU PRESENTACIN
 MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU CONSISTENCIA

1. Medios slidos.

2. Medios lquidos.

3. Medios semislidos
 POR SU CONSISTENCIA

1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporcin en agar est
siempre por encima del 1.5% . Koch utiliz, en 1881, por primera
vez la gelatina para obtener un medio slido; posteriormente un
alumno suyo, Hesse, utilizara en su lugar agar. En la actualidad,
para la solidificacin de los medios es el agar el utilizado, ya que la
gelatina presenta el inconveniente de fundir a unos 24C, adems
existen en bacteriologa numerosas bacterias gelatinasa positiva
que destruiran tal medio.
La importancia, pues, de los medios slidos es muy grande, ya que
nos permite el aislamiento, purificacin y visualizacin de su
crecimiento en colonias, as como su posible identificacin a travs
de medios especficos y diferenciales de caracteres slidos,
elaboracin de antibiogramas, etc.
 POR SU CONSISTENCIA

1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfologa de las colonias y el tipo de
hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al
consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
 AGAR SANGRE

HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en
base a su propiedades hemoliticas en
agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos
da como un resultado un color
verdoso del medio slido que rodea
las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que
lisan los eritrocitos, produce un
aclaramiento del medio que rodea las
colonias (beta-hemolisis).
 AGAR SANGRE

Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares pertenecientes a
bacilos gramnegativos.
El otro morfotipo presenta
colonias blancas, pequeas,
enteras, tipicas de un
microorganismo grampositivo.
 AGAR SANGRE

Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes,
blancas pertenecientes a
Staphyloccous.
El otro tipo de colonias
puntiforme pertenecientes a
Streptococus.
 AGAR MUELLER HINTON

ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusin del
antibitico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formacin de halo alrededor
del antibitico) y/o
resistencia (crecimiento
alrededor del antibitico).
 POR SU CONSISTENCIA

2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que tambin se denominan caldos, no
contienen agar y su composicin, adems de agua suele contener
al menos una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas
ocasiones segn las caractersticas del medio, factores de
crecimiento, vitaminas, peptonas, ciertos aminocidos, etc. Son de
gran utilidad para la realizacin de recuentos bacteriolgicos por
turbidimetra, especialmente til en levaduras, para la realizacin de
inculos, para obtener productos metabolitos primarios o
secundarios, creados por los propios microorganismos como, por
ejemplo, antibiticos, cidos lcticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradacin de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la produccin de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formacin de cido y gas
 INDOL

La formacin de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo despues del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
El tubo de la derecha demuestra
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
 POR SU CONSISTENCIA

3. MEDIOS SEMISLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios lquidos y los slidos
donde su proporcin en agar suele ser inferior al 0.5% pero siempre
suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione una
consistencia semislida.
Son tiles para ciertas pruebas bioqumicas como por ejemplo, la
prueba de oxidacin- fermentacin, que permiter conocer el tipo de
metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Produccin de H2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Produccin de Indol y Ornitina.
 SIM

Tubo con medio para motilidad

y produccin de cido
sulfihidrico.
Los microorganismos mviles
muestran desarrollo difuso hacia
fuera de la lnea de siembra.
Los microorganismos inmviles
crecen solamente a lo largo de
la linea de siembra por puncin
exterior.
Se observa un color Negro
debido a la produccin de H2S
 O-F (Hugh Leifson)

Utilizacin oxidativa de la glucosa.

Dos tubos con el medio O-F.
El tubo de la derecha se encuentra
abierto a la atmsfera, mientras que el
de la izquierda se encuentra cubierto
con aceite mineral para evitar la
exposiicn con el oxgeno atmosfrico.
Solo se ve cido (amarillo) en la
porcin superior del tubo abierto,
indicando que el microorganismo es
capaz de oxidar la glucosa, pero no de
fermentarla.
 MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU PRESENTACION

1. Medios deshidratados o liofilizados.

2. Medios ya preparados:
A. Slidos en placa petri.
B. Slidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Lquidos en tubo.
D. Semislidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.
 POR SU PRESENTACION

1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal
cual y una vez en el laboratorio deben
ser preparados adicionando la cantidad
de agua correspondiente en
condiciones totalmente aspticas o una
vez preparados en estas condiciones lo
esterilizaramos en el autoclave. Su
composicin es muy variable y puede
ser de tipo bsico o ms complejo.
 POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas comerciales
presentando un determinado control de calidad y caractersticas
especficas adecuadas a cada tipo de cultivo. Este tipo de medios
pueden presentarse en forma de placas, en tubo, como formas
slidas, en frascos, como medios semislidos o lquidos, en
sistemas de doble fase, etc.
 POR SU PRESENTACION

A. Medios slidos en Placa Petri

Son medios slidos que ocupan una
superficie lo suficientemente grande
como para poder visualizar
perfectamente las colonias
microbianas (mucho mejor que en
tubo).
Estos medios se utilizan mucho para
obtener cultivos puros partiendo de
una colonia previamente aislada.
El sistema en placa es uno de los
medios que permite mejor el
aislamiento del microorganismos
que pueden crecer en l.
 POR SU PRESENTACION

B. Medios slidos en tubo

Los medios slidos en tubo corresponden a tubos:

B.1. Con agar inclinado

Este medio solidficado tiene por finalidad aumentar la
superficie donde se va a producir el crecimiento
microbiano una vez sembrado.
Las siembras se realizarn por estra.
Agar Citrato de Simmons
Agar Urea
Agar Manitol rojo fenol.
 POR SU PRESENTACION
B.2. Con agar semi-inclinado o Pico
de flauta
Estos tipos de medios son tiles para
observar el crecimiento aerobio
microbiano si se ha sembrado por estra,
el crecimiento anaerobio microbiano si se
ha sembrado por picadura (anaerobiosis
facultativa).
Agar KIA
Agar LIA
Tambin es til para la conservacin de
cepas, porque la desecacin es menor en
medios slidos en tubo que en las placas
petri.
 POR SU PRESENTACION
C. Medios lquidos en tubo
Estos medios no permiten
visualizar colonis pero tienen
muchas aplicaciones como, por
ejemplo, pruebas bioqumicas que
permiten:
La determinacin del Indol.
La reduccin de nitratos a nitritos
La fermentacin de la glucosa,
lactosa u otro azcar, etc.
Pueden servir para aumentar la
concentracin del microorganismo
inoculado, es decir, realizar un
inculo, y otras aplicaciones.
Estos medios no contienen en
 POR SU PRESENTACION
D. Medios semislidos en tubo
Se siembran por picadura y corresponden a un trmino medio entre
los lquidos y los slidos. Se utilizan en ciertas pruebas bioqumicas
como:
La prueba de la movilidad
La prueba de oxidacin-fermentacin o de Hugh-Leiffson.
 POR SU PRESENTACION
E. Medios de doble fase en frasco
Son frascos constituidos por una fase slida y otra
lquida, por ejemplo, para la determinacin rpida de
microorganismos en sangre. Ambas fases crecen en
el mismo medio y pueden tener un carcter aerobio o
anaerobio. Suelen contener obturadores de caucho
manteniendo completamente aislado el medio.
Medio de Ruiz Castaeda para el aislamiento de
Brucella.
Medio para Hemocultivo
 MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU USO O UTILIZACION

1. Medios para aislamiento.

A. Enriquecidos
B. Selectivos
C. Diferenciales

2. Medios para crecimiento general.

3. Medios para identificacin.

4. Medios para mantenimiento de cepas.

 POR SU USO O UTILIZACIN
1. MEDIOS PARA AISLAMIENTO
Son medios muy diversos pero con la particularidad comn de
poder obtener a partir de ellos colonias aisladas. Estos, segn sea
su composicin, se pueden a su vez dividir en:

A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les aade
ademas de los componentes bsicos, uno o varios elementos,
como por ejemplo casena soja, triptfano, etc., que facilitan el
crecimiento de algn tipo de microorganismo generalmente
exigentes, lo que nos permite aislar el microorganismo que
buscamos.
 POR SU USO O UTILIZACIN
B. Medios selectivos
Son medios en cuya composicin presentan algn componente o
componentes que van a impedir el crecimiento de algn tipo
bacteriano, estableciendo con ello una seleccin en el tipo de
microorganismo que s puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe
se caracteriza porque en su composicin aparece azida sdica
confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal componente
va impedir el crecimiento de todas las bacterias Gramnegativas,
permitiendo el crecimiento de algunas Grampositivas como
Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composicin sales
biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora
Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.
 POR SU USO O UTILIZACIN
C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas
propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen
componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias y, lo
que es ms caracterstico de este medio, presentan sustancias que
al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho
medio, dan una informacin suplementaria y especfica, es decir,
diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composicin
eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de los
Grampositivos y algunas Gramnegativas, facilitando el crecimineto
de la enterobacterias, que segn utilicen o no la lactosa darn lugar
a una coloracin caracterstica para cada tipo de microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser tambin selectivos y se usan
con fines de aislamiento e identificacin.
 POR SU USO O UTILIZACIN
2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERAL
Son medios ya sea en forma liquida o slida que sirven para el
cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su composicin va a
corresponder a una fuente de carbono, una fuente de nitrgeno,
sales y agua. Dentro de los medios generales ms empleados
tendramos el caldo comn, que est compuesto por extracto de
carne, peptona, glucosa, cloruro de sdico y agua.
 POR SU USO O UTILIZACIN
3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIN
Son medios que pueden tener las mismas caractersticas que los
diferenciales tanto, nos van a servir para identificar el crecimineto y
caractersticas de algn tipo de microorganismo.
Tambin podra corresponder a medios generales ms o menos
enriquecidos conalgn componente como, por ejemplo, peptona,
urea, glucosa, etc., hecho que nos va a servir para visualizar el tipo
de metabolismo microbiano, por ejemplo:
El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol +.
El medio urea para la ureasa +.
El caldo glucosado para saber la fermentacin de la glucosa.
Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el
microorganismo.
 MRVP (CALDO GLUCOSADO)

Permite investigar que ruta metablica ha

utilizado el microorganismo para consumir la
glucosa.
Si utiliza la va de fermentacin de los cidos el
pH resultante es menor de 4.4, y el
microorganismo ser Rojo de metilo (+) el cual
se va a evidenciar por el agregado del indicador
rojo de metilo y dar un color rojo (+) y
amarillo anaranjado (-).
Los microorganismos que utilizan la va de la
acetoina sern Voges Proskauer (+) y se
evidencian por un color rojo al cabo de los 10
minutos despus de agregar el KOH y el alfa-
naftol.
 INDOL

La formacin de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo despus del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
El tubo de la derecha demuestra
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
 UTILIZACION DE LA GLUCOSA

Tres tubos con caldo y con

tubos de Durham.
El tubo de la izquierda muestra
formacin de cido a partir de
glucosa (amarillo) y formacin
de gas..
El tubo del centro muestra
formacin de cido a partir de
glucosa (amarillo).
El tubo de la derecha es
negativo (rojo).
AGAR UREA
El tubo de la derecha demuestra
un color rojo, lo que indica una
reaccin positiva.
El tubo de la izquierda no
presenta viraje de color
 AGAR CITRATO DE SIMMONS

El tubo de arriba demuestra un

color verde y ausencia de
crecimiento.
El tubo de abajo muestra un
color azul, lo que indica una
reaccin positiva.
 AGAR KIA (KLIGER)

Muestra una serie de reacciones.

Pico de color amarillo indica
fermentacin de lactosa.
Fondo de color amarillo indica
fermentacin de glucosa.
Ruptura del agar y/o burbuja, indica
formacin de CO2.
Presencia de un color negro indica
produccin de H2S.
El pico rojo indica que no hay
fermentacin de lactosa.
El Pico rojo y fondo rojo indica que no
hay fermentacin de glucosa ni lactosa.
 POR SU USO O UTILIZACIN

4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.

Son medios que suelen tener los nutrientes necesarios para
mantener a las cepas vivas durante perodos de tiempo
relativamente largos mantenindose tales medios generalmente a
temperaturas lo suficientemente bajas en cada caso como para
impedir su crecimiento. Ejemplo, Leche descremada que congelada
se utiliza a menudo para mantener cepas durante meses.
 MEDIOS DE CULTIVO SEGN
LA COMPOSICION QUE PRESENTEN

1. Medios naturales.

2. Medios semisintticos.

3. Medios sintticos.

4. Medios complejos.
 POR SU COMPOSICIN QUE
PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
Son medios donde parte de su composicin
corresponde a extractos naturales como levadura,
malta, patata, sangre, leche, etc., a los que se
aaden constituyentes sintticos o qumicamente
definidos para el crecimiento bacteriano.
 POR SU COMPOSICIN QUE
PRESENTAN
1. MEDIOS NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgnicos e inorgnicos se
encuentran en la naturaleza, se suelen preparar
artesanalmente y, en general, pueden estar constituidos por
ciertos tejidos, lquidos orgnicos, etc., por ejemplo: la leche,
que constituye un medio natural de conservacin y cultivo
favorable para numerosas bacterias. Se suele utilizar en
forma de leche simple descremada, leche tornasolada y leche
con azul de metileno. Otros medios naturales son el huevo
entero, clara o la yema, o incluso la patata, que es
ampliamente utilizada en bacteriologa para el aislamiento de
muchos hongos.
 POR SU COMPOSICIN QUE
PRESENTAN
3. MEDIOS SINTETICOS
Corresponden a estructuras sintticas ms o menos puras y
qumicamente definidas, que estn o pueden estar disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas de forma que se obtenga
una solucin adecuada para permitir el crecimiento de
microorganismo que se desee.
Estos medios sintticos son los ms utilizados en bacteriologa y, en
general. Su uso puede ser para aislamiento, identificacin,
crecimiento, determinacin, ensayo, mantenimiento, etc. Siempre
debern contener en su composicin los siguientes elementos:
Una fuente de Carbono o azcar.
Una fuente de nitrgeno en forma inorgnica como iones NO -3, NH+4, o
en forma orgnica, como peptona, aminocidos, aminas, etc.
Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.
Factores de crecimiento.
Todo medio sinttico puede presentar una complejidad muy variable
 POR SU COMPOSICIN QUE
PRESENTAN
4. MEDIOS COMPLEJOS
Son los primeros que se utilizaron en bacteriologa, aunque en la
actualidad su uso est ms restringido. Sin embargo, en
parasitologa y virologa se utilizan habitualmente. Se preparan de
forma compleja a partir de tejidos animales y ms raramente de
vegetales. Su composicin no est exactamente definida como
sucede en los medios sintticos, es decir, no es rigurosamente
constante, y sus materias primas suelen ser carne de msculo, de
hgado, de corazn, clara o yema de huevo, azcares, peptonas,
etc.
Medio de Lowenstein Jenssen.
Infusin cerebro corazn (BHI)
 MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN

1. COMPOSICION
Fosfato monopotsico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego aadir 50 g de almidn de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones aspticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solucin al 2%
Distribuir en condiciones aspticas en tubos con
tapa de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
 INFUSION CEREBRO CORAZON

1. COMPOSICION
Infusin cerebro de ternera 20.0 g
Infusin corazn de res 25.0 g
Peptonas 10.0 g
Fosfato disdico 2.5 g
Glucosa 2.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agua destilada 1000 ml

2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles
de cultivar, en l los grmenes mantienen su virulencia , antigenicidad
y otras caractersticas serolgicas.
 AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR VERDE BRILLANTE
1. COMPOSICION
Extracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 g
Peptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 g
Sacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR MAC CONKEY
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR MAC CONKEY

TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de cido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeas y
transparentes.
AGAR MAC CONKEY
 AGAR TCBS
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 5.0 g Citrato de sodio 10.0 g
Peptona de carne 5.0 Tiosulfato de sodio 10.0 g
Bilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio 3.0
Sacarosa 20.0 Citrato hierro (III) 1.0
Cloruro de sodio 10.0 Azul de timol 0.04
Agar-agar 14.0 Azul de Bromotimol 0.04

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se
deben a la utilizacin del
citrato y a la formacin de
cido por la utilizacin de la
sacarosa del medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii

AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)

El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.
 AGAR
TCBS
Las colonias gris verdosa
semitranslcida indica que el
microorganismos no utiliza la
sacarosa.
Vibrio parahaemolyticus
V. Mimicus.
V. Damsela
V. hollisae
 AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 10.0g Eosina amarilla 0.3 g
Lactosa 5 Azul de metileno 0.065
Sacarosa 5 Agar-agar 13.5
Fosfato dipotsico 2 Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Agar Eosina Azul de

Metileno (EMB)
Los colorantes de Eosina y azul de
de Levine
metileno inhiben a las bacterias
Grampositivas y a las Gramnegativas
exigentes. Tambin se combinan
precipitando a pH cido, actuando como
indicadores de produccin de cidos.
Los fermentadores fuertes de lactosa:
Escherichia coli, producen colonias color
negro verdoso con brillo metlico. El
brillo metlico indica una fuerte
produccin de cido con una cada de
pH a 4.5 o menos.
Los productores dbiles de cidos,
producen colonias violeta, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Hafnia.
Los no fermentadores de lactosa, forman
colonias incoloras. Salmonella,
Shigella, Proteus..
Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine
 AGAR SALMONELLA SHIGELLA
1. COMPOSICION
Extracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 g
Proteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003
Lactosa 10 Rojo neutro 0.025
Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13
Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 ml
Tiosulfato de sodio 8.5

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Agar Salmonella Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayora de los
coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentracin de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias
Grampositivas y muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el nico carbohidrato y el rojo neutro detecta la produccin de cido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la deteccin del H 2S por el
precipitado negro formado con el citrato frrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus,
Salmonella.
Agar Salmonella Shigella
 AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL

1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 ml
D-Manitol 10 g Agar agar 15 g
Peptona 10.0 Rojo fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
A. INTRODUCCION
La configuracin del medio en pico de flauta
(Pico y Fondo) determina la existencia de 2
compartimientos La porcin inclinada, expuesta
al oxgeno atmosfrico es aerobia.
- La porcin inferior llamada fondo esta
protegida del aire y es relativamente anaerobia.
La porcin expuesta al oxigeno (INCLINADA),
tiende a tornarse alcalina por la
descarboxilacin oxidativa de protenas, y se
desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
En el fondo del tubo donde no hay oxgeno , la
degradacin proteica es mnima y se pueden
detectar incluso pequeas cantidades de cido
por la aparicin de un color amarillo.
La produccin de H2S se manifiesta por la produccin de un color negro.
La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.
La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
A. INTRODUCCION
La configuracin del medio en pico de flauta (Pico y Fondo)
determina la existencia de 2 compartimientos La porcin
inclinada, expuesta al oxgeno atmosfrico es aerobia.
- La porcin inferior llamada fondo esta protegida del aire y
es relativamente anaerobia.
La porcin expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a
tornarse alcalina por la descarboxilacin oxidativa de
protenas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
En el fondo del tubo donde no hay oxgeno , la degradacin
proteica es mnima y se pueden detectar incluso pequeas
cantidades de cido por la aparicin de un color amarillo.

La produccin de H2S se manifiesta por la produccin de un color negro.

La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.
La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
A/A Microorganismo fermentador de lactosa y
glucosa
Estos microorganismos que degradan lactosa y
glucosa producen cantidades grandes cido por que
la concentracin de lactosa es de 10/1 con respecto a
la glucosa. Esta cantidad de cido es suficiente para
contrarrestar la reaccin alcalina producida por la
degradacin de las protenas. Dando un color
amarillo en todo el medio.
CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.
H2S: Se evidencia la produccin de H2S por un
precipitado de color negro.
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
INTERPRETACION
K/K: Microorganismo no fermentador
Son incapaces de producir cido por fermentacin de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.

.
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
K/A Microorganismo no
fermentador de lactosa
El microorganismo es capaz
de utilizar la glucosa pero
no a lactosa, por lo cual
produce una pequea
cantidad de cido, ya que la
concentracin del medio es
de 0.1% de glucosa, por lo
cual al comenzar a
degradarse las protenas
del pico se comienza a
liberar aminas lo que da un
color rojo en el pico. En el
fondo del tubo la
degradacin proteica es
insuficiente para
contrarrestar el cido
formado y se mantiene de
color rojo.
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:

INTERPRETACION
:
Lactosa:

Glucosa:

CO Gas:
2
H S:
2
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:

INTERPRETACION
:
Lactosa:

Glucosa:

CO Gas:
2
H S:
2
 TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:

INTERPRETACION
:
Lactosa:

Glucosa:

CO Gas:
2
H S:
2
 AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Prpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio frrico 0.5g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 LISINA HIERRO AGAR
LIA

k/k
Microorganismo:
Lisina (+)
Descarboxilacion (+)
Desaminacion (-)
 LISINA HIERRO AGAR
LIA

R/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (+)
 LISINA HIERRO AGAR
LIA

k/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA

SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACIO

NDESAMINACION
LISINA

H2S
 LISINA HIERRO AGAR
LIA

SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACIO

NDESAMINACION
LISINA
H2S
LISINA HIERRO AGAR
LIA

SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACIO

NDESAMINACION
LISINA

H2S
 CALDO PEPTONA
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Cloruro de sodio 9 g
Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
INTRODUCCION: INDOL
El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradacin
metablica del aminocido triptofno. Las bacterias que poseen la
enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el
triptofno con produccin de indol, cido pirvico y amoniaco.
La prueba de indol esta basada en la formacin de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo del p-
dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de
Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico en triptofno.
. INDOL
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amlico o isoamlico puro 150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl concentrado 50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37C por 24 horas. Luego
aadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del
reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.
 AGAR CITRATO SIMMONS
1. COMPOSICION
Citrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 g
Fosfato monoamnico 1.0 g Fosfato dipotsico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Citrato de Simmons C.S.
INTRODUCCION
El citrato de sodio es una sal del cido ctrico, un
compuesto simple que constituye uno de los
metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas bacterias
pueden obtener energa por va distinta de la de
fermentacin de hidratos de carbono, utilizando
citrato como nica fuente de carbono. La
determinacin de esta caracterstica importante para
la identificacin de muchas enterobacterias.
TECNICA
Tomar una colonia bien aislada de la superficie de
un medio e inocular en una sola ,estra en el pico del
agro citrato e incubar a 37C por 24 - 48 horas.
INTERPRETACION
El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48
horas indica una prueba positiva y revela que el
organismo en estudio ha sido capaz de utilizar el
citrato contenido en el medio, con la formacin de
productos alcalinos.
 AGAR UREA O CALDO UREA
1. COMPOSICION
Tripteina 1.0 g
Glucosa 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Fosfato monopotasico 2 g
Agar - Agar 15 g
Rojo fenol 0.02 g
Agua destilada 1000 ml
PREPARACION:
Suspender 24 g en 950 ml de agua. Esterilizar en autoclave
Agregar 50 ml de Urea al 40% por filtracion

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:
B. Requerimiento no energtico
C. Segn su proporcin en agua
D. Segn su uso o utilizacin
E. Segn la composicin que presenta
F. Segn su presentacin
 AGAR UREA
1. FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa,

aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el
rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la
enzima ureasa liberando amonaco y dixido de
carbono.
Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el
rojo de fenol del amarillo al rojo.
En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la
enzima ureasa, acelerando la velocidad del
metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o
Klebsiella.
AGAR UREA O CALDO UREA
 AGAR SIM
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 20.0 g
Peptona de carne 6.6 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Citrato hierro(III) amonio 0.2 g
Agar - agar 3.0 g
Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Agar S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formacin de sulfuro, la produccin de
indol y observar la movilidad.

PRODUCCION DE H 2 S
Se evidencia la formacin de cido
sulfihidrico por la formacin de un
precipitado negro. Esto se logra mediante
las siguientes etapas:
Liberacin de sulfuro a partir del tiosulfato
por accin enzimtica de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion
hidrogeno (H+) para formar gas H2S.
Deteccin del gas H2S mediante sales de
metales pesados como hierro, logrando la
forma de sulfuro del hierro, que es un
precipitado negro.
 Agar S.I.M.
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad
contienen concentraciones de agar de 0.4%
o menos. A mayor concentracin del gel es
demasiado firme como para permitir la
diseminacin de los organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por la
turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura.
La no motilidad se caracteriza por el
crecimiento producido exclusivamente a lo
largo de dicho canal.

INDOL
Despus de agregar unas gotas del reactivo
de kovacs, si aparece un color rojo-cereza
dela capa del reactivo indica la presencia de
Indol.
 CALDO MRVP
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 7.0 g
Dextrosa 5.0 g
Fosfato dipotsico 5.0 g
Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Rojo de Metilo R.M.
INTRODUCCION
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo) y
4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta cido es considerablemente
menor que el de otros indicadore. A fin de provocar un cambio de color, el
organismo en estudio debe producir grandes cantidades de cido a partir del
sustrato hidrocarbonado que emplea.
La prueba del R.M. detecta la produccin de cido y requiere de organismos
positivos que produzcan cidos fuertes (lctico, frmico, actico) a partir de
glucosa, por la va de la fermentacin cida mixta.
COMPOSICION
CALDO MRVP: ROJO DE METILO (Indicador)
Rojo de metilo 0.1 g
Etanol al 95% 300 ml
Agua destilada 200 ml.
TECNICA
Inocular el caldo MRVP e Incubar a 37C por 24 horas, agregar 5 gotas del
reactivo rojo de metilo.
INTERPRETACION
Positivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la produccin
de cido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.
 Voges Proskauer V.P.
INTRODUCCION
El cido pirvico, componente fundamental formado en la degradacin
fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a travs de varias vas, de
acuerdo con los sistemas enzimticos que poseen las diferentes bacterias. Una de
dichas vas lleva a la produccin de acetona (acetilmetilcarbinol), un subproducto
de reaccin neutra de la va Butilenglicol. Los organismos que producen acetona
como principal subproducto del metabolismo de la glucosa y forman cantidades
menores de cidos mixtos. En presencia de oxgeno atmosfrico e KOH al 40% , la
acetoina se convierte en diacetilo y el alfa naftol acta como catalizador para
revelar un complejo de color rojo.
COMPOSICION
ALFA-NAFTOL KOH
Alfa naftol 5g KOH 40 g
Alcohol etlico absoluto 100 ml Agua 100 ml
TECNICA
Inocular caldo MRVP e incubar a 37C por 24 horas. Luego aadir alfa naftol e
KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.
INTERPRETACION
Positivo: desarrollo de un color rojo a los l0 minutos, revelando la presencia de
diacetilo, producto de oxidacin de la acetona.
 I.M.V.I.C.

INDOL
ROJO DE METILO

VOGES PROSKAUER

CITRATO DE SIMMONS
 I.M.V.I.C.
Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultneamente, constituyen las
clasicas reacciones IMVIC.
Indol: la formacin de Indol a partir del triptfano se indica por un color rojo
despus del agregado del reactivo Kovacs.
Rojo de Metilo: la aparicin de un color rojo en el tuno con caldo MRVP,
despus de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo indica un
descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la presencia de fuertes
fermentadores productores de cidos mixtos.
Voges Proskauer: la aparicin de un color rojo en el tubo con caldo
MRVP, despus de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica la presencia
de acetona producida a partir del piruvato por la va del butilenglicol.
Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a un color
azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar el citrato de sodio
como nica fuente de carbono.
12

a. Medio de cultivo
b. Smbolo
c. Interprete el resultado
d. Indicador
 I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:

Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
 DIFERENCIACION
BIOQUIMICA
TSI

LIA

Indol

Rojo de Metilo

Voges Proskauer
 INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)
1. COMPOSICION
Infusin cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disdico 2.5 g
Infusin corazn de res 25.0 g Glucosa 2.0 g
Peptonas 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR SANGRE
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR CHOCOLATE
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 AGAR SABAURAUD
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Dextrosa 40.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

A. Requerimiento energtico:

B. Requerimiento no energtico

C. Segn su proporcin en agua

D. Segn su uso o utilizacin

E. Segn la composicin que presenta

F. Segn su presentacin
 Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato XLD
Agar XLD con colonias de especies de
Enterobacterias fermentadoras de lactosa.
Los hidratos de carbono son: Xilosa,
Lactosa y Sacarosa.
El indicador es el rojo fenol.
Las colonias que fermentan uno o ms de
estos hidratos de carbono producen cido,
son de color amarillo claro, debido a que
hacen virar el color del agar adyacente del
rosa al amarillo.
Los microorganismos como Escherichia
coli, Klebsiella y Enterobacter pueden
utilizar ms de un hidrato de carbono y
forman colonias color amarillo brillante.