ESCUELAS DE LA FACULTAD DE MEDICINA - ESFUNO 2018

UTI: BIOLOGÍA CELULAR Y TISULAR

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO GUÍA Nº1 : AGUA, SOLUCIONES, ACIDOS, BASES y SISTEMAS

AMORTIGUADORES

A. Soluciones

1. Explique por qué las sustancias polares se disuelven en agua mientras que las no polares
no lo hacen.

2. ¿Cuál es su concepto de solución? ¿Cómo define la concentración de una solución? ¿Qué

diferencia hay entre la molaridad y la osmolaridad de una solución?

3. ¿Cuántos moles de KCl hay en 15 g? KCl 74.6 g/mol

NaCl 9 g? NaCl 58.44 g/mol
NaOH 20 g? NaOH 40 g/mol
H2SO4 3 g? H2SO4 98 g/mol
Glucosa 90 g? Glucosa 180 g/mol

4. ¿Qué molaridad tendrá una solución de KCl que contiene 9.0 g por litro de solución?

5. a) ¿Cuántos gramos de NaCl sólido se requieren para preparar 500 mL de una solución
0,040 M?
b) Expresar la concentración de la solución en términos de g/L, %m/v y osmolaridad.

6. ¿Qué diferencia hay entre difusión y ósmosis?

7. Calcule la osmolaridad de las siguientes soluciones:

KCl 0,5 M
H2SO4 0,5 M
MgCl2 2,0 M
HCl 3,0 M

8. Ordene las siguientes soluciones por orden creciente de osmolaridad:

a) Sacarosa 200 g/L (PM: 342 g/mol)

b) Albúmina 200 g/L (PM: 66.000 g/mol)
c) Glucosa 200 g/L (PM: 180 g/mol)
d) CaCl2 200 g/L (PM: 110 g/mol)

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9. Prediga que espera que ocurra si se colocan eritrocitos en las siguientes soluciones:

-solución de NaCl 4,0 g/L

-solución de Glucosa 80 g/L
-solución de Sacarosa 10.6 % m/v

B) Ácidos, bases y sistemas amortiguadores

10. Calcular la concentración de H+, la de OH- y el pH de cada una de las siguientes

soluciones:

a) HCl 0,010 M
b) HCl 0,10 M
c) CH3COOH (Acido acético) 0,10 M (Ka = 1,8 x 10-5)
d) H2SO4 0,10 M
e) HCN 0,10 M (Ka = 4.9 x 10-10)

11. a) ¿Qué entiende por un buffer? ¿Cómo funciona?

b) Indique cuál de los siguientes pares utilizaría para preparar un buffer que amortigüe
alrededor de pH 7.0 justificando su respuesta:

- CH3COOH/CH3COONa (Ka = 1.8 x 10-5)

- NaH2PO4/Na2HPO4 (Ka= 6.2 x 10-8)
- NaHCO3/Na2CO3 (Ka = 5.6 x 10-11)

12. a) ¿Cuál será el pH de una solución preparada mezclando 100 mL de una solución de
ácido acético 0,05 M con 250 mL de acetato de sodio de igual concentración?

b) ¿Qué propiedad presenta dicha solución?

C) Aminoácidos

13. Describa las diferentes formas (desde el punto de vista ácido-base) en las que puede
presentarse una molécula de glicina, de aspartato y de lisina. Explique por qué una
solución de un aminoácido puede actuar como buffer.

14. Dibuje la curva de titulación del glutamato.

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15. Dados los siguientes aminoácidos y sus respectivos pKs:

pK1 pK2 pKR

Ala 2.34 9.87 -----

Glu 2.19 9.66 4.28
Lys 2.18 8.95 10.5

a) Calcule el pI de cada aminoácido

b) Trace la curva de titulación de la alanina, indicando los pKs y el pI
c) Cuál será la carga neta en los siguientes pH: 1, 3.2, 6.1 y 11

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UTI: BIOLOGÍA CELULAR Y TISULAR

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO GUÍA Nº2: BIOENERGETICA

1. Calcule la variación de energía libre de la hidrólisis del ATP a pH 7.0 y 25ºC bajo
condiciones de estado estacionario (tal como existen en las células), en las cuales las
concentraciones de ATP, ADP y Pi son mantenidas en 1.0 mM, 0.1 mM y 10 mM,
respectivamente. Considere que la ∆Gº’ para la hidrólisis de ATP a 25ºC y pH 7.0 es
–30.5 kJ/mol.

2. La variación de energía libre estándar para la hidrólisis de ATP a 25ºC y pH 7.0 es ∆Gº’ =
30.5 kJ /mol. Se sabe que la variación de la energía libre estándar para la hidrólisis de
glucosa-6-fosfato en las mismas condiciones es ∆Gº’ = –13.8 kJ/mol. Calcule la variación
de energía libre estándar para la reacción que cataliza la hexoquinasa:

GLUCOSA + ATP → GLUCOSA-6-P + ADP

3. ¿Cuál de las siguientes reacciones espera que ocurran en la dirección mostrada bajo
condiciones estándar, asumiendo que las enzimas apropiadas están presentes para
catalizarlas?:

Malato + NAD+→ oxalacetato + NADH + H+

Piruvato + NADH + H+→ lactato + NAD+

Piruvato + 2H+ + 2e-→ lactato Eº’ = -0.185V

+ -
Oxalacetato + 2H + 2e → Malato Eº’ = -0.166V
NAD+ + 2H+ + 2e- → NADH + H+ Eº’ = -0.320V

4. Las células utilizan reacciones de oxidación y reducción (redox) para sintetizar ATP. El
dinuclétido de adenina y nicotinamida (NAD+) es la principal molécula transportadora de
electrones a nivel celular. El dinuclétido de adenina y nicotinamida cede los electrones a la
cadena respiratoria donde el último aceptor de los electrones es el oxígeno (O2). A
continuación se plantean las semireacciones de reducción del NAD+ y el O2y sus potenciales
redox estándar (Eº):

NAD+ + 2H+ + 2e-→ NADH + H+Eº = - 0.315 V

½ O2 + 2H+ + 2e-→ H2O Eº = 0.815 V

a) Si el par NAD+/NADH y el par ½O2/H2O reaccionan directamente en condiciones estándar

¿quién se llevaría los electrones, es decir quién es el agente oxidante? Plantee la reacción
global y determine la variación de energía libre.

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b) ¿Cuántas moléculas de ATP se podrían formar si se produce esta reacción de óxido-

reducción?
Recuerde que la energía libre necesaria para la síntesis de un mol de ATP en condiciones
estándar es de 30,5 kJ/mol
Constantes utilizadas en esta discusión

R (constante de los gases) 0,00831 kJ/K mol

T (temperatura Absoluta) 298 K

F (constante de Faraday) 96.5 kJ/V-mol

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DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO GUÍA Nº3: ENZIMAS

1. ¿Qué variables afectan la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente? ¿Qué

relación existe entre la velocidad inicial de una reacción y la concentración de sustrato?

2. Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir del estudio de la actividad de la

enzima invertasa de levaduras, la cual cataliza la hidrólisis de la sacarosa:

0.8
[sacarosa] (mM) Vo (mM/min)
0 0 0.6
10 0.089
V0 mM/min

20 0.209 0.4
50 0.426
100 0.560 0.2

300 0.720
400 0.750 0.0
0 100 200 300 400 500
[Sacarosa] (mM)

1/[sacarosa] 1/Vo 10 y= 99.8 x + 0.71

(mM) (mM/min) r2=0.974
0.1 11.2
1/V0

0.05 4.78
5
0.02 2.34
0.01 1.78
3.5 x 10-3 1.38
2.5 x 10-3 1.33 0
0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
1/[Sacarosa]

a) Determine los valores de los parámetros cinéticos de Km y Vmax para esta enzima.

b) Calcule la constante catalítica o número de recambio Kcat , teniendo en cuenta que la

concentración de enzima utilizada fue 10 nM. ¿qué significado tiene ese valor?

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3. Explique qué mecanismos existen para regular la actividad de una enzima.

4. Las enzimas X e Y catalizan la misma reacción y presentan las curvas vo en función de [S]
que se muestran en la figura. ¿Qué enzima es más eficiente a baja [S]? ¿Cuál es más
eficiente a alta [S]?

vo E n z im a X
1 2 .0 4

9 .0 8

E n z im a Y

6 .1 2

3 .1 6

0 .2 0

0 .0 0 2 .6 0 5 .2 0 7 .8 0 1 0 .4 01 3 .0 0
[S]

5. Muchas reacciones enzimáticas se inhiben por el producto de la reacción. Se estudia la

reacción catalizada por la enzima alcohol deshidrogenasa, responsable de la
detoxificación de alcohol a nivel hepático, que lo transforma en acetaldehído.

CH3CH2OH + NAD + → CH3CHO + NADH + H +

Su producto, el acetaldehído, es inhibidor de la enzima por lo que se realizaron ensayos de

actividad en ausencia y en presencia de una concentración de 4.0 mM de acetaldehído.
Utilizando los datos del estudio expresados en las tablas, determinar:
a) el tipo de inhibición que se produce. Grafique los datos de Vo = f ([S]) en presencia y en
ausencia del inhibidor sobre los mismos ejes.
b) los valores de Km, Vmax en ausencia y en presencia del acetaldehído.
c) ¿cómo se evita la inhibición por producto en la célula hepática?

v (mmol/min)
[Etanol](mM) v (mmol/min) c/inhibidor
20.0 19.5 11.6
30.0 21.3 14.3
50.0 23.3 17.6
100.0 24.9 21.2

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DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CUESTIONARIO GUÍA Nº5 : METABOLISMO

1. La glucosa entra en la vía glucolítica por su fosforilación a glucosa-6-fosfato catalizada

por dos enzimas: la hexoquinasa, presente en todas las células (con un bajo Km para su
sustrato) y la glucoquinasa exclusiva del hígado pero con un alto Km para la glucosa.

b) ¿Cuáles son los posibles destinos de la glucosa 6-P en los distintos tejidos y frente a
distintas necesidades energéticas?
c) ¿Qué rol juega cada una de estas enzimas en el metabolismo de los carbohidratos?
d) Altos niveles de ATP y bajos de AMP inhiben a la fosfofructoquinasa. ¿Qué sucede
con la actividad de la hexoquinasa y glucoquinasa en esta situación?

2. Cada vez que una molécula de glucosa se transforma en dos moléculas de piruvato,
¿qué otras moléculas consume y produce la célula? Plantee un balance.

3. La glucólisis es una secuencia de 10 reacciones catalizadas por enzimas por la cual

una molécula de glucosa se convierte en 2 moléculas de piruvato. Con el objetivo de
estudiar termodinámicamente la vía se determinaron los valores de variación de energía
libre (ΔG) para todas las reacciones en el músculo cardíaco. En la tabla se presentan estos
valores y las variaciones de energía libre estándar a pH7 (ΔGo’).

Reacción Enzima ΔGo’(kJ/mol) ΔG(kJ/mol)

(kJ/mol)

1 Hexoquinasa ‐20.9 ‐27.2

2 Fosfoglucosaisomerasa +2.2 - 1.4
3 Fosfofuctoquinasa ‐17.2 ‐25.9
4 Aldolasa +22.8 ‐5.9
5 Triosafosfatoisomerasa +7.9 +4.4
6+7 Gliceraldehído-­‐3-­‐PDH ‐16.7 ‐1.1
+ Fosfogliceratoquinasa
8 Fosfogliceratomutasa +4.7 ‐0.6
9 Enolasa ‐3.2 ‐2.4
10 Piruvatoquinasa ‐23.0 ‐13.9

a) ¿Qué reacciones se encuentran cercanas al equilibrio y cuáles se encuentran alejadas

del equilibrio, en el músculo cardíaco?

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b) ¿Qué enzimas serían candidatas a controlar el flujo de metabolitos por la vía glicolítica?
¿Por qué?
c) ¿Cómo se explica la diferencia de energía en condiciones estándar y fisiológicas, de la
reacción catalizada por la aldolasa?
d) ¿Cuáles son las enzimas reguladoras y cómo están reguladas?

4. La PFK cataliza la fosforilación de la fructosa‐6‐fosfato (F‐6‐P) para formar

fructosa‐1,6‐bifosfato (F‐1,6-‐BP) reacción catalizada por por la fosfofructoquinasa‐1
(PFK‐1).

Mg2
F‐6‐P + ATP F‐1,6‐BP + ADP

A continuación se muestran las concentraciones intracelulares de los sustratos que

intervienen en lafosforilacióndelafructosa‐6‐fosfatoentejidocardíacoderata, medidas por
técnicas de criocompresión:
Metabolito Concentración (mM)
Fructosa‐6‐P 0.087
Fructosa‐1,6‐BP 0.022
ATP 11.4
ADP 1.32

a) Calcular la relación de acción de masas:[F‐1,6‐BP][ADP]/[F‐6‐P][ATP]

b) Dado que el ΔGo’=‐14.2kJ/mol, calcular la Keq.

Comparar la relación de acción de masas y la Keq. ¿Se encuentra en equilibrio esta reacción?
¿Qué nos dice esto sobre el papel de la PFK1 como enzima reguladora?
c) Enumere cuales son los moduladores de la PFK‐1.

5. ¿Cuáles son los posibles destinos metabólicos del NADH generado en la glucólisis?

6. ¿Cuáles son los posibles destinos metabólicos del piruvato?

7. Durante la actividad intensa el tejido muscular demanda altas cantidades de ATP

comparado con el tejido en reposo, que se produce casi exclusivamente por fermentación
láctica. En esta condición, el ATP es producido en la glucólisis en las reacciones catalizadas
por las enzimas fosfoglicerato quinasa y piruvato quinasa.
Suponga que el músculo esquelético fuera desprovisto de lactato deshidrogenasa. ¿Podría
llevar a cabo actividad física intensa, es decir, podría generar ATP a alta velocidad por
glucólisis? Explique.

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8. La formación de acetil-CoA a partir de piruvato es una decarboxilación oxidativa catalizada

por el complejo piruvato deshidrogenasa.

a) Esquematice la reacción catalizada por este complejo enzimático.

b) ¿cuál es el sustrato oxidado y el reducido?
c) ¿en qué compartimiento subcelular ocurre la decarboxilación oxidativa del piruvato?

9. ¿Cuál es el destino de los carbonos y cuál es el destino de los electrones de los sustratos
oxidados en el ciclo de Krebs?

10. Aunque el oxígeno no participa directamente del ciclo de Krebs, explique porque sólo
funciona en condiciones aeróbicas.

11. Existen vías metabólicas que consumen intermediarios del Ciclo de Krebs. Un ejemplo es
la síntesis del neurotransmisor ácido γ-aminobutárico (GABA) a partir de glutamato en el
tejido nervioso.¿A partir de que intermediario del ciclo se sintetiza el neurotransmisor?
¿Cómo se repone el intermediario para que el ciclo siga funcionando?

12. Una de las reacciones del ciclo de Krebs cataliza la fosforilación a nivel de sustrato de
uno de los intermediarios:
a) ¿cuál es la reacción y qué enzima la cataliza?
b) ¿cómo se metaboliza el intermediario fosforilado producto de esta reacción para
finalmente rendir ATP?

13. ¿Qué roles cumple en el metabolismo celular el ciclo de Krebs?

14. ¿Cuáles son los componentes principales de la cadena respiratoria y sus relaciones con la
membrana mitocondrial?

15. ¿Cuáles son los puntos de entrada de los equivalentes de reducción a la cadena
respiratoria provenientes de la oxidación de: glucosa/piruvato, ácidos grasos y glicerol.

16.Un mitoplasto es una mitocondria sometida a permeabilización con detergentes de forma

que se le extrae selectivamente la membrana externa. Por lo tanto, la cadena respiratoria y
fosforilación oxidativa no se alteran. Si a un mitoplasto (mitocondria sin membrana externa)
se le elimina el citocromo c por extracción salina dejando intactos el resto de los
componentes y luego se les adiciona sustratos NADH-dependientes y succinato:

a) ¿Cuál será el estado redox de la NADH deshidrogenasa, succinato deshidrogenasa, CoQ,

Cyt b y a?
b) ¿Consume O2? Justifique su respuesta.

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c) Si a los mitoplastos se les agrega el 20% del cyt c inicialmente extraído, recuperan
totalmente su estado respiratorio y vuelven a fosforilar ATP. ¿Qué conclusiones saca al
respecto?

17. Estudio de una enfermedad mitocondrial: análisis de las bases moleculares de una
patología OxPhos

Un niño que nació luego de 40 semanas de gestación desarrolló en las primeras 24 horas de
vida problemas respiratorios y a las 6 semanas problemas neurológicos y cardíacos,
revelando los exámenes la existencia de una miocardiopatía. Entre las 15 y las 16 semanas se
detectó además una acidemia láctica progresiva, con un valor de pH de 7.30 (rango normal
7.38-7.44), con valores de piruvato y de la relación lactato/piruvato elevados.
La acidemia láctica persistió hasta que el niño murió de un paro cardio-respiratorio a las 16
semanas de vida.

A fin de comprender las bases moleculares de la patología que provocó la muerte de este
niño se evaluó la funcionalidad de las vías del metabolismo energético en el tejido cardíaco:
• Las actividades de las enzimas de la vía glucolítica y de la piruvato deshidrogenasa
eran normales.
• Estudios de resonancia paramagnética de electrones (EPR) indicaron que el
contenido de hierro de las mitocondrias era menor al normal y lograron identificar
qué tipo de grupo prostético se hallaba afectado.
• Se purificaron mitocondrias de músculo cardíaco y se valoró su funcionalidad:

La gráfica A presenta el consumo de oxígeno mitocondrial en función del tiempo en

presencia de piruvato y malato, antes y después de agregar 7.2 µmoles de ADP
La gráfica B presenta el consumo de oxígeno mitocondrial en función del tiempo en
presencia de succinato antes y después de agregar 7.2 µmoles de ADP.

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a) ¿Qué conclusiones pueden sacar con respecto a la funcionalidad mitocondrial del tejido
cardíaco de este niño? ¿Estas mitocondrias se encuentran desacopladas? ¿Son capaces de
sintetizar ATP?

b) A partir de los datos obtenidos con las mitocondrias plantee a qué nivel podríamos
encontrar un defecto en el metabolismo mitocondrial.

c) Con los datos de EPR plantee que cofactor o grupo prostético se encuentra afectado.

d)¿Cómo puede explicar la debilidad muscular y los problemas neurológicos del niño
tomando en cuenta los datos aportados?

e) La enfermedad de este niño se encuentra dentro del grupo de las acidosis lácticas
congénitas. ¿Por qué? ¿A qué se debe el aumento del ácido láctico en sangre?

BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA

Teóricos 1-8

1. Marks Bioquímica médica básica: Un Enfoque clínico. Michael Lieberman y Allan D.

Marks 4ª edición.
2. Bioquímica. Mathews y Van Holde.
3. Leningher Principios de Bioquímica. David L. Nelson y Michael M. Cox. 5ª Edición.
4. Bioquímica Médica. John W. Baynes y Marek H. Dominiczak. 2ª y 3ª edición.

Teórico 9
1. Marks Bioquímica médica básica: Un Enfoque clínico. Michael Lieberman y Allan D.
Marks 4ª edición.
2. Bioquímica Médica. John W. Baynes y Marek H. Dominiczak. 2ª y 3ª edición.
3. Harper Bioquímica Ilustrada. Murray R.K. y colegas. 28ª edición.

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