GEN

Son pequeños segmentos de largas cadenas de ADN que determinan la herencia

de una característica determinada, o de un grupo de ellas.
Los genes se encuentran localizados en los cromosomas en donde se disponen
en línea a lo largo de ellos.
Los cromosomas se encuentran en pares, por lo tanto los genes también
En esencia, un gen es una secuencia de nucleótidos que codifica para una
proteína determinada

PARTES DE UN GEN
A veces el gen está formado por una secuencia de bases, pero en eucariotas es
frecuente que un gen esté constituido por varios fragmentos de DNA separados
por secuencias sin sentido que no codifican ninguna proteína. A las partes con
sentido que sirven para fabricar la proteína se les llama EXONES, y a las partes
sin sentido intercaladas en el gen INTRONES, que deben ser eliminados tras la
transcripción.
Un intrón es una región del ADN que debe ser eliminada de la transcripción
primaria de ARN, a diferencia de los exones que son regiones que codifican para
una determinada proteína.

TÉCNICAS PARA LOCALIZAR A LOS GENES

AISLAMIENTO DE GENES POR COMPLEMENTACIÓN

Los primeros genes microbianos fueron aislados mediante el principio de la
complementación. Este procedimiento se fundamenta en el trabajo previo de los
genetistas que, desde mucho tiempo atrás, habían caracterizado indirectamente a
los genes. El trabajo clásico en genética microbiana implicaba el aislamiento y
caracterización de bacterias mutantes, es decir, variantes que se generan
espontáneamente o por un tratamiento químico o físico., ¿Qué podríamos hacer
para aislar este gene? Una vez que se dispone de las técnicas de clonación
molecular, el proceso es conceptualmente sencillo.
Primero se requiere crear un conjunto de clonas que contengan segmentos de un
tamaño adecuado. Lo que se hace es someter una preparación del ADN total de la
bacteria en cuestión (de la cepa silvestre que contiene el gene normal que nos
interesa) a la acción de alguna enzima de restricción. La reacción se controla para
generar segmentos de unos 5 a 10 mil pares de bases, cada uno capaz de
contener unos cuantos genes.
Esta colección de fragmentos se liga a un vector de clonación y se introduce a
células de la cepa mutante (la que era incapaz de crecer en galactosa).
Si colocamos algunos miles de células así transformadas en una caja con medio
nutritivo (claro, donde el nutrimento sea galactosa), es probable que crezca alguna
de ellas: la que recibió el segmento que contenía el gene funcional;
correspondiente al gene mutante.
Este gene ya no es más una entelequia. Se encuentra en un segmento pequeño,
insertado en un plásmido del que se pueden preparar grandes cantidades. Este
gene ha sido aislado, o purificado.

Separación de los ácidos nucleicos (Electroforesis)

Gracias a la utilización de la electroforesis es posible visualizar la acción de las
enzimas de restricción.
1. Se colocan muestras que contienen ADN de diversos tamaños en los pozos de
un gel e forma de placa
2. Se aplica una corriente eléctrica
3. Estas moléculas se distribuirán por separado, gracias a la diferencia de
velocidad de migración después de un tiempo determinado.
4. Se le agrega una sustancia que se hace luminosa al interaccionar con el ADN y
bañarse con luz ultravioleta.
Para los ácidos nucleicos se usa el azul de metileno o, más frecuentemente,
compuestos fluorescentes e intercalantes, como el bromuro de etidio (véase
figura). Un compuesto intercalante es aquél que se introduce entre los pares de
bases apilados del DNA.
Bromuro de etidio: Agente intercalante, se introduce entre las bases apiladas del
DNA, abre un poco la doble hélice, provoca un desenrollamiento local. Su
fluorescencia (color naranja al iluminar con UV) aumenta mucho cuando se une al
DNA: método de tinción o revelado del DNA, especialmente usado en
electroforesis y en centrifugación.
5. Por último, se observa el patrón de distribución de las bandas constituidas por
moléculas de diferente tamaño y permitiendo deducir sus dimensiones.
 Método del PCR
La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica in vitro utilizada para
amplificar enzimáticamente una región determinada de ADN.
a).-Desnaturalización del DNA a copiar (molde o diana). Ello se consigue
incrementando la temperatura para separar las dos cadenas que componen la
doble hélice del DNA.
b).-Hibridación o apareamiento de los cebadores u oligos al DNA molde. Para ello
se baja la temperatura de reacción, de forma que pequeñas secuencias de DNA
de cadena sencilla (típicamente, entre 10 y 30 bases o meros) se unan a sus
secuencias complementarias del DNA diana. Cada uno de ellos se une a una de
las cadenas del DNA diana, de forma que sus extremos 3’–OH apuntan el uno
hacia el otro, delimitando la secuencia a amplificar.
C.-Copia de las cadenas delimitadas por los cebadores. Se consigue elevando la
temperatura de la reacción a la óptima de la polimerasa de DNA.

AISLAMIENTO DE GENES UTILIZANDO ANTICUERPOS

En este método se usan los anticuerpos en respuestas a proteínas extraña, que

son utilizados como reactivos que reconocen a la sustancia específica que
indujeron su producción.

AISLAMIENTO DE GENES UTILIZANDO SUS ARN MENSAJEROS

Este método se utiliza ARN para aislar un gen ya que el ARN se encuentra en
gran proporción y es más fácil de detectarlo y aislarlo, esto se da gracias a la
transcriptasa reversa que permite el paso de ARN a ADN usando como molde la
cadena ARN que tiene adenina, para así dar la cadena ADN clonable.

AISLAMIENTO DE GENES RESPONSABLES DE ENFERMEDADES

HEREDITARIAS.
Muchas de las enfermedades hereditarias más conocidas pueden ser
causadas por el defecto de un solo gene.
Aunque las técnicas clásicas de la genética humana podrían haber
establecido este hecho, la posibilidad de identificar el gene preciso, su
producto proteico, y la lesión causante de la enfermedad.
Su manifiestación clínica consiste en la producción de sudor muy salado,
aunado a deficiencias respiratorias y digestivas. Esta enfermedad se
encuentra con bastante frecuencia en ciertas poblaciones humanas, por
ejemplo del norte de Europa o entre los estadunidenses de raza negra.

PRINCIPIO DE MLST
MLST mide directamente las variaciones de la secuencia de ADN en un conjunto
de genes de limpieza y caracteriza cepas por sus perfiles alélicos únicos. El
principio de MLST es simple: la técnica consiste en la amplificación por PCR
seguida de secuenciación de ADN. Diferencias de nucleótidos entre las cepas se
pueden verificar en un número variable de genes en función del grado de
discriminación deseado.