UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE MEDICINA

SEGUNDA CLASE PRÁCTICA DE BIOQUÍMICA I

Periodo lectivo: 2017-2018 CII

Semana: del 20 al 24 de noviembre de 2017

Temas

1.- Determinación del pH de un ácido débil y de un ácido fuerte

2.- Determinación de la acidez total, de un ácido débil y de un ácido fuerte

3.- Efecto de la dilución de un ácido fuerte y una base fuerte sobre la concentración de H+

4.- Determinación del pH de la orina.

PRIMER TRABAJO PRÁCTICO:

DETERMINACIÓN DEL pH DE UN ÁCIDO DÉBIL Y DE UN ÁCIDO FUERTE.

Equilibrio iónico del agua

El agua pura es un electrolito débil que se disocia en muy baja proporción en sus iones hidronio o
hidrógeno H3O+ (también escrito como H+) e hidróxido o hidróxilo OH–. Dos moléculas polares de agua
pueden ionizarse debido a las fuerzas de atracción por puentes de hidrógeno que se establecen entre
ellas.

Al producto de la concentración de iones hidroxonio o hidronio (H3O+) por la concentración de iones

hidróxido o hidroxilo (OH−) se le denomina producto iónico del agua y se representa como Kw. Las
concentraciones de los iones H+ y OH– se expresan en moles / litro (molaridad). Este producto tiene un
valor constante igual a 10−14 a 25º C.

Debido a que en el agua pura por cada ion hidronio (o ion hidrógeno) hay un ion hidróxido (o hidroxilo),
la concentración es la misma.

Las concentraciones de hidronios (también llamada de protones) (H+) y de hidroxilos (OH-) son
inversamente proporcionales; es decir, para que el valor de la constante de disociación se mantenga
como tal, el aumento de una de las concentraciones implica la disminución de la otra.

Ionización del agua y el pH

El agua no es un líquido químicamente puro, ya que se trata de una solución iónica que siempre
contiene algunos iones H3O+ y OH–. El producto [H+]•[OH-]= 10–14 se denomina producto iónico del agua.
Ese valor constituye la base para establecer la escala de pH, que mide la acidez o alcalinidad de una
disolución acuosa; es decir, su concentración de iones [H+] o [OH–], respectivamente.

¿Qué es el pH?

El pH es una medida cuantitativa de la acidez o basicidad de una disolución, que es dada por la actividad
de los cationes hidronio, H3O +, en disolución.

El pH, en las disoluciones acuosas, tiene una escala que va del 0 al 14, en la que el 7 se denomina pH

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neutro. Los números menores de 7 indican acidez (y más ácido cuanto más pequeño es el número), y

los mayores de 7 indican basicidad (más básico cuanto mayor es el número). El pH se utiliza para evitar
la manipulación de las cifras complejas (una concentración de [H3O+] = 1 × 10–7 M o 0,0000001) que
aparecen en expresar la concentración.

El concepto de pH fue introducido por el químico danés S. P. L. Sørensen del Laboratorio Carlsberg en
1909, cuando realizaba estudios sobre proteínas, aminoácidos y enzimas. Idea una manera sencilla de
expresar la amplia variación de la concentración de cationes hidrógeno en las disoluciones.

Quien lo definió como el logaritmo negativo de base 10 de la actividad de los iones hidrógeno.

Posteriormente se cambió el símbolo inicial de Sørensen, P H, por lo que se utiliza actualmente, pH. El
símbolo “pH” es un acrónimo que significa el potencial del hidrogeno, ya que el pH se puede medir a
partir de medidas de potenciales eléctricos en una celda electroquímica.

Medida del pH

La medida precisa del pH se realiza utilizando los pH-metros, potenciómetros que disponen de una celda
electroquímica que se pone dentro de la disolución de la que se quiere determinar el pH, y que contiene
un electrodo de referencia, habitualmente un electrodo de plata-cloruro de plata, y un electrodo de
vidrio, que es sensible a la concentración de cationes H+. A pesar de los pH-metros de mejor calidad son
de mesa, actualmente se puede disponer de pH-metros de bolsillo que permiten realizar medidas de pH
precisas in situ.

Si no se requiere una medida precisa del pH y hace falta un valor aproximado, se emplean tiras de papel
indicador, que en contacto con la disolución que se quiere analizar cambian de color de forma gradual.
De este modo, según el color observado, por comparación con una escala definida, se tiene un valor
aproximado del pH. Estas tiras se fabrican impregnándose las de una mezcla de diferentes indicadores
ácido-base, sustancias que cambian de color dentro de un intervalo de valores de pH. Estos tipos de
mezclas se llaman indicadores universales.

El pH del cuerpo humano

En el cuerpo humano se encuentra medios donde el pH oscila dentro de un estrecho margen para que
haya un correcto funcionamiento de las actividades vitales. Así la sangre tiene un pH entre 7,35 y 7,45; y
no puede superar el pH = 7,8. La sangre tiene un pH extraordinariamente estable debido a los sistemas
amortiguadores que contiene, entre los que destacan el fosfato dihidrogenado/ fosfato monohidroge-
nado, H2PO4 -/HPO4 2- , y el ácido carbónico/bicarbonato, H2CO3 / HCO3 -.

La saliva tiene un pH óptimo neutro y oscila entre 6,5 y 7,5. El jugo gástrico tiene un pH muy ácido, 0,8.
Estos valores tan bajos permiten realizar la función digestiva a la vez que destruyen bacterias: por
ejemplo los enterococos mueren a un pH inferior a 2,4. También la piel tiene un pH ácido (3,5 a 4,0) que
le confiere una acción desinfectante. El jugo pancreático es alcalino, entre 8,5 y 8,9 unidades de pH. La
bilis tiene un pH prácticamente neutro 6,8-7,0. En el intestino el pH oscila entre 7,0 y 8,0. Las lágrimas y
el sudor tienen un pH aproximadamente de 7,2. El semen tiene un pH que va de 7,2 a 8,0 y los
espermatozoides pierden su movilidad por debajo de 6,0. El flujo vaginal, en cambio, es ácido, entre 4,4
y 5,6 unidades de pH, lo que evita la entrada de gérmenes no habituales. La orina tiene un pH que varía
entre 4,5 y 8.

Los Ácidos Débiles:

Se denomina Ácido Débil a aquel que no se disocia completamente sino que habrá un equilibrio entre
partículas disociadas y sin disociar.

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Sea HA un Ácido Débil, entonces la reacción de disociación será: HA + H2O ↔ H3O+ + A-

Por otra parte, un Ácido Fuerte es aquel ácido que en una disolución acuosa se disocia
completamente. Sea HA' un Ácido Fuerte:

HA' + H2O → H3O+ + A'-

Medida de la Acidez y Basicidad:

Constante de acidez Ka: grado de disociación de un ácido débil (HA ↔ A-+H3O+). Ka= [A-]·[H3O+] / [HA]

Constante de basicidad Kb: grado de disociación de una base débil (B ↔ BH++OH-). Kb= ([BH+]·[OH-]) /
[B]

Constante de equilibrio del agua Kw: Kw= [H3O+]·[OH-] = Ka· Kb = 10-14

El pH: pH = -log10 [H+]. Además, pH + pOH = 14

SEGÚN LA FUERZA DEL ÁCIDO:

Ácidos Fuertes: en disolución acuosa se disocia completamente (HA → H+ + A-). HCl, H2SO4

Ácidos Débiles: en disolución acuosa se disocia parcialmente (HA ↔ H+ + A-). CO3H2

SEGÚN ÁTOMOS DE H QUE DONAN:

Ácidos Monopróticos: capaces de donar 1 protón por molécula en la disociación. HCl

Ácidos Dipróticos: capaces de donar 2 protones por molécula en la disociación. H2SO4

Ácidos Polipróticos: capaces de donar más de 2 protones por molécula. H3PO4

Definición de Base Débil:

Una Base Débil es aquella base que en una disolución acuosa no se disocia completamente sino que
habrá un equilibrio entre partículas disociadas y sin disociar. Sea BOH un Base Débil:

BOH ↔ B+ + OH-

Por otra parte, se denomina Base Fuerte a aquella que en disolución acuosa se disocia completamente.
Sea B'OH una Base Fuerte, entonces la reacción de disociación será:

B'OH → B'+ + OH-

¿Qué son los indicadores?

Son sustancias que siendo ácidos o bases débiles a añadirse a la muestra sobre la que se desea realizar
el análisis ,se produce un cambio químico que es apreciable ,generalmente un cambio de color ;esto
ocurre porque estas sustancias sin ionizar tiene un color distinto que al ionizarse.

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La variación de color se denomina viraje para esto el indicador debe cambiar su estructura química ya

sea al perder o aceptar un protón. Este cambio en el indicador se produce debido a que durante el
análisis se lleva a cabo un cambio en las condiciones de la muestra e indica el punto final de la
valoración. El funcionamiento y la razón de este cambio varían mucho según el tipo de valoración e
indicador.

Reactivos y aparatos

Indicador universal

Pipetas

Dos tubos de ensayo pequeños

ClH 0,1N Ácido clorhídrico

CH3COOH 0,1 N Ácido acético

Fundamento: Se determina el pH del ácido débil y del ácido fuerte con la varilla del indicador universal.

Marcha experimental

Colocar 5 ml de CH3COOH en un tubo de ensayo y 5 ml de ClH en otro tubo de ensayo. Introduzca en

cada uno de ellos la varilla del indicador universal por varios segundos, escúrrala y compare el color de
la varilla con la escala colorimétrica.

Resultados obtenidos:

Anota el pH obtenido con el ácido débil (4) y el del ácido fuerte (1)

SEGUNDO TRABAJO PRÁCTICO

DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ TOTAL, DE UN ÁCIDO DÉBIL Y DE UN ÁCIDO FUERTE

Las mezclas homogéneas son aquellas que tienen la misma composición y cantidad de sustancia en cada
una de sus partes.

Las soluciones son mezclas homogéneas de dos o más componentes.

Sus componentes no son distinguibles a simple vista.

La soluciones están formadas por un di-solvente; componente de mayor proporción en la solución y

un soluto; la parte con menor proporción.

Las soluciones cuyo mayor componente es agua se llaman soluciones acuosas.

Las soluciones acuosas pueden ser diluidas, concentradas, insaturadas, saturadas, sobre saturadas.

Toda sustancia polar tiene la posibilidad de entrar en solución acuosa hasta cierta cantidad
(solubilidad); más allá de esta cantidad se separara y se asienta o flota, dependiendo de su densidad.

La solubilidad aumentará o disminuirá de acuerdo con la temperatura.

Normalmente a medida que se calienta la solución mayor cantidad de soluto podrá disolver.

Las medidas utilizadas para determinar la cantidad de soluto en una solución (es su concentración), son
entre otras:

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Porciento en peso (%p/p): Cantidad de gramos presentes en 100 gramos de solución.

Porciento en volumen (%/v/v): Cantidad de mililitros o litros presentes en 100mL ó 100L de solución
respectivamente.

Partes: Cantidad de partes en 100 partes de solución.

Partes por millón (ppm): milígramos de soluto presentes en 1000 gramos (1Kg) de solución.

Normalidad: Cantidad de Equivalentes/Litro de solución

Solución Normal (1N): Un Equivalente gramo (un equivalente) disuelto en un litro de solución.

Un Equivalente (Eq.) representa el peso molecular del compuesto dividido entre su número de
valencia.

Indicador
La fenolftaleína es un indicador de pH que en disoluciones ácidas permanece incoloro, pero en
presencia de disoluciones básicas toma un color rosado con un punto de viraje entre pH=8,0 (incoloro)
a pH=9,8 (magenta o rosado). Sin embargo en pH extremos (muy ácidos o básicos) presenta otros
virajes de coloración; en la cual la fenolftaleína en disoluciones fuertemente básicas se torna incolora,
mientras que en disoluciones fuertemente ácidas se torna naranja.

Reactivos y Aparatos

Pipetas

Dos tubos de ensayo grandes

CLH 0,1 N (Ácido Clorhídrico Fuerte)

CH3COOH 0,1 N ( Ácido Acético Débil )

NaOH 0,1 N (Hidróxido de Sodio, Base Fuerte)

Fenolftaleína (indicador colorímetro incoloro a rosa alcalino)

Fundamento:

Se determina la acidez total del ácido acético y del ácido clorhídrico por titulación con base fuerte
hidróxido de sodio.

Método:

Colorimétrico

Marcha experimental:

Preparar dos tubos de ensayo; en un tubo colocar 5 ml, de ácido acético 0,1 N y en otro tubo 5 ml. de
ácido clorhídrico 0,1 N.

Colocamos en cada uno de ellos 5 gotas de fenolftaleína

Titulamos con hidróxido de sodio 0,1 N poco a poco hasta el vire del indicador de incoloro a rosa.

Resultados obtenidos en la experiencia:

Anotar los mililitros de hidróxido de sodio 0,1 N gastados en la titulación del ácido acético (débil) y ácido
clorhídrico (fuerte). 5
TERCER TRABAJO PRÁCTICO

EFECTO DE LA DILUCIÓN DE UN ÁCIDO FUERTE Y UNA BASE FUERTE SOBRE LA CONCENTRACIÓN DE

HIDROGENIONES.

Reactivos y aparatos

Pipetas

14 Tubos de ensayo de 10 ml.

ClH 0,1 N

NaOH 0,1 N

Indicador universal de pH en solución

Agua destilada

Fundamento

Al diluir el ClH 0,1N que corresponde a una concentración de hidrogeniones de 0,1Eq/L en forma seriada
de 1:10 disminuye la concentración de hidrogeniones hasta que exista un ClH con una cH + de 10-7 Eq/L .
Lo propio ocurre con el NaOH 0,1N con una concentración de oxidriliones de 0,1 Eq/L hasta que exista
un cOH- de 10-7Eq/L.

Marcha experimental

DILUCIÓN DE UN ÁCIDO FUERTE: Colocamos 6 tubos de ensayo (desde el 2 al 7) con 9 ml de agua

destilada y 10 gotas de indicador universal a cada tubo.

Al tubo n° 1 le ponemos 10 ml de ClH, luego tomamos 1 ml del tubo n°1 y lo pasamos al tubo n°2 y así
sucesivamente hasta llegar al tubo n° 7. Vamos a hacer la dilución en forma seriada de 1 en 10 lo que
quiere decir que va a disminuir la concentración de hidrogeniones de 10 en 10 hasta que exista un HCL
que tenga una concentración de 10-7 en Eq/litro. Lo propio va a ocurrir con el hidróxido de sodio al 0,1
N.

DILUCIÓN DE UNA BASE FUERTE: Realizamos el mismo procedimiento anterior pero con NaOH.

Resultados obtenidos:

Se obtuvo diferentes pH en cada tubo de ensayo desde el 1 al 7. Observar el cambio de color de cada
tubo que corresponde a un pH diferente de acuerdo a la dilución seriada tanto del ClH como del NaOH.

Con el ClH el viraje es de rojo hacia anaranjado o amarillo

(0,1-0,01-0,001-0,0001-0,00001- 0,000001-0,0000001).

Con el NaOH el viraje es de azul a verde → amarillo

(0,1-0,01-0,001-0,0001-0,00001- 0,000001- 0,0000001).

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CUARTO TRABAJO PRÁCTICO

DETERMINACIÓN DEL pH DE LA ORINA

Reactivos y aparatos

Varillas de indicador universal

Varillas de indicador sectorial, tiene 2 zonas de pH 4 a 7 y 6,5 a 10 con colores característicos.

Recipiente de vidrio

Orina recién emitida

Fundamento

Se determina el pH urinario con varillas de indicadores de pH universal y sectorial

Marcha experimental

Trabajamos con orina no diluida para evitar disminuir la cH

Sumergir en el seno de la orina recién emitida durante unos segundos, una varilla de indicador universal,
saque la varilla, sacuda el exceso de orina y compare con la escala colorimétrica de 0 a 14 y anote la
unidad de pH. Acto seguido utilice una varilla de indicador sectorial y realice el mismo procedimiento
compare con la escala el decimal del pH de 4 a 7 o de 6,5 a 10.

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Resultados obtenidos:

Determinamos que el pH de la orina tuvo un valor de acuerdo a las varillas de Indicador de pH.

INFORME
1.- Título del trabajo práctico

2.- Fotos de la marcha experimental

3.- Fotos de los resultados y explicación

Bibliografía
1.- Rodwell V W et al: Harper Bioquímica Ilustrada, 30nd ed. Mc Graw Hill Education, 2015

2.- Hall J E: Guyton y Hall Tratado de Fisiología Médica, 13nd ed. Elsevier, 2016

3.- Manual de Bioquímica Práctica, Editorial Universidad de Guayaquil, 1990

4.- https://www.ecured.cu/Ionizaci%C3%B3n_del_aguaIonización del agua - EcuRed

5.- http://queesela.net/ph-del-cuerpo-humano/

6.- http://quimicaivtum.blogspot.com/p/blog-page_4.html