A.

Peran Ion Ca2+ dalam Mekanisme Penghantaran Impuls

Dalam mekanisme penghantaran impuls syaraf, impuls berjalan
melalui satu neuron dengan neuron lainnya dalam bentuk aliran listrik.
Namun, impuls tidak berjalan secara terus menerus diantara 2 neuron
disebabkan karena adanya celah antara neuron yang disebut dengan celah
sinaps. Untuk memungkinan agar impuls saraf tetap dapat berjalan,
terdapat mekanisme yang disebut Neurotransmisi, yang terjadi dengan
tujuan menghantarkan molekul neurotransmitter dari neuron pre-sinaptik
yang kemudian akan menginisiasi impuls saraf di neuron post-sinaptik.1
Sejauh ini terdapat 3 mekanisme Neurotransmisi yaitu Synchronous,
Asynchronous dan Spontaneous, yang semuanya menggunakan prinsip
eksositosis.1 Dari ketiga mekanisme di atas model Synchronous sudah
terkarakterisasi dengan baik dan memiliki kaitan erat dengan dampak
kenaikan konsentrasi internal ion Ca2+ pada neuron. Model synchronous
juga mendominasi kejadian neurotransmisi di tubuh manusia dengan
persentase >90%.2 Berikut adalah gambaran singkat dari proses
neurotransmisi dengan metode synchronous.
Neurotransmitter yang akan terlibat dalam mekanisme neurotransmisi
akan dikirimkan melalui vesikel transport. Proses Neurotransmisi
umumnya diinduksi oleh influks ion Ca2+ akibat adanya peristiwa
depolarisasi pada terminal akson. Sebelum dilepaskan, vesikel transport
yang berisi neurotransmitter akan mengalami proses perakitan dan
pengisian yang kemudian akan dilanjutkan dengan proses yang
berlangsung di Active Zone dari terminal sinaps. Proses ini disebut dengan
Docking & Priming. Dari perakitan hingga menuju ke proses Docking &
Priming, vesikel neurotransmitter mengalami mobilisasi/translokasi.3
Mobilisasi dari vesikel pre-sinaptik yang berisi Neurotransmitter
menempatkan vesikel pada lokasi yang siap tanggap terhadap perubahan
kondisi fisiologi neuron selanjutnya. Depolarisasi neuron, akan memicu
pembukaan kanal ion Ca2+ yang menyebabkan peningkatan drastis dari
konsentrasi ion Ca2+ dalam sel. Hal ini kemudian ditanggapi oleh protein
permukaan vesikel pre-sinaptik dengan melakukan perlekatan ke
kompleks protein yang ada pada perumukaan internal dari membrane
plasma neuoron.3
Perlekatan dari vesikel pre-sinaptik bertujuan untuk membentuk cincin
fusi, yang akan menjadi jalan bagi pelepasan Neurotransmitter ke celah
sinaps. Setelah pengosogan vesikel maka vesikel akan melepaskan diri
melalui mekanisme endositosis. Vesikel kemudian akan didaur ulang dan
siklus akan berlanjut kembali apabila rangsangan yang menghasilkan
impuls terus terjadi.3
Berikut adalah penjelasan rinci dari mekanisme synchronous dalam
kejadian nerotransmisi.
a. Sintesis Vesikel dan Pemuatan Neurotransmitter
Pada mulanya vesikel pre-sinaptik datang ke terminal akson dari
badan sel dalam bentuk prekursor. Pada tahapan ini vesikel berada
pada area reserve pool.3 Selanjutnya vesikel akan melalui tahapan
pengisian neurotransmitter / neurotransmitter uptake. Mekanisme
neurotransmitter uptake menggunakan prinsip transpor aktif /
penggunaan ATP yang dibantu dengan gradien elektrokimiawi
yang diinduksi oleh pompa proton.4
b. Mobilisasi Vesikel
Vesikel yang telah berisi kemudian akan dipindahkan ke area
Active Zone. Pada area ini terdapat komponen protein permukaan
internal membran neuron berupa Syntaxin-1 dan Synaptosomal-
associated Protein (SNAP) 25. Protein-protein tadi akan berfungsi
sebagai penambat vesikel saat proses perlekatan nanti. Active Zone
merupakan lokasi ditemukannya kanal ion Ca2+ yang menjadikan
lokasi ini sangat aktif pada saat depolarisasi nanti.3 Proses
mobilisasi / translokasi dari vesikel memiliki kaitan erat dengan
mikrotubulus serta diinisisiasi oleh konsentrasi ion Ca2+ yang
semula telah lebih dahulu berada dalam sel.5
c. Priming dan Docking Vesikel
Sebelum terjadinya depolarisasi neuron, vesikel pre-sinaptik
terlebih dahulu telah disiapkan di area Active Zone dengan kondisi
 telah tertambat ke protein-protein permukaan dari mebran internal
neuron melalui priming & docking. Sebelum priming & docking
terjadi, protein plasma Munc18 akan berikatan dengan Syntaxin-1.
Kesatuan anatara Munc18 dan Syntaxin-1 akan mengikat SNAP-
25. Pada kompleks protein yang sudah terbentuk, kemudian akan
menarik Munc13 dan protein Active Zone yang akan
menyelesaikan pembentukan area penambatan.3
Proses docking adalah ketika vesikel pre-sinaptik mendekati
Active Zone, sedangkan pada proses priming terjadi perlekatan
antara membrane vesikel dengan mebran neuron akibat adanya
penambatan protein permukaan. Synaptobrevin-2 yang ada pada
permuakaan vesikel pre-sinaptik akan berikatan dengan kompleks
Syntaxin-1 dan SNAP-25 membentuk kompleks Soluble N-
ethylamalemide-sensitive factor activating receptor (SNARE)
protein. Protein lain yang berada pada permukaan vesikel adalah
Synaptotagmin-1 yang bertindak sebagai detectrot ion Ca2+ akan
berikatan ke phosphatidylinositol (4,5) bisphosphate (PI(4,5)P2) /
PIP2.3,6
d. Pembentukan Cincin Fusi Vesikel
Saat terjadi depolarisasi neuron, maka kanal ion Ca2+ akan
membuka dan menaikan konsentrasi ion Ca2+. Synaptotagmin-1
akan mengikat 5 ion Ca2+ (3 pada domain C2A dan 2 pada domain
C2B). Pengikatan ion Ca2+ menjamin kecepatan dari fusi vesikel
dan juga menginduksi perputaran kompleks protein SNARE dalam
membentuk cincin fusi. Proses ini juga didukung oleh protein
Complexin yang berlekatan ke kompleks SNARE.3
Pembentukan dari cincin fusi terjadi dalam proses bertahap dimulai
dari pembentukan stalk, hemifusion hingga akhirnya menjadi
cincin / pori fusi yang dapat dilewati oleh neurotransmitter. Fusi
yang dimaksud disini adalah yang terjadi antara membran ganda
vesikel pre-sinaptik dan membrane sel neuron.7
 Konsentrasi ion Ca2+ yang dibutuhkan untuk memicu fusi sel
dalam eksositosis memiliki kisaran yang bervariaasi pada beragam
jenis sel. Untuk gambaran ada sel yang membutuhkan 510 M
ion Ca2+ untuk memicu eksositosis, namun adapula sel yang
membutuhkan hingga 100200 M ion Ca2+.8
e. Pelepasan Vesikel
Vesikel tidak selamnya tertambat pada membrane sel. Setelah
melakukan pelepasan neurotransmitter, vesikel bersama dengan
synptobrevin akan mengalami endositosis. Endositosi akan
mendaur ulang vesikel dan protein agar dapat digunakan dalam
siklus selanjutnya. Kemudian kompleks protein SNARE akan
dirombak oleh N-ethylmaleimide sensitive fusion (NSF) protein
dengan menggunakan transport aktif.9
A. The role of Ca2+ Ion on Nerve Impulse Transmission
In the mechanism of conducting nerve impulses, the impulse travels
through one neuron with another in the form of electricity. However,
impulses do not run continuously between 2 neurons caused by a gap
between neurons called synaptic cleft. To enable the nerve impulse to
proceed, there is a mechanism called Neurotransmission, which occurs
with the goal of delivering neurotransmitter molecules from pre-synaptic
neurons that will then initiate nerve impulses in post-synaptic neurons.1
So far there are three mechanisms of Neurotransmission: Synchronous,
Asynchronous and Spontaneous, all of which use the principle of
exocytosis.1 Of the three mechanisms above the Synchronous model is
well characterized and closely related to the effect of increasing the
internal concentration of Ca2+ ions in neurons. The synchronous model
also dominates the incidence of neurotransmission in the human body by a
percentage of> 90% .2 Here is a brief overview of the neurotransmission
process by the synchronous method.
The neurotransmitters involved in the neurotransmission mechanism
will be transported through the transport vesicles. The process of
neurotransmission is generally induced by Ca2+ ion influx due to
depolarization events in the axon terminal. Prior to release, transport
vesicles containing the neurotransmitter will undergo assembly and filling
process which will then proceed with a process that takes place in the
Active Zone of the synapse terminal. This process is called Docking &
Priming. From assembly to the process of Docking & Priming,
neurotransmitter vesicles are mobilized / translocated.3
Mobilization of the pre-synaptic vesicles containing the
Neurotransmitter puts the vesicles at a location ready to respond to the
further changes in the physiological state of the neuron. Depolarization of
neurons, will trigger the opening of Ca2+ ion channels which causes a
drastic increase of the concentration of Ca2+ ions in the cell. This is then
responded by the surface protein of pre-synaptic vesicles by attaching to
the protein complex present in the internal enclosure of the neuron plasma
membrane.3
The attachment of the pre-synaptic vesicles aims to form a fusion ring,
which will be the path for the release of the Neurotransmitter into the
synaptic cleft. After vesicle being emptied then vesicles will be detached
through the mechanism of endocytosis. The vesicles will then be recycled
and the cycle will resume when impulses that produce impulses continue
to occur.3
Here is a detailed explanation of the synchronous mechanism in the
event of neurotransmission.
a. Vesicle Synthesis and Neurotransmitter Uptake
At first the pre-synaptic vesicles come to the axon terminal
of the cell body in the form of precursors. At this stage the vesicle
is in the reserve pool area.3 Next the vesicle goes through the
neurotransmitter / neurotransmitter uptake stage. The uptake
neurotransmitter mechanism uses the principle of active transport /
ATP use that is aided by the electrochemical gradient induced by
the proton pump.4
b. Vesicle Translocation
The contained vesicles will then be moved to the Active
Zone area. In this area there is an internal surface protein
component of a neuron membrane in the form of Syntaxin-1 and
Synaptosomal-associated Protein (SNAP) 25. These proteins will
act as vesicle retarders during the later attachment process. Active
Zone is the location of the discovery of Ca2+ ion canal that makes
this location very active at the time of depolarization later.3 The
process of mobilization / translocation of vesicles has a close
connection with microtubules and is initiated by the concentration
of Ca2+ ions which had previously been in the cell.5
c. Vesicle Docking and Priming
Before the onset of neuronal depolarization, pre-synaptic
vesicles have been prepared first in the Active Zone with
 conditions already tethered to surface proteins from the internal
neuron through priming & docking. Before priming & docking
occurs, the Munc18 plasma protein will bind to Syntaxin-1. Unity
between Munc18 and Syntaxin-1 will bind SNAP-25. In the
already established protein complex, it will attract Munc13 and the
Active Zone protein which will complete the formation of the
tethering area.3
The docking process is when the pre-synaptic vesicles
approach the Active Zone, whereas in the priming process there is
attachment between the vesicle membrane and the neuron mebrane
due to the surface proteins. Synaptobrevin-2 present in the pre-
synaptic vesicle will bind to the Syntaxin-1 and SNAP-25
complexes to form the Soluble N-ethylamalemide-Sensitive Factor
Activating Receptor (SNARE). Another protein on the surface of
the vesicle is Synaptotagmin-1 which acts as a Ca2+ ion detectrot to
bind to phosphatidylinositol (4,5) bisphosphate (PI (4,5) P2) /
PIP2.3,6
d. Formation of Vesicle Fusion Ring
When depolarization of neurons occurs, the Ca2+ ion
channel will open and raise the concentration of Ca2+ ions.
Synaptotagmin-1 will bind 5 Ca2+ ions (3 on C2A and 2 domains
on the C2B domain). The binding of Ca2+ ions ensures the velocity
of the vesicle fusion and also induces the rotation of the SNARE
protein complex in forming the fusion ring. This process is also
supported by the Complexin protein attached to the SNARE
complex.3
The formation of the fusion ring occurs in a gradual process
starting from the formation of stalk, hemifusion until it eventually
becomes a fusion ring / pore that can be passed by
neurotransmitters. The fusion referred to herein is what occurs
between the double membrane of the pre-synaptic vesicle and the
neuron cell membrane.7
 The concentration of Ca2+ ions required to trigger cell
fusion in exocytosis has a range that varies across different cell
types. For illustration there are cells that require 5-10 M Ca2+ ions
to trigger exocytosis, but those that require up to 100-200 M Ca2+
ions.8
e. Vesicle Detachment
The vesicles are not immersed in the cell membrane. After
the release of neurotransmitters, vesicles together with
synptobrevin-2 will be endocytosized. Endocytosis will recycle
vesicles and proteins in order to be used in the next cycle. Then the
SNARE protein complex will be overhauled by N-ethylmaleimide
sensitive fusion (NSF) proteins using active transport.9
 REFERENCES
1. Su dhof,T.C.Thesynaptic vesiclecycle.Annu. Rev.Neurosci.27, 509547
(2004).
2. Kaeser P S, Regehr W G. Molecular Mechanisms for Synchronous,
Asynchronous, and Spontaneous Neurotransmitter Release. Annu. Rev.
Physiol. 2014 (76):1-31
3. Jahn R, Fasshauer D. Molecular machines governing exocytosis of synaptic
vesicles. Nature. 2012;490:201-6
4. Agranoff B W, Albers R W, Siegel G J, Sdhof T C et al. The Synaptic
Vesicle Cycle in the Nerve Terminal. Basic Neurochemistry: Molecular,
Cellular and Medical Aspects. 6th edition. Philadelphia: Lippincott-Raven;
1999.
5. Yagensky O, Dehaghi T K, Chua J J E. The Roles of Microtubule-Based
Transport at Presynaptic Nerve Terminals. Frontiers in Synaptic
Neuroscience.
6. Lai,A.L., Huang,H., Herrick,D.Z., Epp,N. & Cafiso,D.S. Synaptotagmin1and
SNAREsforma complexthatisstructurallyheterogeneous.J.Mol.Biol. 2011:405,
696706
7. Risselada,H.J., Kutzner,C.& Grubmuller, H.Caughtintheact: visualizationof
SNARE-mediatedfusioneventsinmolecular detail. ChemBioChem12,
2011:10491055
8. Augustine G J. How does calcium trigger neurotransmitter release?. Elsevier
Science. Current Opinion in Neurobiology 2001, 11:320326
9. Sutton,R.B.,Fasshauer,D.,Jahn,R.&Brunger,A.T.CrystalstructureofaSNARE
complexinvolvedinsynaptic exocytosisat2.4A resolution. Nature395,
1998:347353.
 G5

G3

G1 G2

G4

G6

G4
G7