UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y TECNOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS Y FORENSES
TSU EN HISTOTECNOLOGÍA

Procesamiento de tejidos
MÉTODOS Y TÉCNICAS DE INCLUSIÓN

Prof. Carlos Escalona Surth

 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
El proceso al que debe someterse la muestra de
tejido comprende varios pasos:

-Deshidratación por agentes químicos.

-Desalcoholización por agentes aclarantes o
diafanizantes.
-Infiltración o impregnación en parafina de grado
histológico.
 Deshidratación por agentes químicos
El proceso de deshidratación consiste en la eliminación completa de las
moléculas de agua de los tejidos, con el fin de que se pueda embeber,
infiltrar o impregnar la muestra correctamente con el medio de inclusión
que no es hidrosoluble (parafina).

Se lleva a acabo por mecanismos químicos con reactivos deshidratantes

(alcoholes).

Las condiciones esenciales de un buen agente deshidratante son dos :

No debe de alterar la estructura tisular.

Debe poder mezclarse con el reactivo intermediario o agente aclarante.

 Condiciones o ventajas deseables

-Rapidez

-Endurecimiento no excesivo

-Toxicidad o peligrosidad mínima

-Mínimo riesgo de incendios / explosión.

El proceso de deshidratación suele realizarse
mediante el empleo de alcohol etílico o isopropílico, y
en él intervienen los siguientes parámetros:

-La gradación de los alcoholes

-La utilización de los alcoholes como agentes deshidratantes se realiza de

manera ascendente (50º,70º,80º,95º,100º), ya que la acción brusca de un
alcohol a elevada gradación provocaría una retracción del tejido.

-Volumen y numero de los baños de deshidratación.

-No es preciso que el volumen de alcohol sea demasiado elevado, por lo

general se recomienda que el volumen de alcohol sea 10 veces mayor al
volumen del tejido a deshidratar.

-Es recomendable multiplicar el numero de baños, puesto que tiende a

producirse con bastante rapidez un estado de equilibrio entre el grado de
hidratación de la pieza y del alcohol, además enumeramos las ventajas a
continuación.
1. La menos permanencia en cada baño , lo que ahorra tiempo y disminuye el riesgo
de endurecimiento excesivo del tejido.
2. El menor índice de saturación de agua en el alcohol, lo que posibilita la utilización
del baño de alcohol.
3. Mejor control sobre el grado de saturación de la pieza o tejido.
4. Menor riesgo de alteración tisular por cambio brusco en la fuerza de extracción
del agua.

Duración de la deshidratación

Se halla igualmente en el tamaño de la pieza y la cantidad de agua que contiene,

teniendo siempre en cuenta dos premisas:

 la deshidratación ha de ser completa.

 La exposición prolongada al agente deshidratante provoca un endurecimiento de

los tejidos.
 Principales agentes deshidratantes
-Alcohol etílico (CH3CH2OH): es el agente mas comúnmente usado. Excelente
deshidratante, presenta el inconveniente de que es muy inflamable y, además tiene un
precio muy superior al del alcohol metílico.

-Alcohol metílico (CH3OH): en ocasiones sustituye al alcohol etílico , es muy

inflamable y toxico.

-Acetona (CH3-CO-CH3): agente deshidratante muy volátil y de acción rápida, si el

tratamiento en los tejidos es prolongado aumenta extraordinariamente su fragilidad.

-Alcohol butílico (CH3CH2CH2CH2OH): es un deshidratante lento miscible con la

parafina y que por tanto, permite prescindir de los agentes aclarantes.

-Dioxano (dióxido de etileno): miscible en la parafina y muy toxico en espacios

pequeños.

-Alcohol isopropílico (CH3CH[OH]CH3): no se puede utilizar en inclusión en

celoidina.

-Tetrahidrofurano: agente de acción rápida que no causa retracción excesiva.

 ACLARAMIENTO O DESALCOHOLIZACIÓN

Se trata de un proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante

por una sustancia miscible con el medios de inclusión.

Los agentes aclarantes son numerosos y su elección dependerá de su rapidez para

eliminar el deshidratante, escasez de acciones nocivas sobre los tejidos y células
(endurecimiento, retracción, entre otros), adecuación del aclarante al agente
deshidratante y al medio de infiltración, facilidad de su eliminación, toxicidad,
peligrosidad intrínseca y coste. Los agentes aclarantes reciben la denominación
genérica de líquidos intermediarios.
La técnica general del manejo de los agentes aclarantes incluye la realización de baños
sucesivos de duración variable en función de las características del agente y del
volumen de la pieza.
 CARACTERÍSTICAS DEL PRINCIPAL AGENTE
ACLARANTE

Xileno o xilol:
-Está compuesto por una mezcla de orto-, meta- y para-xileno.

Ventajas:
-Es el aclarante más rápido.
-Endurece poco los tejidos.
-Se elimina fácilmente del medio de inclusión.
-El punto optimo de clarificación es fácil de apreciar.

Desventajas:
-Es tóxico.
-Sólo aclara desde el alcohol absoluto (100%).
-Tiende a volver blanquecino el tejido.
-Endurece si actúa mucho tiempo.
-Tiende a la acidificación.
OTROS AGENTES ACLARANTES MENOS USADOS EN LA
ACTUALIDAD SON:

-Tolueno (Metil benceno).

-Benceno.
-Cloroformo.
-Tetracloruro de carbono.
-Dioxano.
 INFILTRACIÓN O IMPREGNACIÓN

Es el proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra

con el medio que se va a utilizar para la imbibición del tejido. El fundamento del
proceso radica en la ocupación completa por este medio de los espacios intra y
extracelulares inicialmente ocupados por el agua intratisular.

Las parafinas son sustancias de tipo céreo compuestas por mezclas de

hidrocarburos saturados de cadena larga y que pueden obtenerse con una amplia
variación en su punto de fusión (56º-58º).
La dureza de la parafina está en función de la plasticidad, más que del punto de
fusión.
En la práctica diaria suelen utilizarse parafinas con diversas mezclas de polímeros
plásticos de peso molecular controlado y otros aditivos que mejoran sus
características. Estas mejoras se resumen así:
-Obtención de cortes más uniformes.
-Aumento de dureza y homogeneidad del bloque.
-Incremento de la viscosidad del medio.
-Menor fragilidad de los bloques.
 PROCEDIMIENTOS DE INFILTRACIÓN

Se realiza mediante baños sucesivos en parafina fundida. Estos baños deben ser
renovados frecuentemente, pues se cargan de solvente (medio de aclaramiento),
cuya presencia provoca un descenso en el punto de fusión de la parafina,
volviendola más blanda y menos apropiada para el corte. Simultáneamente, y por
evaporación del solvente tras la inclusión, se produce desecación y retracción de
la pieza, lo que confiere a esta el aspecto de “cuero curtido” de las inclusiones
defectuosas.