Artikel

Intermediasi Siklus Krebs Melindungi terhadap

Stres Oksidatif dengan Modulasi Tingkat Reaktif
Spesies Oksigen pada Sel HT22 Neuronal
Kenta Sawa 1, Takumi Uematsu 1, Yusuke Korenaga 1, Ryuya Hirasawa 1, Masatoshi Kikuchi
1,
Kyohei Murata 1, Jian Zhang 1, Xiaoqing Gai 1, Kazuichi Sakamoto 2, Tomoyuki Koyama 3
dan
Takumi Satoh 1, *
1 Departemen Riset Makanan Anti Penuaan, Sekolah Biosains dan Bioteknologi, Universitas
Tokyo
Teknologi, 1404-1 Katakura, Hachioji 192-0982, Jepang; b01131253c@edu.teu.ac.jp (K.S.);
b01130437a@edu.teu.ac.jp (T.U.); b0113111b5@edu.teu.ac.jp (Y..); b01132115c@edu.teu.ac.jp
(R.H.);
b01130888d@edu.teu.ac.jp (M.K.); b0113245f8@edu.teu.ac.jp (K.M.);
1099813793zj@gmail.com (J.Z.);
g11160462a@edu.teu.ac.jp (X.G.)
2 Sekolah Pascasarjana Ilmu Kehidupan dan Lingkungan, Universitas Tsukuba, 1-1-1
Tennoudai, Tsukuba,
Ibaraki 305-8572, Jepang; sakamoto@biol.tsukuba.ac.jp
3 Laboratorium Nutraceuticals dan Makanan Fungsional Ilmu Pengetahuan, Sekolah
Pascasarjana Ilmu Kelautan dan
Teknologi, Universitas Ilmu Pengetahuan dan Teknologi Kelautan Tokyo, 4-5-7 Konan, Tokyo
108-8477, Jepang;
tskoyama@kaiyodai.ac.jp
* Korespondensi: satotkm@stf.teu.ac.jp; Tel .: + 81-42-637-2485; Faks: + 81-42-637-6314
Editor Akademik: Debasis Mondal
Diterima: 18 Januari 2017; Diterima: 24 Februari 2017; Diterbitkan: 16 Maret 2017
Abstrak: Intermediasi siklus Krebs (KCIs) dilaporkan berfungsi sebagai substrat energi di
Indonesia mitokondria dan efek antioksidan pada otak. Penelitian ini dirancang untuk
mengidentifikasi KCI yang merupakan senyawa neuroprotektif yang efektif melawan stres
oksidatif pada neuronal sel. Di sini kita menemukan bahwa piruvat, oksaloasetat, dan? -
ketoglutarat, tapi tidak laktat, sitrat,iso-sitrat, suksinat, fumarat, atau malat, sel HT22 yang
dilindungi terhadap hidrogen peroksida yang dimediasi toksisitas Ketiga zat antara ini
mengurangi produksi hidrogen peroksida yang diaktifkan reaktif spesies oksigen, diukur dalam
istilah 20,70-dichlorofluorescein diacetate fluorescence. Sebaliknya, tidak satu pun dari KCI
yang digunakan pada 1 mM yang dilindungi terhadap kematian sel yang disebabkan oleh
konsentrasi tinggi glutamat - jenis lain dari kematian sel neuronal yang diinduksi stres oksidatif.
Karena protektif ini KCI tidak memiliki efek toksik (setidaknya sampai 10 mM), mereka
memiliki potensi penggunaan terapeutik intervensi terhadap penyakit neurodegeneratif kronis.
Kata kunci: asam oksaloasetat; asam alfa-ketoglutarat; asam piruvat; spesies oksigen reaktif;
neuron
1. Perkenalan
Siklus Krebs adalah serangkaian reaksi enzimatik yang mengkatalisis metabolisme bahan
bakar aerobik molekul karbon dioksida dan air, sehingga menghasilkan energi untuk produksi
adenosin molekul trifosfat. Banyak jenis molekul bahan bakar dapat ditarik ke dalam dan
dimanfaatkan oleh siklus, termasuk asetil koenzim A, yang berasal dari glikolisis atau oksidasi
asam lemak. Pada sel eukariotik, paling banyak dari enzim yang mengkatalisis reaksi siklus
Krebs ditemukan dalam matriks mitokondria [1]. Senyawa yang terlibat dalam siklus siklus
pereda siklus Krebs (KCIs) disebut energi donor dan prekursor untuk sintesis asam amino, lipid,
dan karbohidrat [2]. Metabolisme aerobik ini bisa mencakup setiap aspek biologi dan
kedokteran, karena banyak makalah yang diterbitkan dalam 10 tahun terakhir menunjukkan
bahwa KCI mengatur proses epigenetik dan seluler sinyal, mungkin melalui pengikatan protein
[3]. KCI mengaktifkan jalur transduksi sinyal tertentu dan melakukan berbagai tindakan biologis,
seperti neuroprotection, anti-inflammation, osteogenesis, dan anti penuaan [3]. Misalnya,
suplementasi eksternal dengan piruvat (PA), oksaloasetat (OAA), α-ketoglutarat (AKG), asam
malat (MA) atau fumarat (FA), tapi bukan asam laktat (LA), suksinat (SA), sitrat (CA) atau iso-
sitrat (ICA) secara signifikan memperpanjang umur elegans Caenorhabditis dengan
mengaktifkan berbagai transcriptional factor (s) -dependent transcriptional pathways [4-6].
Meski fragmental informasi tentang peran fisiologis KCI di otak tersedia, KCI juga diusulkan
sebagai menjadi agen kardioprotektif terhadap infark miokard [7]. FA dan AKG telah diajukan
untuk melindungi otot jantung mungkin melalui pengaktifan atau penghambatan faktor
transkripsi tertentu, seperti faktor terkait NF-E2 2 (NRF2) dan faktor induksi hipoksia (HIF-1).
Dalam neuron, PA mencegah hidrogen peroksida (H2O2) -induced sel kematian [8,9],
melindungi otak dari percobaan stroke melalui mekanisme anti-inflamasi [10], dan mencegah
defisit kognitif yang bergantung pada usia terlihat pada model tikus penyakit Alzheimer [11].
Perlindungan ini mungkin disebabkan oleh α –ketoacid struktur, yang bisa langsung bereaksi
dengan H2O2 [8,9]. H2O2 adalah spesies oksigen reaktif yang stabil, tidak bermuatan, dan bebas
diffusible (ROS) dengan dugaan peran utusan kedua dalam mekanisme pensinyalan intraseluler
dan ekstraselular [12]. Generasi H2O2 relatif tinggi di otak, sebagian karena tingginya aktivitas
konsumsi oksigen dan sebagian karena tingginya tingkat ekspresi oksida monoamina di jaringan
ini [13]. Secara patologis kondisi seperti iskemik-reperfusi dan penyakit Alzheimer, berbagai
jenis sel dapat diproduksi sejumlah besar H2O2 [13]. Selain pertahanan enzimatik terutama
dimediasi oleh berbagai enzim (yaitu, peroksidase glutathione (GSH), katalase, dan
peroksanoksin), mekanisme non-enzimatik dapat
juga berkontribusi terhadap pertahanan seluler terhadap sitotoksisitas akibat H2O2 [13].
Misalnya, PA itu melimpah di sel mamalia dan memiliki sifat non-enzimatik bereaksi dengan
H2O2 [8,9]. PA melindungi neuron terhadap H2O2 eksogen dan endogen, dan juga menghambat
kematian sel dimediasi oleh H2O2 di neuron [8] dan sel non-neuronal [9]. Namun, apakah KCI
selain PA,OAA, dan AKG benar-benar mendapatkan neuroproteksi melalui interaksi langsung
sederhana dengan H2O2 eksogen di lokasi ekstraselular belum sepenuhnya diklarifikasi.
Dalam penelitian ini, kami memeriksa efek neuroprotektif KCI terhadap dua jenis stres oksidatif
pada sel HT22 neuron dan menemukan bahwa hanya tiga di antaranya (PA, OAA, dan AKG) -
yang mana memiliki struktur asam urat-memiliki efek neuroprotektif yang signifikan dengan
memodulasi tingkat ROS di dalam sel. Kami menemukan bahwa KCI lainnya tidak protektif,
menunjukkan bahwa neuroprotektif ini KCI-yang digunakan sendiri atau sebagai koktail-bisa
menjadi suplemen makanan potensial untuk tujuan mencegahnya neurodegenerasi kronis
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan kimia
Semua KCI (garam natrium), natrium glutamat (Glu), hidrogen peroksida (H2O2), dan
3- (4,5-dimetilthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromida (MTT) dibeli dari Wako
Junyaku (Tokyo, Jepang). Larutan stok KCI (100 atau 1000 mM) disiapkan dalam Ca2 +, Mg2 +
-free garam penyimpan fosfat (PBS (-), Invitrogen, Carlsbad, CA, AS). 20,70-
Dichlorodihydrofluorescin diacetate (DCFH-DA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) larutan
stok disiapkan dalam 10 mM larutan dimetil sulfoksida dan digunakan pada suhu 10 ° C dalam
medium kultur.
2.2. HT22 Budaya dan MTT Assay
Sel hippocampal neuron HT22 dikultur seperti yang dijelaskan sebelumnya [14-16].
Dalam sel HT22, konsentrasi tinggi (tingkat mM) Glu dapat menyebabkan kematian sel dengan
menipiskan GSH intraselular penghambatan masuknya sistein, dan konsentrasi yang relatif
rendah (tingkat M) H2O2 dapat menginduksi sel kematian. Karena sel HT22 tidak memiliki
protein reseptor NMDA fungsional, mereka tidak mati akibatnya eksitotoksisitas [14-16]. Sel-sel
ini dijaga dalam piring 10 cm (Invitrogen, Carlsbad, CA, AS) mengandung 10 mL media Eagle
Modifikasi Dulbecco ditambah dengan 10% (v / v) panas-tidak aktif (56 ˚C, 30 menit) serum
betis janin (Invitrogen). Sel-sel itu diunggulkan ke piring 24-sumur pada kerapatan dari 4 x 104
sel / cm2. Saat memeriksa efeknya pada toksisitas H2O2, kami menambahkan KCI ke budaya
setelah inkubasi 24 jam. Enam puluh menit kemudian, 100, 200, atau 500? M H2O2
ditambahkan, dan Sel kemudian diinkubasi selama 24 jam tambahan. Kami menetapkan waktu
pra-inkubasi diferensial 24 jam dan 1 jam untuk toksisitas Glu dan H2O2. Ini untuk
menstabilkan respons terhadap H2O2, dan juga karena toksisitas Glu benar-benar terhambat oleh
preinkubasi yang lama (lebih dari 5 jam) oleh yang tidak diketahui mekanisme [14-16]. Bila efek
KCI pada toksisitas Glu oksidatif diperiksa, sel-selnya diinkubasi selama 1 jam setelah di-seeded
di sumur piring 24-sumur, dan KCI kemudian ditambahkan ke budaya. Enam puluh menit
kemudian, 5, 10, atau 20 mM Glu ditambahkan, dan sel-sel itu kemudian diinkubasi tambahan 24
jam. Untuk mengevaluasi kelangsungan hidup sel HT22, kami melakukan uji MTT [14-16].
2.3. DCF Assay
Tingkat stres oksidatif seluler dinilai dengan memantau pembentukan radikal bebas
spesies dengan menggunakan DCFH-DA, seperti yang dijelaskan di tempat lain [17]. Sel disepuh
24 jam sebelum inisiasi percobaan pada kepadatan 40.000 sel / sumur di piring 24-sumur. KCIs
dan 10? M DCFH-DA adalah ditambahkan ke sel 30 menit sebelum pengukuran. Pelat itu disetel
ke Spark10M (Tecan Japan, Tokyo, Jepang) di bawah atmosfir CO2 5% dan suhu 37 ° C. H2O2
(200? M) atau kendaraan ditambahkan ke sumur pada 30 menit, dan sel-sel diinkubasi lebih
lanjut selama 180 menit. Fluoresensi DCF adalah diukur pada panjang gelombang eksitasi 485-
nm dan panjang gelombang emisi 538 nm pada interval 10 menit. Nilai fluoresensi dinyatakan
sebagai persentase dari nilai kontrol yang tidak diobati.
2.4. Analisis statistik
Percobaan yang disajikan di sini diulang setidaknya tiga kali, dengan setiap percobaan
dilakukan
dlm rangkap empat. Data disajikan sebagai mean ± SD. Signifikansi statistik perbedaan
diperiksa dengan melakukan tes t Student.

3. Hasil
3.1. Efek Neuroprotektif PA, OAA, dan AKG pada Sel HT22
Kami menggunakan sel HT22 - sel neuronal yang berasal dari hippocampus mouse -
sebagai model untuk kerusakan sel oksidatif. Pengobatan sel dengan 100, 200, atau 500? M
H2O2 (Gambar 1A) atau dengan 5, 10, atau 20 mM Glu (Gambar 1B) menyebabkan kematian
sel oleh stres oksidatif dalam waktu 24 jam. Pra (1 h) - perawatan dari sel dengan KCI pada
1mM melindungi sel dari efek toksik H2O2 (Gambar 1A), sedangkan ini KCI tidak - atau sangat
sedikit jika mereka - melindungi terhadap toksisitas Glu (Gambar 1B). KCI ini tidak beracun
untuk sel HT22 sampai 10 mM, namun menyebabkan reduksi kecil namun signifikan dalam sel
kelangsungan hidup saat digunakan pada 20-50 mM (Gambar 2). Hasil ini menunjukkan bahwa
PA, OAA, dan AKG bisa melindungi sel neuronal melawan H2O2, tapi tidak melawan Glu.
3.2. Peraturan ROS oleh PA, OAA, dan AKG
Karena efek neuroprotektif KCI mungkin disebabkan oleh struktur kimiawi α–keto Asam
dengan interaksi langsung dengan H2O2 di dalam sel, selanjutnya kita periksa apakah KCI bisa
mengurangi tingkat ROS pada sel HT22 (Gambar 3). Kami menghitung tingkat ROS dengan
ROS-sensitive indikator neon DCFH-DA dengan menggunakan perangkat Spark 10M (Tecan
Japan, Tokyo, Jepang). Berbasis Pada aktivitas fluoresensi, H2O2 (200? M) meningkatkan kadar
ROS sebesar 20-40 kali lipat. Tingkat ROS plateaued pada 45-60 menit eksposur. PA (Gambar
3A) atau OAA (Gambar 3B) pada 1, 2, atau 10 mM, dan 2 atau 10 mM AKG (Gambar 3C)
secara signifikan menurunkan pembentukan ROS intraselular; 1 mM AKG tidak mengurangi
tingkat ROS. Hasil ini menunjukkan bahwa KCI yang digunakan pada tingkat mM rendah secara
efektif mengurangi Tingkat ROS pada sel saraf.

Gambar 1. Perlindungan HT22 melawan (A) H2O2 dan (B) Glu oleh piruvat (PA), oksaloasetat
(OAA), dan α -ketoglutarat (AKG). (A) Efek pelindung 1mM PA, OAA, atau AKG terhadap
berbagai konsentrasi dari H2O2. (B) Tidak ada efek perlindungan dari 1 mM PA, OAA, atau
AKG terhadap konsentrasi tinggi Glu ditemukan. Bilah putih menunjukkan H2O2 atau Glu
sendiri; dan bar abu-abu H2O2 + KCI (PA, OAA, atau AKG). Nilai, disajikan sebagai persentase
dari kontrol MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromida) (diperoleh
dengan tidak adanya glutamat), diberikan sebagai meannya? SD (n = 4). * secara signifikan
berbeda (p <0,05) dari sampel tanpa KCI. KCI: siklus Krebs intermediate.
Gambar 2. Efek toksik KCIs sendiri. PA, OAA, AKG, suksinat (SA), asam laktat (LA), fumarat
(FA), dan asam malat (MA) tidak mengurangi kelangsungan hidup sel hingga 10 mM, sedangkan
sitrat (CA) dan iso-sitrat (ICA) menurunkannya bila digunakan pada konsentrasi sekitar 5-10
mM. Nilai, disajikan sebagai persentase dari nilai MTT kontrol (diperoleh dengan tidak adanya
glutamat), diberikan sebagai mean? SD (n = 4). * Berbeda nyata (p <0,05) dari sampel tanpa
KCI.
Gambar 3. Modulasi tingkat spesies oksigen reaktif (ROS) oleh (A) PA, (B) OAA, atau (C) AKG
melawan Sitotoksisitas yang diinduksi H2O2. Pengukuran sel yang sarat dengan 10 μM DCFH-
DA (2 ', 7'-Dichlorodihydrofluorescin diacetate) selama 30 menit dimulai pada 0 menit, dan
tingkat fluoresensi DCF ditunjukkan pada interval 10 menit. Berbagai konsentrasi (1, 2, dan 10
mM) PA, OAA, atau AKG adalah ditambahkan ke budaya bersamaan dengan penambahan
DCFH-DA. H2O2 (200 μM) ditambahkan pada 30 menit. Nilai adalah mean ± SD dari empat
percobaan per kelompok. Berlian, kontrol; lingkaran, H2O2; kuadrat, H2O2 + KCI. Perhatikan
bahwa kelompok KCI saja tidak ditunjukkan dalam grafik ini, karena KCIs mereka sendiri tidak
mempengaruhi tingkat ROS pada tim manapun.
3.3. Tidak ada Efek Pelindung oleh LA, CA, ICA, SA, FA, dan MA terhadap H2O2
Selanjutnya, kami menilai apakah LA, CA, ICA, SA, FA, dan MA dapat melindungi sel
HT22 melawan H2O2, dan menemukan bahwa zat antara ini tidak - atau sangat sedikit jika
mereka - protektif terhadapnya H2O2 (100, 200, dan 500? M) -mediated sitotoksisitas (Gambar
4). Lalu, kami memeriksa apakah ini KCIs dapat melindungi sel dari toksisitas Glu. Selain itu,
kecuali SA terhadap 5 mM Glu, ini KCI (pada 1 mM) tidak menunjukkan perlindungan terhadap
konsentrasi tinggi (5, 10, dan 20 mM) Glu (Gambar 5). Hasil ini menunjukkan bahwa LA, CA,
ICA, SA, FA, dan MA tidak dapat melindungi sel HT22 melawan oksidatif menekankan. LA,
SA, FA, dan MA tidak beracun bagi sel hingga 10 mM. Dengan beberapa mekanisme yang tidak
diketahui, CA dan ICA memberi efek toksik saat diuji sekitar 5-10 mM (Gambar 2). Konsentrasi
tinggi FA memiliki tindakan yang luar biasa pada sel, karena 10 mM FA memberikan
perlindungan signifikan terhadap tinggi konsentrasi Glu (Gambar 5) .

.Gambar 4. Tidak ada perlindungan sel HT22 terhadap H2O2 oleh KCI lain pada 1 mM. Baik
LA, CA, ICA, SA, FA, MA juga tidak melindungi sel dari sitotoksisitas yang dimediasi H2O2.
Batang putih hanya H2O2; dan bar abu-abu adalah H2O2 + KCI. Nilai, disajikan sebagai
persentase dari nilai MTT kontrol (diperoleh pada tidak adanya glutamat), diberikan sebagai
mean ± SD (n = 4). * berbeda secara signifikan (p <0,05) dari sampel tanpa KCI.

Gambar 5. Tidak ada perlindungan sel HT22 terhadap Glu oleh KCI lain pada 1 mM. Baik LA,
CA, ICA, SA, MA juga tidak melindungi sel melawan Glu yang digunakan pada 1 atau 10 mM.
FA pada 10 mM melindungi sel melawan Glu, meski 1 mM FA tidak. Bilah putih menunjukkan
Glu sendiri, dan bar abu-abu Glu + KCI. Nilai, disajikan sebagai persentase dari nilai MTT
kontrol (diperoleh dengan tidak adanya glutamat), diberikan sebagai mean + SD (n = 4). *
Berbeda nyata (p <0,05) dari sampel tanpa KCI.
4. Diskusi
Di sini, kami menemukan bahwa gugus asam-keto yang mengandung KCI (PA, OAA,
dan AKG) dapat melindungi neuron terhadap H2O2, mungkin melalui interaksi langsung dengan
H2O2, walaupun kita tidak menyediakannya Bukti langsung untuk reaksi kimia ini sendiri.
Karena DCFH-DA dihidrolisis oleh esterase sitosolik dan diaktifkan oleh ROS di sitoplasma,
penghambatan kenaikan ROS oleh PA, OAA, dan AKG Bisa jadi karena efek pemulungan H2O2
di dalam sel. Kesimpulan dari penelitian ini adalah Diilustrasikan pada Gambar 6A dan B. PA,
OAA, dan AKG bersifat neuroprotektif, namun bukan KCI lainnya. Misalnya, substrat energi
neuron LA dan MA yang mungkin menghasilkan KCI yang melindungi melalui metabolisme
mereka [1,2] -did tidak melindungi sel (Gambar 4 dan 5). AKG mungkin punya yang lain
efek perlindungan daripada? -keto asam seperti PA dan OAA. AKG di 1mM melindungi sel-sel
melawan H2O2 (Gambar 1) tanpa menyebabkan penurunan tingkat ROS yang signifikan
(Gambar 3). Karena AKG itu dilaporkan untuk mengaktifkan degradasi HIF-1? subunit dan
kurangi ungkapan downstream enzim [6,7], pengurangan jalur ini mungkin telah terlibat dalam
efek perlindungan AKG. FA mungkin merupakan KCI yang luar biasa. FA pada 10 mM
melindungi sel-sel melawan sitotoksisitas yang dimediasi oleh Glu (Gambar 5), meskipun KCI
lainnya tidak melakukannya. Karena FA dilaporkan mengaktifkan jalur Nrf2 dan menginduksi
enzim fase-2 [18], aktivasi jalur ini mungkin telah terlibat dalam Perlindungan yang diinduksi
FA Antioksidan 2017, 6, 21 8 dari 10
melindungi sel terhadap konsentrasi Glu yang tinggi dengan menghambat penurunan GSH
dengan induksi fase- 2 enzim, aksi yang meningkatkan produksi GSH [24-26]. Peningkatan GSH
oleh Aktivator NRF2 tidak cukup untuk perlindungan terhadap H2O2
Gambar 6. (A) Senyawa yang terlibat dalam siklus Krebs dan (B) struktur kimia umum dari
KCI neuroprotektif (PA, OAA, dan AKG). Perhatikan bahwa PA, OAA, dan AKG memiliki
bahan kimia yang umum struktur gugus asam-keto - yang ditunjukkan oleh lingkaran bertitik -
dimana molekul dapat langsung bereaksi dengan H2O2.

Menariknya, perlindungan yang diberikan oleh PA, OAA, dan AKG sama sekali berbeda
dari itu dari aktivator NRF2 seperti asam carnosic [19,20], zonarol [21,22], dan ters-butyl
hydroquinone [23]. Antioksidan 2017, 6, 21 8 dari 9 Aktivator ini dapat melindungi sel dari
konsentrasi tinggi Glu, namun tidak melawan H2O2. Nrf2 aktivator melindungi sel melawan
konsentrasi Glu yang tinggi dengan menghambat penurunan GSH dengan induksi dari enzim
Tahap-2, aksi yang meningkatkan produksi GSH [24-26]. Peningkatan GSH oleh aktivator NRF2
tidak cukup untuk perlindungan terhadap H2O2 [24-26].
5. Kesimpulan
Penelitian ini menunjukkan bahwa ada 2 mekanisme oksidatif yang khas: satu diinduksi
oleh H2O2 dan yang lainnya oleh Glu. ? -Kartu yang mengandung gugus KCI (PA, OAA, dan
AKG) melindungi sel melawan yang pertama tapi tidak melawan yang terakhir, sedangkan
aktivator Nrf2 bertindak sebaliknya. Sistem saraf pusat sangat rentan terhadap kerusakan
oksidatif karena energinya yang tinggi pengeluaran dan permintaan oksigen [24-26].
Peningkatan konsentrasi radikal bebas dan resultan Kerusakan oksidatif, seperti peroksidasi lipid
dan karbonilasi protein, telah berulang kali ditunjukkan pada gangguan neurodegenerative
seperti penyakit Alzheimer, penyakit Parkinson, dan stroke iskemik [24-26]. Dengan demikian,
PA, OAA, dan AKG, menjadi zat antara metabolik dan energi alami substrat, mengerahkan efek
antioksidan di otak dan jaringan lain yang rentan terhadap H2O2.

References
1. Krebs, H.A. The citric acid cycle and the Szent-Györgyi cycle in pigeon breast muscle.
Biochem. J. 1940, 34,
775–779. [CrossRef] [PubMed]
2. Locasale, J.W.; Cantley, L.C. Metabolic flux and the regulation of mammalian cell growth.
Cell Metab. 2011,
14, 443–451. [CrossRef] [PubMed]
3. De Berardinis, R.J.; Thompson, C.B. Cellular metabolism and disease: What do metabolic
outliers teach us?
Cell 2012, 148, 1132–1144. [CrossRef]
4. Edwards, C.B.; Copes, N.; Brito, A.G.; Canfield, J.; Bradshaw, P.C. Malate and fumarate
extend lifespan in
Caenorhabditis elegans. PLoS ONE 2013, 8, e58345. [CrossRef]
5. Williams, D.S.; Cash, A.; Hamadani, L.; Diemer, T. Oxaloacetate supplementation increases
lifespan
in Caenorhabditis elegans through an AMPK/FOXO-dependent pathway. Aging Cell 2009, 8,
765–768.
[CrossRef] [PubMed]
6. Mishur, R.J.; Khan, M.; Munkácsy, E.; Sharma, L.; Bokov, A.; Beam, H.; Radetskaya, O.;
Borror, M.; Lane, R.;
Bai, Y.; et al. Mitochondrial metabolites extend lifespan. Aging Cell 2016, 15, 336–348.
[CrossRef] [PubMed]
7. Czibik, G.; Steeples, V.; Yavari, A.; Ashrafian, H. Citric acid cycle intermediates in
cardioprotection.
Circ. Cardiovasc. Genet. 2014, 7, 711–719. [CrossRef] [PubMed]
8. Desagher, S.; Glowinski, J.; Prémont, J. Pyruvate protects neurons against hydrogen peroxide-
induced
toxicity. J. Neurosci. 1997, 17, 9060–9067. [PubMed]
9. Andrae, U.; Singh, J.; Ziegler, S.K. Pyruvate and related alpha keto acids protect mammalian
cells in culture
against hydrogen peroxide induced cytotoxicity. Toxicol. Lett. 1985, 28, 93–98. [CrossRef]
10. Wang, Q.; van Hoecke, M.; Tang, X.N.; Lee, H.; Zheng, Z.; Swanson, R.A.; Yenari, M.A.
Pyruvate protects
against experimental stroke via an anti-inflammatory mechanism. Neurobiol. Dis. 2009, 36, 223–
231.
[CrossRef] [PubMed]
Antioxidants 2017, 6, 21 9 of 9
11. Isopi, E.; Granzotto, A.; Corona, C.; Bomba, M.; Ciavardelli, D.; Curcio, M.; Canzoniero,
L.M.; Navarra, R.;
Lattanzio, R.; Piantelli, M.; et al. Pyruvate prevents the development of age-dependent cognitive
deficits in a
mouse model of Alzheimer’s disease without reducing amyloid and tau pathology. Neurobiol.
Dis. 2015, 81,
214–224. [CrossRef] [PubMed]
12. Reczek, C.R.; Chandel, N.S. ROS-dependent signal transduction. Curr. Opin. Cell Biol.
2015, 33, 8–13.
[CrossRef]
13. Halliwell, B. Oxidative stress and neurodegeneration: Where are we now? J. Neurochem.
2006, 97, 1634–1658.
[CrossRef] [PubMed]
14. Tamaki, Y.; Tabuchi, T.; Takahashi, T.; Kosaka, K.; Satoh, T. Activated glutathione
metabolism participates
in protective effects of carnosic acid against oxidative stress in neuronal HT22 cells. Planta Med.
2009, 76,
683–688. [CrossRef] [PubMed]
15. Satoh, T.; Rezaie, T.; Seki, M.; Sunico, C.R.; Tabuchi, T.; Kitagawa, T.; Yanagitai, M.;
Senzaki, M.; Kosegawa, C.;
Taira, H.; et al. Dual neuroprotective pathways of a pro-electrophilic compound via HSF-1-
activated
heat-shock proteins and Nrf2-activated phase 2 antioxidant response enzymes. J. Neurochem.
2011, 19,
569–578. [CrossRef] [PubMed]
16. Satoh, T.; Stalder, R.; McKercher, S.R.;Williamson, R.E.; Roth, G.P.; Lipton, S.A. Nrf2 and
HSF-1 pathway
activation via hydroquinone-based proelectrophilic small molecules is regulated by
electrochemical oxidation
potential. ASN Neuro 2015, 7. [CrossRef] [PubMed]
17. Wang, X.; Perez, E.; Liu, R.Y.; Yan, L.J.; Mallet, R.T.; Yang, S.H. Pyruvate protects
mitochondria from oxidative
stress in human neuroblastoma SK-N-SH cells. Brain Res. 2007, 1132, 1–9. [CrossRef]
[PubMed]
18. Ashrafian, H.; Czibik, G.; Bellahcene, M.; Aksentijevi´c, D.; Smith, A.C.; Mitchell, S.J.;
Dodd, M.S.; Kirwan, J.;
Byrne, J.J.; Ludwig, C.; et al. Fumarate is cardioprotective via activation of the Nrf2 antioxidant
pathway.
Cell Metab. 2012, 15, 361–371. [CrossRef] [PubMed]
19. Satoh, T.; Kosaka, K.; Itoh, K.; Kobayashi, A.; Yamamoto, M.; Shimojo, Y.; Kitajima, C.;
Cui, J.; Kamins, J.;
Okamoto, S.; et al. Carnosic acid, a catechol-type electrophilic compound, protects neurons both
in vitro
and in vivo through activation of the Keap1/Nrf2 pathway via S-alkylation of targeted cysteines
on Keap1.
J. Neurochem. 2008, 104, 1116–1131. [CrossRef] [PubMed]
20. Satoh, T.; Izumi, M.; Inukai, Y.; Tsutsumi, Y.; Nakayama, N.; Kosaka, K.; Shimojo, Y.;
Kitajima, C.; Itoh, K.;
Yokoi, T.; et al. Carnosic acid protects neuronal HT22 cells through activation of the
antioxidant-responsive
element in free carboxylic acid- and catechol hyroxyl moieties-dependent manners. Neurosci.
Lett. 2008, 434,
260–265. [CrossRef] [PubMed]
21. Shimizu, H.; Koyama, T.; Yamada, S.; Lipton, S.A.; Satoh, T. Zonarol, a sesquiterpene from
the brown algae
Dictyopteris undulata, provides neuroprotection by activating the Nrf2/ARE pathway. Biochem.
Biophys.
Res. Commun. 2015, 457, 718–722. [CrossRef] [PubMed]
22. Yamada, S.; Koyama, T.; Noguchi, H.; Ueda, Y.; Kitsuyama, R.; Shimizu, H.; Tanimoto, A.;
Wang, K.Y.;
Nawata, A.; Nakayama, T.; et al. Marine hydroquinone zonarol prevents inflammation and
apoptosis in
dextran sulfate sodium-induced mice ulcerative colitis. PLoS ONE 2014, 9, e113509. [CrossRef]
[PubMed]
23. Satoh, T.; Saitoh, S.; Hosaka, M.; Kosaka, K. Simple ortho- and para-hydroquinones as
compounds
neuroprotective against oxidative stress in a manner associated with specific transcriptional
activation.
Biochem. Biophys. Res. Commun. 2009, 379, 537–541. [CrossRef] [PubMed]
24. Satoh, T.; McKercher, S.R.; Lipton, S.A. The Nrf2-targetted antioxidant actions of pro-
electrophilic drugs.
Free Rad. Biol. Med. 2013, 65, 645–657. [CrossRef]
25. Lipton, S.A.; Rezaie, T.; Nutter, A.; Lopez, K.M.; Parker, J.; Kosaka, K.; Satoh, T.;
McKercher, S.R.; Masliah, E.;
Nakanishi, N. Therapeutic advantage of pro-electrophilic drugs to activate the Nrf2/ARE
pathway in
Alzheimer’s disease models. Cell Death Dis. 2016, 7, e2499. [CrossRef] [PubMed]
26. Satoh, T.; Lipton, S.A. Redox regulation of neuronal survival mediated by electrophilic
compounds.
Trends Neurosci. 2007, 30, 37–45. [CrossRef] [PubMed]
© 2017 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland. This article is an open access
article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution
(CC BY) license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).