BIOQUIMICA ANALITICA

PROBLEMA DE INVESTIGACION

CLAUDIA RUBIANO-NOHORA VEGA

Proponga en forma sistemática una metodología para resolver el siguiente problema de

investigación. Explique cuáles y porque escoge los métodos para llevar a feliz término su
propuesta. Explique los resultados que espera con cada una de las metodologías; puede
complementar sus respuestas con tablas, graficas, diagramas, dibujos etc.

Antecedentes:

Resultados preliminares mostraron que hay una proteína integral de membrana que está
en las células del sistema nervioso central (modelo cerebro de rata y/o ratón) y que
permite el flujo iónico a través de la membrana celular, activando una serie de segundos
mensajeros que intervienen en plasticidad sináptica. Algunas de las propiedades
moleculares son:

1. La topología estructural probablemente corresponde a un heterotetrámero

2. Cada subunidad tiene un peso aproximado de 100 kDa.

3. Una de las subunidades tiene un sitio de unión a Glutamato y otra de las

subunidades presenta un sitio de unión a glicina. Por otro lado se sabe que las
otras dos subunidades están glicosiladas.

4. La subunidad que se une a glutamato tiene un punto isoeléctrico teórico de 6.41 y

fue sometida a tratamiento enzimático con pepsina y tripsina y se obtuvo los
siguientes fragmentos peptídicos.

AVFVFEYFSPVGYNRCLADGREPGGPSFTIGKA
CHNEKNEVMSSQLDIDNMAGVFYMLG
CYNTHEKRIYQSNMLNRYLINVTFEGRNLSFSEDGYQMHPKLVIILLNKER
DEGCKLVTIGSGKVFASTGYGIAIQKDSGW
DFSVPFIETGISVMVSRSNGTVSPSAFLEPFSADVWV
DGDSKIQNQLKKLQSPIILLYCTKEEATYI
ERKWERVGKWKDKSLQMKYYVWPRMCPETEE
FEVANSVGLTGYGYTWIVPSLVAGDTDTVPSEFPTGLISVS
FEVANSVGLTGYGYTWIVPSLVAGDTDTVPSEFPTGLISVSYDEWDYGLPA
FFAVIFLASYTANLAAFMIQEEYVDQVSGLSDKK
FVDLQKEEAALAPRSVSLKDKGR
GEVVMKRAYMAVGSLTINEERSEVVDFSVPFIETGISVM
GHHHNNPGSGYMLSKSLYPDRVTQNPFIPTFGDDQCLLHGSK
GRFMDGSPYAHMFEMPAGESSFANKSSVTTAGH
GWKRQVDLAILQLFGDGEMEELEALWLTGI
IITRICDLMSDRKIQGVVFADDTDQEAIAQILDFISAQTLTPIL
KKFQRPNDFSPPFRFGTVPNGSTERNIRNN
KSVKFTYDLYL
LDFISAQTLTPILGIHGGSSMIM
 LGAAMALSLITFICEHLFYWQFRHCFMG
MEEYDWYIFSIVTTYFPGYQDFVNKIRS
MGVCSGKPGMVFSISRGIYSCIHGVAIEER
MKPSAECCSPKFWLVLAVLAVSGSKA
NGSPQSALDFIRRESSVYDISEHRRSFTHSDCKSYNNPPCEENLFS
DYISEVERTFGNLQLKDSNVYQDHYHHHHRPHSIGSTSSIDGL
NNYAEMHAYMGKFNQRGVDDALLS
PCQKRIISENKTDEEPGYIKKCCKGFCIDILKKISKS
PGRFQKDICIGNQSNPCVPNNKNPRAFNGSSNGHVYEKLSSIESDV
PILGIHGGSSMIMADKDESSMFFQFGPSIEQQASVMLNI
PKFWLVLAVLAVSGSKARSQKSAPSIGIAVILVGTS
PSFTIGKAIWLLWGLVFNNSVPVQNPKGTTSKIMVSVWAFFAV
PTGLISVSYDEWDYGLPARVRDGIAIITTAAS
QSVMNSPTATMNNTHSNILRLLRTAKNMANLSGVNG
RVRDGIAIITTAASDMLSEHSFIPEPKSS
SKSYFFRQPTVAGASKTRPDFRALVTNKPVVSALHGAVPGR
TSDEVAIKDAHEKDDFHHLSVVPRVELVAMNETDPKS
IITRICDLMSDRKIQGVVFADDTDQEAIAQILD
TVTYGNIEGNAAKRRKQQYKDSLKKRPASAKSRREFDEIELAYRRRPPRSPDHK
VDDALLSLKTGKLDAFIYDAAVLNYMAGRDE
WVMMFVMLLIVSAVAVFVFEYFSPVGYNRCL
YDCDNPPFTTQPRSISKKPLDIGLPSSKHSQLSDLYG
KFSFKSDRYSGHDDLIRSDVSDISTHTVT
YPQSPTNSKAQKKNRNKLRRQHSYDTFVDLQK

Usted debe corroborar las propiedades moleculares mencionadas y debe complementar

la caracterización del receptor, para ello debe:

1. Proponer en forma detallada una metodología sistemática para purificar el receptor

2. Aislar cada una de las subunidades de la proteína, evaluar si en realidad son

diferentes y determinar cómo es la interacción de las subunidades.

3. Complementar la caracterización molecular del receptor

4. Se podría determinar su estructura terciaria ?

5. Como se podría determinar si hay modificaciones postraduccionales?

6. Teniendo en cuenta las características del receptor ¿cómo se podría inhibir o

bloquear la actividad de la proteína?

7. Como se podría aislar e ARNm del receptor y el su gen?

Nota: Dentro de la metodología es importante evaluar la cantidad de proteína que se

puede aislar o se debe proponer una metodología en la que el receptor se obtenga en
mayor cantidad para los estudios de caracterización molecular.