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MICROORGANISMOS COMO FACTORAS DE PRODUCCIN DE ENZIMAS
Las enzimas se pueden obtener de tres fuentes, tanto de origen animal, vegetal como microbiano
(levaduras, hongo y bacterias): la eleccin de una u otra fuente depende de varias factores como son
la estabilidad, especificidad de sustrato, temperatura y pH ptimo, coste, inocuidad, abundancias
El primer paso para la produccin de enzimas es la eleccin del microorganismo adecuado, lo cual
depender de las caractersticas de la enzima a producir. Una vez elegido el microorganismo, se le
deja crecer en condiciones adecuadas de pH, temperatura y aireacin. A continuacin se debe extraer
la enzima, lo cual depende de si la enzima es extracelular, intracelular o periplasmtica (ver figura).
De manera que si es extracelular no hay que romper ninguna membrana, pero si es intracelular hay
que romper tanto la membrana externa como la interna, y si es periplasmtica slo la membrana
externa. Para estos dos ltimos casos existen diferentes mtodos de rotura celular tanto qumicos (con
disolventes orgnicos, detergente, choque osmtico) como fsicos (sonicacin, cizalla lquida o slida,
congelacin y descongelacin) [1,3].
Una vez extrada la enzima, esta se asla, es decir se eliminan todos los cidos nucleicos que han sido
liberados al medio tras la rotura celular, y partculas slidas como fragmentos de membrana y clulas
parcialmente rotas. Despus se concentra y enriquece y por ltimo se purifica.
[3] S.M. Robert; N.J. Turner; A.J. Willetts; M.K. Turner (1995) Introduction to Biocatalysis using
enzymes and microorganisms. Cambridge University Press.
[4] K. Aunstrup, O. Andresen, E.O. Falch, T.K. Nilsen (1979) Production of microbial enzymes in
Microbial Tecnology.Vol.1. Eds. Peppler, H.J., Pelman D. Academic Press, Nueva York.
1. SISTEMA DE CULTIVO CELULAR POR LOTE O CONTNUO
Cultivos celulares
http://www.pucv.cl/uuaa/postgrados-ingenieria-bioquimica/cultivos-
celulares/2016-04-08/100920.html
https://w3.ual.es/~jfernand/ProcMicro70801207/tema-1---
generalidades/1-5-modos-de-cultivo.html
https://books.google.com.pe/books?id=2ctdvBnTa18C&pg=PA582&lpg=P
A582&dq=CIN%C3%89TICA+DE+CULTIVO+en+ENZIMAS+MICROBIANAS&s
ource=bl&ots=_rx51eyxye&sig=bQaVRm9q7NlYz-
1uLTF01pPO0AQ&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiQwNKgg4bYAhVMxCYKHcK
HDYoQ6AEIZzAO#v=onepage&q&f=false
2. CINTICA DE CULTIVO
Definicin de crecimiento
Incremento en el nmero de clulas microbianas en una poblacin, ya que las tcnicas actuales
no permiten el estudio de clulas individuales
CINTICA DE CULTIVO
Describe el crecimiento y la formacin de productos, es decir:
Actividad de clulas en crecimiento,
Actividad de clulas en reposo.
Muchos productos de los cultivos microbianos de inters comercial se producen despus
que el crecimiento ha cesado. Es importante conocer la cintica de los cultivos
microbianos porque es necesario poder predecir cmo va a evolucionar un cultivo, cmo
va a ir consumindose el substrato y cmo se va a ir acumulando el producto de una
fermentacin.
Patrones de crecimiento de diferentes tipos de microorganismos
El tiempo que le lleva a una nueva clula dividirse se llama tiempo de generacin
Cultivo realizado en un sistema cerrado: volumen fijo de nutrientes cuya composicin se ve alterada en
forma continua como resultado del consumo de estos a causa del crecimiento microbiano y la produccin
de metabolitos. A lo largo del cultivo no se aaden nutrientes, solamente:
Curva de crecimiento.
Fase lag, de latencia o induccin. Es cuando las clulas se transfieren de un medio a otro y no existe
inicialmente aumento en el nmero de clulas, aunque la masa microbiana puede cambiar. Es un perodo
de ajuste al nuevo ambiente. Puede ser larga o corta dependiendo de muchos factores:
Inoculo
o Estado fisiolgico
o Fase de crecimiento
o Tamao
o Tipo de microorganismos
(dX/dt) = 0
X = Concentracin de clulas (biomasa)
t = Tiempo
X = X0
X0 = Biomasa inicial
b) Fase exponencial, logartmica o trofofase. Fase en la que las clulas se han adaptado, se realiza la
reaccin en cadena de duplicacin de las clulas. Trofos= que se alimenta. Es la fase en la que se
producen los metabolitos primarios.(Etanol, cidos orgnicos (actico, ctrico), Protenas (fosfatasa,
proteasas, amilasas, protenas recombinantes-insulina, etc.), Biomasa (Transformaciones de metabolitos
intermedios).
Descripcin matemtica basica de la trofofase. El crecimiento puede ser descrito
cuantitativamente en funcin de la duplicacin del nmero de clulas por unidad de tiempo.
En este caso lo que se considera es la duplicacin de la biomasa o del material gentico por unidad de
tiempo.
Aplicabilidad del modelo matemtico del crecimiento microbiano y constante especfica de
crecimiento explicados:
1.- Temperatura:
3.- pH:
QUIMIOSTATO
El tipo ms frecuente de cultivo continuo es el quimiostato en el que se introduce
medio fresco a un flujo constante denominado velocidad de dilucin (D) a la vez que
se elimina cultivo viejo al mismo flujo. El medio de cultivo de un quimiostato contiene
un nutriente esencial en una cantidad limitante (nutriente limitante). Estos parmetros
se relacionan de acuerdo a la siguiente ecuacin:
donde f es la velocidad de flujo (ml h-1) y V el volumen del recipiente en ml. Por
consiguiente, las dimensiones de D son [h-1]. El valor D indica el nmero de volmenes
de reactor (volmenes de fermentador) que pasan a travs el reactor por unidad de
tiempo.
Este valor es el recproco del tiempo de residencia o tiempo que una unidad de
substrato est dentro del reactor.
que permite calcular cmo vara la concentracin del nutriente limitante en el efluente
en funcin de la tasa de dilucin D.
Si llamamos SR a la concentracin de nutriente limitante que entra en el fermentador
y Sr la concentracin de este nutriente en el efluente; considerando que el substrato
consumido en el fermentador (SR-Sr) es transformado en biomasa durante el estado
estacionario () con un rendimiento Ys, podemos calcular la produccin de biomasa en
el fermentador con las siguiente ecuaciones
OPERACIONES DE RECUPERACIN
ALGUNOS EJEMPLOS DE PRODUCCIN INDUSTRIAL DE
ENZIMAS MIBROBIANAS
AMILASAS
-amilasa
Son producidas principalmente por bacterias y hongos y pueden ser clasificadas por su
actividad: licuefaccin o sacarificacin. En el segundo caso se llegan a producir
cantidades importantes de azcares (glucosa, maltosa y maltitriosa), mientras que en el
primero se desdobla el almidn, disminuyendo rpidamente la viscosidad, formando
maltohexosa como producto ms pequeo. En general, las -amilasas bacterianas son de
mayor resistencia a la temperatura que las fungales. El genero Bacillus es la fuente
bacteriana de mayor importancia destacando por su importancia comercial dos de ellos:
B. amyloliquefaciens y B. licheniformis. La enzima del primero fue la primera en aparecer
en el mercado, mientras que la -amilasa de B. licheniformis es actualmente la ms
empleada por su alta termoestabilidad.
La mayor parte de las -amilasas son metaloenzimas que requieren calcio, al menos un
tomo por molcula de enzima y hasta 10 en el caso de la enzima de A. aryzae.
-amilasa
La -amilasa es una exoenzima que libera maltosa a partir del extremo no reductor de
amilosa y amilopectina. Dado que no tiene actividad hacia enlaces 1 6, tambien se
obtienen como producto dextrinas.
PECTINASAS
DEXTRANASAS
Las dextranasas son producidas fundamentalmente para ingenios azucareros, en los que
la contaminacin con dextranas producidas por Leuconostoc mesenteroides requiere de
un tratamiento enzimtico. Se obtienen de cepas de Penicillum funicilosum, P. lilaceum
y Chaetomium gracilae, requiriendo de dextranas como inductor. Existe una gran
variedad de enzimas reportadas en la literatura con actividad hacia diversos tipos de
dextrana, ay que las enzimas comerciales slo presentan alta actividad hacia enlaces
INVERTASA
Las invertasas pueden ser -fructofuranosidasas o -glucosidasas. Solo las invertasas de
S. cerevisiae y S. carlsbergensis (sinnimo: S. pastorianus y S. uvarum) (-
fructofuranosidas) son producidas industrialmente.
Isomaltulosa sintetasa
Esta enzima se ha empleado en la produccin de isomaltulosa como intermediario en la
sntesis del edulcorante conocido como palatinita, empleando clulas completas de
Serratia plymuthica, Protaminobacter rubrum o Erwinia rhapontici. La isomaltulosa es
posteriormente hidrogenada con catalizadores de nquel. Actualmente la isomaltulosa ha
adquirido un mercado por s misma, dada su gran similitud tecnolgica con la sacarosa,
con un poder edulcorante netamente inferior.
Diacetil reductasa