PRCTICA N10 DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE PROTENAS EN LA DIETA

2. Cmo se determina la digestibilidad real o verdadera mediante pruebas

biolgicas con animales de experimentacin (ratas albinas)?

DIGESTIBILIDAD VERDADERA Y APARENTE

Se cree que la protena del alimento que no aparece en las heces, ha sido digerida.
Esto es la digestibilidad aparente, pues parte del Nitrgeno fecal, es endgeno o sea
derivado del animal.
Al deducir el Nitrgeno Metablico Fecal (NMF) del nitrgeno fecal, se obtiene la
digestibilidad verdadera que es realmente el N del alimento que ha sido absorbido.
El NMF es proporcional al alimento ingerido, lo que representa 2 mg de N por gramo
de MS consumida. Esta cifra permite convertir la digestibilidad aparente en
digestibilidad verdadera. Sin embargo la digestibilidad aparente aumenta si
aumenta el nivel de protena en la racin aunque se mantenga constante la MS
consumida.

MTODOS PARA DETERMINAR LA DIGESTIBILIDAD DE LAS PROTENAS

DIGESTIBILIDAD DE LAS PROTENAS IN VIVO

Este procedimiento ha sido usado tradicionalmente para determinar la

digestibilidad. La cantidad media diaria de nitrgeno aparentemente absorbido por
el animal, se calcula por diferencia entre la cantidad de nitrgeno del alimento
consumido y la cantidad excretada en las heces. Esa cantidad, expresada como
porcentaje de lo ingerido es el coeficiente de digestibilidad. Puesto que las heces no
se componen nicamente de alimentos indigestibles sino que incluyen clulas
descamadas y productos excretados al tracto digestivo, la diferencia entre lo
ingerido y lo excretado determinada de esta forma se denomina digestibilidad
aparente (DA) (Edney,1989; Bondi,1988).

La digestibilidad aparente se calcula de la siguiente forma:

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Para hallar la digestibilidad real es preciso tener en cuenta la cantidad de nitrgeno

fecal excretado cuando el animal consume una dieta sin protena (nitrgeno
metablico) (FAO/OMS, 1992).

DIGESTIBILIDAD DE LAS PROTENAS IN VITRO

Los estudios de digestibilidad son tan laboriosos de llevar a cabo que se han hecho
numerosos intentos para reproducir en el laboratorio las reacciones que tienen
lugar en el tracto digestivo del animal, con el objeto de poder determinar la
digestibilidad de los alimentos. No es fcil reproducir, en su totalidad, la digestin
de los animales monogstricos, pero la digestibilidad de las protenas puede
determinarse mediante las tcnicas multienzimticas y el ataque in vitro con
pepsina y cido clorhdrico (Mc Donald et al., 1986).

- Mtodo de la pepsina y cido clorhdrico

Este mtodo se basa en reproducir la digestin proteica en el laboratorio,

sometiendo a una muestra de alimento a la accin de pepsina y cido clorhdrico.
Como resultado de este ataque se obtiene un residuo indigestible al cual se le
determina su contenido de nitrgeno, que multiplicado por 6.25 dar el contenido
de protena indigestible, que se resta del contenido de protena bruta de la muestra,
previamente determinada, y se obtiene el porcentaje de protena digestible del
alimento (AOAC, 1990).

Para determinar el valor nutritivo de las protenas se utilizan mtodos biolgicos (in
vivo) y qumicos (in vitro) (Cuadro 2).

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Cuadro 2. Mtodos para evaluar la calidad de la protena. Hand et al., 2000

FACTORES QUE AFECTAN LA DIGESTIBILIDAD DE UN ALIMENTO.

La digestibilidad de un alimento es bastante variable, siendo influida por factores

relacionados con el animal, con el medio ambiente y con el alimento, entre los cuales
se destacan los siguientes:

Edad Del Animal. En cada fase de desarrollo y productiva se presenta un

desarrollo anatmico y funcional del tubo digestivo y una actividad enzimtica,
que permite el aprovechamiento ms eficiente de ciertos alimentos.

Especie Animal. Los rumiantes y los herbvoros monogstricos estn

adaptados para el aprovechamiento de los carbohidratos estructurales,
mediante procesos de fermentacin microbiana a nivel ruminal o cecal.

Composicin De Los Alimentos. La cantidad de fibra bruta, especialmente

del complejo lignoceluloltico, afecta de manera negativa la digestibilidad del
alimento por reduccin de la digestibilidad de las protenas y los carbohidratos
fermentables, los cuales quedan atrapados dentro de la pared celular. En todas

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las especies animales es indispensable una cierta cantidad de fibra bruta para
ayudar al normal trnsito intestinal.

Composicin De la dieta. En una dieta mixta el exceso de carbohidratos

fermentables puede disminuir el aprovechamiento de los carbohidratos
estructurales. El exceso de protena verdadera puede afectar la utilizacin del
nitrgeno no proteico, en el caso de los rumiantes.

Tamao De la Partcula Del Alimento. La molienda fina de los granos y los

cereales favorece la digestibilidad por existir una mayor rea de exposicin a
la accin de las enzimas. Pero puede provocar inconvenientes, representados
en un incremento de problemas respiratorios y un mayor desperdicio del
alimento. En el caso de los forrajes, la excesiva reduccin del tamao de las
partculas aumenta la velocidad de trnsito del alimento, presentndose una
reduccin en la digestibilidad y en la exposicin a la fermentacin microbiana.

Coccin Del Alimento. Es til para eliminar factores anti nutricionales

presentes en algunos alimentos: por ejemplo, la solanina de la papa y los
factores antitripsnicos en las semillas de las leguminosas. No obstante, un
exceso de calentamiento de dichas semillas produce la formacin de sustancias
indigestibles.

Tratamientos Qumicos. El empleo de cidos, lcalis, enzimas o gases como

el amonio, aumenta la digestibilidad de materiales fibrosos como el afrecho, el
tamo, la paja y las socas de cereal.

Presencia De Factores Anti nutricionales. Disminuye la digestibilidad de los

alimentos. Como ejemplos se tienen los glucanos en la cebada, el cido
cianhdrico en la yuca, los antitripsnicos en las semillas de leguminosas y los
taninos en el sorgo.

- Expresin De La Digestibilidad.

La expresin de este parmetro se hace a travs del coeficiente de digestibilidad,

el cual expresa en % la cantidad de alimento o sustancias nutritivas que se
asimilan por el organismo con fines fisiolgicos y productivos.

Este coeficiente se presenta por la siguiente frmula.

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Dnde:

C = Coeficiente de digestibilidad
P = Alimento o sustancia ingerida
P = Alimento o sustancia excretada
(P - p) = Alimento o sustancia absorbida

EJEMPLO: MTODOS UTILIZADOS PARA LA DETERMINACIN DE

DIGESTIBILIDAD:

METODOS DIRECTOS

1. Digestibilidad aparente
Normalmente los valores de digestibilidad que se obtienen son alores
aparentes, es decir, incluyen en las heces los aportes metablicos y
endgenos provenientes de enzimas, clulas epiteliales, clulas microbiales,
metabolitos, entre otros, que llegan a la luz intestinal.
El mtodo directo, tambin llamado mtodo de recoleccin total, consiste en
la recoleccin cuantitativa, la estimacin y el anlisis de todas las heces
producidas.

El mtodo in vivo descrito por (Crampton y Lloyd 1959, citados por Cerda
1986) es sin duda, el que da la mejor estimacin de la digestibilidad de un
alimento. Este mtodo por coleccin total de heces fecales es el que mide ms
exactamente la digestibilidad de un alimento, aunque presenta un leve sesgo
respecto de la digestibilidad real debido al material endgeno que se elimina
a travs de las heces.

En los estudios convencionales acerca de la digestin, los animales se

confinan en un box o establo con el fin de facilitar la recoleccin de heces y
orina. Existen diversos mtodos para recoger las heces, dependiendo de la
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especie, del tipo de animal, y en las condiciones que se encuentra (estabulado

o pastoreo).

En estos tipos de ensayos realizados con mamferos se usan machos con

preferencia a las hembras, porque con ellos es ms fcil recoger la orina y las
heces por separado (Mac Donal, 1986).

2. Digestibilidad real:

Con el fin de obtener informacin ms aproximada al verdadero

aprovechamiento de los nutrientes por parte de los animales, se establece el
concepto de digestibilidad verdadera en el cual se tiene en cuenta en los
clculos los valores endgenos, ya que se reconocio que parte de los
nutrientes que se encuentran en las heces se derivan del animal y no son
residuos del alimento (Maynard, 1986).
Se puede calcular la digestibilidad verdadera de los animales teniendo en
cuenta los aportes endgenos Cuando se tienen en cuenta los desechos
endgenos se puede definir un coeficiente de digestibilidad verdadera
(Watanabe, 1988; Hepher, 1988; Mendoza, 1993; Hardy, 1997).

MTODOS DE RECOLECCIN DE HECES.

Las comparaciones entre los coeficientes de digestibilidad resultan un poco
difciles, teniendo en cuenta que no existe una metodologa estandarizada
debido a las diferencias entre un gran nmero de variables tales como, la
especie, la talla de los individuos, el estado fisiolgico, las condiciones
ambientales, el diseo experimental, la composicin de la dieta y el mtodo
de recoleccin de heces. El proceso para la determinacin de la digestibilidad
en los peces no puede ser comparado con el de los animales terrestres, esto
se debe al medio el cual dificulta la recoleccin de heces para ser analizadas
(Mendoza, 1993; De Silva y Anderson, 1995). Teniendo en cuenta que

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evidentemente no es fcil la recoleccin de heces de los organismos acuticos

e implica problemas tales como lixiviacin y estrs en los animales, debe
orientarse a la obtencin de una muestra representativa, libre de partculas
de alimento no consumido y el uso de un marcador inerte.

Los mtodos de recoleccin pueden ser clasificados considerando si el

muestreo se realiza fuera o dentro del agua

RESULTADOS:

DETERMINACION DE PROTEINAS

Determinacin de % protenas en las heces:

DONDE:
%N: porcentaje de nitrgeno
Vhcl: volumen gasto del acido clorhdrico (ml)
Mili equivalente: 0.014
N: normalidad HCl (0.1N)
M: peso de la muestra en gr.

LUEGO, HALLAMOS EL % DE PROTENA CRUDA:

%P: % de protena cruda

%N: % de nitrgeno
Factor: 6.25

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Coeficiente de la digestibilidad aparente:

Coeficiente de la digestibilidad Real:

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