Las proteínas de carga exportadas desde el retículo endoplasmático al aparato de

Golgi son típicamente transportadas en vesículas recubiertas con el complejo de

proteína II (COPII) de 60-90 nm de diámetro. Varias moléculas de carga que
incluyen colágenos y quilomicrones forman estructuras que son demasiado
grandes para ser acomodadas por estas vesículas, pero su secreción aún requiere
proteínas COPII. Aquí, primero revisamos el progreso reciente en grandes
secreciones de carga derivadas especialmente de modelos animales y
enfermedades humanas, que indican la importancia de las proteínas COPII. Luego
discutimos el reciente aislamiento de factores especializados que modulan el
proceso de formación de carga dependiente de COPII para facilitar la salida de
cargas de gran tamaño del retículo endoplásmico. Con base en estos hallazgos,
proponemos un modelo que describe la importancia del ciclo de GTPasa para la
secreción de cargas de gran tamaño. A continuación, resumimos informes que
describen las estructuras de las proteínas COPII y cómo estos resultados
proporcionan información sobre el mecanismo de ensamblaje de los grandes
transportadores de carga. Finalmente, discutimos qué problemas quedan por
resolver en el futuro.

El requerimiento de proteínas COPII para la exportación de colágeno desde los

ER Cargoes que salen del retículo endoplásmico (RE) al aparato de Golgi se
empaqueta en vesículas recubiertas con el complejo de proteína II (COPII) que
típicamente tienen diámetros de 60-90 nm [1]. La formación de vesículas COPII
ocurre en regiones particulares de la ER llamadas sitios de salida ER, también
conocidas como ER de transición (tER), que se tiñen como puntos puntuados
dispersos por el citoplasma mediante análisis de inmunofluorescencia de células
de mamíferos (Fig. 1). Los mecanismos para formar vesículas de transporte están
altamente conservados desde la levadura hasta los humanos. La pequeña
GTPasa Sar1 se activa por su factor de intercambio de guanina y nucleótido
(GEF), Sec12. Después de la activación, Sar1 se recluta a la membrana ER y
forma el complejo de pre-brotación, que consiste en el complejo de revestimiento
interno Sec23 / Sec24 y las moléculas de carga Sec24-bound. Posteriormente, el
complejo de capa externa Sec13 / Sec31 se une, y este evento de unión mejora la
actividad de la proteína activadora de GTPasa de Sec23, completando así el
ensamblaje de la capa. Sec16 es el otro factor esencial en la biogénesis de la
COPII y funciona como andamio para interactuar con proteínas de la cubierta
particulares. Recientemente, Sec16 también ha sido reportado negativamente
regular la hidrólisis de GTP por Sar1. Se han identificado factores adicionales
implicados en la producción de vesículas, como p125, TFG-1 y ALG2. Los detalles
de la biogénesis COPII convencional han sido ampliamente revisados en otros
artículos publicados recientemente.
Los colágenos sintetizados en el ER se pliegan en hetero- u homo-trímeros, que
forman [estructuras rígidas de 300 nm de longitud que son demasiado grandes
para caber en las vesículas recubiertas con COPII convencionales. Sin embargo,
las imágenes por fluorescencia y la microscopía electrónica indica que el colágeno
I sale del RE a través del proceso dependiente de COPII. Stephens y Pepperkok
demostraron que la microinyección de un mutante de Sar1a deficiente en GTPasa
(Sar1a H79G) bloquea la secreción de colágeno I.
Además, mostraron que el colágeno I sale del RE en estructuras marcadas con
Sec24D, pero segrega de la glicoproteína del virus de la estomatitis vesicular
VSVG-ts045, un modelo de las proteínas de carga convencionales. El último
resultado implica que el transporte de colágeno al Golgi depende de la COPII,
pero es distinto del tráfico de carga convencional. Mironov et al. fortaleció este
hallazgo mediante el análisis por microscopía electrónica, que demostró que
VSVG y el colágeno I salen de la sala de emergencias mediante un proceso
dependiente de COPII, pero desde distintos dominios. Además, se observó que
las protuberancias de los dominios de ER en la vecindad de los sitios de salida ER
forman portadores que contienen VSVG o colágeno I. Curiosamente, la formación
de portadores es dependiente de COPII, pero no parece implicar la gemación y
fusión de vesículas recubiertas con COPII.

Sec23A
La importancia de las proteínas COPII para la secreción de colágeno también se
ha sugerido mediante el análisis de enfermedades humanas y modelos animales
(Tabla 1). Se ha identificado que dos mutaciones puntuales en los genes Sec23A
(F382L y M702V) son responsables de la displasia cráneo-lentículo-sutural
(CLSD), un trastorno autosómico recesivo caracterizado por fontanelas de cierre
tardío, dismorfismos faciales y defectos esqueléticos. Los fibroblastos aislados de
pacientes con CLSD mostraron una extensa dilatación del ER y la acumulación de
colágeno I dentro del ER. Ambas mutaciones se encuentran cerca del sitio de
unión de Sec31. La caracterización bioquímica y estructural sugiere que Sec23A /
F382L no puede reclutar Sec13 / Sec31 y, por lo tanto, no se producen brotes de
vesículas. Por el contrario, Sec23A / M702V es capaz de interactuar con Sec13 /
Sec31 y no tiene efectos apreciables sobre la gemación de vesículas in vitro.
Curiosamente, la mutación M702V parece mejorar la actividad de Sar1B GTPasa
a través de una interacción con Sec13 / Sec31. La mutación del triturador de pez
cebra se obtuvo a través de una pantalla de mutagénesis química para identificar
genes implicados en el desarrollo craneofacial. Un análisis adicional reveló que la
trituradora tiene una mutación sin sentido en el resto 402 del gen Sec23A. Los
condrocitos trituradores tienen ER distendido con colágeno II acumulado en el
interior, lo que respalda aún más que se requiera Sec23A para la exportación de
colágeno desde el ER.

Recientemente, Sec23A se ha identificado como un objetivo del factor de

transcripción residente en ER BBF2H7, también conocido como Creb3L2. BBF2H7
se expresa en condrocitos y normalmente se degrada por la vía ubiquitina-
proteasoma, pero tras el estrés ER, el factor de transcripción se estabiliza y se
transporta al aparato de Golgi, luego se activa mediante proteólisis con sitio 1
proteasa localizada por Golgi (S1P) y sitio 2 proteasa (S2P). El extremo N
escindido se transloca al núcleo para regular al alza la expresión de Sec23A. Se
encontró que los ratones knockout BBF2H7 muestran una condrodisplasia grave.
Los condrocitos de los ratones knock-out tienen ER expandida, donde el colágeno
II y la proteína de la matriz oligomérica del cartílago se acumulan en grandes
cantidades. Un mutante de pez cebra que portaba una mutación sin sentido en
BBF2H7 (feelgood) también mostró defectos en el desarrollo de condrocitos y se
observó la acumulación de colágeno II en la ER distendida. Estos resultados
sugieren que la activación de transcripción mediada por BBF2H7 de Sec23A es
necesaria para el transporte de colágeno en condrocitos. El requisito de la vía
BBF2H7-Sec23A para el transporte de colágeno también se informó para los
fibroblastos dérmicos

Sec24D
El vertebrado posee cuatro isoformas de Sec24, y se considera que estas
isoformas satisfacen las demandas de tráfico de variedades de moléculas de
carga, aunque parecen ser parcialmente redundantes en el reconocimiento de
carga.
Estudios recientes en peces indicaron que Sec24D es específicamente importante
para la secreción de colágeno de la sala de emergencias. Las pantallas de
mutagénesis realizadas en medaka y pez cebra condujeron independientemente a
la identificación de las mutaciones sin sentido denominadas vbi y bulldog,
respectivamente. Ambos mutantes mostraron defectos craneofaciales, y los
condrocitos de estos mutantes no pudieron secretar el colágeno II y mostraron una
ER dilatada. La osteogénesis imperfecta, un trastorno asociado con la reducción
de la masa ósea, el aumento de la fragilidad ósea y la deformidad ósea, está
causada principalmente por mutaciones heterocigóticas en los genes que codifican
el colágeno I (COL1A1 o COL1A2).
Un estudio clínico reciente reveló que las mutaciones de Sec24D también son
responsables del fenotipo de osteogénesis imperfecta.
Los individuos afectados poseen dos mutaciones de sentido erróneo en cada alelo
Sec24D o un sentido erróneo y la otra mutación sin sentido. Los fibroblastos de
pacientes mostraron acumulación de colágeno I dentro del ER dilatado.
Curiosamente, el knockout de Sec24D en ratones reveló letalidad embrionaria
temprana. Estos resultados implican que se requiere transporte de carga
Sec24Ddependent para las primeras etapas de desarrollo, y formas truncadas o
mutadas de Sec24D de los mutantes de peces y los pacientes tienen actividad
marginal requerida para el desarrollo temprano, pero no es suficiente para secretar
colágeno I de la sala de emergencias. Curiosamente, se ha informado que el
patrón de expresión de Sec24d cambia durante el desarrollo. Se expresa de
manera ubicua durante las primeras etapas del desarrollo, mientras que la
expresión se restringe al cartílago craneofacial durante las etapas posteriores del
desarrollo
Sec13 / 31
Sec13 funciona formando complejos individuales en diferentes ubicaciones dentro
de las células. Se sabe que Sec13 constituye el complejo de poro nuclear (NPC).
Sin embargo, Sec13 interactúa con Sec31 para servir como una capa externa de
vesículas COPII. Además, recientemente se sugirió Sec13 para formar un
complejo con Sec16, que sirve como una plantilla para la formación de capas
externas Sec13 / 31.
Townley et al. primero informó que los morfantes Sec13 de pez cebra exhiben
defectos en el desarrollo craneofacial. En células de mamífero, la reducción de
Sec13 por siRNA daña la secreción de colágeno I sin afectar el transporte de
carga convencional. Curiosamente, un mutante de pez cebra originalmente
identificado como el fenotipo de hígado pequeño en una pantalla se reveló que
tenía un truncamiento C-terminal de Sec13, que lo hace incapaz de unirse a
Sec31. El pez mutante exhibe un órgano digestivo hipoplástico y ojos pequeños
con laminación retiniana alterada, y los condrocitos del mutante mostraron
acumulación de colágeno II en las estructuras ER dilatadas. En este contexto, una
reducción Sec31A por morfolino se realizó en peces y mostró malformación del
órgano digestivo, como se observó en los mutantes Sec13. Además, los
condrocitos de morphants acumulan colágeno II dentro del ER dilatado. Estos
resultados sugieren fuertemente que los defectos en el desarrollo de órganos
digestivos y la secreción de colágeno en los peces mutantes Sec13 se deben a la
función comprometida de COPII. La mutación en el componente de NPC Nup107
exhibe falla de la laminación de la retina,
aunque la disminución de Sec31A y Sec31B o el tratamiento con brefeldin A, un
inhibidor de la ER para el tráfico de Golgi, no tiene ningún efecto sobre el
desarrollo del ojo. Por lo tanto, la función de Sec13 en el complejo NPC parece ser
necesaria para el desarrollo de la retina
A medida que la evidencia se acumula, no hay duda de que la secreción de
colágeno de la ER requiere componentes de COPII. Sin embargo, estos
resultados no son suficientes para concluir si el colágeno es transportado
directamente por estructuras recubiertas con COPII modificado, que puede
acomodar cargas de gran tamaño, o el requisito de COPII para la secreción de
carga de tamaño excesivo es limitado e indirecto. Recientemente, se han
identificado varias moléculas asociadas con los sitios de salida ER que se
requieren específicamente para la secreción de grandes cantidades de carga y se
han propuesto algunos modelos. Nos enfocaremos en este tema en la siguiente
sección.

Componentes específicamente requeridos para la secreción de colágeno

TANGO1
La detección en todo el genoma en las células S2 de Drosophila reveló varios
genes implicados en la secreción de proteínas y la morfología de Golgi. El
transporte y la organización 1 de Golgi (TANGO1), también conocida como
actividad inhibidora de melanoma 3 (MIA3), se aislaron en esta detección como
implicadas en el tránsito de RE a Golgi. TANGO1, una proteína que contiene
múltiples dominios, con un dominio SH3 no canónico las regiones transmembrana,
dos dominios de espiral enrollada, y el dominio rico en prolina (PRD), solo se
conservan a través de metazoos (Fig. 2). TANGO1 se localiza en los sitios de
salida ER con el dominio SH3 orientado hacia el lado luminal y el PRD hacia el
lado citoplásmico. Los pliegues similares a Luminal SH3 en las proteínas de la
familia MIA tienen propiedades estructurales únicas en comparación con los
dominios SH3 citoplasmáticos canónicos.
Se ha demostrado que PRD de TANGO1 interactúa con Sec23 / Sec24,
probablemente de manera similar a la unión de Sec31 con Sec23 / Sec24, porque
PRD de Sec31 es responsable de la interacción con Sec23 / Sec24.
El dominio SH3 de TANGO1 es capaz de interactuar con el colágeno VII, y una
caída de TANGO1 perjudica la exportación de colágeno VII desde la sala de
emergencias sin afectar el transporte general de proteínas. Estos datos sugieren
que TANGO1 actúa como un receptor de carga para el colágeno VII en los sitios
de salida de ER. Es de destacar que no se requiere TANGO1 para la secreción de
colágeno I en células cultivadas, lo que sugiere que el papel de TANGO1 como
receptor de carga se limita a un cierto conjunto de moléculas y no a todas las
cargas sobredimensionadas. En un ensayo de incrustación de vesículas in vitro,
se demostró que TANGO1 no se exportaba desde el ER junto con los colágenos.
Por el contrario, los receptores de carga convencionales salen del ER junto con las
proteínas de carga dentro de las vesículas revestidas con COPII. Por lo tanto,
TANGO1 puede emplear un mecanismo único para exportar grandes cargas
desde el ER. Los ratones TANGO1 knock-out se han hecho y exhiben
condrodisplasia, lo que conduce a enanismo del feto, edema periférico y letalidad
neonatal. Estos fenotipos probablemente se deban a la acumulación intracelular
de colágenos y a la inducción de la fuerte respuesta de proteína desplegada,
especialmente en el esqueleto en desarrollo. Se descubrió que el knockout
TANGO1 muestra defectos en la secreción y parte de la maduración del colágeno
I, II, III, IV, VII y IX a partir de condrocitos, fibroblastos, células endoteliales y
células murales. A diferencia del agotamiento de TANGO1 por ARNip, el knockout
TANGO1 inhibe la exportación de colágeno I y VII del RE.
Es interesante observar que el bloqueo transcripcional del gen del colágeno I en
ratones mediante la inserción de retrovirus condujo a la letalidad embrionaria, que
es más grave
fenotipo que el knockout TANGO1. Si TANGO1 tiene roles directos en la secreción
y maduración de una amplia gama de colágenos, aún no se ha investigado; sin
embargo, proponemos que el fenotipo de los animales knock-out es un resultado
acumulativo debido a la secreción alterada de un número limitado de colágenos.
Es de destacar que se ha informado que TANGO1 en drosophila también está
involucrado en la secreción de colágeno IV desde el ER.

cTAGE5
El antígeno 5 asociado al linfoma de células T (cTAGE5), también conocido como
antígeno 6 expresado por meningioma (MGEA6), que se aisló originalmente como
antígenos específicos de tumores para varios tipos de cáncer, es un homólogo
cercano de TANGO1 en células de mamífero. Aunque cTAGE5 carece del tramo
luminal largo N-terminal cuando se compara con TANGO1, contenía una región
transmembrana, dos dominios de espiral en espiral y un PRD ubicado en el
extremo C, y se localiza en los sitios de salida del ER (Fig. 2). El PRD de cTAGE5
también se une a Sec23 / Sec24. cTAGE5 interactúa directamente con TANGO1 a
través de uno de los dominios de bobina enrollada. Las células agotadas de
cTAGE5 por siRNA acumulan colágeno VII en el ER, lo que sugiere que cTAGE5
actúa como un correceptor de TANGO1 en los sitios de salida ER.
cTAGE5 se conserva en vertebrados y forma una familia multigene con nueve
pseudogenes en humanos y posiblemente en otros primates. La expresión de
cTAGE5 es bastante omnipresente, pero el corte y empalme alternativo específico
de tejido
produce formas más largas de cTAGE5, designado como MIA2. La expresión de
MIA2 solo está restringida a los hepatocitos, y al igual que TANGO1, contiene un
pliegue N-terminal tipo SH3.
Los ratones que poseen mutaciones puntuales en MIA2 tienen VLDL, LDL, HDL y
triglicéridos circulantes más bajos. Se requiere investigación adicional para
determinar si MIA2 actúa como un receptor de carga para carga de gran tamaño.
Se sabe que MIA2 tiene una forma secretada más corta y se ha informado sobre
su papel en la carcinogénesis. Con base en los datos experimentales descritos
anteriormente, se ha propuesto un modelo para la exportación de colágeno VII por
el complejo cTAGE5 / TANGO1. El complejo cTAGE5 / TANGO1 en los sitios de
salida ER se une al colágeno VII a través del pliegue luminal SH3 de TANGO1 y
Sec23 / Sec24 a través de los PRD tanto de cTAGE5 como de TANGO1. La
interacción de estos dos PRD con Sec23 / Sec24 inhibe el reclutamiento de Sec13
/ Sec31, retrasando así la hidrólisis de Sar1 GTP requerida para la formación de
vesículas. Una vez que el colágeno VII se acomoda en un portador COPII del
tamaño correcto, el colágeno VII puede disociarse de TANGO1, lo que conduciría
a la disociación de los PRD de Sec23 / Sec24. Sec13 / Sec31 puede ser reclutado
y completar la formación del transportista. Se requiere una validación experimental
adicional para probar esta hipótesis

Sec12
La inmunoprecipitación posterior al análisis de espectrometría de masas reveló
Sec12 como un nuevo compañero de unión de cTAGE5.
La Sec12, también conocida como proteína de unión a elementos reguladores de
la prolactina en células de mamíferos, es una proteína transmembrana de tipo II
con pliegues WD-40 y actúa como un GEF para Sar1 [5, 100]. Sec12 se une
directamente a uno de los dominios de coiled-coil de cTAGE5, y esta interacción
no ejerce ningún cambio en la actividad GEF de Sec12 hacia Sar1. Sin embargo,
la interacción es necesaria para que Sec12 pueda ubicarse correctamente en los
sitios de salida de ER, ya que una caída de cTAGE5 conduce a la dispersión de
Sec12 a lo largo del ER. Curiosamente, la caída de cTAGE5 inhibe la secreción de
colágeno VII, pero no tiene efectos sobre la secreción proteica general, lo que
indica que las cargas convencionales pueden secretarse siempre que Sec12 esté
presente en la sala de emergencias. Por lo tanto, el reclutamiento de Sec12 a los
sitios de salida de ER por interacción con cTAGE5 parece ser específicamente
necesario para que el colágeno VII salga del RE [99]. Como Sec12 es un GEF
para Sar1, estos datos implican que la exportación de colágeno desde el ER
requiere altos niveles de Sar1 activado en la vecindad de los sitios de salida ER.

Sly1-syntaxin18
Nogueira et al. informó recientemente que Sly1 interactúa con el dominio
citoplásmico de TANGO1 en presencia de un agente de entrecruzamiento. Se
sabe que Sly1, una de las proteínas Sec1 / Munc18 (SM) implicadas en la
reacción de fusión de membrana, interactúa con proteínas de unión a proteínas de
fusión N-etilmaleimidasensibles a la sensibilidad específica de ER (t-SNAREs),
sintaxina17 y sintaxina18. Una caída de Sly1 o syntaxin18 bloquea
específicamente la secreción de colágeno VII, pero no el colágeno I u otras cargas
convencionales exportadas desde el ER. Recientemente, se informó un modelo de
transporte de colágeno VII que incorpora estos hallazgos, lo que sugiere que la
fusión de reciclaje de sly1-sintaxina18 membranas tales como el compartimento
intermedio ER-Golgi es responsable de agrandar el portador mediado por COPII,
en el que la formación se desencadenaría por la acción de cTAGE5 / TANGO1.
Cul3-KLHL12
Jin et al. recientemente informaron que la ubiquitilación de los componentes COPII
está involucrada en grandes secreciones de carga. Las células ES de ratón
agotadas con ubiquitina ligasa CUL3 forman grupos de células fuertemente
agrupadas, lo que sugiere la deposición aberrante de la matriz extracelular (ECM).
KLHL12 se aisló como un adaptador de CUL3, que se une y muestra un fenotipo
similar a CUL3 cuando se derriba en células ES. Curiosamente, CUL3-KLHL12
monoubiquitylates Sec31, y esta ubiquitilación promueve la formación de
estructuras recubiertas con COPII ampliada (200-500 nm de diámetro) donde
KLHL12 también está presente. Además, se requiere la formación de estas
estructuras COPII ampliadas para el colágeno I y IV transporte.
Sedlin
Sedlin, también conocido como TRAPPC2, es un componente del complejo
TRAnsport Protein Particle (TRAPP), que está involucrado en el anclaje de las
vesículas durante la RE a Golgi y el transporte dentro del Golgi. Sedlin ha sido
identificado como el gen mutado en la displasia espondiloepifisaria tardía, un
desorden esquelético ligado al cromosoma X caracterizado por una estatura
desproporcionadamente corta con un tronco corto y articulaciones degenerativas,
y los condrocitos de los pacientes muestran una alteración de la secreción de
moléculas de ECM. Venditti et al. recientemente mostró que Sedlin se localiza en
los sitios de salida ER mediante la interacción con TANGO1 y parece interactuar
directamente con la forma de Sar1 enlazada a GTP. La caída de Sedlin conduce a
la acumulación de una forma activada de Sar1 en los sitios de salida de la ER y
específicamente bloquea la secreción de colágeno I y II a partir de condrocitos y
fibroblastos. Los autores sugieren que Sedlin regula el ciclo Sar1 GTPasa para
controlar la salida de colágeno del ER.
Como se describió anteriormente, la secreción de colágeno del ER parece estar
regulada por factores especializados, que modificarían la función de las proteínas
COPII convencionales. Se propone un complejo receptor de carga cTAGE5 /
TANGO1 para regular el ciclo de Sar1 GTPasa interactuando con Sec12, además
de la unión a Sec23 / Sec24 para una posible competencia con Sec13 / Sec31;
CUL3-KLHL12 monoubiquitylates Sec31 para ampliar los portadores, y las
moléculas que participan en el anclaje y la fusión, Sedlin y Sly1-syntaxin18,
también participan en la secreción de proteínas grandes.
Secreción de quilomicrones
Los quilomicrones Sar1B sintetizados en el ER de enterocitos difieren en tamaño
en diferentes condiciones (75-450 nm), pero algunos se consideran más grandes
que las vesículas COPII convencionales. Enfermedad de retención de
quilomicrones (CMRD), enfermedad de Anderson y CMRD con el trastorno
neuromuscular El síndrome de Marinesco-Sjogren (MSS) son todos trastornos
hereditarios de malabsorción grave de grasa con transporte alterado de
quilomicrones y que se encuentran asociados con mutaciones en Sar1B. Las
mutaciones en estas enfermedades se encuentran principalmente en los bolsillos
de unión de nucleótidos de Sar1B, lo que indica la importancia del Sar1
GTPasecycle. El modelo de pez cebra de la deficiencia de Sar1B basada en la
eliminación de morfolino mostró un fenotipo similar, donde los lípidos de la dieta se
acumulan en enterocitos de peces mutantes [114]. Es de destacar que los peces
también presentan defectos en el cartílago craneofacial asociado con colágeno
anormal II secreción, aunque estos defectos no se ven normalmente con CMRD y
enfermedades relacionadas.
Curiosamente, Sar1B parece tener características únicas en comparación con la
función de Sar1A. Basado en el análisis bioquímico de un mutante CLSD, se ha
sugerido que Sar1B tiene una afinidad más débil que Sar1A hacia Sec13 / Sec31.
La interacción suelta de Sec13 / Sec31 con Sar1B puede facilitar la formación de
una capa externa más flexible que luego puede acomodar grandes cargas.

Análisis estructural de proteínas COPII que proporcionan información sobre el

ensamblaje de grandes transportadores de carga.

El análisis microscópico crioelectrónico de Sec23 / Sec24 y Sec13 / Sec31

purificados mostró que estos dos complejos pueden ensamblarse en la estructura
similar a una jaula desde un cuboctaedro con un diámetro de 60 nm a un
icosidodecaedro con un diámetro de 100 nm. Sin embargo, estas estructuras
aparentemente no son lo suficientemente grandes como para acomodar grandes
cargas como colágenos y quilomicrones. O'Donnell et al. recientemente informó
que Sec13 / Sec31 también podría formar túbulos con interiores cilíndricos huecos
de 330 nm de largo con un diámetro de 30 nm.
La formación de túbulos dependiente de COPII también se ha notificado en células
semi-intactas, que se trataron con una forma activada de Sar1 (Sar1 H79G).
Además, varios informes indican que los liposomas artificiales pueden ser
tubulados por incubación con Sar1 H79G o con Sar1 en presencia de análogos de
GTP no hidrolizables tales como GMPPNP y GTPcS. Estos datos implican que la
secreción de cargas grandes requiere grandes cantidades o Sar1 unido a GTP
estabilizado, lo que es consistente con la función propuesta de Sec12 en la
secreción de colágeno descrita anteriormente. Mediante el uso de la tomografía
crioelectrónica y el promediado del subtomograma, Zanetti et al. demostraron que
las vesículas unilaminares gigantes incubadas con Sec12, Sar1, Sec23 / Sec24,
Sec13 / Sec31 y GMP-PNP generan túbulos recubiertos con proteínas COPII. La
disposición de las capas interna y externa en estos túbulos está conectada
estructuralmente a, pero distinta de la de las vesículas de COPII convencionales
informadas previamente. Debe observarse que la arquitectura de ensamblaje de
estos túbulos es bastante diferente de los túbulos Sec13 / 31 ensamblados in vitro
descritos anteriormente.
Aunque aún no se ha demostrado, estos túbulos pueden estar involucrados en el
transporte de grandes cargas, y es interesante especular que la tubulación
depende de la monoubiquitilación Sec31. En este sentido, un estudio reciente de
S. cerevisiae mostró que la función de Sec13 en COPII la formación de vesículas
puede ser para rigidizar el complejo externo COPII para aumentar la capacidad de
doblar la membrana. Además, se ha informado que la fosforilación de Sec31 por la
caseína quinasa II reduce su afinidad por Sec23, aunque su implicación en la
secreción de grandes cantidades de carga sigue sin estar clara. Se espera que el
trabajo futuro revele si estas modificaciones de los componentes básicos de COPII
son (en parte) responsables de la formación de transportistas de cargas de gran
tamaño.
Perspectivas futuras
Estudios recientes sobre enfermedades humanas y modelos animales han
revelado que los componentes COPII son cruciales, no solo para la exportación de
carga convencional, sino también para la exportación de grandes proteínas y
complejos proteicos desde la sala de emergencias. Por otra parte, varios factores
específicamente involucrados en la secreción de grandes proteínas se han
identificado y se ha descubierto que modifican el proceso de formación de
vesículas dependientes de COPII para permitirles secretar a partir del ER. Sin
embargo, aún hay varios problemas
deben abordarse. Un problema importante que queda por resolver es la
identificación de los portadores responsables del transporte de grandes proteínas.
La existencia de megacarriers o túbulos, que podrían acomodar grandes cargas,
se ha propuesto como se describe en esta revisión, pero las entidades exactas y
los mecanismos para formar estos contenedores no se comprenden
completamente.
Un segundo problema es la relación entre los factores especializados
identificados. Se informa que el complejo cTAGE5 / TANGO1 y el eje sly1-
syntaxin18 son bastante específicos para el transporte de colágeno VII, pero no
para el colágeno I. Sin embargo, CUL3-KLHL12 y Sedlin han sido implicados en el
transporte de colágeno I. Ya sea que puedan cooperar para llevar a cabo la gran
exportación de carga o que individualmente apliquen distintos mecanismos
requiere una mayor investigación.
Aunque todavía hay asuntos por resolver, la identificación reciente de factores
especializados ciertamente nos ha proporcionado pistas para resolver estos
problemas.