Solución de Prácticas de Microbiología

Práctica n°2
MICROSCOPIO
I. INTRODUCCION:
El estudiante de microbiología se ayuda de instrumentos ópticos de precisión para la
observación de estructuras y detalles del material biológico que no pueden ser percibidos a
simple vista. Estos instrumentos se conocen con el nombre genérico de microscopios, entre
los diferentes tipos podemos citar: microscopio simple, compuesto, electrónico, entre otros.
El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura,
forma y tamaño de diferentes tipos de muestras. En esta práctica se utilizará el microscopio
óptico compuesto, en el cual se combinan dos oculares y objetivos, para aumentar la imagen.

II. CONTENIDO
1. Definición: El microscopio es un instrumento óptico que amplifica
la imagen de un objeto pequeño. Es el instrumento que más se usa en los
laboratorios que estudia microorganismos. Mediante un sistema de lentes
y fuentes de iluminación se puede hacer visible un objeto microscópico. Los
microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamaño
original.

2. Parte de un microscopio óptico compuesto.

 Sistema óptico
 oculares: Lentes convergentes situados en la parte superior del tubo.
Aumentan la imagen que proviene del objetivo.
 objetivo: Lentes convergentes incorporados en la parte inferior del
revólver. Aumenta la imagen del objeto observado.
 condensador: Sistema de lentes convergentes encargados de
concentrar los rayos de luz en el centro del orificio de la platina. Sirve
para enfocar la luz hacia el objeto que se va a examinar.
 diafragma: Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo
del condensador. Sirve para regular la entrada de luz al condensador y
se acciona mediante una palanca.
 foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
 Sistema mecánico
 Base: Parte inferior del microscopio que hace contacto con la mesa.
 Columna o Brazo: Estructura rígida situada en la parte posterior del
microscopio, sostiene el tubo binocular y la platina, y sirve para
transportarlo.
 Tubo: Pieza vertical que sostiene el revólver y el lente ocular.
 Revólver: Sistema giratorio localizado en la parte inferior del tubo, al
cual se incorporan los lentes objetivos.
 Tornillo macrométrico: Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina,
permite enfocar la imagen.
 Tornillo micrométrico: Sirve para dar claridad a la imagen.

Microbiología
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 Platina: Lámina con un orificio central en donde se coloca la muestra

que se desea observar.
3. Manejo y uso del microscopio óptico compuesto.
 Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio.
 Utilizar el objetivo de menor aumento.
 Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macrométrico,
observando lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del
portaobjetos.
 Observar a través de los oculares subiendo lentamente el tubo del
microscopio hasta observar la preparación enfocada, no debe bajarse el
tubo del microscopio mientras se está observando, porque puede llegar
a chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar desperfectos.
 Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico.
 Si se desea mayor aumento, girar el revolver al objeto adecuado.
 Si se utiliza el objeto de inmersión (100 X) colocar sobre la
preparación una gota de aceite de inmersión y baja el tubo del
microscopio hasta que la lente del objetivo toque a la gota, observa y
ajusta cuidadosamente después de su uso limpiar el objetivo con un
tejido suave (papel seda).
4. Mantenimiento y precauciones
 Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte
mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo
cubierto con su funda.
 Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
 No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).
 El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre
la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la
muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del
mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
 Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre
ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite,
limpiarla con un paño humedecido en.

III. CONCLUCIONES:
 Aplicar el número de objetivo en el enfoque adecuado.
 El microscopio se debe utilizar de forma correcta para que la
observación sea lo más clara posible, además de que se deben
mantener las medidas para su uso, manipulación y mantenimiento.

IV. REFERENCIAS BIBLIOGRAFIA:

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

 ACEVEDO T., M. Y OTROS. 2003. Conciencia 6. Grupo Editorial Norma.

Bogotá.120p.
 LINETH D. Y LOZANO P. 2005. Ciencias Naturales y Educación
Ambiental. Editorial Voluntad. Bogotá. 150p.

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Práctica n° (3)
MATERIALES Y EQUIPOS DE USO
I. INTRODUCCION:

El laboratorio de microbiología es un recinto en donde se trabaja con material relativo a los

seres vivos, en él se realizan prácticas a nivel celular o microscópicos como a nivel
macrocelular, órganos, tejidos o sistemas, con dichas actividades se trata de diferenciar la
estructura de los organismos vivos e inclusive identificar algunos de los elementos que los
integran. Así mismo se pueden realizar mediciones y observaciones con lo cual se formulan
hipótesis y conclusiones con los experimentos. Yaqué para su estudio y comprensión es
necesario efectuar algunas determinaciones prácticas para lo cual es necesario el
conocimiento y manejo de algunos materiales e instrumentos de uso común; por esa razón es
que estamos presentando una guía que nos ayudara a reconocer más de cerca la función y
clasificación de algunos materiales que usamos con mucha frecuencia en este laboratorio.
II. OBJETIBOS
 Conocer los equipos y materiales de uso en las prácticas de microbiológica en
el laboratorio.
III. CONTENIDO
A. Materiales y equipos del laboratorio.
 Es muy importante que los materiales y equipos de uso común en el
laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso específico que tiene
cada uno, pero más importante es saber manejarlo correctamente en el
momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para
el uso de aquellos que así lo requieran. Los instrumentos y útiles de
laboratorio están constituidos de materiales diversos: material de vidrio, material
de porcelana, material de metal y madera, etc. y se a continuación les presentamos
algunos de uso común del laboratorio.

1. MESAS DE LABORATORIO: es aquí donde

desarrollamos con seguridad nuestras prácticas de clase.

2. VITRINAS Y ARMARIOS: se usa para

guardar de una forma ordenada los
materiales, equipos

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3. MECHERO: para calentar los medios de

cultivo.

4. ESTUFA DE INCUBACION: es una cámara de

temperatura controlada para cultivo de
microorganismos , se utiliza para facilitar el
desarrollo de los microorganismos a su
temperatura optima de crecimiento
(generalmente 34-37)

5. MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO: es el

instrumento más necesario para un microbiólogo, ya que
permite la observación de organismos que no pueden ser
apreciados en detalle a simple vista, es decir de los
microorganismos. Existe una gran variedad de
microscopios que, según la fuente
de iluminación utilizada.

6. BALANZA ANALÍTICA. Es un aparato que permite pesar sustancias. Es

un aparato que tiene una gran sensibilidad, algunas tienen hasta 1
diezmilésima de sensibilidad.

7. ASAS DE SIEMBRA: Se usan para

inocular muestras o bacterias puras en los medios
de cultivo.

8. PLACAS PETRI: recipientes para la preparación de

cultivos en sólido.

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9. PORTA Y CUBRE OBJETOS: Se usan para

depositar en ellos las muestras a observar en el
microscopio.

10. MATRAZ ERLENMEYER: Suele utilizarse

para calentar sustancias a temperaturas altas.

11. CUCHARAS Y ESPÁTULA: se utilizan para

pesar muestras o medios de cultivo.

12. AUTOCLAVE: es el equipo más utilizado, se usa

para un procedimiento de esterilización mediante
calor húmedo. Se realiza por un tiempo de 15 a 20
min y a 115°C ó 121°C,

13. CUCHARAS Y ESPÁTULAS: Se utilizan para

pesar muestras o medios de cultivo.

14. TUBOS DE ENSAYO: Estos recipientes sirven para

hacer experimento o ensayos, los hay en varias
medidas y aunque generalmente son de
vidrio también los hay de plástico.

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15. GRADILLA: Utensilio que sirve para colocar tubos de ensayo. Este utensilio que
facilita el manejo de los tubos de ensayo.

IV. CONCLUSIONES
 Conocer el equipo y material de uso en la práctica microbiológica ayuda a
prevenir accidentes y a trabajar adecuadamente en el laboratorio de
microbiología.
 Conocer de qué material está constituido cada material.
 Saber a qué tipo de materiales y equipos estamos expuestos.

V. BIBLIOGRAFÍA
R. Dìaz, C. Gamazo, I. Lòpez-Goñi. Manual pràctico de microbiologìa. 2ª ediciòn.
MASSON. Barcelona (España). 1999. 215 pg.
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica1.pdf
Identificación y manejo del material de laboratorio pdf. Consulta 06/06/2016

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Practica n°4

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
I. INTRODUCCIÓN
Los microorganismos pueden producir enfermedades cuando infectan personas,
animales y plantas y cuya gravedad oscila entre una infección débil, intoxicación e
incluso la muerte. Por lo que pueden contaminar los alimentos y producir cambios
físicos y químicos en ellos, haciéndolos en algunos casos incomibles e incluso
venenosos. Los microorganismos son responsables también de la alteración de
muchos otros materiales, e incluso generando graves pérdidas económicas. Por ello es
indispensable disponer de algunos métodos de esterilización de materiales con el fin
de eliminar cualquier tipo de contaminación y el crecimiento microbiano.

II. OBJETIVOS

 Reconocer cuales son los agentes de control más empleados para combatir los
microorganismos.
 Aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en
microbiología, así como el proceso de la esterilización por calor seco de estos.

III. CONTENIDO
1. Definición; La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción
total de los microorganismos presentes en un determinado material.
2. Clasificación de los medios de esterilización: Existen diversos métodos de
esterilización. La selección del método a aplicar en cada caso está determinada por el
tipo de producto a esterilizar.
I. Agentes físicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos
formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por
desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los
microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es
considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún
tipo de daño.
 Calor Húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de
proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razones: El agua es una
especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas
por reacciones que eliminan agua. El vapor de agua posee un coeficiente de
transferencia de calor mucho más elevado que el aire.
 Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxicos por
niveles elevados de electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben
a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que
están en contacto con éstos. La acción destructiva del calor sobre proteínas y

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lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad

de agua del medio es baja.
II. Agentes mecánicos: la filtración permite la remoción de todos los
microorganismos presentes en un líquido o un gas reteniéndolos sobre la
superficie de un material.
III. Agentes químicos: algunas sustancias químicas pueden ser usadas como
agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más
reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los
microorganismos (proteínas, membranas, etc.)
IV. Materiales y métodos
 Autoclave.
 Estufa para secado de material.
 Estufa de incubación.
 Papel para envolver.
 Algodón.
 Tubos de ensayo.
 Placas de Petri
 Matraz Erlenmeyer.
V. Actividades a realizar.
Preparación del material para esterilizar: El material a ser esterilizado deberá estar
perfectamente limpio.
 Tubos de ensayo: se tapan con algodón y se empaquetan en grupos de 2 a 4
envueltos con papel aluminio. En la autoclave se colocan siempre en posición
vertical con la boca hacia arriba.
 Matraz Erlenmeyer: (250, 500 ml, etc.): se taponan con algodón, se cubren
con papel y se atan con piola de algodón.
 Placas de Petri: se envuelven individualmente en papel.
 Estos materiales se esterilizaron en el autoclave en un tiempo de 15 a
30min a una temperatura de 121°C y presión de 15 Lb.
VI. Almacenamiento del material estéril.
 Controlar el acceso a las áreas de almacenamiento de materiales estériles.
 Mantener el área de almacenamiento limpia, libre de polvo, sucio e insectos.
 Controlar la temperatura y la humedad de las áreas de almacenamiento.
 La temperatura ideal debe estar por debajo de los 26ºC y la humedad
relativaentre 30 y 60%.
 Los periodos prolongados de almacenamiento en lugares tibios y húmedos,
pueden producir condensación de humedad sobre el material de empaque.
 Utilizar, preferiblemente, estantes cerrados para colocar el material.

IV. CONCLUCIONES :

 Para evitar la transmisión de las enfermedades y las infecciones.

 Para eliminar los microorganismos de un hospedador que está infectado.
 Para eliminar microorganismos de diferentes materiales y así evitar su
deterioro y alteración.

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

V. BIBLIOGRAFIA
Black, J. 1999. Microbiología Principal y Exploración. Louth edición. John Wiley&
Son, Inc.
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part6/64.pdf
Sistema de esterilización pdf. Consulta 10/06/2016
http://assets.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf
Esterilización pdf. Consulta 10/06/2016
Práctica n°5
MEDIOS DE CULTIVO: PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN

I. INTRODUCCION

Prácticamente todos los microorganismos, pero en particular bacterias y hongos,

pueden cultivarse sobre sustratos nutritivos para el estudio de sus propiedades,
pudiendo llegar a través de ellas a la identificación del germen. No todos los
microorganismos van a tener las mismas exigencias para su normal desarrollo,
necesitándose por ello una amplia gama de medios de cultivo. Hay, sin embargo, una
serie de requisitos mínimos que deben de reunir el medio para el desarrollo de
cualquier germen: para ello van a ser necesarias unas sustancias nutritivas, así como
unas condiciones físicas, químicas y biológicas adecuadas. Los microorganismos son
muy pequeños y no visibles a simple vista, por lo que se recurre a los medios de
cultivo en los que se van a obtener millones, cuando los cultivos se encuentran
formados por una sola clase de microorganismos se denominan cultivos puros.
Independientemente de los medios de cultivo y métodos utilizados, el éxito del trabajo
en el laboratorio de microbiología depende de la adecuada elección y buen uso de los
métodos de esterilización y técnicas asépticas.

II. OBJETIVOS
 Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.
 Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de cultivo.
 Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
 Preparar medios de cultivo con diferente estado físico y explicar la diferencia
en el procedimiento de preparación.
III. CONTENIDO
A. Definición: Los microorganismos pueden ser aislados y propagados por
diferentes métodos: su utilización varía según el propósito y tipo de
microorganismo que se deseen aislar.
B. Clasificación de los medios de cultivo
 De acuerdo a la consistencia o estado físico:
 Medios líquidos: Son medios de cultivo que carecen de un
polisacárido denominado agar-agar extraído de algas marinas del
género Gellidium sp. un medio típico es el caldo nutritivo.
 Medios sólidos: Estos medios son usados frecuentemente para aislar
microorganismos, en los medios líquidos los microorganismos al
encontrarse libres pueden desplazarse en tanto que en los medios
sólidos se multiplican localmente en el punto de la inoculación y

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forman colonias cuya apariencia frecuentemente es típica de cada

especie determinada.
 Medio semisólidos: son medios que usualmente contienen una pequeña
cantidad de agar, esta cantidad promedio es de 0.5%, estos medios son
muy usados para determinar la movilidad de un microorganismo
gracias a su escaso poder retenedor, es decir, que no impiden que el
microorganismo móvil se desplace por el medio.
 De acuerdo a los nutrientes encontramos:
 Medios simples: son medios que poseen los nutrientes mínimos para
permitir el desarrollo de microorganismos menos exigentes, como
ejemplo encontramos el caldo nutritivo o el agar nutritivo.
 Medio enriquecidos: son aquellos medios a los cuales se les han
incorporado sustancias que proporcionan características
complementarias nutritivas para que el medio pueda servir como
sustrato para los microorganismos más exigentes.
 Medios selectivos: son aquellos medios a los que se les incorporan
sustancias para inhibir al crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos con excepción de aquellos para los que fueron
ideados.
C. Preparación: Siempre es recomendable y se incluye como una regla
básica la de leer las instrucciones de las etiquetas de los medios de
cultivo, por ello no se recomienda reenvasar los medios sino, mantenerlos
en los recipientes originales.
a. Materiales y equipos.

 Matraz Erlenmeyer de 100 ml

 Cajas de Petri
 Tubos de ensayo
 Espátula
 Mechero
 Gradilla
 Balanza
 Autoclave, estufa y horno
 cultivos
 Agar nutritivo
 Agar saboraud
 Tsi
 Macconkey

b. Preparación de un medio de cultivo:

Lo único que hay que hacer es pesar la cantidad que indique el
fabricante y completarlo hasta el volumen que sea con agua destilada.
 El proceso a seguir para todos los cultivos s sería:
 Pesar la cantidad de polvo.
 Poner en un matraz la cantidad de agua y añadir poco a poco el
polvo. Homogeneizar por agitación, si el medio lo permite se
calienta. Se calienta el medio hasta llegar a la ebullición (en

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algunos medios esto no es posible porque altera el mismo. En

este caso, el fabricante lo indica en el envase).
 Se esteriliza durante 15 minutos.
 Sacar de la autoclave una vez esterilizado.
 Si el medio es sólido, se deja enfriar aproximadamente a 40 ó
50º C y se vierte sobre placas de Petri estériles, tras flamear la
boca del matraz. La capa de la placa debe tener un espesor de
3-4 mm, es decir, que para una place de 9 cm. de diámetro son
suficientes 15 ml del medio.
 Volver a flamear el matraz y guardar el resto si no se utiliza.
 Una vez llena la placa, se espera a que solidifique.
 Si son medios sólidos y se hacen en tubos se pone la cantidad
necesaria y se deja solidificar en una posición inclinada
 También se preparan medios líquidos en los tubos de ensayo.
1. Macconkey. Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de
fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos.
 Primeramente pesamos
la cantidad a preparar en
la balanza analítica
nuestro caso: pesamos
12.5 gramos para 250ml
de agua.
 Seguidamente leemos la
preparación que está en
el frasco: caliéntese con
agitación frecuente y hierva
para que 1 minuto
completamente disuelva el
polvo
 Finalmente
esterilizamos en la
autoclave por 15 minutos una
temperatura de 121 ° C.

2. Saboraud: medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de

hongos patógenos y saprófitos
 rehidratar 16.25 g del medio en 250ml de agua destilada.
 Reposar 10 a 15 minutos.
 Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1
minuto para disolverlo por completo.

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 Esterilizar en autoclave a
121ºC (15 Lb de presión)
durante 15 minutos.
 Enfriar aproximadamente
a 45ºC. Vaciar en cajas de
Petri estériles. Cuando se
requiera el medio en tubo
de ensayo, distribuir el
volumen requerido antes
de esterilizar y
posteriormente enfriar en
posición inclinada.
 Conservar en refrigeración
de 2 a 8ºC.
3. Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el
aislamiento de microorganismos
poco exigentes en lo que se refiere
a requerimientos nutritivos.
Su uso está descripto en muchos
procedimientos para el análisis de
alimentos, aguas y otros
materiales de importancia
sanitaria.
 Suspender 7.75 g de polvo
por 250ml de agua
destilada.
 Mezclar y dejar reposar 5
minutos.
 Calentar suavemente
agitando y hervir 1 o 2
minutos hasta su
disolución.
 Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

4. Tsi agar. Medio universalmente

empleado para la diferenciación de
enterobacterias, en base a la
fermentación de glucosa, lactosa,
sacarosa y a la producción de ácido
sulfhídrico.
 Disolver 15.625 g del
polvo por 250ml de agua
destilada.
 Mezclar bien y calentar
con agitación frecuente,
hervir 1 o 2 minutos hasta

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disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo.

 Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

D. Esterilización
 Se esteriliza por autoclave o por ebullición de acuerdo a las
instrucciones para cada preparación. Los tiempos y temperaturas
recomendados están relacionados con las temperaturas alcanzadas en el
medio y el tiempo en el que se mantengan a la temperatura
especificada.
 Cuando se esterilizan volúmenes grandes de medio se debe aumentar el
tiempo de esterilización para permitir la penetración del calor al
interior del recipiente. Los autoclaves varían en su feribilidad de calor
y por consiguiente, se debe comprobar colocando pares térmicos en los
recipientes del medio o cintas indicadoras de esterilidad.
E. Servido de los medios de cultivo: Una vez estéril los medios de cultivo debe
ser enfriados a temperatura promedio de 45º - 55ºC para ser adicionados en los
recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las técnicas asépticas.
 Realizar los cálculos respectivos para agar y caldo teniendo en
cuenta que para cada caja deben servir 15-18 ml de agar y para cada
tubo entre 7-10 ml de caldo aproximadamente.
 Lo mismo con los caldos sirva 7-10 ml en cada tubo y tápelos.
 Déjelos enfriar y guárdelos en la refrigeradora hasta su utilización.

IV. CONCLUSIONES
Aprendimos a preparar un medio de cultivo
Saber el medio de cultivo adecuado para la observación de microorganismos

V. BIBLIOGRAFIA
https://es.scribd.com/doc/14173118/4-Esterilizacion-y-Preparacion-de-Medios-de-
Cultivo
Esterilización de material y preparación de medios de cultivo pdf. Fecha de
Consulta 07/06/2016
http://www.ms.gba.gov.ar/sitios/laboratorio/files/2012/08/ESTERILIZACI%C3%93N
-DE-MEDIOS-DE-CULTIVO.pdf

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

esterilización de medios de cultivo pdf . Fecha de consulta 08/06/2106

Práctica n°6
METODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

I. INTRODUCCIÓN
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es posible cultivarlos
bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de
las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una
muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que
permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario
considerar que en el área de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen
los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional,
sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio
de cultivo durante la incubación, condiciones tales como la temperatura, aireación, la
luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los
microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de
cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y
control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de
microorganismo y propósito específico del estudio.

II. OBJETIVOS
Desarrollar siembras comunes
Aprender a sembrar correctamente microorganismos en el agar

III. CONTENIDO
A. Métodos de siembra
El método de siembra a emplear dependen de los objetivos que se pretende
alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno, los
métodos de siembra más empleados son los siguientes:
 Siembra por estrías.
 Siembra por punción.
 Siembra volumétrica.
 Siembra masiva.
Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe realizarse
en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado reduce el número de
microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a
favor del proceder aséptico.
a. Siembra por estrías
Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos
distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de cuña
 Instrumentos de siembra a emplear.
Procedimientos
Palca petry
 Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o micrón.
 Coger el asa por el cabo, en forma
similar, a cuando tomamos el lápiz para
escribir.
 Esterilizar la punta del asa en fuego
hasta q parezca un color rojo vivo.

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

 Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el

asa se enfríe y no mate a los microorganismos.
 Con el asa estéril y fría tomamos el volumen o fragmento de la muestra que será
sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.
 Todo esto se hace muy cerca al fuego para que asi no se contamine nuestro sembrío.

Tubo de ensayo
 Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.
 Con el dedo meñique de la mano que
sostiene el asa, retire del tubo el tapón
de algodón (no colocar el tapón o la
tapa sobre la mesa de trabajo)
 Flamee de inmediato la boca del tubo
de ensayo, pasándola una o dos veces
por la llama del mechero, con el
objetivo de eliminar por incineración,
los microorganismos contaminantes que
se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo.
 Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo
del tubo.
 Todo esto se hace cerca de un mechero con el fin de prevenir cualquier tipo de
contaminación

 Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba,

imprimiéndole un movimiento de zigzag.
 Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo
a esterilizar el asa en las llama del mechero.
b. Siembra por punción
Como es obvio, el instrumento de
siembra a emplear será la aguja de
platino y el medio de cultivo sólido,
generalmente, en tubo de ensayo.
Las manipulaciones y la
observancia de las precauciones de
asepsia, son similares que cuando se
utiliza el asa. La particularidad que
tiene este método, es que la aguja
(con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.

c. Siembra volumétrica
Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser
predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos.

Microbiología
Solución de Prácticas de Microbiología

d. Siembra masiva
Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En
este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del
medio de cultivo sólido imprimiendo un movimiento en espiral. La siembra masiva también
se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo líquido, procediendo a su
deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

IV. CONCLUSIONES
Aprendimos a sembrar en forma de estrías.
Las siembras se hacen muy cerca de un mechero para aislar cualquier tipo de
contaminación.
V. BIBLIOGRAFÍA
 Brook Th. 1999. Biología de los Microorganismos. 8ª. Mac Graw Hill.
 http://es.slideshare.net/leo-canis-lupus/mtodos-de-siembra-y-aislamiento
Métodos de siembra y aislamiento pdf. Fecha de consulta 15/06/2016
 https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-
aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/
Técnicas y métodos de aislamiento pdf. Fecha de consulta 13/06/2016

Practica n°7
ANÁLISIS MICROBIANO EN ALIMENTOS
I. INTRODUCCIÓN

Uno de los factores que en mayor medida afectan a la Salud Pública es la higiene de
los alimentos, especialmente en los comedores colectivos, ya que cada vez es mayor
porcentaje de personas que realizan diariamente, de comer comida fuera del hogar.
Una correcta higiene de los alimentos está determinada por multitud de factores:
condiciones de obtención de los mismos, características de los medios empleados para
su transporte, temperaturas y condiciones de conservación, estructura de los locales
donde se manipulan los alimentos, etc., destacando entre todos ellos la higiene de las
prácticas de los manipuladores de alimentos. Una vez que el alimento está listo para
su consumo, su análisis microbiológico puede informarnos acerca del resultado real
de todo el proceso, ya que la presencia de determinados microorganismos en los
alimentos es una medida de su calidad sanitaria y además un indicador de la
incorrección de las manipulaciones efectuadas. Entre los comedores colectivos existe
un grupo al que calificamos como, de alto riesgo, que son aquellos en los que se sirve

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comida a grupos de personas especialmente susceptibles de sufrir toxiinfecciones

alimentarias graves, como son los niños y los ancianos los más propensos a sufrir
estas intoxicaciones.
II. DESCRIPCIÓN
A. Materiales y métodos
 Agua destilada
 Gradilla
 Mechero
 Beaker
 Asas de siembra
 Placas Petri y tubos con medios de cultivo

B. El alimento escogido por mi persona fue un maní confitado a diferencia de los

demás compañeros de practica de microbiología.
 Esto quiere decir que el tipo de alimento escogido esta estado solido
 Primeramente se esteriliza los materiales a utilizar
 Se prepara los medios de cultivo de acuerdo a la indicación del mismo
y luego se esteriliza en la autoclave.
 Se sirve ya se en placa Petri o tubos de ensayo esterilizados y muy
cerca de un mechero.
 Se deja solidificar estos cultivos en placas y tubos en la refrigeradora.
 Seguidamente con nuestra muestra ya fijada para su respectivo análisis
lo disolvemos en agua destilada una cantidad de 80 a 90 gramos de
alimento fijado.
 Todo estos materiales y alimento llevamos a muy cerca de un mechero
para iniciar con nuestra siembra respectiva.
 Teniendo todo listo y estando con equipo de seguridad procedemos a
encender nuestro mechero, luego esterelizamos nuestra asa de siembra
asta que es te un color rojo vivo, dejamos que se enfrié unos segundos
para no haga daño a nuestros microorganismos existentes en nuestro
alimento.
 Fijamos nuestra muestra con el asa y con una mano abrimos nuestra
caja Petri sin separar la tapa del mismo y con la otra asemos nuestra
siembra asiendo la mismo proceso tres veces en la misma placa, y
tener mucho cuidado para no malogra agar nutrido en el cual estamos
asiendo nuestra siembra.
 Dejamos en la incubadora de 24 a 48 horas después de colocar nuestra
siembra.
 Después de las 48 horas observamos algunos crecimientos, en mi caso
no se dio el crecimiento porque seguramente en el alimento estaba en
buenas condiciones higiénicas para ser consumido.
 A diferencia de los demás compañeros que si hubo crecimiento.

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 A partir de esto empezamos a trasladar nuestros microorganismos del

agar nutritivo al agar macconkey con el fin de obtener
microrganismos puros.
 se pasó las colonias al agar macconkey tanto en placa como en tubo,
esto se iso con la ayuda de asas de siembra por estrías en la placa y por
picadura en el tubo de ensayo.
 Luego de 24 horas procedimos a hacer nuestra lectura de
microorganismos desarrollados.
 a partir de del anterior cultivo se siembra en el TSI y el saboraud.
Después de la incubación de 24 horas a una temperatura de 35 a 37 °C
se procede a observar lo siguiente en cada tubo sembrado
 resultado final a observar para identificar el tipo de bacteria
1. Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2. Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azúcares.
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica
que el microorganismo produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico.

Microrganismo Pico o fondo Producción de Producción de

gas ácido
sulfhídrico
E. Coli a/a + -

Fue la bacteria observada

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III. CONCLUSIONES
 El proceso de siembra se hace con el fin de obtener un cultivo puro.
 La siembra se hace siempre cerca de un mechero y con equipo de seguridad adecuado
por precaución a contaminarse.
IV. BIBLIOGRAFÍA
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema_08_%20micro_alimentos.pdf
microbiología de alimentos pdf. Fecha de consulta 16/06/2016
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sabouraudgluagar.htm
TSI agar. Consulta 16/06/2016

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