DESENVOLVIMENTO DE VACINAS

CONTRA AGENTES INFECCIOSOS

 Histria da vacina antivarilica

Varola

Vrus vaccinia, famlia Poxviridae, ds DNA

Histria

Ramss V

Variolizao China, ndia, frica (1000 AC)

Morgan & Parker, 2006

 James Phillips

Edward Jenner

A mo de
Sarah Nelms.

Vacina = Vacca Edward Jenner museum

 Qual o efeito da introduo de uma vacina?

Casos da doena Uso da vacina Reao adversa

nica doena erradicada: varola

Poliomielite: 2000 casos em 2006

Chen et al., Vaccine
 Vacinas Funcionando
Vacina antes ano depois ano

Difteria 175,885 1922 1 1998

Sarampo 503,282 1962 89 1998
Caxumba 152,209 1968 606 1998
Coqueluche 147,271 1925 6,279 1998
Rubola 47,745 1968 345 1998
Varola 48,164 1904 0 1998

(Cases in the U.S.; The Scientist, July 19, 2004)

 O que faz uma vacina?

Estimula respostas imunolgicas protetoras do

hospedeiro para combater o patgeno invasor.

Que conhecimento necessrio para

produzir uma vacina?

1. Entender o ciclo de vida do patgeno.

encontrar o melhor estgio para servir de alvo.
2. Entender os mecanismos imunolgicos estimulados pelo
patgeno.
resposta imune celular/humoral?
 Caractersticas de uma vacina
ideal
Vacinas contm antgenos que so alvos do sistema
imunolgico.

A vacinao deveria gerar uma imunidade efetiva

(anticorpos e clulas T).

Vacinas devem produzir imunidade protetora.

Bom nvel de proteo sem a necessidade de uma dose

de reforo.

Seguras: uma vacina no pode causar doena ou morte.

Consideraes prticas: Baixo custo por dose. Fcil de

administrar. Estvel biologicamente. Poucos ou nenhum
efeito colateral.
 Doenas bacterianas Doenas virais
Difteria, Ttano, Coqueluche e Febre amarela
Vacinas
outras infeces causadas por disponveis
(Haemophilus influenzae)-
(Tetravalente) no
Tuberculose - BCG Hepatite B Brasil
Pneumococo Poliomielite

Meningite Sarampo, rubola,

(Neisseria meningitidis) caxumba (tripla viral)

Antraz Rotavrus

Febre tifide Gripe

Clera HPV
Hepatite A
Raiva
Catapora (Varicela-
Zoster)
 Calendrio
vacinal de
crianas no
Brasil

http://portal.saude.gov.br/portal/saude/visualizar_texto.cfm?idtxt=21462
 Calendrio vacinal de adolescentes no Brasil

http://portal.saude.gov.br/portal/saude/visualizar_texto.cfm?idtxt=21463
 Calendrio vacinal de adultos e idosos no Brasil

http://portal.saude.gov.br/portal/saude/visualizar_texto.cfm?idtxt=21464
 Vacinas produzidas no Brasil

Trplice viral (sarampo, rubola, caxumba)

Poliomielite
Hib infeces causadas por Haemophilus influenzae
Meningite A, C
Febre Amarela

DTP (difteria, ttano, coqueluche)

Tuberculose (BCG)
Hepatite B
Raiva
em breve Influenza (Sanofi-aventis)
Rotavrus (NIH)
Dengue (NIH)
Mecanismo de ao
 Tipos de vacinas
Tipo de vacina Doena
Organismo atenuado Febre amarela, Polio (Sabin), Rubola,
(vivo, no patognico) Sarampo, Caxumba, Catapora, Tuberculose

Organismo inativado ou morto Hepatite A, Raiva, Clera, Gripe, Plio (Salk),

Febre tifide, Coqueluche

Toxide-composto txico Difteria, Ttano, Antraz

inativado (formol)

Vacinas de subunidades Hepatite B, pneumonia causada por

(Protenas recombinantes, LPS, Streptococcus pneumoniae, HPV,
VLPs) Pneumococo, Meningite
Vacinas conjugadas Haemophilus Influenza tipo B, pneumonia
causada porStreptococcus pneumoniae

Vacinas de DNA Em testes clnicos

Vetores recombinantes Em testes clnicos

(adenovrus, poxvrus)
 Organismo atenuado
Febre amarela, Polio (Sabin), Rubola, Sarampo, Caxumba,
Catapora, Tuberculose

Rubola: clulas embrionrias de pato

Sabin: clulas de macaco

O vrus adquire mutaes

O vrus isolado de um O vrus no cresce mais em
O vrus utilizado para que permitem o
paciente e crescido em clulas humanas e pode ser
infectar clulas de macaco crescimento nas clulas de
clulas de cultura humana utilizado como vacina
macaco
 Organismo atenuado
Febre amarela
ovos SPF
9 dias
suspenso viral inoculada na cavidade vitelina do ovo
3 dias
Retirada dos embries

Cmara trituradora, centrifugao, liofilizao

- Vantagens: Baixo custo, fcil administrao (Sabin), imunidade duradoura,

capaz de induzir forte resposta de linfcitos T CD8.

- Desvantagens: Instabilidade da preparao (sensvel a temperatura),

mutao reverso da virulncia, no deve ser dada a indivduos
imunocomprometidos.
 Organismo inativado
Gripe, Plio (Salk), Coqueluche, Hepatite A, Raiva, Clera,
Febre tifide

Crescimento do vrus em clulas de cultura

Purificao dos vrus

Inativao por calor, formaldedo

- Vantagens: Sem mutao ou reverso, utiliza antgenos na sua conformao

nativa (Acs neutralizantes), pode ser utilizada em pacientes
imunocomprometidos.

- Desvantagens: somente imunidade humoral, repetidas doses (o vrus no

multiplica) , custo mais elevado, bactrias inativadas podem causar inflamao.
http://g1.globo.com/Noticias/Ciencia/0,,MUL1435702-5603,00-VACINA+BRASILEIRA+CONTRA+A+NOVA+GRIPE+SAI+APENAS
+EM+MEADOS+DE.html
 Acelulares

Toxide
Difteria, Ttano, Anthrax

Isolamento das Toxinas (diftrica, tetnica)

Inativao da toxicidade por formol

Adio de estabilizador: mercrio Thimerosal

Adio do adjuvante Hidrxido de alumnio (alum)
 Acelulares
Subunidade
Hepatite B, pneumonia causada por Streptococcus pneumoniae , HPV,
Pneumococo, Meningite

PCR do antgeno de interesse (ex: HBsAg)

Clonagem em vetor de expresso para bactria, levedura, clulas

Transformao de bactria, levedura com o plasmdeo

Purificao do antgeno recombinante

Adio de adjuvantes (ex: alum)
 Acelulares
Vacinas conjugadas
Haemophilus Influenza tipo B (meningite bacteriana)

Utilizam poro do microorganismo

(geralmente carboidrato) conjugado a uma
protena carreadora

- Vantagens: Segurana.

- Desvantagens: Baixa imunogenicidade natural

necessidade da adio de adjuvantes.
 Vacinas gnicas ou de DNA
Gene de interesse

plasmdeo

patgeno
msculo

pele

- Vantagens: imunogenicidade, segurana, facilidade de manipulao, baixo

custo, fcil escalonamento, termoestveis.

- Desvantagens: Baixa expresso, o DNA pode se incorporar ao DNA genmico

do hospedeiro ou ao genoma de clulas da linhagem germinativa, aparecimento de
anticorpos anti-DNA.
 Vetores recombinantes
Composio: gene de interesse inserido em vrus (adenovrus, vaccinia, febre
amarela)

- Vantagens: Imunogenicidade

- Desvantagens: Instabilidade da preparao (sensvel a temperatura),

mutao reverso da virulncia, no deve ser dada a indivduos
imunocomprometidos
 Vacinas atenuadas
Varola Raiva Tuberculose Febre Sarampo Polio Caxumba Rubola Adenovrus
1800 1880 1927 Amarela 1963 1963 1967 1969 1980
1938

Febre Colera Varicela Rotavrus

Tifoide 1995 1996 1998
1985

Vacinas inativadas
Febre Clera Peste Pertussis Influenza Polio Raiva Encefalite Encefalite Hepatite A
transmitida por
Tifoide 1896 bubnica 1914 1936 1956 1980 carrapatos Japonesa 1995
1896 1897 1990 1992

Vacinas acelulares - Subunidades

Difteria Ttano Pertussis Hepatite B Hepatite B Toxina Doena
1923 1927 1981 1981 1986 colrica de Lyme
1992 1998

Vacinas acelulares - Conjugadas

Pneumococo Meningococo Haemophilus Febre Haemophilus Pneumococo
1977 1982 influenzae b Tifoide influenzae b 2000
1985 1998 1987
 Vacinas ainda no disponveis
Doenas bacterianas Doenas virais Doenas Doenas
parasitrias Fngicas
Leptospirose Dengue Malria Histoplasmose
Amebase HIV Leishmaniose Paracoccidiose

Clamidiose Hepatite C Esquistossomose Candidase

Helicobacter pylori Citomegalovrus Ancilostomose Criptococose

Diarria causada por Ebola Toxoplasmose

E.coli
Lepra Epstein Barr
Shiguelose

Sfilis
Haemophilus
influenzae no tipvel
Staphylococcus aureus
The Jordan Report, NIH, 2007
 Novas tecnologias para o
desenvolvimento de vacinas

A vacina ideal A realidade

nica dose Mltiplas doses

100% efetiva Efetividade varivel
100% segura Segurana varivel
Proteo de longo Geralmente proteo de
prazo curto prazo
Baixo custo
Antgeno Vetor

Sistema
Vacinal

Adjuvante Via de
administrao
 Vias de administrao
Delivery

Intramuscular
Subcutnea
Intradrmica
Intranasal/Aerosol
Oral
Transdrmica
 Intramuscular
Vantagens Desvantagens
Fcil tcnica Invasiva
Grande volume possvel Possvel administrao
sistmica
Dano no msculo ou nervo

Subcutnea
Vantagens Desvantagens
Fcil tcnica Absoro pela gordura
Grande volume possvel
Menor chance de
administrao sistmica
 Intradrmica
Vantagens Desvantagens

Acesso a APC (Langerhans) Volume menor (<250l)

Tcnica mais difcil

Intranasal
Vantagens Desvantagens

No invasiva Pode ocorrer absoro

errada
Induo de resposta imune
de mucosa
Mnima diluio do antgeno
 Oral
Vantagens Desvantagens

No invasiva Tolerncia

Induo de resposta imune Diluio do antgeno

de mucosa

Transdrmica
Vantagens Desvantagens

No invasiva Alergia

Fcil administrao Tempo de absoro

Fcil observao
Novas tecnologias para vias de administrao

Eletroporao sem agulha

pouco antgeno: 1g/dose

Biolistic particle delivery ideal para vacinao em massa

system p ou partculas recobertas

protenas, peptdeos, DN

12 shot cartridge
400 psi optimal for mice
Helium

Gold particles carrying DNA are propelled into

the mouse tissues

http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=675
 Adjuvantes
Definio

= Adjuvare . Qualquer substncia que quando

adicionada a uma formulao vacinal, aumenta sua
imunogenicidade.

Tipos de adjuvantes
Imunoestimulatrios
Particulados (sais minerais, partculas
lipdicas, micropartculas)
Mucosa
 Lista de diferentes classes de adjuvantes que vem sendo
avaliados por melhorarem a resposta imune s vacinas
Partculas lipdicas
Adjuvantes imunoestimulatrios Lipossomos
Saponinas ex., QS21 Emulses ex., Freunds,
Citocinas ex., IL-2, IL-12, SAF, MF59*
GM-CSF Virossomos*
Derivados MDP Iscoms
DNA bacteriano (CpG oligos) Cocleatos
LPS Adjuvantes Sais Minerais
MPL e derivados sintticos Particulados Hidrxido de Alumnio*
Lipopeptdeos Fosfato de Alumnio*
Fosfato de Clcio*
Adjuvantes de mucosa
Heat labile enterotoxin (LT) Micropartculas
Cholera toxin (CT) Micropartculas PLG
Mutant toxins e.g., LTK63 Partculas de Poloxamer
Coleatos Partculas Virus-like
* Licenciado para uso em humanos
Singh and OHagan, Pharmaceutical Research, Vol. 19, No. 6, June 2002
 Ensaios para o desenvolvimento de vacinas
Ensaios em animais
Voluntrios humanos no-
imunes em reas no
endmicas.
Voluntrios imunes. Desafio
experimental com o patgeno.
No laboratrio
Residentes semi-imunes de reas
de diferentes endemicidades.
Populao alvo pequena, grupos
especiais.
Desafio Natural
Residentes semi-imunes de reas
de endemicas. Grande populao
alvo, comunidades inteiras.
Desafio Natural
FASE 0 Segurana, imunogenicidade,
Pr-clnica tolerabilidade, eficcia.
Segurana, imunogenicidade,
FASE I
Clnica tolerabilidade.
Fase IIa: voluntrios no imunes
FASE II Fase IIb: voluntrios imunes
Clnica Eficcia da vacina, segurana,
tolerabilidade, aceitao
FASE III Eficcia da vacina, segurana,
tolerabilidade, aceitao.
Eficcia da vacina, segurana,
FASE IV tolerabilidade, aceitao,
estratgias de vacinao,
efetividade.
 Por que to limitado o sucesso para o
desenvolvimento de vacinas contra parasitas?
Parasitas evitam, confundem e escapam do sistema imune do
hospedeiro.

Ciclos de vida complexos e dificuldade de identificar bons antgenos

alvo.

Dificuldade de se identificar correlatos de proteo.

Quatro estgios
evolutivos
Dez alvos antignicos Muitos alvos
Somente 2 induzem potenciais em
anticorpos protetores cada estgio
Mais de 5000
alvos antignicos
potenciais
Grande adaptao
ao sistema imune
 Seria possvel uma vacina contra
malria?
Indivduos continuamente expostos infeco pelo parasita
desenvolvem imunidade contra a doena. Em reas endmicas
com o aumento da idade
Diminui a mortalidade
Diminui a doena severa
Diminui o nvel de parasitemia
Diminui a prevalncia de parasitemia

Soro de adultos imunes transfere resistncia para crianas

Inoculao de parasitas vivos atenuados pode proteger

voluntrios contra a infeco.

Imunizao com organismos mortos protege modelos animais.

 O efeito da vacina
Preveno da Doena

Anticorpos Neutralizantes Imunidade mediada por

Clulas
Resposta Th1
CD4:INF gamma
CD8:CTL
Esporozoto Estgio Heptico +/- NK Cells
Intra-vascular Intra-hepatocitica
3-5 minutos 1-2 semanas
(Reforo limitado) Estgios Pr-eritrocticos (Reforo possvel)
Transferncia de Proteo
Estgios Sanguneos
anticorpos para o Estgios Sexuais dependente de
Merozotos
mosquito Intra-mosquito anticorpos
(maioria) Intra-erythrocytic
10-14 dias 2+ dias/ciclo Hemcias no tem MHCI ou
MHCII. ADCC (Antibody
Dependent cell-mediated
Neutralizao cytotoxicty)
+/- Lise por
+/- Ativao do
complemento
complemento
Febs Journal
(2007), 274:4680a
 RTS,S uma vacina contra as
formas pr-eritrocticas
Hbrido contendo a regio central repetitiva e a maior
parte da poro C-terminal da protena CS fundida com o
antgeno de superfcie do vrus da hepatite.
Adjuvante em uma mistura complexa AS02.
Protegeu completamente 6 de 7 voluntrios contra a
infeco com esporozotos.
Estudos no Gmbia mostraram boa proteo de curto
termo.
Um estudo clnico em Moambique mostrou um atraso na
infeco e reduo na incidncia de malria severa em
crianas.
Est em fase III. Os resultados mostram que a
imunidade celular pode no ser o mecanismo protetor
majoritrio.
Partners: Walter Reed Army Institute in Washington,
DC, Glaxo Smithkline and the Medical Research Council,
The Gambia.
OUTRAS VACINAS ANTI-PARASITRIAS
 OUTRAS VACINAS ANTI-PARASITRIAS
Ancylostoma caninum:
uso de larvas L3 irradiadas contra infeco canina.
iniciativa de vacinao contra a ancilostomase humana identificou,
isolou, clonou e expressou os principais antgenos das larvas L3 e os
est testando como vacinas recombinantes.

Leishmania:
parasitas inteiros mortos combinados com BCG foram testados no Ir
contra leishmaniose cutnea e visceral. Eficcia limitada.
vrios candidatos recombinantes foram testados em camundongos e
algum grau de proteo foi obtido (gp63, LPG, LACK e um antgeno de
46 kDa).
uso de adjuvantes que induzem uma resposta Th1 (com IL-12)
resultaram em proteo em camundongos. Um teste clnico de fase I
em voluntrios nos EUA e em pacientes no Brasil sugere que a vacina
imunognica e segura.