Pérez Mendoza Manuel Alberto

Microbiología general II (Laboratorio)

Grupo: 2752 Equipo: 9
Entrega 16/11/17
Puntos guía.
PRÁCTICA 2.
● Métodos de cultivos virales (Diferentes al embrión de pollo): Animales, órganos,
tejidos, líneas celulares, etc...
● Vías de inoculación del embrión de pollo y ejemplos de los virus que se pueden
inocular en cada una. Commented [1]: Estás se repiten
● Efectos que producen los virus en cada vía de inoculación (Efectos citopáticos
y ejemplos)
El tipo de cultivo celular usado (primario, secundario ó línea celular) para el cultivo viral
depende de la sensibilidad de las células a dicho virus en particular. En el laboratorio, la
multiplicación del virus puede seguirse determinando lo siguiente:

a) Efecto citopático, o necrosis de las células en el cultivo de tejidos (poliomielitis, herpes,

sarampión, adenovirus, CMV).

b) La inhibición del metabolismo celular o incapacidad de las células infectadas por el virus
para producir ácido (enterovirus).

c) La aparición de una hemaglutinina (parotiditis, influenza) o un antígeno fijador del

complemento (poliomielitis, varicela, sarampión).

d) La adsorción de eritrocitos de las células infectadas llamada hemadsorción (parainfluenza,

influenza). Esta reacción se hace positiva antes que los cambios citopatogénicos se hagan
visibles.

e) Interferencia por el virus no citopatógeno (rubéola) con replicación y efecto citopático de

un segundo virus indicador (echovirus).

f) Transformación morfológica por un virus oncogénico, seguido por lo general de la perdida

del contacto por inhibición y el agrupamiento de células en los focos discretos. Tales
alteraciones constituyen una propiedad heredable de las células.
● Variables que se deben tomar en cuenta para la inoculación de los virus en
embrión de pollo. (Temp, concentración, humedad, tiempo)
1. Embrión vivo libre de patógenos específicos
2. Cáscara color blanca para fácil observación
3. Temperatura de incubación 39* C
4. Tiempo de incubación de 7 a 13 días
5. Edad del embrión
6. Vía de inoculación
7. Volumen de inoculación
8. Concentración del virus a inocular
9. Humedad relativa de 60%
10. Concentración de O2 de 2%
 ● Criterios para demostrar la viabilidad del embrión
-Con la transiluminación se presenta formación de venas presentes en la membrana
corioalantoidea. También se puede observar el desplazamiento de un punto negro.
-El huevo se sumerge en agua Si no flota está vivo Si el huevo flota está muerto debido a la
producción de gases de descomposición
● Investigue qué tipo de virus crean hemoaglutinación y por qué?
Algunos virus poseen en su envoltura proyecciones cortas de una constitución química
definida (glicoproteínas) denominadas hemoaglutininas. Estas tienen la propiedad de unirse
a glóbulos rojos de ciertas especies animales, formando en suspensión, un enrejado de
glóbulos rojos-virus.
En los virus del grupo Orthomixovirus (Influenza humana) y Paramixovirus (Parainfluenza
tipo 3) la ubicación de la enzima neuraminidasa entre las glicoproteínas virales, determina
que en algunos virus (por ejemplo, Parainfluenza tipos 3) la técnica de hemoaglutinación debe
realizarse a bajas temperaturas para retrasar la elución de los eritrocitos por la acción de la
neuraminidasa.
La neuraminidasa actúa sobre la unión entre los glóbulos rojos y hemoaglutinina provocando
la destrucción del sitio receptor específico en el glóbulo rojo con posterior elución del virus.
Este fenómeno es visualizado en el fondo del pocillo de la policubeta por la formación de un
pequeño botón rojo.
Los Adenovirus y Enterovirus son capaces de hemoaglutinar glóbulos rojos de ciertas
especies, pero no poseen la enzima neurominidasa, por lo que la hemoaglutinación es
irreversible. En otros virus, la hemoaglutinación está asociada a una fracción soluble del virus
separable de la partícula viral (Poxvirus).
La característica principal de la técnica de hemoaglutinación es la rapidez, el bajo costo de
los reactivos y la simplicidad de su realización, lo que determina su fácil adaptación a
laboratorios de escasa infraestructura.

Vias de inoculacion del embrion de pollo y ejemplos de los virus que se pueden
inocular en cada una.

1) ¿Qué otros tipo de cultivos se cuentan para desarrollar virus?

Los virus sólo pueden multiplicarse en el interior de las células vivas, no pudiendo hacerlo en
un medio nutritivo carente de células.
Los sistemas celulares utilizados para propagar son:
● Animales de experimentación
● Cultivos celulares artificiales
 Animales de experimentación
La inoculación en animales de experimentación de muestras clínicas para su aislamiento y
propagación, es una técnica poco empleada debido a diversas dificultades como el de los
animales, la laboriosidad de la inoculación y el peligro de entrenamiento difusión del virus con
las excretas de las animales. se emplea únicamente cuando se trata de propagar
Los animales más utilizados: monos, los cobayo y los ratones lactantes.
Embriones animales La infección puede producir una lesión tisular local conocida.
Cultivos celulares artificiales
Se trata de multiplicar y mantener células in vitro. La células se obtienen de un fragmento de
un órgano u embriones de pollo, por trituración y posterior disgregación con tripsina (enzima),
lo que permite obtener células aisladas que se introducen en frascos con medios de cultivo
líquidos adecuados (botellas o placas Petri). Las células en los frascos pueden estar en
suspensión, es decir, libres en el medio de cultivo líquido o adosadas a la pared del frasco y
bañadas por el medio (las células producen un material glicoprotéico que permite su adhesión
a las superficies). En el primer caso se trata de células en suspensión y en segundo en
monocapa.
Como alternativa a los huevos embrionados se suelen ocupar cultivos de célula.El cultivo de
tejidos se refiere al crecimiento y mantenimiento de células de tejidos in vivo.Hay básicamente
dos tipos:cultivo de explantes y cultivo de células.Los explantes son pequeños fragmentos de
tejidos del hospedero que se mantienen en cultivo,mientras que el cultivo de células se
obtiene de la disgregación de diferentes tejidos del hospedero en celulas invididuales.La
meyoria de los sistemas usados en virología son en realidad cultivos celulares y no cultivos
de tejidos, aunque ambos términos se usan de manera indistinta.Los cultivos celulares se
dividen a su vez en cultivos primarios,cultivos semi-continuos y cultivos continuos.
2)¿Qué ventajas o desventajas tiene el uso de un embrión de pollo?
Los huevos embrionados presentan la ventaja de ser bacteriológicamente estériles, de poseer
escasos virus latentes de carecer de respuesta inmune y de ser de facil manipulacion
.Actualmente su uso está restringido a la producción de vacunas para la influenza y para el
aislamiento de ortomyxovirus y poxvirus.
Las desventajas serian la alta sensibilidad de la técnica por lo que requiere personal calificado
para su uso además del costo que conlleva, además es difícil apreciar efectos en embriones
en los tre primeros días de edad del embrión.
3. ¿Qué tipos de virus se pueden inocular en cada una de las partes del embrión de
pollo?
Las cuatro vías más comunes para la inoculación del huevo embrionado fértil son:

La vía de saco alantoideo.

Es usada para el aislamiento y propagación Paramyxovirus,Myxovirus y Coronavirus .Los
embriones inoculados por esta vía son generalmente incubados de 4 a 7 días post
inoculación.
La vía de saco vitelino
Esta vía es usada para el aislamiento y propagación del virus de encefalomielitis aviar.Los
embriones inoculados por esta vía son incubados de 10 a 13 días de post inoculación.

La vía de membrana corioalantoidea(MCA)

Es usada en el aislamiento y pases de Poxvirus y virus del Herpes.Los embriones inoculados
por esta vía son incubados durante 7 días post inoculación.

La vía de saco amniótico

Esta vía es usada para el aislamiento inicial de los Myxovirus.Los embriones inoculados por
esta vía son inoculados de 4 a 7 días post inoculación.

Intracerebral.
Esta inoculación es usada en embriones de 8 a 14 días de edad y es usado en estudios de
alteraciones patológicas del cerebro.Los virus del Herpes simple y rabia se pueden cultivar
por esta vía.

4)¿Qué efectos causa la inoculación de un virus en un embrión de pollo?

La inoculación de virus como el Avipoxvirus al ser cultivado en la membrana corioalantoidea
del embrión de pollo, produce lesiones ulcerativas focal o difusas.

5. Esquematizar y explicar los ciclos de replicación

Commented [2]: La saque del totora si quieres la

cambio no se ve muy bien

El ciclo lítico se denomina así porque la célula infectada por un virus muere por rotura (lisis
en griego), al liberarse las nuevas copias virales. El ciclo lítico es el método de reproducción
viral, este es usualmente el principal método de replicación viral e involucra la destrucción de
células infectadas. El ciclo consta de las siguientes fases:

1. Fase de adsorción o fijación: El virus se une a la célula hospedadora de forma estable.

La unión es específica, ya que el virus reconoce complejos moleculares de tipo proteico,
lipoproteico o glucoproteico, presentes en las membranas celulares.
2. Fase de penetración o inyección: el ácido nucleico viral entra en la célula mediante una
perforación que el virus realiza en la pared bacteriana.
3. Fase de eclipse: en esta fase no se observan copias del virus en la célula, pero se está
produciendo la síntesis de ARN, es decir la duplicación y transcripción de ARN, necesario
para generar las copias de proteínas de la cápsida. También se produce la continua formación
de ácidos nucleicos virales y enzimas destructoras del ADN bacteriano.
4. Fase de ensamblaje: en esta fase se produce la unión de los capsómeros para formar la
cápsida y el empaquetamiento del ácido nucleico viral dentro de ella.
5. Fase de lisis o ruptura: conlleva la muerte celular. Los viriones salen de la célula,
mediante la rotura enzimática de la pared bacteriana. Estos nuevos virus se encuentran en
situación de infectar una nueva célula.

Ciclo lisogénico
Las dos primeras fases de este ciclo son iguales a las descritas en el ciclo anterior. En la fase
de eclipse el ácido nucleico viral en forma de ADN bicatenario recombina con el ADN
bacteriano, introduciéndose en éste como un gen más. Esta forma viral se denomina profago,
o virus atenuado, mientras que la célula infectada se denomina célula lisogénica.

En este estado el profago puede mantenerse durante un tiempo indeterminado, pudiendo

incluso, reproducirse la célula, generando nuevas células hijas lisogénicas. El profago se
mantendrá latente hasta producirse un cambio en el medio ambiente celular que provoque
un cambio celular, por ejemplo, por variaciones bruscas de temperatura, o desecación, o
disminución en la concentración de oxígeno. Este cambio induce a la liberación del profago,
transformándose en un virus activo que continúa el ciclo de infección hasta producir la muerte
celular y la liberación de nuevos virus.

Bibliografía
● Acton, Jean D. Virología. a ed. Editorial Interamericana: México 1997
● Herrera Uribe Libia. Procedimientos en virología médica. Editorial Universidad de
Costa Rica: Costa Rica. 2004
● Leslie Collier. Virología Humana. Tercera Edición. Corea. 1993. pp 259-267.
● Koneman. Diagnóstico microbiológico. Tercera edición. Editorial Panamericana.
Argentina. 1992. pp. 786-810
● Jawetz. Microbiología médica. Editorial el manual moderno. México 1996.