Abstrak

zaitun merupakan komponen penting dari diet Mediterania, perlu untuk membangun tegas identifikasi dan kuantisasi
dari potensi senyawa fenolik antioksidan utama yang dikandungnya. Antioksidan fenolik utama dalam dua jenis zaitun
brined diisolasi dan puri fi ed oleh semi-preparatif kromatografi cair kinerja tinggi. analisis struktur dilakukan dengan
menggunakan spektrofotometri UV, spektrometri massa dan spektroskopi resonansi magnetik nuklir. Secara khusus,
benar-benar ditugaskan Data 1H dan 13C NMR disajikan dan kesalahan dalam data literatur dikoreksi. Data
menunjukkan bahwa tyrosol, hydroxytyrosol, 3- (3, 4-dihydroxyphenyl) asam propanoat (dihydroca asam EIC ff),
dihidro-p-coumaric acid (asam phloretic), yang glukosida nylpropanoid yang fenomenal acteoside (verbascoside) dan
isoacteoside, bersama dengan fl avonoids luteolin dan apigenin merupakan komponen utama dari fraksi fenolik buah
zaitun hitam brined. Brined zaitun hijau hanya berisi hidroksitirosol dan jejak fenolat kecil lainnya. zaitun brined
mengandung konsentrasi yang lebih tinggi antioksidan fenolik dari minyak zaitun dan mungkin, oleh karena itu,
menjadi modulator lebih penting dari aktivitas kemopreventif kanker
1. Perkenalan
Kejadian kanker dan penyakit jantung adalah con- siderably rendah dalam cekungan Mediterania dibandingkan untuk
seluruh Eropa (Keys dan Keys, 1975;. Keys et al, 1981; Gerber, 1994). Dengan demikian, wilayah Mediterania
merupakan kantong peradaban Barat yang menikmati gaya hidup yang relatif sehat, dan alasan utama
untuk ini, selain dari faktor genetik mungkin, dapat dikaitkan dengan speci fi c praktek diet Mediterania. Misalnya,
buah zaitun, minyak zaitun, ikan dan buah segar-wakil mengirim komponen pokok dari diet Mediterania dan beberapa
studi epidemiologi (Martin-Moreno et al, 1994;. Trichopoulou et al, 1995;.. La Vecchia et al, 1998; Braga et al., 1998)
menunjukkan bahwa ada pelindung proyek-e ff konsumsi minyak zaitun terhadap payudara dan kanker usus besar.
Meskipun konsumsi lemak tinggi berkorelasi antar nasional dengan kejadian kanker banyak (Gio- Vannucci et al,
1994;. Katsouyanni et al, 1986;. Kuller, 1997;. Holmes et al, 1999), di Yunani kejadian penyakit ini sangat rendah
meskipun konsumsi rata-rata 140 g lemak per hari. Namun proporsi yang besar lemak ini (60%) adalah dalam bentuk
asam oleat (cis 9- asam octadecenoic), sebuah C18 asam lemak mono-tak jenuh, dengan kontribusi lebih rendah dari
lemak jenuh pada umumnya dan dari lemak tak jenuh ganda asam seperti asam linoleat (cis, cis 9, asam 12-
octadecadienoic) pada khususnya
Asam oleat kurang rentan terhadap peroksidasi lipid dari asam leic lino- dan dimasukkan sebagai asam lemak rantai
panjang besar di membran sel ketika konsumsi tinggi. Dengan demikian, diet Mediterania, dengan komposisi asam
lemak yang menguntungkan dan tingkat yang relatif tinggi antioksidan fenolik poli-, memberikan ketahanan yang lebih
besar untuk stres oksidatif, yang dianggap menjadi faktor logika aetio- utama bagi banyak kanker (Bartsch et al., 1999
2002) dan penyakit jantung (Keys dan Keys, 1975; Keys et al, 1981).. Kandungan antioksidan fenol minyak zaitun
telah diselidiki selama bertahun-tahun dan studi terbaru telah tersedia luas identifikasi dan tasi kuantitas produk zat ini
(Owen et al., 2000a-d). Namun, buah berbiji zaitun dari mana minyak zaitun berasal belum diteliti sedemikian rupa.
Berbagai lications pub- selama bertahun-tahun dan baru-baru karya Ryan et al. (1999) telah menyajikan metode elegan
untuk pengidentifikasian senyawa fenolik dalam buah berbiji zaitun. Jelas, drupes zaitun dapat dimakan segar, tetapi
mereka memiliki rasa yang sangat pahit. Oleh karena itu, untuk membuat mereka lebih cocok, mereka brined selama
beberapa bulan untuk menghapus kepahitan, proses yang juga menghilangkan sebagian dari antioksidan fenolik. Untuk
mendapatkan gambaran yang lebih akurat dari sejauh mana zaitun dapat berkontribusi untuk asupan antioksidan
makanan, perlu untuk mendapatkan fi le komponen fenolik utama sebuah tegas pro di drupes zaitun brined. Oleh
karena itu, kami telah menyelidiki secara rinci isi fenolik dari dua varietas buah berbiji brined zaitun (hitam, hijau).
Kami menemukan bahwa berbagai hijau terkandung dominan hidroksitirosol sedangkan zaitun hitam yang terkandung
tyrosol, hydroxytyrosol, dihy- droca ff EIC asam, dihidro-p-coumaric acid (asam phloretic), acteoside (disakarida
terkait dengan hidroksitirosol dan ca asam ff EIC), acteoside isomer, dan fl yang avonoids apigenin dan luteolin. Dalam
makalah ini kami menjelaskan lation iso-, pemurnian dan elusidasi struktur senyawa ini, termasuk 1H- komprehensif
dan 13C NMR, dan bukti hadir untuk potensi antioksidan mereka
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Reagen
asam asetat, dimetil sulfoksida (DMSO), asam diaminetetraacetic ethylene-, hipoksantin, metanol, Mu xan-, dan
xanthine oxidase diperoleh dari Merck (Darmstadt, Jerman). K2HPO4 dan KH2PO4 diperoleh dari Serva (Heidelberg,
Jerman). asam format, asam salisilat, tyrosol dan FeCl3.6H2O diperoleh dari Aldrich Chemie (Steinheim, Jerman).
Allopurinol, asam askorbat, N-metil-N- (trimethylsilyl) - tri fl uoroacetamide (BSTFA) dan tetrabutylammonium
hidroksida diperoleh dari Sigma Chemie (Dei- senhofen, Jerman). Asam EIC ca ff diperoleh dari Fluka (Buchs, Swiss)
sementara hidroksitirosol disintesis menurut Owen et al. (2000D). Semua solusi-solusi yang dibuat dalam air ganda
suling.
2.2. zaitun belajar
varietas zaitun (Italia) diketahui mengandung jumlah mampu-pertimbangan zat fenolik dipilih untuk memfasilitasi
isolasi su jumlah FFI sien zat ini untuk rinci analisis dan analisis spektroskopi dan untuk penilaian potensi antioksidan
mereka. berbagai hijau: Il Trullo, Sapori di Puglia, Prodotto Naturale Senza Conservanti, conservare di Luogo Fresco,
Dopo L'Apertura. Berbagai hitam: atina cor, Don Franco Cuonzo, 70036, Palombaio, Bari, Apulien.
2.3. Ekstraksi dari pericarp zaitun
Zaitun yang dehulled, dan pericarp itu freeze- kering (Kristus, Gefriertrocknungsanlagen, Osterode, Jerman) untuk
berat konstan, setelah 100 g diekstraksi dua kali (3 jam) dengan pentana dalam Soxhlet appara- tus untuk
menghilangkan lemak yang tidak diinginkan. Setelah kering, pericarp diekstraksi (3 jam) dengan metanol (3). ekstraksi
lanjut dari pericarp dengan berbagai ventilasi sol organik termasuk metanol / air 50:50 seperti yang dijelaskan oleh
Ryan et al. (2001) tidak menghasilkan senyawa fenolik lanjut. Ekstrak metanol dikumpulkan, dan pelarut diuapkan
dalam vakum pada 35 C. Karena residen ditangguhkan dalam asetonitril (50 ml), dan ekstraksi ted tiga kali dengan
heksana (20 mL) untuk menghilangkan komponen sisa lipid. Ekstrak heksana dibuang, dan solusi asetonitril
dikeringkan anhidrat magnesium sulfat. asetonitril telah dihapus dalam vakum (35 C), dan residu dikeringkan
ditangguhkan dalam metanol (5.0 ml), sebelum pemisahan komponen-komponen dengan HPLC semi-preparatif.
2.4. kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC)
HPLC Analitik dilakukan pada ard Hewlett-paket-(HP) 1090 kromatografi cair fi tted dengan C-18, reverse-fase (5
mm) kolom (25 cm 4 mm I.D .; Latex, Eppelheim, Jerman). HPLC semi-preparatif dilakukan pada HP 1100
kromatografi cair fi tted dengan kolom C18 yang sama (10 mm nomor pembayar). Puncak eluting dari kolom
dikumpulkan pada HP 220 lempeng Sampler dan kemudian beku-kering. Untuk tion separa- senyawa individu dalam
air garam dan di ekstrak dari pericarp zaitun, fase gerak terdiri dari 2% asam asetat dalam air (pelarut A) dan metanol
(sol ventilasi B), memanfaatkan gradien pelarut diterbitkan pra viously (Owen et al., 2000c dan d). senyawa fenolik
704 R.W. Owen et al./Food dan Chemical Toxicology 41 (2003) 703-717
di eluannya terdeteksi dengan UV dual-array yang deteksi tor (HP 1040M) ditetapkan pada 278 dan 340 nm. Jumlah
senyawa fenolik dalam ekstrak dihitung dari kurva standar baik standar otentik (tyr- OSOL, asam phloretic, dihydroca
asam EIC ff, luteolin, API- genin), standar disintesis (hidroksitirosol) atau bahan dimurnikan (acteoside dan isomer
nya) di UV maksimum kelas fenolik. Untuk uji hipoksantin / xantin oksidase detektor UV ditetapkan pada 325 nm
untuk deteksi saluran pro (2,5-Dihydroxybenzoic asam dan 2,3-dihydroxy- asam benzoat) yang dihasilkan oleh spesies
oksigen reaktif (ROS) serangan di asam salisilat. Untuk pemeriksaan produk 8-oxo-2-deoxyguanosine (8-okso-2DG)
yang dihasilkan dari serangan ROS atas 2-deoxyguanosine, fase gerak isokratik berisi 5% metanol dan 95% bu berair
ff er (5 mM tetrabutilammonium hidroksida, disesuaikan dengan 6% asam format untuk pH 4.3), dan detektor UV
ditetapkan pada 293 nm. Ekstrak pericarps zaitun dilarutkan dalam metanol (5.0 ml) sebelum injeksi (20 mL) ke dalam
HPLC; yang sesuai air asin diinjeksikan langsung (setelah trifugation-abad di 13.000 rpm). Tingkat ow fl dari fase
gerak adalah 1 mL / menit. instrumen kontrol dan penanganan data dilakukan dengan software HP Chemstation pada
PC.
2.5. spektrofotometri UV
Spektrum UV dari fenolat ed puri fi dicatat dalam metanol pada UV / VIS double-beam spektrofotometer photometer
(Kontron Instrumen, 85375 Neufahrn, Jerman).
2.6. kromatografi gas spektrometri massa (GC-MS)
Analisis dilakukan dengan menggunakan spektrometer massa HP 5973 digabungkan ke HP 6890 gas grafik
chromatograph. Sebelum GC-MS, kering ekstrak metanol yang diderivatisasi dengan penambahan 100 mL BSTFA
pada suhu kamar selama 15 menit (fenolik senyawa TMS hampir seketika di bawah kondisi ini dan tidak ada bukti
non-TMS fenolat diderivatisasi terdeteksi di MS). volume sampel dari 1 mL diinjeksikan ke dalam kromatografi gas.
Pemisahan analit dicapai dengan menggunakan kolom HP 5ms kapiler (30 m 0,25 mm nomor pembayar, 0,25 mm fi
ketebalan lm). Helium digunakan sebagai gas pembawa dengan kecepatan linear dari 0,9 mL / s. Program suhu oven
adalah: suhu awal 100 C, 100-270 C pada 4 C / menit, 270 C selama 20 menit. Suhu GC injektor adalah 250 C; suhu
transfer line diadakan di 280 C. Parameter spektrometer massa untuk mode EI adalah: suhu sumber ion, 230 C; energi
elektron, 70 eV; fi ratapan saat ini, 34,6 mA; elektron tegangan multiplier, 1200 V.
2.7. Nano-electrospray massa ionisasi spektrometri (ESI-MS)
Sampel dilarutkan dalam metanol, dan spektrum massa ESI dicatat pada Finnigan MAT TSQ 7000 triple-quadrupole
spektrometer massa (Finnigan, San Jose, California, USA) yang dilengkapi dengan sumber nanoelec- trospray (EMBL,
Heidelberg, Jerman) menggunakan kedua positif-negatif dan ion-mode. Argon digunakan sebagai gas tabrakan pada
tekanan nominal 2,5 mTorr (1 Torr = 133,3 Pa). Sampel disemprotkan dari rumah di- disiapkan (Type-87-B
microcapillary penarik, Sutter Instrumen) kapiler kaca berlapis emas. tegangan yang diterapkan adalah 400-700 V
dengan berbagai scan 20-2600.

2.8. Nuklir magnetic resonance spectroscopy (NMR)

1H- dan 13C-NMR spektrum untuk semua senyawa kecuali tyrosol dicatat pada Bruker AM-500 meteran
spektrofotometer (Bruker Analytik, Rheinstetten, Jerman) di 11,75 T (1H and13C frekuensi 500,137 dan 125,759
MHz, masing-masing) dan 30 C . Tyrosol spektrum direkam pada spektrometer Bruker AC-250 di 5.87 T (250,133
dan 62,896 MHz). Semua senyawa kecuali avones fl dilarutkan dalam CD3OD (99,8% D), biasanya 3-10 mg dalam
0,4 mL; yang avones fl (VII, VIII) yang sukar larut dalam CD3OD sehingga 3: campuran 1 dari CD3OD / DMSO-d6
diperlukan. Konvensional 1D dan 2D Fourier transform teknik yang bekerja sebagai iden- sary untuk mencapai tugas
sinyal tegas dan struktur bukti untuk semua senyawa secara independen. Selain 2D percobaan pergeseran-korelasi (HH
Cosy dengan konektivitas jarak jauh; CH korelasi melalui 1JCH), ekstensif menggunakan terbuat dari 1H-ditambah
13C spektrum dan selektif 1H-decoupling untuk menentukan rentang panjang konstanta JCH kopling dan untuk
menetapkan semua qua- karbon terner jelas. Jika diperlukan, tugas reochemical Ste-dibuat dengan bantuan 1D nuklir
Overhauser (NOE) di ff selisih spektrum atau 2D ROESY percobaan. Detil analisis spektrum ditingkatkan resolution-
dilakukan dengan menggunakan Bruker Win NMR (puncak memetik, integrasi, analisis multiplet) dan WIN-DAISY
(simulasi berputar sistem dan tion itera-) perangkat lunak untuk PC. 1H dan 13C kimia pergeseran d dilaporkan dalam
ppm relatif terhadap CHD2OD (d = 3,30 ppm untuk 1H) atau CD3OD (49.0 untuk 13C) atau standar internal Me4Si
(TMS, d = 0,0) dalam pelarut campuran.
2.9. pemodelan molekul
Sebagai panduan untuk membuat awal sinyal NMR penugasan, prediksi pergeseran kimia dibuat menggunakan
rutinitas di ChemDraw Ultra 6.0 (CambridgeSoft, Cambridge, MA). pemodelan molekul dilakukan dengan MM2
kekuatan lapangan di Chem3D dan dengan metode AM1 semi-empiris dalam HyperChem 5.1.
R.W. Owen et al./Food dan Chemical Toxicology 41 (2003) 703-717 705
2.10. hidrolisis asam
Sebuah alikuot (10 mL larutan metanol) dari ekstrak kasar pericarp zaitun hitam atau glikosida murni dipindahkan ke
tabung kaca centrifuge 15-mL, dan pelarut dihapus bawah aliran nitrogen. residu tersuspensi dalam 20% H2SO4 (100
ml) dan diinkubasi pada 100 C selama 1 jam pada air mandi gemetar. Hidrolisat kemudian diekstraksi dua kali dengan
etil asetat (2 mL); etil asetat ekstrak yang dikumpulkan dikeringkan di bawah aliran nitrogen dan diresuspensi dalam
metanol (100 ml). Solusi ini digunakan untuk ana HPLC lytical dan, setelah derivatisasi dengan BSTFA, untuk analisis
GC-MS
2.11. Hipoksantin / xanthine oxidase assay
Uji yang digunakan untuk menentukan potensi terjadinya antioksidan dari ekstrak zaitun dan puri fi individu ed
fenomenal, senyawa nolic didasarkan pada metode Owen et al. (1996, 2000c, e). Fenolat I-VI dilarutkan dalam uji bu
ff er (1,0 mL) dan diuji di kisaran trasi konsentrasi 0-4 mM. The avonoids fl (VII dan VIII) dilarutkan dalam DMSO
sebelum Selain uji bu ff er memberi fi konsentrasi nal dari 0-200 mM. Sebuah alikuot 10 mL xanthine oxidase (18 mu)
dalam 3,2 M NH4SO4 ditambahkan untuk memulai reaksi. Tabung ple sam diinkubasi selama 3 jam pada 37 C, dimana
pada saat reaksi selesai. Sebagian 20-mL campuran reaksi dianalisis dengan HPLC menggunakan fase dan kondisi
ponsel yang dijelaskan di atas untuk ana HPLC lytical. Sampel untuk penentuan kapasitas antioksidan dari ekstrak
kulit buah zaitun (2 g) disusun dengan menempatkan 0-500 mL methanol (2,0 mL) larutan ekstrak dalam tabung
centrifuge 15-mL (dalam rangkap dua) dan menghapus pelarut di bawah sungai nitrogen. sampel air garam disiapkan
dengan menambahkan 0-500 mL untuk tabung centrifuge 15-mL diikuti oleh lyophilisation. Dalam setiap kasus materi
sampel kering ditangguhkan dalam uji bu ff er (1,0 mL) sebelum penambahan xantin oksidase. Konsentrasi fenolik
individu komponen-komponen dan hidroksilasi hipoksantin dipantau melalui penyerapan UV pada l = 278 nm;
hidroksilasi asam salisilat dipantau pada 325 nm. Kuantisasi komponen fenolik dari ekstrak zaitun terlarut dalam
pengujian ini fosfat bu ff er dan produk akhir dari enzim atau reaksi radikal bebas dilakukan dengan menggunakan
kurva standar yang sesuai penyerapan vs konsentrasi diukur untuk senyawa murni.
2.12 . assay 2 - deoxyguanosine
Sistem bu ff er dijelaskan untuk sistem hipoksantin / xantin oksidase digunakan dengan kelalaian
hipoksantin dan penggantian asam salisilat oleh 2 - deoxyguanosine ( 2 mM ) . Generasi ROS diprakarsai oleh
penambahan asam askorbat ( 500 mM ) . Tabung reaksi diinkubasi selama 24 jam pada 37 C , dan 20 mL campuran
reaksi dianalisis dengan HPLC seperti dijelaskan di atas . Jumlah guanosin 8 - oxo - 2 - deoxy- dihasilkan oleh reaksi
dari ROS dengan 2- deoxyguanosine ditentukan dari penyerapan pada 293 nm menggunakan kurva standar yang
ditetapkan untuk produk reaksinya . Selama dua tes yang dijelaskan di atas volume ekstrak fenolik atau konsentrasi
dimurnikan fenomenal, senyawa nolic menghasilkan penghambatan 50 % dari tion oksidasi ( IC50 ) ditentukan dengan
menggunakan program Table Curve ( Jandel Ilmiah fi c , Chicago , IL ) .
3. Hasil
3.1 . karakteristik dasar dari buah zaitun brined
karakteristik dasar dari buah zaitun brined disajikan pada Tabel 1. Massa pericarp rata-rata untuk drupes zaitun hitam
atau hijau ( n = 20 ) adalah 71,8 atau 111,6 g , masing-masing. Zaitun hijau dipamerkan rasio yang lebih tinggi dari fl
esh ke batu ( empulur ) dibandingkan dengan zaitun hitam , dan ini kembali fl ektopik ted di kadar air yang lebih tinggi
untuk zaitun hitam hijau vs ( 74 % vs 50 % ) . Ekstrak pentana dari pericarp zaitun juga menghasilkan jumlah secara
signifikan lebih tinggi dari minyak zaitun untuk hijau vs hitam ( 62,2 % vs 15,4 % dari kering wt .; 16,3 % vs 7,7 %
dari berat basah . ) . analisis HPLC untuk semua komponen fenolik utama terdeteksi menunjukkan bahwa buah zaitun
hitam berisi hampir lima kali lipat jumlah antioksidan fenolik sebagai zaitun hijau ( berarti : 29.24 vs 6.59 mg per buah
berbiji ) .
3.4. analisis spektroskopi dan penjelasan struktur
Data GC-MS untuk komponen pericarp diderivatisasi fenolik zaitun diringkas dalam Tabel 2. ESI-MS dan data UV
untuk senyawa terisolasi disajikan
pada Tabel 3 dan 4, masing-masing. Rinci 1H- dan 13C- NMR data dengan tugas lengkap diringkas dalam Tabel 5-7.
3.4.1. fenol sederhana Untuk senyawa I dan III UV, ESI-MS dan NMR data serta hasil GC-MS untuk TMS turunannya
cocok dengan hasil yang diperoleh sebelumnya untuk hidroksitirosol dan tyrosol, masing-masing (Owen et al., 2000D).
Spektrum UV senyawa II dan IV nyarankan- gested struktur fenol sederhana. GC-MS spektra dipamerkan ion molekul
dengan m / z = 28 unit lebih tinggi dari yang diperoleh dengan hidroksitirosol dan tyrosol, masing-masing, dan pola
fragmentasi mirip dengan yang diperoleh dengan alkohol fenol akrab. Metilasi II dan IV dengan diazometana sebelum
TMS derivatisasi menyebabkan ion molekul dengan m / z dikurangi dengan 58 unit (+ CH3, -TMS), menunjukkan
adanya satu gugus asam karboksilat di masing-masing senyawa. Ion molekul dari senyawa underivatised terdeteksi
sebagai [MH] dan [2M-H] di negatif-ion ESI-MS spektra (Tabel 3), con fi rming berat molekul II dan IV sebagai m /
z 182 dan 166 , konsisten dengan derivatif 2,3-dihidro dari ca ff asam EIC dan p-coumaric acid (massa tepat: 182,058
dan 166,063).

The 1H- dan 13C-NMR data untuk senyawa I dan III sepakat sangat baik dengan data kami diterbitkan untuk
hidroksitirosol dan tyrosol, masing-masing (Owen et al., 2000D). 1H dan 13C NMR data untuk II dan IV diberikan
dalam Tabel 5 dengan tugas yang lengkap dan jelas, menggunakan skema penomoran Gambar. 1 (yang dipilih untuk
menyederhanakan perbandingan). Spektrum IV menunjukkan pola yang khas terkait dengan sub para
stituted benzena dan bagian X-CH2-CH2-Y. tugas sinyal dapat dengan mudah dibuat dengan menggunakan prediksi
pergeseran kimia untuk struktur 3- (4-hidroksifenil) -pro- asam panoic. Spektrum II pola acara khas untuk benzena
1,3,4-trisubstituted dan bagian X-CH2-CH2-Y, analog dengan spektrum hidroksitirosol. Cincin proton H2,5,6 mudah
ditugaskan atas dasar orto, meta, andpara pola kopling JHH, dan kelompok CH2 melekat cincin (pos. 7) dapat di- kenal
dengan kopling 4JHH untuk H2 dan H6 . The proto yang ditunjuk karbon dapat segera ditugaskan melalui korelasi
percobaan C-H 2D. Akhirnya, tugas dari dua cincin karbon hydroxylated membutuhkan analisis konstanta JCH kopling
jarak jauh. Karbon 4 di posisi para pameran kopling besar 3J ke H6 (9,6 Hz, khas untuk HCC (H) -C jalur), sebuah 3J
kopling agak kecil untuk H2 (6,7 Hz, dikurangi dengan kelompok OH pada C3), dan kopling 2J untuk H5 (3,0 Hz). Di
sisi lain, karbon 3 menunjukkan 3J, 2j, dan 4J kopling untuk H5 (7,1 Hz, khas untuk H-C-C (OH) jalur -C), H2 (3,3
Hz), dan H6 (1,4 Hz), masing-masing. Meskipun che- mical pergeseran prediksi memberi urutan yang benar dari
pergeseran kimia karbon untuk II (C3 = 144,4; C4 = 141,7), metode '' pengenalan pola '' melalui JCH memberikan
satu-satunya cara umum dan aman untuk menetapkan C3 dan C4 di gugus 3,4-dihydroxyphenyl biasa ditemui dalam
senyawa fenolik yang menarik.
analisis rinci dari etil bagian sebagai sistem AA0BB0 berputar menggunakan software WIN - DAISY memberikan e
ff efektif ( rotamer rata-rata) vicinal kopling 3JHH : misalnya , 8,9 dan 6,6 Hz untuk dihydroca asam EIC ff ( II ) . Jika
kita asumsikan untuk rotamer mengingat bahwa kopling antara proton trans adalah ca. 10 Hz , maka rotamer 1 dengan
tion orientasi trans dari substituen X , Y dihuni sampai sebatas ca. 70 % . Jenis analisis tidak mungkin untuk Asam
phloretic ( IV ) sejak jalur perluasan , kemungkinan besar karena penghapusan lengkap dari spesies paramagnetik dari
sampel , resolusi dicegah dari rincian pseudo- kembar tiga . Untuk tyrosol dan kopling vicinal hidroksitirosol 8,0 dan
6,5 ditentukan , sponding corre- untuk ca. 60 % rotamer 1. Secara bersama-sama , data NMR dan data MW jelas con
fi rm struktur disajikan pada Gambar . 1 untuk senyawa I- IV .
3.4.2. Glikosida Dua glikosida isomer kompleks, acteoside-1 (V, disebut dalam literatur sebagai acteoside atau
verbascoside) dan acteoside-2 (VI, isoacteoside atau isoverbascoside) diisolasi dari pericarp zaitun hitam. Data ESI-
MS (Tabel 3) tersedia nilai m / z untuk [MH], [2M-H], dan [M + Na] + ion, memberikan berat molekul 624, konsisten
dengan rumus C29H36O15 untuk kedua senyawa (kalk .: 624,205). Spektrum UV untuk kedua isomer yang sangat
mirip (Tabel 4), masing-masing
menampilkan lima band penyerapan dalam kisaran 230-330 nm dengan log "= 4.0 ca.. Data ini menunjukkan adanya
senyawa fenolik dengan bagian tak jenuh luar cincin fenol. Miyase et al. (1982) melaporkan tiga band UV untuk
acteoside -1 dan -2 di 246, 290, 330 nm dan 246, 289, 328 nm, masing-masing. asam hidrolisis menyebabkan
pembentukan dari dua senyawa fenolik sederhana yang con fi rmed oleh GC-MS sebagai hidroksitirosol dan ca asam
ff EIC [3- (3 , 4-dihydroxyphenyl) asam -propenoic]. Tabel 6 merangkum data 1H- dan 13C-NMR diperoleh untuk
senyawa V dan VI, dan Gambar. 4 hadiah wilayah resolusi-ditingkatkan 1H-NMR diperluas untuk V. untuk
pengetahuan kita hasil ini-wakil yang dikirim fi rst lengkap dan analisis ambigu spektrum 1H dari acteosides (lihat
Diskusi). spektrum 1H yang iteratif Fi tted menggunakan WIN-DAISY. Tugas dan hubungan struktural con fi rmed
oleh eksperimen 2D (jarak NYAMAN, ROESY , dan CH korelasi) dan spektrum 13C diperoleh dengan selektif 1H-
decoupling pada H5 dari ca ff bagian Eyl untuk menetapkan C3, C4. Selain itu, data referensi yang lengkap yang
memanfaatkan- mampu untuk hidroksitirosol (Owen et al., 2000D) dan ca asam ff EIC (akan diterbitkan) dalam larutan
metanol. Untuk acteoside-1 (V) residu l-rhamnose dengan 1-OR dan 2-OH aksial (Gambar. 1) adalah con fi rmed oleh
13C pergeseran kimia dan nilai-nilai kecil untuk vicinal pro ton kopling J12 = 1,8 ( equat.-equat.) dan J23 = 3.3 (equat.-
aksial). The -d-glukosa residu dengan 1-O sub stituent, glikosilasi pada C3, dan asilasi di C4 adalah con fi rmed sebagai
berikut: 13C pergeseran kimia dari 104,2 ppm untuk C1 dan besar 3J trans-aksial untuk semua proton cincin; turun fi
pergeseran bidang dari C3 untuk 81,6 ppm; turun fi pergeseran bidang dari H4 ke 4,89 ppm. NMR Data con fi rm
bahwa bentuk isomer acteoside-2 (VI) identik dengan acteoside-1 dengan pengecualian bahwa residu Eyl ca ff melekat
glukosa C6 bukan C4 (pergeseran yang normal kimia untuk H4, down shift lapangan untuk H6a, b ). analisis kualitatif
spektrum ROESY 2D untuk acteoside-2 memberi hubungan berikut untuk intensitas lintas puncak: R1, G3> R1, R2;
G1, HT8b> G1, HT8a> HT7a, b). Hasil ini con fi rm keterkaitan untuk rhamnose dan hidroksitirosol. ROESY
menyeberangi puncak antara ca ff proton Eyl C8 dan glukosa H6a, b proton tidak terdeteksi, namun ini dapat dijelaskan
oleh jarak yang besar yang terlibat, seperti yang ditunjukkan oleh pemodelan molekul (lihat Diskusi)
3.4.3. Flavonoid Data ESI-MS (Tabel 3) disediakan berat molekul untuk VII dan VIII yang konsisten dengan struktur
luteolin dan apigenin, masing-masing. Data GC-MS (Tabel 2) dan data UV (Tabel 4) juga mendukung ini. Analisis
NMR lengkap senyawa ini di CD3OD / DMSO-d6 diringkas dalam Tabel 7 dan, untuk pengetahuan kita, merupakan
analisis yang paling lengkap untuk senyawa ini sampai saat ini (lihat Diskusi). tugas 13C tegas didasarkan pada korelasi
CH, jarak Data CH kopling luas dan (untuk apigenin) decoupling selektif H6 dan H20,60. Selanjutnya, perangkat
nuklir Overhauser (apigenin) dari H20,60 ke H3 (17%) dan H8 (1%) tetapi tidak untuk H6 memberikan bukti penting
bagi 1H penugasan. NMR Data fi tegas menetapkan struktur luteolin (VII) dan apigenin (VIII), dan hasil kami
konsisten dengan data yang diterbitkan dari Markham dan Geiger (1986), Markham dan Chari (1982) dan analisis yang
disediakan oleh Van Loo et al . (1986). Namun, beberapa perbedaan-perbedaan di ff dalam tugas tetap (lihat Bagian
4).
3.5. Jumlah total dan individu senyawa fenolik dalam buah zaitun
Untuk dua jenis zaitun dan air asin terkait jumlah zat fenolik ditentukan oleh
analisis HPLC, seperti yang dirangkum dalam Tabel 8. Hitam zaitun pericarp terkandung 16,40 g / total fenolat kg
diwakili oleh fenol sederhana (55%), glikosida (42%) dan avonoids fl (3%). Fenol sederhana hidroksitirosol, tyrosol,
dihydroca asam EIC ff dan asam phloretic-wakil masing-masing sented 35, 3, 11 dan 7% dari total fenol,. Glikosida
kontribusi yang acteoside-1 (30%) dan acteoside-2 (12%) sedangkan avonoids fl yang luteolin (2%) dan apigenin
(0,8%). Pericarp dari zaitun hijau hanya mengandung 4,48 g / total fenolat kg, hampir seluruhnya diwakili oleh
hidroksitirosol dengan hanya jejak komponen lainnya. Pro fi les dari air asin mencerminkan orang-orang dari pericarps
masing. Black olive air garam yang terkandung 0,93 g / L Total fenolat (mewakili 5,4% dari total fenolat di pericarp
+ air garam); hijau zaitun air garam yang terkandung 1,36 g / L (23% dari total).
3.6. potensi antioksidan dari ekstrak kasar dan air asin
Kapasitas antioksidan dari ekstrak kulit buah zaitun ditentukan dengan memantau produksi asam benzoat hydroxylated
(DHBA) karena serangan
ROS pada asam salisilat dalam hipoksantin / xanthine uji oksidase atau produksi 8-okso-2DG di uji 2-deoxyguanosine.
Penurunan total produk oksidasi tion sebagai fungsi dari volume ekstrak ditambahkan ke pengujian yang ditunjukkan
pada Gambar. 5. ekstrak zaitun hitam dengan konsentrasi yang lebih tinggi dari senyawa fenolik dipamerkan potensi
antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak olive green. Ekstrak zaitun hitam dan hijau memiliki nilai
IC50 dari 30 dan 130 mL, masing-masing, untuk hipoksantin / xantin oksidase assay dan 50 dan 90 mL untuk uji 2-
deoxyguanosine. Semakin tinggi e FFI efisiensi dalam assay yang hipoksantin / xantin oksidase untuk ekstrak zaitun
hitam mungkin karena observedsigni fi kan inhibitionofxanthineoxidaseactivity (IC50 = 200ml)
.Thebrinesforthetwotypes dari olivesalso menghambat serangan dari ROS secara tergantung dosis yang sama tetapi
dengan nilai IC50 yang lebih tinggi (data tidak ditampilkan).
3.7. potensi antioksidan dari puri fi fenolat ed
Hidroksitirosol (I), dihydroca asam EIC ff (II), tyrosol (III), asam phloretic (IV), dan acteoside-1 (V) diuji secara
individual dalam hipoksantin / xantin oksidase assay. Setiap senyawa menghambat hidroksilasi asam salisilat oleh
ROS secara dosis-tergantung seperti ditunjukkan pada Gambar. 6 dengan nilai IC50 yang tercantum dalam legenda
angka. Tidak ada bukti dari xanthine langsung penghambatan oksidase dalam kromatogram HPLC. fl The avonoids
luteolin dan apigenin yang ble buruk larutan dalam media air. Oleh karena itu, mereka dilarutkan dalam DMSO untuk
mempelajari kemungkinan proyek-e ff mereka pada aktivitas xantin oksidase. Karena DMSO sendiri, adalah bitor inhi-
ampuh serangan radikal hidroksil pada asam salisilat, itu tidak mungkin untuk melakukan studi inhibisi dijelaskan
untuk fenol sederhana. Namun, dalam tes untuk kegiatan xantin oksidase (produksi asam urat), baik luteolin (VII; IC50
= 77 mM) dan apigenin (VIII; IC50 = 186 mM) terbukti menjadi inhibitor relatif ampuh xantin oksidase, sebanding
dengan allopurinol (IC50 = 74 mM), seperti ditunjukkan pada Gambar. 7.

4. Diskusi
4.1. analisis NMR untuk acteosides
Dalam publikasi asli mereka mengenai kation fi identifikasi dari acteosides, Miyase et al. (1982) mempresentasikan
data 1H-NMR sangat terbatas (90 MHz) yang konsisten dengan hasil kami dan lengkap 1D 13C Data pergeseran kimia
(22,5 MHz) yang beberapa kesalahan tugas yang jelas. Berikut pasang tugas untuk kedua isomer pada Tabel 2 publikasi
yang perlu dipertukarkan: C2, C5 dan C3, C4 di residu xytyrosol hidro; C2, C (C8) dan C3, C4 dalam residu Eyl ca ff;
C2, C5 untuk residu glukosa. Andary et al. (1982) disajikan satu set lengkap 1H tugas pergeseran kimia (250 MHz,
DMSO-d6) dan beberapa konstanta kopling diperkirakan untuk verbascoside (acteoside-1). Tugas 1H pergeseran yang
terdiri dengan hasil kami untuk solusi CD3OD dengan pengecualian yang HT5 dan HT6 yang dipertukarkan. Andary
et al. (1982) membuat 13C tugas untuk verbascoside di D2O / aseton-d6 dan DMSO-d6 + CF3COOD tanpa
diuntungkan dari korelasi CH dan dengan perbedaan berikut: feyl caf- C5, C8 dipertukarkan; G2, G5 yang belum
terselesaikan dalam DMSO, dipertukarkan di D2O. Sticher dan Lahloub (1982) mempresentasikan data NMR untuk
acteoside-1 dalam larutan CD3OD. Analisis parsial mereka dari spektrum 1H pada 100 MHz adalah benar untuk semua
sp2 pro ton. Namun, ada beberapa kesalahan dalam 13C tugas: HT2, HT5 dipertukarkan; sinyal untuk ca ff C2 Eyl,
C5, C8 ditugaskan untuk C8, C2, C5, masing-masing. Kobayashi et al. (1984) juga meneliti acteoside- 1 di CD 3OD.
tugas 1H parsial mereka pada 90 MHz benar sedangkan kesalahan dalam 13C tugas yang sama dengan yang dibuat
oleh Miyase et al. (1982).
sama seperti yang dilakukan oleh Miyase et al. (1982).
Zhongjian et al. (1991) membuat 13C tugas untuk acteoside-1 di D2O dengan perbedaan berikut: HT2, HT5 belum
terselesaikan; C5, C8 terbalik; G2, G5 terbalik. Zimin dan Zhongjian (1991) dibuat 13C tugas untuk acteoside-1 dan
2 dalam DMSO pada 100 MHz tapi rupanya tanpa menggunakan metode 2D. Urutan pergeseran kal chemi- cocok
tugas kami kecuali residu Eyl ca ff mana C5, C8 dibalik untuk acteoside-1 dan C2, C5, C8 dipertukarkan untuk
acteoside-2. Dalam studi lain Zhongjian et al., (1992) diukur acteoside-2 di CD3OD. Dalam hal ini ada kesepakatan
yang sangat baik dengan nilai-nilai 13C pergeseran kami, dan satu-satunya kesalahan tugas adalah pertukaran G2, G5.
Demikian pula, Xiong et al. (1996) disajikan 13C kimia pergeseran (100 MHz) dan penugasan yang dibuat oleh CH
eksperimen korelasi untuk acteo- sisi-1 yang setuju sangat baik dengan data kami dengan pengecualian bahwa G2, G5
terbalik. Perbedaan ini mungkin karena tugas terbalik dari G2, G5 pro ton (data 1H tidak diberi). Akhirnya, Nakamura
et al. (1997) membuat 1H studi / 13C rinci pada 500/125 MHz dari acteoside-1 dalam DMSO. Analisis 1H tidak
lengkap tetapi hasilnya dipresentasikan setuju cukup baik dengan data kami. 13C tugas pergeseran benar-benar
konsisten dengan hasil kami; nilai-nilai pergeseran setuju sangat baik dengan data Xiong et al. (1996), juga diperoleh
dengan menggunakan DMSO sebagai sol curhat. Dalam DMSO dibandingkan dengan CD3OD semua pergeseran
kimia relatif terhadap TMS berkurang, dengan perbedaan-perbedaan di ff mulai 0,4-2,7 ppm. Dalam sebuah penelitian
terbaru dari beberapa glikosida phenylethanoid dengan struktur terkait erat dengan acteosides, Miyase et al. (1996)
disajikan parsial 500 MHz 1H-NMR dan data pergeseran 13C kimia lengkap (CD3OD sebagai ventilasi sol) dengan
tugas yang setuju dengan kita ketika cor- menanggapi residu struktural dibandingkan. Sebagaimana dicatat untuk fenol
sederhana tugas tegas C3 dan C4 dalam kelompok 3,4-dihydroxyphenyl membutuhkan pengukuran sebenarnya dari
kopling
Ara. untuk H2,5,6 dan bukan hanya penentuan bahwa kopling ada (2D percobaan korelasi seperti HMBC atau
COLOC). Untuk sering terjadi 4-hidroksi-3- metoksifenil gugus korelasi percobaan jangka panjang akan su FFI efisien
sejak metoksi proton pasangan secara khusus untuk C3. Dari hasil kami disajikan di sini dan di Owen et al. (2000D)
dan dari literature baru-baru ini, termasuk Seca et al. (2001), aturan eral tampaknya gen- muncul untuk penugasan C3,
C4 di kedua jenis kelompok fenil 1,3,4-tersubstitusi. Ketika C1 fenil melekat unit karbon-karbon sp3-sp3 (etil di
hidroksitirosol atau dihydroca asam EIC ff, a-CH (OR) -CHR- Unit di banyak lignan), maka urutan pergeseran kimia
adalah C4 <C3 ; ketika C1 fenil melekat ikatan ganda sp2-sp2 karbon-karbon (seperti dalam cinnamyl, ca ff Eyl, gugus
ferulyl, atau C2-C3 di avones fl), maka urutan pergeseran terbalik, C4> C3, karena positif meningkat dalam ayat e ff
ect disebabkan oleh fi n satuan ole. prediksi pergeseran kimia dibuat menggunakan kombinasi linear sederhana dari
kenaikan pergeseran untuk Zene ben (mis ChemDraw) tidak memadai mencerminkan aturan-aturan yang jelas.
Semi-empiris pemodelan molekul dari acteosides (AM1 di HyperChem) memungkinkan interpretasi data NMR dalam
hal parameter stereokimia dan konformasi. Untuk kedua isomer rendah-energi formasi con- dari linkage rhamnose-
glukosa mengadopsi sudut FH, CH antara 30 dan 30, yaitu dengan proton R1 berorientasi pada proton G3 (jarak: 2,1-
2,2 A). Hal ini menjelaskan mengapa ROESY menyeberangi puncak R1, G3 adalah lebih besar dari R1, R2 lintas
puncak (jarak: 2,66 A). Model untuk kedua isomer menunjukkan bahwa konformasi disukai dari hidroksitirosol
aglycone adalah bentuk diperpanjang dengan kelompok fenil trans ke oksigen cosidic Gly-, konsisten dengan kopling
JHH di etil fragmen yang menunjukkan dominasi yang rotomer trans 1. Untuk kedua isomer hubungan aglycone di C1
glukosa mengadopsi konformasi dengan satu HT8 proton berorientasi pada glukosa H1 (syn dengan FH, CH = ca 60,
60;. r = 2,39) sementara yang lain poin HT8 proton jauh dari H1 (r = 2,98 A). Hasil ROESY untuk acteoside-2
menunjukkan bahwa HT8b harus proton dalam orientasi syn. Kedua isomer menunjukkan pergeseran kimia perbedaan-
perbedaan di ff yang sama untuk glukosa H6a, kopling b dan mirip dengan H5. Data konsisten dengan H6a = H6 (Si),
H6b = H60 (Re) dan dengan dominan dan sekitar populasi yang sama dari gg dan gt rotamers (C5-C6 dihedral).
Rupanya, lampiran kelompok Eyl ca ff untuk C6 di acteoside-2 memiliki sedikit e ff ect pada populasi ini rotamer.
Satu-satunya signifikan 1H pergeseran di ff perbedaan-perbedaan untuk dua isomer acteoside, selain dari orang-orang
untuk G4, G6 proton, diamati untuk proton rhamnose R5, R6, yang digeser ke atas lapangan di acteoside-1. Pemodelan
menunjukkan bahwa dalam pembentukan con- disukai acteoside-1 R5, R6 yang terletak kira-kira tegak lurus di atas
C¼C-C¼O bagian dari planar yang
ca ff Eyl bagian dan karena itu mengalami gest lar- up pergeseran lapangan.

4.2. analisis NMR untuk avones fl

Dalam studi NMR masa lalu avonoids fl umumnya digunakan DMSO sebagai pelarut. pengukuran kami per- dibentuk
dengan 3: 1 CD3OD / DMSO-d6, yang memiliki keuntungan dari viskositas rendah, memungkinkan suatu resolusi
yang lebih tinggi yang harus dicapai. tugas sinyal 1H kami untuk Genin API- dan luteolin yang konsisten dengan data
literatur (Markham dan Geiger, 1994) dengan semua nilai pergeseran dikurangi dengan ca. 0,01-0,08 ppm dalam
campuran pelarut kami. Namun, kami telah mampu menyelesaikan semua JHH yang lebih besar dari 0,1 Hz, termasuk
kopling 6J antara H3 dan H6. Dibandingkan dengan apigenin, semua konstanta kopling di Ring C dari luteolin
berkurang, mencerminkan dalam fl u- ence dari kelompok hidroksil tambahan di pos. 30. Kompilasi data NMR fl
avone 13C disiapkan oleh Markham dan Chari (1982) sering digunakan untuk membuat tugas dan con fi rming fl avone
struktur. Namun, dalam banyak kasus data diperoleh sebelum teknik 2D NMR yang umum tersedia, dan kesalahan
tugas karenanya tak terelakkan. Van Loo et al. (1986) membuat analisis rinci dari spektrum apigenin dalam DMSO-
d6 menggunakan jarak jauh JCH dan selektif percobaan decou- pling, dan telah ditetapkan hampir ekivalen C2 dan C7
karbon dengan bahan kimia bergeser 163,93 dan 164,34 ppm, masing-masing, dibandingkan dengan tugas kebalikan
dari 164,1 dan 163,7 ppm oleh Markham dan Chari (1982). Kami telah menggunakan strategi yang sama untuk
membuat tugas tegas untuk apigenin dan luteolin dalam pelarut campuran kami. Untuk C2, C7 di apigenin kita fi
pergeseran dn 165,30 dan 165,27 ppm sedangkan untuk luteolin nilai-nilai yang 165,44 dan 165,30 ppm. Pergeseran
rangka C2> C7 berlaku dalam kedua kasus sementara dalam DMSO urutan berlawanan ditemukan untuk apigenin
(Van loo et al., 1986) dan tidak pasti (Markham dan Chari, 1982) untuk luteolin (164,5, 164,7 ppm). Untuk semua
karbon lainnya penugasan kami setuju dengan mereka dalam literatur (Markham dan Chari, 1982;. Van Loo et al,
1986) dalam hal urutan shift, tetapi nilai-nilai pergeseran kami menunjukkan kenaikan positif dari ca. 0,2-1,5 ppm
dibandingkan dengan nilai-nilai untuk solusi DMSO. Van Loo et al. (1986) Hadir beberapa 2JCH Dan 3JCH kopling
untuk review apigenin hearts DMSO. Kami Mampu pro- vide PADA Tabel 7 PT Yang LEBIH komprehensif kopling,
termasuk 4JCH, mungkin KARENA Resolusi Yang Lebih Baik TIMAH hearts pelarut Campuran Dan TIDAK adanya
komplikasi Dari kopling Ke Kelompok OH. Kami hasil temuan con fi rm Banyak hasil temuan Yang Oleh disajikan
Van Loo et al., (1986), crepancies tetapi ADA sejumlah dis-. Untuk review C10 ADA Tiga 3JCH Yang ditugaskan
sebagai 5,5 Hz (H3) Dan 4,2 Hz (H6, H8). Namun, kami menemukan Oleh decoupling selektif bahwa telkom yang
Benar Adalah 5,4 Hz (H6) Dan 4,2 Hz (H3, H8). Untuk review pasang KARBON Setara C20 / 60 dan C30 / 50 di
Cincin
R.W. Owen et al./Food Dan Chemical Toxicology 41 (2003) 703-717 715
B, kopling Jarak Jauh Yang diamati Dari 7,1 Dan 4,5 Hz, masing-masing, Keliru ditugaskan sebagai 2JCH Ke H30 /
50 Dan H20 / 60. Sebenarnya Penyanyi Adalah lintas cincin 3JCH plings cou-, Dan telkom Yang Tepat Adalah 7,1 Hz
(C20 untuk review H60, C6 0 H20), 4,8 Hz (C30 untuk review H50, C5 0 C30); untuk review 2JCH hasilnya 1,1 Hz
(C30 untuk review H20, C5 0 H60), Dan <0,5 Hz (C20 untuk review H30, C6 0 H50). Untuk review kedua fl avones
kopling vicinal CH di Cincin B mematuhi Aturan berikut: ca. 8-9 Hz (Cq-CH-CH Jalur); ca. 7 Hz (CH-Cq-CH ATAU
Cq-COH-CH); ca. 3-5 (CH-COH-CH).
4.3. Fenolat hitam vs zaitun hijau
Isi total dan konstitusi fenolik senyawa yang berada jelas di ff erent di brined hitam vs drupes hijau zaitun (satu varietas
masing-masing dibandingkan). Sementara fenolik pro fi les serupa di pericarp dan air garam dari jenis zaitun diberikan,
isi mutlak dalam air asin yang jauh lebih rendah daripada di drupes. Dibandingkan dengan extravirgin minyak zaitun
isi total fenolat, pada g / dasar kg, kira-kira 40 dan 10 kali lebih besar untuk zaitun hitam dan hijau, masing-masing.
Black olive pericarp berisi campuran kaya nolics yang fenomenal, dan delapan senyawa fenolik utama milik tiga kelas
diisolasi dari ekstrak metanol: sederhana fenol hidroksitirosol dan tyrosol; analog karboksi mereka dihydroca asam
EIC ff dan asam phloretic (dihidro-p-coumaric acid); dua asil sisi glikosuria utama, acteoside-1 dan isomer nya
acteoside-2; dan fl umum avonoids luteolin dan apigenin. Sebaliknya, pericarp zaitun hijau mengandung praktis hanya
xytyrosol hidro sebagai komponen fenolik utama. Kehadiran dihydroca asam EIC ff dalam buah zaitun hitam brined
dan air garam mereka dapat dikaitkan dengan memperlambat hidrolisis acteoside dan isomer nya, mungkin obat-
diciptakan oleh pH asam (<4.0) dari air garam dan oleh lactobacilli yang fl ourish dalam kondisi ini ( Sanchez et al.,
2000). Asam EIC yang ca ff dirilis oleh hidrolisis dapat lebih dikurangi oleh lactobacilli untuk memberikan jenuh alkil
rantai samping di turunan dihydro. Kehadiran asam phloretic kurang mudah dijelaskan sejak glikosida sponding corre-
mengandung p-coumaric acid sebagai kelompok asil tidak terdeteksi di pericarp. Mengingat acteoside itu dan isomer
nya yang mudah terdeteksi, tampaknya tidak mungkin bahwa potensi sumber asam phloretic dihidrolisis sepenuhnya.
Sebuah alternatif yang mungkin adalah droxylation dehidrasi asam EIC ca ff atau derivatif dihidro-nya oleh
lactobacilli. Bakteri ini diketahui dehydrox- asam empedu primer ylate untuk asam empedu sekunder dalam kondisi
anaerob (Midvedt, 1967)
4.4. Chemoprotective e Ects ff
Masing-masing dari senyawa fenolik yang ditampilkan potensi anti oksidan dalam uji hipoksantin / xantin oksidase,
dimana hidroksitirosol adalah yang paling e ff efektif
dan acteoside paling e ff senyawa efektif. Potensi oksidan anti dari avonoids fl dalam hal ity abil- mereka untuk
mengais ROS tidak bisa diuji dengan metode ini karena kelarutan rendah dari fl avonoids. Namun, kelarutan yang baik
dalam DMSO memungkinkan kita untuk menilai proyek-mereka langsung penghambatan e ff aktivitas xantin oksidase,
dan kedua luteolin dan apigenin ditemukan memiliki nilai IC50 mirip dengan allopurinol, substrat bunuh diri xanthine
oxidase (Halliwell dan Gutteridge, 1993) . Oleh karena itu, konsumsi drupes zaitun, baik hijau atau hitam, dapat
memberikan perlindungan terhadap ROS karena kedua varietas zaitun mengandung jumlah yang sama dari e FFI
efisien hidroksil scavenger radikal hidroksitirosol. Sebuah lanjut '' bonus '' untuk zaitun hitam adalah sejumlah besar
mereka fenolat tambahan, terutama fl avo- noids yang juga akan menghambat xantin oksidase. Perlu dicatat,
bagaimanapun, bahwa xanthine dehidrogenase dan tidak xantin oksidase adalah alami protein kode genetik dalam
tubuh. Dalam jaringan NADH adalah substrat alami xanthine dehidrogenase, tetapi di bawah kondisi iskemik xanthine
dehidrogenase adalah deproteinised dan diubah menjadi xantin oksidase (Halliwell dan Gutter- Idge, 1993). Setelah
kembali ke kondisi aerobik (reperfusi), sebuah oksidatif meledak karena interaksi xantin oksidase dengan hipoksantin
atau xanthine ses relea- jumlah berlebihan superoksida, yang dalam arti pra besi sesuai chelated dapat mengkatalisis
pembentukan yang sangat reaktif radikal hidroksil (McCord, 1987). Lokal iskemia dan reperfusi merupakan peristiwa
relatif umum dalam tubuh, terutama di colorectum, dan itu terutama dalam situasi ini yang fl avonoids dapat
mengerahkan proyek-e ff chemoprotective mereka melalui penghambatan xantin oksidase.
Berdasarkan hasil tersebut dan data yang sesuai untuk minyak zaitun (Owen et al., 2000a-d), konsumsi 50 g (wt basah.)
Dari pericarp zaitun hitam akan memberikan ca. 400 mg zat fenolik untuk asupan makanan sehari-hari sementara
jumlah yang sama dari extravirgin minyak zaitun akan berkontribusi sekitar 12 mg. Dengan demikian, konsumsi buah
zaitun di samping minyak zaitun akan menjadi lebih e FFI efisien sarana untuk memperoleh antioksidan fenolik,
memperkuat kesehatan mempromosikan properti dari diet Mediterania. Meskipun beberapa studi epidemiologi
memiliki relativitas ted asupan minyak zaitun untuk risiko kanker (Martin-Moreno et al, 1994;. Trichopoulou et al,
1995;. La Vecchia et al, 1998;.. Braga et al, 1998) dan hati penyakit (Tombol dan Keys, 1975;. Keys et al, 1981), untuk
pengetahuan kita tidak ada studi tersebut menyangkut konsumsi buah zaitun memiliki
beenconducted.Thismaybeausefulareaforfuturestudy.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada G. Erben, Departemen Spektroskopi Central, Pusat Penelitian Kanker Jerman, untuk pro
masi ESI-MS spektra