TECNOLOGICO DE ESTUDIOS

SUPERIORES DE ECATEPEC

INGENIERIA BIOQUIMICA

ANALISIS DE INOCUIDAD DE ALIMENTOS

PRACTICA #5: PRUEBAS BIOQUIMICAS

BALDOVINOS SANCHEZ JESICA PAOLA

TREJO ACOSTA ALAN URIEL
VEGA MENDOZA BERENICE MONSERRAT
 1. RESUMEN

Tincin de Gram : Es denida como una tincin diferencial, ya que utiliza dos
colorantes y clasica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas
y bacterias Gram positivas.10 Fue desarrollada por el cientco dans Hans Christian
Gram en 1884; hoy en da, sigue siendo una de las tinciones ms utilizadas
universalmente debido a lo econmico, sencillo y ecaz que resulta. Los principios
de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la pared celular de las
bacterias, la cual le conere propiedades determinantes a cada microorganismo. La
pared celular de las bacterias Gram negativas est constituida por una capa na de
peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram
positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; as pues, la composicin qumica y el
contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y
Gram positivas explica y determina las caractersticas tintoriales.

Para la prueba tincin de Gram se coloc una capa delgada de la bacteria Listeria
monocytogenes Scott A, se fijo la muestra con el mechero, seca la muestra se cubri
con cristal violeta se esperaron de 30-60 seg y se enjuago con agua destilada, se
cubri la muestra con yodo y se dej reposar 60 seg, para enjuagar con agua
destilada. Posteriormente se adiciono un decolorante acetona y etanol en proporcin
hasta que el color violeta no fuera notorio. Finalmente se coloco una gota de
safranina por 45 seg y se enjuago con agua destilada. Se dejo secar el portaobjetos.

Prueba catalasa: El perxido de hidrgeno es el producto final del metabolismo oxidativo

de carbohidratos, a esta va metablica recibe el nombre de metabolismo aerobio-oxidativo.
La acumulacin del perxido es muy toxico por lo que la mayora de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus sp. producen una
enzima llamada catalasa que degrada el perxido de hidrgeno obteniendo agua y
oxigeno gas. El reactivo utilizado en la prueba es el perxido de hidrogeno al 30%.

Se tomo con el asa muestra de la bacteria Listeria monocytogenes Scott A, se coloco sobre
un portaobjetos y se agrego una gota de Perxido de hidrogeno al 30%,
posteriormente se observ la reaccin.

Prueba de movilidad:
Sirve para determinar si un organismo es mvil o inmvil. Las bacterias tienen movilidad
por medio de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos aunque existen
algunas formas de cocos mviles.
El medio manitol movilidad permite la realizacin de esta prueba gracias a ser semislido
ya que presenta solamente 3,5 g/l de agar. En estas condiciones, las bacterias mviles
producirn un enturbiamiento homogneo del medio debido a la distribucin aleatoria de
los microorganismos. Por el contrario, las bacterias inmviles permanecern en la misma
lnea dela picadura en que se sembraron.

En tubos de ensayo con medio SIM, se tom la muestra de la colonia aislada de Listeria
monocytogenes Scott A, se tomo uno de los tubos y se esterilizo en el mechero, se pico
en lnea recta el tubo con la bacteria sin retirar el asa, a 2/3 del medio SIM.
Posteriormente se incubaron los tubos 24 hrs a 37 C para observar la movilidad del
fuera de la lnea recta del sembrado.
2.OBJETIVOS

2.1 Objetivo general

Realizar las pruebas bioqumicas para la deteccin e identificacin de Listeria

monocytogenes Scott A.

2.2 Objetivos especficos:

Realizar la tcnica de tincin de Gram e identificar si la bacteria Listeria

monocytogenes Scott A. y analizar de acuerdo a los resultados es gram positiva
o negativa de acuerdo a sus caractersticas.
Realizar la prueba bioqumica de catalasa, aplicar la tcnica e identificar de
acuerdo a los resultados si la bacteria Listeria monocytogenes Scott A arroja un
resultado positivo o negativo.
Mediante la prueba de movilidad realizar un sembrado por picadura de la
bacteria Listeria monocytogenes Scott A, para posteriormente analizar la
movilidad de la bacteria.
3.METODOLOGIA

TINCIN DE GRAM

Colocar muestra en Cubrir muestra con cristal

Fijar muestra en mechero
portaobjetos violeta, esperar 60s,
enjuagar

Agregar decolorante Adicionar hasta que el tono

Cubrir con yodo, reposar
(acetona, alcohol) en violeta no sea visible
60s
proporcin

Colocar colorante safranina,

Dejar secar portaobjetos Observar al microscopio
reposar 45s, enjuagar
PRUEBA CATALASA

Recoger con asa colonia

pura

Colocar sobre
portaobjetos

Agregar una gota de

perxido al 30%

Observar formacin de
burbujas (es una prueba
positiva)

Desechar portaobjetos
PRUEBA MOVILIDAD

Medio SIM

Medio SIM Pesar 3g medio Disolver 100ml agua

Distribuir en tubos de Calentar con agitacin,

Esterilizar 121C, 15min dejar hervir 1min
ensayo 10ml cada uno

Enfriar y solidificar

Movilidad en medio SIM

Tomar muestra de Abrir tubo y esterilizar en Picar con el asa 2/3 del
colonia aislada mechero tubo en medio SIM

Incubar 24 hrs, 37C Esterilizar el tubo y tapar En lnea recta retirar el asa

Observar
4. RESULTADOS:

EQUIPO Prueba Resultad Tincin Resultado Prueba Resultado

catalasa o de Gram bioqumica
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
5. ANALISIS DE RESULTADOS
CONCLUSION:
BIBLIOGRAFIA:

http://www.scielo.cl/pdf/rci/v25n5/art05.pdf

http://microbitosblog.com/2011/09/27/pruebas-bioquimicas-primarias/

http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

http://www.buenastareas.com/ensayos/Prueba-De-Movilidad/7860426.html