PRACTICA # 1: EXTRACCION DE ADN Y VISUALIZACION DEL ADN

ORDOÑEZ BEDOYA, Isabella; BEDOYA ARENAS, Laura Alejandra;

RAMIREZ LASSO, Henderson

LABORATORIO DE BIOQUIMICA, PROGRAMA DE IBQ, FACULTAD DE CIENCIA NATURALES,

UNIVERSIDAD ICESI

SANTIAGO DE CALI, FEBRERO 05 DE 2018

1- RESULTADOS
1- ) GRAFICA DE RESULTADOS

ABSORBANCIA
0.04

0.03

0.02

0.01
VALORES DE ABSORBANCIA

-0.01

-0.02

-0.03

-0.04

-0.05

-0.06

-0.07
230 260 280
ABSORBANCIA -0.057 0.012 0.027
2- ) TABLA DE RESULTADOS

230 260 280

CARBOHIDRATOS -0,057 - -

PROTEINAS - - 0,027

ADN - 0,012 -

1- ) En la gráfica de la tabla se muestran los resultados que se obtuvieron a partir de la muestra de

mucosa oral en el espectrómetro y a partir de estos valores se realizaron las correlaciones entre
las longitudes de onda y los valores de absorbancia.

CORRELACION #1

260 0,012
= = 0,44 R/ Si hay contaminación de proteínas.
280 0,027

CORRELACION # 2

260 0,012
= = -0,21 R/ Si hay contaminación de carbohidratos
230 −0,057

CALCULOS DE LAS CONCENTRACIONES DE ADN EN LA MUESTRA

1) 260:0,012 × 50 = 0,6 × 10 = 6 𝑢𝑔/𝑢𝐿

2) 280: 0,027 × 50 = 1,35 × 10 = 13,5 𝑢𝑔/𝑢𝐿
3) 230:−0,057 × 50 = −2,85 × 10 = −28,5 𝑢𝑔/𝑢𝐿
2- ANALISIS DE RESULTADOS

R/ De acuerdo con lo que se realizó durante la práctica se pudo determinar que la

concentración de ADN que se tomó a partir de la mucosa oral fue muy baja, debido a que
la muestra se encontraba contaminada con una cantidad alta de proteínas y carbohidratos,
puesto que el etanol frio al 95% el cual purificaba la muestra no tuvo un gran efecto en
esta.

Uno de los errores que se pudieron cometer durante la práctica fue que al momento de
extraer el ADN de la solución contenida en el tubo falcón 50mL ya que se desechó una
parte significativa de la hebra del ADN y lo que en realidad se adiciono al tubo eppendorf
de 1,5mL fueron residuos tanto de la hebra de ADN como de los demás reactivos, por lo
tanto al analizar esta muestra con el espectrómetro lo resultados de absorbancia fueron
demasiado bajos entre el rango que se había propuesto.

Finalmente se examinó que la concentración de muestra que se tenía planteada que era
de ½ esto significa, que se adiciona 0,1𝑚𝑡𝑎 + 0,9𝑑𝑙𝑛 = 1𝑚𝐿 no era la adecuada ya que los
resultados que obtuvieron algunos compañeros con esta muestra fueron demasiados altos,
por lo tanto se optó por cambiar la concentración de la muestra a 1⁄10 es decir, que se
adiciona 1𝑚𝑡𝑎 + 9𝑑𝑙𝑛 = 10𝑚𝐿. Sin embargo, la muestra que es objeto de estudio en este
informe obtuvo unos resultados demasiados bajos referentes a la última concentración
planteada por tal motivo se presume que la concentración correcta para la muestra debió
ser de ½, aunque hay que tener en cuenta que como ya se había dicho anteriormente a la
hora de extraer el ADN de la solución, gran parte de esta fue desechada al contenedor de
residuos.

3- CONCLUSIONES

 Tras realizar la práctica se puede concluir que la mucosa bucal es una buena opción como
muestra para la extracción de ADN ya que con 2,5mL se obtuvo una buena cantidad de
material genético que podía ser visible a simple vista y también facilitaba la manipulación
de este ya que había que separarlo de los residuos para así poder hacerle el análisis en el
espectrómetro. Si se utilizara por ejemplo un cabello sería más complejo la extracción de
ADN y el procedimiento a utilizar sería más complejo y por ende costoso.
 A medida que se iban realizando los pasos para la extracción del DNA se pudo observar o
mejor, se pudo comprender cuales eran las funciones de los reactivos utilizados en este
procedimiento. El SDS es un compuesto tensoactivo que se utiliza en la fabricación de
detergente y su uso bioquímico, para el rompimiento de la membrana celular y por
consiguiente la nuclear, permitiendo así que el ADN se liberara. El NaCl también ayuda a el
rompimiento de la membrana nuclear, pero con un poco más de cuidado y también a que
se precipiten los polisacáridos. Por último, el etanol al 96% se utilizó para obtener una
mayor concentración y pureza del ADN, pero al revisar los resultados se observó que aun
así había restos de proteínas y carbohidratos.

 Al revisar los datos arrojados por el espectrómetro se evidencia que los valores fueron
muy bajos, lo que nos lleva a pensar que en el procedimiento ocurrió algún tipo de error, y
sí, este paso cuando se estaba extrayendo el ADN de la solución contenida en el tubo
eppendorf, ya que cuando se procedió a vaciar al recipiente de residuos, el material
genético cayo junto con la solución de SDS, NaCl, etanol y demás material celular, por
ende, fue muy mínima la muestra de ADN obtenida.

 Ya que este procedimiento es para extraer ácidos nucleicos, los más probables es que no
solo fue ADN lo que se obtuvo, sino también ARN.

 Por último, como la muestra para la extracción del ADN fue mucosa bucal, no se esperaría
obtener solamente ADN de la persona que dono esta saliva, sino que también de las
bacterias que se encuentran en su boca.