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DOCUMENTACIN

200606701

TERMALISMO Y DEPORTE

Anlisis de biomarcadores del estrs oxidativo del deportista

***

NGELA CASADO MORAGN

Jefa del Grupo de Biomarcadores de Estrs Oxidativo y Procesos de Envejecimiento
Departamento de Fisiopatologa y Gentica Molecular Humana
Centro de Investigaciones Biolgicas (CSIC)

Alhama de Granada (Granada)

Del 16 al 18 de noviembre de 2006
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Termalismo y deporte

BENEFICIOS Y/O DESVENTAJAS DEL EJERCICIO FSICO

Aunque son ampliamente conocidos los beneficios que se derivan del ejercicio
fsico (aumento del tono muscular, prdida de peso, mejora funcional del aparato
cardiovascular, aumento del metabolismo energtico y de las defensas antioxidantes,
aumento de la fuerza y de la resistencia y disminucin de la osteoporosis), tambin
existe considerable evidencia de que, durante su prctica, aumenta la produccin de
radicales libres que producen dao oxidativo en el tejido muscular, hgado, sangre y,
posiblemente, en otras estructuras. Desde hace ms de una dcada, se ha incrementado
sustancialmente el inters en este tpico, as como en los efectos de las terapias
antioxidantes1-3.

RADICALES LIBRES

Un radical libre es una especie qumica que posee un electrn desapareado en su

orbital ms externo. El electrn desapareado en el orbital externo confiere a la molcula
una reactividad elevada, debido a la tendencia a adquirir un segundo electrn en su
orbital, con objeto de conseguir una configuracin electrnica estable. Los radicales
libres se caracterizan por iniciar reacciones en cadena, reacciones autopropagadoras, en
las cuales un radical reactivo origina un producto que tambin es un radical y que a su
vez reacciona y origina otro radical. Esta etapa se conoce como propagacin y una
ltima fase, terminacin, es aquella en la que reaccionan dos radicales dando un
compuesto no radical. Por tanto, las reacciones originadas por radicales libres constan
de tres etapas perfectamente definidas: iniciacin, propagacin y terminacin.

Los radicales libres de oxgeno incluyen radicales cuyo componente es el

oxgeno, por ej. el radical superxido o anin superxido (O2-), el radical hidroxilo
(OH), el radical alcoxilo (RO), el radical peroxilo (ROO), y el radical hidroperoxilo
(RHOO). El perxido de hidrgeno (H2O2) no es un radical libre sino una especie
reactiva de oxgeno porque no tiene un electrn desapareado en su rbital ms externo
y es qumicamente estable, pero en sistemas biolgicos puede romperse, por accin de
metales de transicin tales como el Fe2+ y Cu+, para dar origen al radical hidroxilo que
es el ms potente de todos. La mayora de los radicales que se producen in vivo son
originados tanto a partir de las especie reactivas de oxgeno como de especies reactivas
de nitrgeno. Las especies reactivas de nitrgeno incluyen los radicales libres xido
ntrico (NO), dixido de nitrgeno (NO2) y el potente oxidante peroxinitrito (ONOO-).

Los radicales libres tienen la propiedad de reaccionar con una gran variedad de
especies qumicas, ya que participan en un amplio rango de funciones biolgicas como
en la sealizacin celular (NO) y en la enzimologa (unidos a protenas en el
mecanismo de una variedad de reductasas, peroxidasas, catalasas y oxidasas). La
mayora de los radicales libres producidos in vivo son oxidantes, capaces de oxidar una
amplia gama de molculas biolgicas, incluyendo carbohidratos, aminocidos, cidos
grasos y nucletidos, pudiendo producirse la peroxidacin de las membranas lipdicas,
la hidroxilacin de las bases de los cidos nucleicos y la oxidacin de grupos
sulfhidrilos y de otros puntos sensibles de las protenas.

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Posibles mecanismos de produccin de radicales libres durante el ejercicio fsico

Existen diversas fuentes de produccin de RL durante el ejercicio:

Una de ellas sera por un "escape" de electrones, en la cadena mitocondrial de
transporte de electrones con produccin de anin superxido (O2-)4-7.
Considerando que durante el ejercicio el consumo total de O2 aumenta entre 10 y
20 veces8 y que a nivel del msculo el flujo es aun 10 veces mayor9, es
razonable suponer que la produccin mitocondrial de O2- se halla igualmente
incrementada.
Otro mecanismo posible es el de isquemia-reperfusin. Durante el ejercicio, el
flujo sanguneo es restringido en numerosos rganos y tejidos para aumentar el
aporte a los msculos activos. Por ello, las regiones privadas temporalmente del
flujo adecuado ingresan en un estado de hipoxia, que es tanto mayor cuanto ms
intenso es el ejercicio, y ms an si se supera la capacidad aerbica mxima.
Incluso el propio msculo activo entra en un estado de hipoxia por insuficiente
aporte energtico. Al finalizar la actividad intensa, todas las reas afectadas son
reoxigenadas, producindose el fenmeno de isquemia-reperfusin con la
conocida produccin de RL que la acompaa10-11.
Un tercer posible mecanismo de generacin de RL es la autooxidacin de
catecolaminas, cuyos niveles suelen estar aumentados durante el ejercicio12.

DEFENSAS ANTIOXIDANTES

Como es imposible prevenir la produccin in vivo de todos los radicales

libres, no es sorprendente que los organismos hayan desarrollado una amplia variedad
de defensas antioxidantes. Se conocen como antioxidantes todas aquellas sustancias
capaces de impedir la accin de los radicales libres neutralizando el efecto pernicioso de
estos. Son molculas capaces de captar el electrn desapareado del orbital externo y
desactivar los radicales libres. Guterridge y Mitchell13 las clasifican segn su
mecanismo de accin en:
Defensas primarias, que previenen la formacin de RL
Defensas secundarias, que inactivan o barren los RL ya formados
Defensas terciaras, que retiran o reparan el dao oxidativo, particularmente el
DNA.

Segn su estructura molecular se clasifican en enzimticos y no enzimticos. El

control enzimtico se produce por la accin de enzimas dependientes de iones y metales
(Cu, Mn, Se y Zn) como superxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), glutatin
peroxidasa (GPx), y glutatin redutasa (GR), en tanto que el control no enzimtico
incluye a antioxidantes como glutation, cido ascorbico y cido rico como compuestos
hidrosolubles y la vitamina E y los carotenos como liposolubles.

A lo largo de su evolucin, el organismo humano ha desarrollado mecanismos

de defensa antioxidante que se encuentran ampliamente distribuidos en distintos
orgnulos celulares y subcelulares (Tabla 1).

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Tabla 1. Antioxidantes enzimticos y no enzimticos (modificado de Powers y Lennon,

199914)
Antioxidantes Ubicacin celular Propiedades antioxidantes
enzimticos
Mn superxido Mitocondria Dismutasa radicales perxido
dismutasa
Cu-Zn superxido Citosol Dismutasa radicales
dismutasa superxido
GHS peroxidasa Citosol y mitocondria Descompone H2O2 e
hidroperxidos orgnicos
Catalasa Citosol y mitocondria Descompone H2O2
Antioxidantes no
enzimticos
Vitamina E Compuestos fenlicos solubles en Principal antioxidante que
lpidos; localizada en membranas disrumpe la cadena de
peroxidacin lipdica
Vitamina C (cido Soluble en agua; localizada en Neutraliza una amplia variedad
ascrbico) citosol de ROS en fase acuosa;
regenera vitamina E
GSH Citosol y mitocondria
cido lipoico Tiol endgeno; localizado tanto en Interviene en el reciclado de
fase acuosa como en la lipdica vitamina C; puede ser buen
sustituto de GSH
Ubiquinonas Derivados de quinona soluble en Las formas reducidas son
lpidos; localizadas en membrana antioxidantes eficientes
Carotenoides Soluble en lpidos; localizados Antioxidantes; reduden la
principalmente en membranas peroxidacin lipdica

EJERCICIO FSICO Y ESTRS OXIDATIVO

Durante la actividad fsica, aun en individuos entrenados, se incrementa

notablemente la produccin de radicales libres y, por lo tanto, es mayor el requerimiento
de mecanismos de defensa antioxidante. Algunas de las defensas antioxidantes se
adecuan con el entrenamiento, pero pueden ser superadas cuando se excede el nivel de
ejercicio al cual se han adaptado, generando una situacin de estrs oxidativo. El
trmino estrs oxidativo fue definido por Sies15 como una alteracin del balance entre
agentes oxidantes y antioxidantes en la clula, a favor de los primeros. El estrs
oxidativo depende no slo de la agresividad qumica del propio oxidante, sino tambin
de la cantidad de estos y del tiempo de exposicin, as como del tipo de tejido que sufra
el efecto y de la eficacia de las defensas antioxidantes disponibles16,17.

En 1978 se demostr por primera vez que el ejercicio fsico poda conducir a un
incremento en la peroxidacin lipdica. Dillard y col.18 observaron un aumento de 1,8
veces en el nivel de pentano exhalado, un subproducto de la peroxidacin lipdica,
despus de 60 minutos de bicicleta. Desde entonces se han acumulado crecientes
evidencias que sostienen la hiptesis de que la actividad fsica tiene el potencial de
aumentar la produccin de radicales libres y conducir al estrs oxidativo.

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Figura 1. Esquema de la peroxidacin lipdica

Oxidacin protica. La modificacin oxidativa de las protenas in vivo es una

consecuencia de la vida aerobia. Las especies reactivas de oxgeno y otros radicales, que
se generan como subproductos del metabolismo celular causan la oxidacin en los
aminocidos integrantes de las protenas lo que conlleva la prdida de la funcin
proteica y/o actividad enzimtica.
El grado de alteracin de los aminocidos y las protenas causado por estrs
oxidativo depende de muchos factores, entre los que cabe destacar la naturaleza y
localizacin relativa de la fuente del oxidante o radical libre, la proximidad del
radical/oxidante a las protenas y de la naturaleza y concentracin de enzimas y
compuestos antioxidantes disponibles.
Ciertos componentes aminocidos de las protenas (histidina, arginina,lisina y
prolina) son sensibles a la oxidacin catalizada por metales, formando grupos
carbonilos en las cadenas laterales de las protenas19,20. El ejercicio intenso y
prolongado puede inducir la formacin de grupos carbonilos.

Figura 2. Productos de oxidacin de aminocidos

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El contenido de protenas carboniladas generadas por la ruptura y oxidacin de

la cadena polipeptdica principal o por la oxidacin de las cadenas laterales en los
aminocidos como arginina, lisina, prolina y treonina es utilizado como marcadora de
estrs oxidativo21.
El grado de aumento del contenido de protenas oxidadas en tejidos depende del
grado de produccin de radicales libres, de la eficacia de su eliminacin por las defensas
antioxidantes, y de la capacidad de renovacin de las protenas daadas. La disminucin
a los valores normales del contenido de grupos carbonilos del msculo esqueltico,
indica que el proceso de remocin funciona adecuadamente, y de que existe mucha
evidencia de que el entrenamiento fsico aumenta las defensas antioxidantes. Existe por
lo tanto una fuerte evidencia de que los radicales libres aumentan con el ejercicio y de
que, aun el incremento en las defensas antioxidantes por el entrenamiento, resulta
inadecuado para contrarrestarlos.

DAO OXIDATIVO AL DNA

Los cidos nucleicos son igualmente blanco del ataque oxidativo y constituyen
un componente del dao celular que puede tener efectos considerables en el largo plazo.
Existe informacin de la presencia de bases de ADN oxidadas en tejido pulmonar
despus del ejercicio.
El radical hidroxilo (OH) reacciona con todos los componentes de la molcula
de DNA: el esqueleto de la desoxiribosa y las bases pricas y pirimidicas. La agresin
del radical hidroxilo (OH) del DNA da como resultado una serie de productos finales
tales como: (FDP-Ade) 5-formamido-4,6diamino-pirimidina; (8-OH-Gua) 8-hidroxi-
guanina; (5,6-OH-Tim) timina glicol y (5-OH-Cit) 5,6-dihidroxi citosina. Las
alteraciones en la hlice del DNA incluyen distorsin, rotura de una o de las dos
cadenas, cruzamientos entre cadenas y aberraciones cromosmicas.

Figura 3. Productos finales de la agresin al DNA por radicales libres.

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El dao oxidativo a los cidos nucleicos se determina midiendo la concentracin

de 8-hidroxiguanosina (8-OHG) en orina, un marcador de la oxidacin del ARN,
sirviendo de muestra basal la orina recolectada antes del ejercicio. Se ha demostrado
que el entrenamiento reduce el dao oxidativo derivado del ejercicio22,23.

CAMBIOS EN EL ESTATUS ANTIOXIDANTE DURANTE EL EJERCICIO

La determinacin del status antioxidante constituye un signo directo de estrs

oxidativo. La mejor respuesta se ha observado con el glutatin, que se encuentra en sus
formas reducida (GSH) y oxidada (GSSG). Existe coincidencia en afirmar que el
ejercicio produce oxidacin del glutatin en sangre.
La nica explicacin de la importante y rpida disminucin del GSH en el
ejercicio radicara en un aumento de formacin de metahemoglobina. Un aumento de la
frecuencia en la desoxigenacin y reoxigenacin de la hemoglobina durante el ejercicio
conduce a la formacin de metahemoglobina; el 3% de la hemoglobina total se
encuentra en la forma oxidada24. La formacin de metahemoglobina va acompaada de
produccin de radical superxido (O2-) que es rpidamente dismutado a H2O2 por la
SOD. El H2O2 es eliminado por accin de la glutatin peroxidasa en los eritrocitos,
causando una marcada prdida de GSH y acumulacin de GSSG. El ejercicio intenso y
prolongado aumenta de forma significativa el estrs oxidativo lo que se ve reflejado en
grandes respuestas del sistema glutatin.

BIOMARCADORES DE ESTRS OXIDATIVO

Si el ejercicio aumenta la produccin de RL, dicho aumento debe, tambin,

evidenciarse. Medir la produccin de radicales libres directamente es difcil,
principalmente, por la corta vida de stas especies reactivas. Por ello lo ms comn es la
determinacin indirecta de su presencia cuantificando el dao producido a los lpidos
(peroxidacin lipdica) o a las protenas (formacin de grupos carbonilos) o al DNA
(concentracin de 8-hidroxiguanosina).
Estas determinaciones pueden realizarse en: muestras de sangre entera, en
plasma, suero y orina. Respecto a la metodologa utilizada es habitual utilizar
determinaciones espectrofotomtricas, colorimtricas, Enzimoinmunoensayos, ELISAS,
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) y cromatografa de gases (CG) entre
otros.

1. Determinacin de antioxidantes
a) Valoracin de antioxidantes enzimticos
Incluye la determinacin de la actividad enzimtica de: superxido dismutasa
(SOD), catalasa (CAT), glutation peroxidasa (GPx) y glutation reductasa
(GR).
b) Valoracin de antioxidantes no enzimticos
Incluye la determinacin de cido rico, vitamina C, vitamina E, etc.
c) Valoracin del poder antioxidante total
d) Valoracin de perxido de hidrgeno (H2O2)
2. Determinacin de peroxidacin lipdica
Incluye la determinacin de los productos finales de la fragmentacin de los cidos
grasos poliinsaturados de las membranas lipdicas.

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a) Determinacin de Malondialdehdo (MDA)

b) Determinacin de 4-Hidroxinonenal (HNE)
c) Determinacin de pentano y otros hidrocarburos
3. Determinacin de oxidacin proteica
Incluye la determinacin del contenido de:
a) Protenas carboniladas
b) Aminocidos oxidados
4. Determinacin del dao oxidativo al DNA
Se determina midiendo la concentracin de 8-hidroxideoxiguanosina (8-
OHdguanosina).

CONCLUSIONES
Los beneficios del ejercicio regular son bien conocidos, incluyendo la mejora
funcional del aparato cardiovascular, aumento del metabolismo energtico y las
defensas antioxidantes, mayor fuerza y resistencia muscular y disminucin de la
osteoporosis.
Existen, no obstante, ciertas desventajas tales como el aumento del consumo de
antioxidantes titulares y cambios en su estado redox, adems el estrs inducido por el
ejercicio est incrementado por un estado deficitario en antioxidantes.
Los individuos que, regularmente, se someten a ejercicios fsicos extenuantes, a
lo largo de los aos pueden acumular productos de dao molecular. Por ello, los
suplementos antioxidantes, que disminuyen dicha acumulacin, podran contribuir a
mejorar la salud a largo plazo de los atletas.
El conocimiento del modo como interactan los antioxidantes ofrece la
posibilidad de desarrollar estrategias nutricionales que permitan prevenir tanto el
progreso de las afecciones degenerativas del envejecimiento, como las situaciones
clnicas agudas que se generan por el estrs oxidativo. Para lograr una comprensin
efectiva de la proteccin que brindan, es esencial evaluar todas las sustancias y enzimas
antioxidantes.

RESUMEN

El ejercicio fsico extenuante ocasiona estrs oxidativo. Existen diversas fuentes

para este mecanismo, que incluyen la produccin de anin superxido por la
mitocondria, el fenmeno de isquemia-reperfusin, y la autooxidacin de las
catecolaminas. Un ejercicio intenso o prolongado puede superar las defensas
antioxidantes, entre las que se encuentran las vitaminas C y E, y los tioles, as como las
enzimas antioxidantes. La evidencia de un estrs oxidativo durante el ejercicio se
demuestra midiendo el dao a las biomolculas y el estado de defensas antioxidante.
Existe escasa evidencia de que los antioxidantes aumenten el rendimiento en los
deportistas, pero un nmero extenso de trabajos indican que aquellos pueden disminuir
el estrs oxidativo. Esto sugiere que el beneficio secundario a la administracin de
antioxidantes debe ser esperado en el largo plazo.

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