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NARRO
UNIDAD LAGUNA
POR
TESIS
A la niña que siempre supo que quería ser en la vida. No traicioné tus
ideales.
i
AGRADECIMIENTOS
ii
ÍNDICE DE CONTENIDO
1 RESUMEN ........................................................................................................ vi
2 INTRODUCCIÓN .............................................................................................. 1
3 OBJETIVO ........................................................................................................ 1
4 JUSTIFICACIÓN ............................................................................................... 2
5 HIPÓTESIS....................................................................................................... 3
6 MARCO TEÓRICO ........................................................................................... 4
6.1 Composición de la sangre .......................................................................... 4
6.2 Hematopoyesis .......................................................................................... 4
6.2.1 Eritropoyesis ........................................................................................ 5
6.2.2 Leucopoyesis ....................................................................................... 6
6.2.3 Trombopoyesis .................................................................................... 7
6.2.4 Linfopoyesis ......................................................................................... 8
6.3 Componentes de la formula blanca .......................................................... 10
6.4 Funciones de la formula blanca ............................................................... 10
6.4.1 Neutrófilos ......................................................................................... 10
6.4.2 Monocitos .......................................................................................... 11
6.4.3 Eosinófilos ......................................................................................... 12
6.4.4 Basófilos ............................................................................................ 13
6.4.5 Linfocitos ........................................................................................... 13
6.4.6 Plaquetas ........................................................................................... 17
6.5 Morfología del neutrófilo en la especie canina ......................................... 18
6.6 Morfología del eosinófilo en la especie canina ......................................... 18
6.7 Morfología del basófilo en la especie canina ............................................ 19
6.8 Morfología del linfocito en la especie canina ............................................ 19
6.9 Morfologia del monocito en la especie canina .......................................... 20
6.10 Morfología de las plaquetas ..................................................................... 20
6.11 Factores que influyen en los valores circulantes (formula blanca) ........... 21
6.11.1 Factores fisiológicos .......................................................................... 21
6.11.2 Factores patológicos.......................................................................... 23
6.11.3 Respuestas individuales de los leucocitos: ........................................ 24
6.12 Componente celular de la formula roja..................................................... 31
6.13 Funciones del componente celular de la formula roja .............................. 31
6.14 Morfología del eritrocito en la especie canina .......................................... 32
6.15 Factores que influyen en los valores circulantes (formula roja)................ 33
iii
6.15.1 Eritrocitosis ........................................................................................ 33
6.15.2 Anemia .............................................................................................. 34
6.16 Biometría hemática .................................................................................. 40
7 VALORES DE REFERENCIA ......................................................................... 42
8 MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................... 43
9 RESULTADOS ............................................................................................... 50
10 DISCUSIÓN................................................................................................. 52
11 CONCLUSIÓN............................................................................................. 54
12 LITERATURA CITADA ................................................................................ 55
iv
ÍNDICE DE CUADROS Y FIGURAS
v
1 RESUMEN
La biometría hemática, también llamada hemograma, es uno de los
estudios de laboratorio que con más frecuencia se solicitan, representa una de las
piedras angulares de las evaluaciones de laboratorio clínico. La valoración
hematológica de pacientes caninos es una herramienta de vital importancia para el
médico veterinario de pequeños animales.
Los valores obtenidos (sin distinción de sexo) fueron comparados con los
parámetros de referencia ya descritos por la bibliografía. Posteriormente se realizó
una comparación estadística entre los valores obtenidos de machos y hembras
para determinar si existen diferencias estadísticamente significativas de los
valores hematológicos entre sexos.
vi
1
2 INTRODUCCIÓN
El hemograma es el examen de laboratorio de mayor uso diagnóstico en el
canino, por lo que se hace necesario disponer de valores referenciales adecuados
para poder interpretar correctamente los resultados y así obtener una conclusión
válida (Pedrozo et al., 2010).
3 OBJETIVO
El objetivo general del presente trabajo de investigación fue determinar los
valores hematológicos en caninos adultos aparentemente sanos en la región y
compararlos con los parámetros de referencia ya descritos por la bibliografía
(Núñez-Ochoa y Bouda, 2007), con la finalidad de determinar si existen diferencias
cuantitativas entre ellos, todo para concluir si se necesitan establecer cuadros de
referencia exclusivos de la región o se pueden utilizar los ya existentes.
4 JUSTIFICACIÓN
Las observaciones hematológicas de un grupo de animales son
tradicionalmente comparados con intervalos de referencia desarrollados de una
población correspondiente de animales, usando técnicas de laboratorio similares
(Pedrozo et al., 2010).
5 HIPÓTESIS
Los valores hematológicos de los caninos de la región se diferenciaran de
los valores de referencia ya establecidos en la literatura.
4
6 MARCO TEÓRICO
Eritrocitos
Neutrófilos
Eosinófilos
Basófilos
Linfocitos
Monocitos
Trombocitos (plaquetas)
6.2 Hematopoyesis
Las células de la sangre se dividen en dos grandes grupos: mieloides y
linfoides. Las primeras comprenden a los granulocitos (neutrófilos, basófilos y
eosinófilos), monocitos, eritrocitos y megacariocitos, mientras que las segundas
5
comprenden a los linfocitos B, linfocitos T y células NK. Las células mieloides son
producidas a través de un proceso conocido como mielopoyesis, mientras que las
linfoides son resultado de la linfopoyesis (Mayani et al., 2007).
Las células intermedias son muy parecidas a las PHSC pero ya están
comprometidas en una línea celular particular y reciben el nombre de células
precursoras comprometidas. La que produce eritrocitos se llama unidad formadora
de colonias de eritrocitos (CFU-E). Las unidades formadoras de colonias que
forman granulocitos y monocitos se llamaran (CFU-GM) y así sucesivamente
(Guyton y Hall, 2006; Mayani et al., 2007).
6.2.1 Eritropoyesis
La primera célula que se identifica como perteneciente a la línea
eritrocítica (fig.1) es el proeritroblasto, da paso a la célula de primera generación
que es el eritroblasto basófilo que hasta este momento ha acumulado muy poca
hemoglobina, las generaciones siguientes (eritroblasto policromatófilo, eritroblasto
ortocromático) se llenan de esta, el núcleo se condensa, lo que resta se expulsa o
se absorbe, se reabsorbe el retículo endoplásmico. La célula de este estadio se
llama reticulocito pues todavía tiene una pequeña cantidad de material basófilo. En
6
6.2.2 Leucopoyesis
Por su parte las unidades formadoras de colonias gránulo-monocíticas
(CFU-GM), dan lugar a unidades formadoras de colonias granulocíticas (CFU-G) y
unidades formadoras de colonias mielocíticas (CFU-M). Una vez encaminadas en
la vía de diferenciación las CFU-G dan lugar a mieloblastos, promielocitos,
mielocitos, metamielocitos y células maduras (basófilos, neutrófilos y eosinófilos).
Mientras que las CFU-M dan lugar a monoblastos, promonocitos, monocitos, y
finalmente macrófagos (Fig. 2) (Mayani et al., 2007).
7
CFU- GM
6.2.3 Trombopoyesis
Las plaquetas o trombocitos se originan a partir de la célula denominada
unidad formadora de colonias megacariocíticas (CFU-Me) (fig.3), esta célula
crece, multiplica su materia lnuclear y se transforma en el megacarioblasto en el
cual se genera una gran cantidad de citoplasma. La célula resultante del
crecimiento del megacarioblasto es el megacariocito las plaquetas se forman en el
citoplasma del megacariocito mediante la formación de una estructura que se
conoce como pro plaqueta la cual se fragmenta en múltiples plaquetas (Mayani et
al., 2007; Reagan, 1999).
8
(CFU-Me) MCB
Fig.3.Megacariocitopoyesis y producción de las plaquetas. Unidad
formadora de colonias megacariocíticas (CFU-Me), megacarioblasto (MCB),
megacariocito inmaduro (Meg-I), megacariocito maduro (Meg-M) y
plaquetas (Mayani et al., 2007).
6.2.4 Linfopoyesis
La linfopoyesis inicia con una célula unidad formadora de colonias
linfocitarias (UFC-L) ésta, mediante mitosis genera dos células: las unidades
formadoras de colonias linfocíticas tipo B (UFC-L y B) y las del tipo T (UFC-L y T).
Estas abandonan la médula para incorporarse a la circulación sanguínea. Para
adquirirla capacidad de generar respuesta inmunológica deben trasladarse
aciertos órganos donde proliferan e iniciar procesos de expresión de marcadores
membranales específicos (Guyton y Hall, 2006)
Las células asesinas naturales (NK por sus siglas en inglés) se originan en
las mismas células precursoras que los linfocitos B y T y constituyen una tercera
población de linfocitos (Pawlina y Ross, 2007).
10
6.4.1 Neutrófilos
Los neutrófilos son glóbulos blancos móviles y de acción quimiotáctica. La
función básica de los neutrófilos es la fagocitosis de pequeñas partículas, de lo
que se encarga sobre todo el neutrófilo segmentado maduro, aunque el
metamielocito y las formas de banda participan en la misma actividad (Coles,
1968).
Son sobre todo los neutrófilos y los macrófagos tisulares los que atacan y
destruyen a las bacterias virus y otros factores lesivos. Los neutrófilos son células
maduras que pueden atacar y destruir bacterias incluso en la sangre circulante,
por el contrario los macrófagos tisulares comienzan la vida como monocitos
sanguíneos que son células inmaduras mientras están en la sangre y tienen poca
capacidad para luchar contra microorganismos infecciosos en ese momento
(Guyton y Hall, 2006).
6.4.2 Monocitos
Los macrófagos son el producto final de los monocitos que entran en los
tejidos desde la sangre. Una vez que entran en los tejidos comienzan a aumentar
de tamaño (a veces hasta 5 veces), se vuelven macrófagos y son capaces de
combatir los microorganismos que están en el tejido (Guyton y Hall, 2006).
6.4.3 Eosinófilos
Los eosinófilos participan en la regulación de reacciones alérgicas,
inflamatorias, de control y de eliminación de infestaciones por parásitos,
principalmente aquellos que tienen fases migratorias (Núñez-Ochoa y Bouda,
2007).
6.4.4 Basófilos
Son los granulocitos menos numerosos, normalmente no se encuentran
fuera de la circulación sanguínea, pero pueden entrar a los tejidos bajo influencia
de ciertas quimioquinas producidas por linfocitos T (Tizard, 2009).
Los basófilos son similares a los mastocitos tisulares pues ambos contienen
una mezcla compleja de moléculas vasoactivas, desempeñan una reacción
destacada en algunos tipos de reacciones alérgicas, pues la inmunoglobulina E
(IgE) tiene una tendencia especial a unirse a los mastocitos y basófilos, después,
cuando el antígeno especifico del anticuerpo IgE especifico reacciona con el
anticuerpo, la unión resultante hace que el basófilo se rompa y libere cantidades
excesivas de bradicinina, serotonina, heparina, sustancia de reacción lenta de la
anafilaxia y varias enzimas lisosómicas. Estas desencadenan reacciones
vasculares locales y tienen manifestaciones alérgicas (Guyton y Hall, 2006; Tizard,
2009).
6.4.5 Linfocitos
Los linfocitos desempeñan un papel muy importante en la defensa del
organismo. Existen 3 tipos principales de linfocitos, las células NK que
desempeñan un papel importante en la inmunidad innata; los linfocitos T, que
regulan la inmunidad adquirida y que son responsables de la inmunidad de base
celular; y los linfocitos B , que son responsables de la producción de anticuerpos.
Dentro de estos 3 tipos celulares hay un gran número de subpoblaciones celulares
con diferentes características y funciones (Tizard, 2009)
14
Una vez que la respuesta inmune primaria finaliza, los linfocitos B y las
células plasmáticas son eliminadas por apoptosis, sin embargo algunos linfocitos
B sobreviven como células de memoria, que formaran una reserva de células
sensibles al antígeno que se requerirán en posteriores exposiciones (Tizard,
2009).
6.4.6 Plaquetas
Su función no inmune consiste en colaborar en la coagulación de la sangre,
su función inmune se centra en los fenómenos de inflamación: cuando existe daño
a las células endoteliales, las plaquetas se adhieren al tejido lesionado y se
agregan, liberando sustancias que incrementan la permeabilidad, y factores que
activan el complemento, con lo que logran atraer a leucocitos (Iáñez-Pareja,
1999).
- Reacciones anafilácticas.
- Insuficiencia adrenocortical.
- Leucemia eosinófila. Es una neoplasia mieloproliferativa en gatos
extraordinariamente infrecuente.
- Síndrome hipereosinofilico, es difícil diferenciar del anterior, se
considera cuando se han descartado otras causas.
- Miositis eosinófila.
- Esplecnotomía en el canino, 30 días posteriores a la cirugía.
- Inflamación granulomatosa causadas por hongos o cuerpos
extraños.
Sin embargo Coles (1968) menciona también las siguientes causas:
-Neoplasias de ovarios, serosas y huesos, además de mastocitomas
y menos frecuente los linfomas.
-Respuesta hipersensitiva a determinados parásitos y alérgenos que
tienen una destacada migración tisular o fase de contacto tisular.
Trombocitosis
-Esplenectomía en perros.
6.15.1 Eritrocitosis
Se define como el aumento del valor del hematocrito, la hemoglobina y los
eritrocitos por arriba de los límites estándar para la especie. Cuando hay un
incremento en la cantidad de eritrocitos en la sangre periférica debido a la
disminución del volumen plasmático pueden estar aumentados los volúmenes de
leucocitos y plaquetas, en ese caso se debe utilizar el término policitemia (Núñez-
Ochoa y Bouda, 2007).
6.15.2 Anemia
Significa deficiencia de hemoglobina en la sangre, lo que puede deberse a
muy pocos eritrocitos o muy poca hemoglobina en ellos (Guyton y Hall, 2006).
Clasificación de la anemia
Regenerativa No regenerativa
>80,000 reticulocitos <80,000 reticulocitos en perros
en perros
<60,000 reticulocitos en gatos
>60,000 reticulocitos
en gatos
Inmunomediadas (figura 5)
No inmunomediadas
Anemias no regenerativas:
-Con hipoplasia medular: este tipo de anemias son las más comunes en
perros y gatos. Incluidas en esta categoría están las anemias por enfermedad
inflamatoria o neoplásica, anemia por hipotiroidismo, anemia mieloptísica y las
anemias resultantes a la exposición de sustancias tóxicas a la medula ósea. La
Anemia aplásica pura esta también dentro de esta categoría (Rebar y Metzger,
2001). La última se debe a una respuesta insuficiente de la medula ósea que
causa pancitopenia con índices eritrocitarios secundarios normales y escases de
reticulocitos (Almaguer, 2003). Puede ser provocada por radiación, fármacos y
sustancias químicas industriales (Guyton y Hall, 2006).
7 VALORES DE REFERENCIA
Los valores de referencia mostrados en el cuadro 1, corresponden a
(Núñez-Ochoa y Bouda, 2007). Fueron elegidos por ser valores de referencia
provenientes de una fuente reconocida, creíble y reciente, además de ser
consistentes con otros valores de referencia ya establecidos en fuentes
extranjeras (Cowell et al., 2009).
8 MATERIALES Y MÉTODOS
Las muestras se obtuvieron de un total de 105 caninos, 46 hembras y 59
machos de raza pura y mestizos, los cuales se eligieron por la oportunidad de
obtención de cantidad de muestra requerida y por resultar sanos al examen físico.
A los propietarios les fueron requeridos los siguientes datos: nombre de la
mascota, edad, sexo, raza así como vacunas y desparasitaciones, datos que no
se especifican en el presente estudio pues solo se tomaron con motivos de
identificación.
- Conteo de eritrocitos
1. Se ensambla el equipo, uniendo la boquilla al tubo de hule y este a la
pipeta de Thoma para eritrocitos (roja).
2. Mezclar la sangre.
3. Aspirar la sangre con la pipeta hasta la marca de 0.5 (para dilución
1:200) usando una suave succión.
4. Se debe limpiar la sangre del exterior de la pipeta con un trozo de papel
filtro. Si se rebasa la marca se debe ajustar eliminando el exceso de sangre con
un papel filtro o un algodón, aun así pueden quedar adheridas células a la pipeta y
la cuenta podría resultar más alta.
5. Después se aspira la solución salina, con una succión uniforme hasta la
línea de 101 por encima del bulbo y se debe girar suavemente mientras se llena.
6. La pipeta se retira del diluyente de forma horizontal y se tapan los
orificios con los dedos, toda la sangre debe estar en el bulbo.
7. La pipeta debe agitarse por 2 o 3 ocasiones en un agitador mecánico.
8. La cámara de Neubauer y el cubreobjetos deberán limpiarse
cuidadosamente quitando la pelusa y grasa.
9. Se coloca el cubreobjetos especial con los extremos más largos paralelos
y sobre los bordes de apoyo de la cámara, manejándolo solo de los extremos más
largos paralelos y sobre los bordes de apoyo de la cámara, manejándola solo de
los extremos largos.
10. Inmediatamente después de agitada la pipeta se desechan 3 gotas y se
limpia la punta de la pipeta con un algodón.
11. Con la punta de la pipeta se toca el espacio entre el cubreobjetos y la
cámara dejando fluir el líquido por capilaridad, sin que se derrame por los bordes,
y se retira la pipeta.
12. Si se derrama hay que repetir este paso, previamente limpiando la
cámara.
46
13. Se esperan 3 minutos para que sedimenten las células, pasado ese
tiempo inicia la evaporación.
14. Con el objetivo de 10x del microscopio se localiza el cuadro central de
los 9 cuadros grandes y una distribución homogénea de las células (fig.6).
15. Con el objetivo de 40x se deben contar los eritrocitos en 5 de los 25
cuadros pequeños del área central.
16. Cada uno de los 5 cuadros está limitado por líneas dobles y triples y se
dividen en 16 más pequeños. Se cuenta iniciando a la izquierda de la fila superior
de los cuatro cuadros pequeños, luego de derecha a izquierda en la siguiente fila y
así sucesivamente. En la línea triple: no se cuentan las células que toquen las
líneas internas superior e izquierda. En la línea doble: no se cuentan las que
toquen las líneas interna inferior y derecha y si se cuentan las que toquen las
líneas externas superior e izquierda.
Cálculo
•Eritrocitos/Litro=Células contadas /100 (0.1mm de profundidad) X 5 (1/5 de
mm cuadrado) X 200 (dilución de 1:200)
47
Cálculo
•Leucocitos totales /x10 9 /L = Células contadas x 0.05.
•Lo que es igual a 50 por la suma de las células contadas en los 4
cuadrados= Leucocitos totales / microlitro.
- Recuento diferencial
1. Hacer una extensión de sangre bien mezclada con sangre con
anticoagulante EDTA o capilar con el método de atraer y arrastrar (figura 2).
Seque rápidamente al aire o en una corriente de aire tibio.
48
Examen microscópico
•En 10x examinar calidad global del frotis, color y distribución de células, la
formación de rodillos por los eritrocitos o la aglutinación de los mismos, debe
revisarse con rapidez en busca de cualquier célula anormal grande o incluso
parásitos inesperados.
49
•En 40x se selecciona la zona correcta del extendido donde se debe iniciar
el recuento y evaluar la morfología celular. Para ello se selecciona el área en la
que los eritrocitos estén superpuestos de 2 a 3 pero que la mayoría estén
separados entre sí.
En 100x se coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca con este
objetivo, se cuentan y clasifican 100 leucocitos y se informan como porcentajes de
leucocitos (valores relativos). La morfología de eritrocitos y plaquetas así como la
estimación de estas últimas se hacen también con este.
La observación del frotis debe hacerse en forma de almena para lograr que
la observación sea representativa.
•Es importante incluir los bordes laterales para incluir las células más
grandes como monocitos, linfocitos reactivos y células inmaduras.
9 RESULTADOS
En el cuadro 2 se presentan los resultados de los valores hematológicos obtenidos
en el presente trabajo:
DE DE
Variable Machos Hembras
± ±
Hematocrito 46.9 a 6.5 48.3 a 5.3
Eritrocitos 6.8 a 1.7 7.0 a 1.2
Hemoglobina 15.6 a 2.2 16.1 a 1.8
VGM 71.5 a 13.1 70.3 a 10.8
HGM 23.8 a 4.4 23.4 a 3.6
CMHG 33.3 a 0.0 33.3 a 0.0
Glóbulos blancos: 9.8 a 3.8 9.7 a 4.1
Neutrófilos %: 62.5 a 13.0 60.8 a 13.0
Neutrófilos abs: 6.1 a 2.8 6.0 a 3.0
Linfocitos %: 30.5 a 12.2 33.4 a 13.7
Linfocitos abs: 3.0 a 1.4 3.2 a 1.5
Monocitos %: 3.7 a 3.1 3.0 a 2.6
Monocitos abs: 0.3 a 0.3 0.3 a 0.2
Eosinófilos %: 2.7 a 5.3 1.9 a 2.8
Eosinófilos abs: 0.2 a 0.5 0.2 a 0.5
Basófilos %: 0.7 a 1.3 0.6 a 1.6
Basófilos abs: 0.1 a 0.1 0.1 a 0.2
Literales iguales indican P >0.05.
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10 DISCUSIÓN
El promedio de la mayoría de los valores hematológicos obtenidos están
dentro del rango de normalidad de los valores de referencia de Nuñez Ochoa y
Bouda (2007), excepto el de leucocitos relativos que fue 1.7% mayor al límite
superior de los valores de referencia que son de 12-30%.
11 CONCLUSIÓN
Los valores hematológicos obtenidos en este estudio guardan una estrecha
relación con los ya establecidos por otras fuentes, por lo que no se considera
necesario el establecimiento de valores de referencia propios de la región, se
podrían seguir utilizando los valores hematológicos de referencia ya establecidos.
12 LITERATURA CITADA
Almaguer, C. 2003. Interpretación clínica de la biometría hemática Medicina
Universitaria 5(18): 35.
Kovalkovičová, N., I. Šutiaková, J. Pistl y V. Šutiak. 2009. Some food toxic for pets.
Interdisciplinary toxicology 2(3): 169-176.
Pawlina, W. y M. Ross. 2007. Histología: Texto y Atlas color con Biología Celular y
molecular. 5ta ed. ed. Ed. Médica Panamericana. , Buenos Aires. pp.