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DRA.

SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

PRÁCTICAS DE LA ASIGNATURA

DE

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA

CATEDRÁTICO

DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN


DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

INDICACIONES PARA REPORTAR PRÁCTICAS

Las prácticas se realizaran bajo el formato de guía de práctica, donde el


instructor proporciona al alumno:

ACTIVIDADES DEL INSTRUCTOR ACTIVIDAD DEL ALUMNO

El instructor le proporcionara el objetivo El alumno realizara una revisión


de la práctica. bibliográfica y de técnicas de
laboratorio para diseñar la práctica bajo
la guía del catedrático.

En caso de existir un manual de El alumno presentara como reporte de


técnicas de laboratorio, esté será la práctica.
proporcionado para que el alumno
seleccione la técnica más adecuada El marco teórico., (donde se
dependiendo de los reactivos existentes. presentara de forma resumida la
información bibliográfica previamente
recabada y analizada.

El instructor revisara antes de la El desarrollo experimental será la


práctica la información recolectada, la explicación de la práctica, incluyendo
cual se presentara en borrador, en su materiales y reactivos., en caso
cuaderno de laboratorio necesario explicar con dibujos.

Durante su desarrollo experimental el Las observaciones realizadas durante


instructor supervisará el trabajo del la práctica se anotaran en una libreta de
equipo., siendo esté parte de la laboratorio estrictamente personal, la
calificación práctica. cual le servirá posteriormente para el
reporte de laboratorio.

El reporte de la práctica debe incluir:

1.- Objetivo

2.- Marco teórico,


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3.- Desarrollo experimental con


fotografías y redactando el
procedimiento.

4.- Conclusiones personales.

5.- Discusión de resultados,


comparando los resultados
bibliográficos con las observaciones
prácticas.

6.- La bibliografía se anotará de forma


tradicional.

La práctica se entregara al instructor en El alumno entregara la práctica, una


la siguiente sesión una vez que está se semana después de terminada., se
ha terminado. enviara al siguiente correo

ovansandy@hotmail.com

La calificación dependerá de la unidad

En las evaluaciones teóricas, se harán


preguntas básicas, de técnicas usadas
para las diferentes determinaciones, la
práctica contará en un porcentaje de la
calificación de las diferentes unidades.

MATERIAL NECESARIO PARA EL DESARROLLO DE LAS PRÁCTICAS DE CINÉTICA


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QUÍMICA Y BIOLÓGICA

Libreta de laboratorio individual.

Por equipo:

Detergente

Brocha chica para limpiar balanza.

Tres jeringas de 0.5, 1 y 3 mL

Cinta adhesiva Maskintape.

Bandeja grande de plástico cuadrada.

Papel aluminio un rollo.

Un paquete de Kleenpack.

Franela o magitel.

Jabón de tocador.

Jabón corta grasa.

Escobillón para matraces de 250 mL

Escobillón para tubos 13 x100


DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

INSTITUTO TECNOL
TECNOLÓGICO DE TUXTLA GUTIÉRREZ
RREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUÍMICA

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA

PROPUESTA PR
PRÁCTICA. No 1

ESTUDIO CINÉTICO DE LA REACCIÓN DE OXIDACIÓN


CIÓN DEL
YODURO DE POTASIO COCONN PERSULFATO DE SODIO
SODI

Objetivo: Determinar la ecuación de la velocidad, el orden de reacción y


la constante de velocidad de la reacción de oxidación del yoduro de
potasio con persulfato de sodio
sodio.

I.- GENERALIDADES:
La cinética química es el estudio de la velocidad y del mecanismo de reacción por medio de los
cuales una especie química
uímica se transforma en otra. La velocidad es la masa, en moles, de un
producto formado o de un reactante consumido por unidad de tiempo.

La palabra mecanismo indica todos los procesos individuales colisiónales o elementales en los que
intervienen moléculas, átomoss radicales o iones, que se verifican simultánea o consecutivamente,
produciendo la velocidad total observada. Se entiende también que el mecanismo de una reacción
debe proporcionar una idea estereoquímica detallada de cada etapa a medida que se verifica.
v

La velocidad de una reacción química es aquélla a la que llass concentraciones de las sustancias
sust

reaccionantes varían con el tiempo, es decir, , donde C es la concentración del


d reactivo y
t el tiempo. El signo menos usado indica que la concentración disminuye con el tiempo. tiempo Esta
dependencia de las sustancias que reaccionan viene dada por la ley de acción de masas, que se
expresa de la siguiente forma:: la velocidad de una rreacción en cada instante ess proporcional a la
concentración de los reactivos con cada conc
concentración elevada all coeficiente estequiométrico de
las moléculas de cada especie que parti
participan en la reacción.

Los factores que influyen en la velocidad de reacción son los siguientes:

Estado físico de los reactivos: Las reacciones son más rápidas si los reactivos son gaseosos o
están en disolución.
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Concentración de los reactivos: La velocidad de la reacción se incrementa al aumentar la


concentración de los reactivos, ya que aumenta el número de choques entre ellos.

Temperatura: Un incremento de la temperatura provoca un incremento en la energía cinética de las


moléculas, lo que hace que sea mayor el número de moléculas que alcanza la energía de
activación.

Catalizadores: Los catalizadores cambian la energía de activación de una determinada reacción, y


por lo tanto varían la velocidad de reacción.

Para definir la ecuación de velocidad se utiliza el término orden de reacción, que significa la suma
de todos los exponentes al que se encuentran elevadas las concentraciones en la ecuación de
velocidad. Debe hacerse una distinción entre el número de moléculas que participan en una
reacción o el grado molecular, es decir, el número de moléculas comprendidas en la etapa
conducente a la reacción, y el orden de ésta. Según la primera, las reacciones son unimoleculares,
bimoleculares, etc., dependiendo de si una, dos o más moléculas están involucradas en la
velocidad de la etapa determinante. Por otra parte, el término orden de reacción se aplica a la
dependencia de la velocidad observada con las concentraciones de los reactivos.

II.- FUNDAMENTO DE LA REACCIÓN:

III.- MATERIALES Y REACTIVOS:

Material y Equipo:

Matraces Erlenmeyer de 125 mL.

Pipeta volumétrica de 5 mL.

Matraces aforado de 50 mL.

Vasos de precipitado de 100 mL.

Bureta de 25 mL.

Pinza para bureta.

Soporte universal.

Termómetro.

Pipeta graduada de 1 mL.

Pipeta graduada de 10 mL.

Pizeta.

Espátula.
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Vidrio de reloj.

Varilla de vidrio.

Balanza analítica.

REACTIVOS:

Persulfato de potasio 0.1 M.

Tiosulfato de sodio 0.01 M.

Yoduro de potasio 0.2 M.

Almidón al 1%.
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PRACTICA 1.-

ESTUDIO CINÉTICO DE LA REACCIÓN DE OXIDACIÓN DE YODURO DE POTASIO CON


PERSULFATO DE SODIO

El catedrático: Expondrá las bases teóricas para el desarrollo experimental, organizará el trabajo
con los alumnos para el desarrollo de la práctica.

El alumno:

Previo a la práctica entregará un diagrama de flujo donde describa cada uno de los pasos que
realizará en el laboratorio para lograr el objetivo.

I.- ACTIVIDADES PROPUESTAS:

a.- Preparar las siguientes soluciones:

• Persulfato de potasio 0.1 M

• Tiosulfato de sodio 0.01 M

• Yoduro de potasio 0.2 M

• Almidón al 1%

II.- METODOLOGÍA:

a.- Medir con una pipeta volumétrica 50 mL de yoduro de potasio 0.2 M y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL

b.- Colocar el mismo volumen, ahora de persulfato de potasio 0.1 M en un matraz Erlenmeyer de
125 mL.

c.- Agregar el yoduro de potasio al persulfato de potasio y mezclar muy bien el sistema. Al
momento de mezclar registrar el tiempo.

d.- Inmediatamente tomar una muestra de 10 mL de la mezcla anterior y transferirlo en un matraz


Erlenmeyer de 125 mL.

e.- Adicionar a la muestra anterior 1 mL de almidón al 1%

f.- Titular rápidamente el yodo liberado con la solución de tiosulfato de sodio 0.1 M

g.- Tomar 5 muestras más de 10 mL cada una a intervalos de 10 min, de la mezcla de yoduro de
potasio y persulfato de potasio (inciso d). Medir la temperatura de reacción y anotarlo. Repetir para
cada muestra tomada, los procedimientos del inciso f y g.
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III.- RESULTADOS:

Completar las siguientes tablas con los resultados generados en la práctica.

Tiempo (minutos) Tiosulfato de sodio


Temperatura °C
(mL gastados)

Relación de número de moles

2KI K2S2O8 I2 2K2SO4

Moles iníciales

Moles que reaccionan

Moles producidos

Moles en equilibrio
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TIEMPO Vg (mL) [I2] n I2 [KI] 0.2 M [K2S2O8] 0.1 M


(min)

10

20

30

40

Determinar el orden de la reacción gráficamente.

IV.- CUESTIONARIO:

1. ¿Qué tipo de función se obtiene cuando se hace la gráfica del inverso de la concentración
de persulfato de potasio contra tiempo de reacción?

2. ¿Qué indica la ordenada al origen de la gráfica?

3. Defina con sus propias palabras los términos de: velocidad y mecanismo de reacción

4. Explicar en qué consiste la ley de acción de masas.

5. ¿Cuál es la importancia de la cinética química en el análisis de un sistema reaccionante y


la aplicación a la ingeniería química?

6. ¿Cómo se comprueba que la reacción es de segundo orden y que significa esto?

V.- DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN DE RESULTADOS:

VI.- BIBLIOGRAFÍA:
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VII.- APENDICE:

VIII.- CÁLCULOS:
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INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TUXTLA GUTIÉRREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA

PROPUESTA PRÁCTICA. No 2

ESTUDIO CINÉTICO DE LA REACCIÓN DE OXIDACIÓN DEL


YODURO DE POTASIO CON PERSULFATO DE SODIO EN
PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

Objetivo: Determinar la ecuación de la velocidad, el orden de reacción y


la constante de velocidad de la reacción de oxidación del yoduro de
potasio con persulfato de sodio en presencia del sulfato ferroso como
catalizador.

I.- GENERALIDADES:
La termodinámica aplicada a reacciones químicas estudia los sistemas cuando ya se encuentra en
estado de equilibrio; sin embargo, cuando se estudia la velocidad de una reacción y su mecanismo,
generalmente se realizan cálculos antes de llegar a este estado, por lo que es necesario apoyarse
en estudios fisicoquímicos, además de la termodinámica.

La cinética química es una rama de la fisicoquímica que estudia la colisión de las moléculas
reaccionantes, la velocidad de la reacción y sus mecanismos considerando la termodinámica de la
reacción.

Las reacciones son aceleradas o retardadas por un catalizador, el cuál es una sustancia que se
adiciona al sistema de reacción. Un catalizador tiene la particularidad de ser recuperado al final de
la reacción química y no influye en la reacción global.

El poder de un catalizador es su capacidad para cambiar la velocidad, a la cual una reacción


determinada por las relaciones de energía libre tiene lugar. Una reacción es factible de realizar si
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su variación de energía libre es negativa. No obstante aún en este caso, la velocidad de


transformación es a veces tan lenta que parece como si los reactivos fuesen inertes.

En tales casos, el fin del catalizador es acelerar la reacción y permitir una aproximación más rápida
al equilibrio. Por este motivo, desde el punto de vista termodinámico, la catálisis no introduce
ninguna complicación en las relaciones energéticas del sistema. La energía libre, el calor de
reacción y la entropía de una reacción siguen siendo iguales tanto en el caso de que aquella
proceda normalmente o sea acelerada por un catalizador.

Un catalizador tampoco modifica la constante de equilibrio. Por lo tanto, si se altera la reacción


directa debe alterarse también la del sentido contrario.

La catálisis puede ser homogénea o heterogénea según que el catalizador forme una sola fase con
los reactivos o constituya una fase separada.

II.- FUNDAMENTO DE LA REACCIÓN:

III.- MATERIALES Y REACTIVOS:

Material y Equipo:

Matraces Erlenmeyer de 125 mL.

Pipeta volumétrica de 5 mL.

Matraces aforado de 50 mL.

Vasos de precipitado de 100 mL.

Bureta de 25 mL.

Pinza para bureta.

Soporte universal.

Termómetro.

Pipeta graduada de 1 mL.

Pipeta graduada de 10 mL.

Pizeta.

Espátula.

Vidrio de reloj.

Varilla de vidrio.
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Balanza analítica.

REACTIVOS:

Persulfato de potasio 0.1 M.

Tiosulfato de sodio 0.01 M.

Yoduro de potasio 0.2 M.

Almidón al 1%.

Sulfato ferroso 0.005 M


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PRACTICA 2.-

ESTUDIO CINÉTICO DE LA REACCIÓN DE OXIDACIÓN DEL YODURO DE POTASIO CON


PERSULFATO DE SODIO EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

El catedrático: Expondrá las bases teóricas para el desarrollo experimental, organizará el trabajo
con los alumnos para el desarrollo de la práctica.

El alumno:

Previo a la práctica entregará un diagrama de flujo donde describa cada uno de los pasos que
realizará en el laboratorio para lograr el objetivo.

I.- ACTIVIDADES PROPUESTAS:

a.- Preparar las siguientes soluciones:

• Persulfato de potasio 0.1 M

• Tiosulfato de sodio 0.01 M

• Yoduro de potasio 0.2 M

• Almidón al 1%

• Sulfato ferroso 0.005 M

II.- METODOLOGÍA:

a.- Medir con una pipeta volumétrica 50 mL de yoduro de potasio 0.2 M y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL

b.- Colocar el mismo volumen, ahora de persulfato de potasio 0.1 M en un matraz Erlenmeyer de
125 mL.

c.- Agregar el yoduro de potasio al persulfato de potasio y mezclar muy bien el sistema. Al
momento de mezclar registrar el tiempo.

d.- Inmediatamente tomar una muestra de 10 mL de la mezcla anterior y transferirlo en un matraz


Erlenmeyer de 125 mL.

e.- Adicionar a la muestra anterior, 2 mL del catalizador, en este caso el sulfato ferroso 0.005 M.

f.- Adicionar a la muestra anterior 1 mL de almidón al 1%.

g.- Titular rápidamente el yodo liberado con la solución de tiosulfato de sodio 0.1 M

h.- Tomar 5 muestras más de 10 mL, cada una a intervalos de 10 min, de la mezcla de yoduro de
potasio y persulfato de potasio (inciso d). Medir la temperatura de reacción y anotarlo. A cada
muestra tomada de cada intervalo de tiempo aumentar gradualmente (2 mL) el volumen de
catalizador adicionado. Repetir para cada muestra tomada, los procedimientos de los incisos f y g.
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III.- RESULTADOS:

Completar las siguientes tablas con los resultados generados en la práctica.

Tiempo (minutos) Tiosulfato de sodio


Temperatura °C
(mL gastados)

Relación de número de moles

2KI K2S2O8 I2 2K2SO4

Moles iníciales

Moles que reaccionan

Moles producidos

Moles en equilibrio
DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

TIEMPO Vg (mL) [I2] n I2 [KI] 0.2 M [K2S2O8] 0.1 M


(min)

10

20

30

40

Determinar el orden de la reacción gráficamente.

IV.- CUESTIONARIO:

1. ¿Qué tipo de función se obtiene cuando se hace la gráfica del inverso de la concentración
de persulfato de potasio contra tiempo de reacción?

2. ¿Qué indica la ordenada al origen de la gráfica?

3. ¿Cómo se comprueba que la reacción es de segundo orden y que significa esto?

V.- DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN DE RESULTADOS:

VI.- BIBLIOGRAFÍA:

VII.- APENDICE:

VIII.- CÁLCULOS:
DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TUXTLA GUTIÉRREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA

PROPUESTA PRÁCTICA. No 3

ESTUDIO CINÉTICO DE LA ENZIMA INVERTASA

Objetivo: Determinar los parámetros cinéticos y el efecto de la


temperatura, pH, concentración de sustrato y de la enzima sobre la
actividad enzimática de la invertasa.

I.- GENERALIDADES:
Las enzimas son macromoléculas de naturaleza proteica con la capacidad de manipular otras
moléculas, denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro catalítico de la enzima
que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados
mecanismo enzimático. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran
en tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se les denomina reacciones
enzimáticas.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (∆ ǂ )
para una reacción, así se acelera substancialmente la tasa de la reacción. Las enzimas no alteran
el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio
de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se
produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho
más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada. Al igual que ocurre con otros
catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que ellas catalizan, ni alteran su
equilibrio químico. Al contrario que las reacciones químicas, las enzimas se saturan. Esto significa
que a mayor cantidad de sustrato, mayor número de centros catalíticos estarán ocupados, lo que
incrementará la eficiencia de la reacción, hasta el momento en que todos los sitios posibles estén
ocupados. En ese momento se habrá alcanzado el punto de saturación de la enzima y, aunque se
añada más sustrato, no aumentará más la eficiencia.
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II.- FUNDAMENTO DE LA REACCIÓN:

III.- MATERIALES Y REACTIVOS:

Material y Equipo:

Matraces Erlenmeyer de 125 mL.

Pipeta volumétrica de 5 mL.

Matraces aforado de 50 mL.

Vasos de precipitado de 100 mL.

Bureta de 25 mL.

Pinza para bureta.

Soporte universal.

Termómetro.

Pipeta graduada de 1 mL.

Pipeta graduada de 10 mL.

Pizeta.

Espátula.

Vidrio de reloj.

Varilla de vidrio.

Balanza analítica.

REACTIVOS:

Persulfato de potasio 0.1 M.

Tiosulfato de sodio 0.01 M.

Yoduro de potasio 0.2 M.

Almidón al 1%.

Sulfato ferroso 0.005 M


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PRACTICA 3.-

ESTUDIO CINÉTICO DE LA ENZIMA INVERTASA

El catedrático: Expondrá las bases teóricas para el desarrollo experimental, organizará el trabajo
con los alumnos para el desarrollo de la práctica.

El alumno:

Previo a la práctica entregará un diagrama de flujo donde describa cada uno de los pasos que
realizará en el laboratorio para lograr el objetivo.

I.- ACTIVIDADES PROPUESTAS:

a.- Preparar las siguientes soluciones:

• Solución de DNS

• Solución de sacarosa 0.3 M

• Regulador de acetato 0.05 M pH 4.7

• Solución de glucosa 0.005 M

• Solución de fructosa 0.005 M

• Solución de invertasa (revisar las tablas para la concentración)

II.- METODOLOGÍA:

Elaboración de la curva patrón.

Se prepara la solución de DNS total a utilizar.


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1) Etiquetar ocho tubos y se van preparando de la forma indicada en la siguiente tabla.

Adición de: T P1 P2 P3 P4 P5 P6 T2

Glucosa 0.005 M + 0 ml 0.1 0.2 0.4 0.8 1.2 1.5 0.0


Fructosa 0.005 M ml ml ml ml ml ml

Sacarosa 0.3 M 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
ml ml ml ml ml ml ml ml

Regulador de acetatos 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.05 M  4.54 ml ml ml ml ml ml ml ml

Agua destilada 1.5 1.4 1.3 1.1 0.7 0.3 0.0 2.5
ml ml ml ml ml ml ml ml

DNS 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0


ml ml ml ml ml ml ml ml

Desarrollo de color
Ebullición en baño 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min
maría

Enfriar y diluir con


agua 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
destilada

2) Se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 540-550 nm.


3) Se elabora una gráfica cuyo “eje x” pertenecerá a la [AR en mg/ml] y el “eje y” indicará la
lectura en absorbancia.

Adición de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 T2

Sacarosa 0.3 M 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Regulador de acetatos 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml


0.05 M  4.7

Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

5 mins. De Preincubación 4°C 25°C 37°C 50°C 75°C 80°C 37°C


adiferentes temperaturas

Invertasa [6.336 UAE/ml] 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 2ml de DNS
+0.5 ml de E

5 min de incubación 4°C 25°C 37°C 50°C 75°C 80°C 37°C

DNS 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 0.0 ml

Desarrollo de color 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min


Ebullición en baño maría

Enfriar y diluir con agua 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml


Destilada
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2) Se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 540-550 nm.

Metodología parte 2. Efecto del .

1) Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparación de la siguiente manera :

Adición de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 T

Sacarosa 0.3 M 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Regulador de citratos  2.5  3.5  4.5  4.95  6.5  7  4.95


0.2 M

Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

5 min. De Incubación a temperatura ambiente

Invertasa [6.36 UAE/ml] 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 0.5 ml 2ml de DNS
ml + 0.5 ml de E

5 min. De incubación a temperatura ambiente

Inactivar con DNS 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 2.0 ml 0.0 ml
ml

Desarrollo de color 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5min


Ebullición en baño maría

Enfriar y diluir con agua 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml


Destilada

2) Se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 540-550 nm.

Metodología parte 3. Efecto de la concentración de sustrato.

1. Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparación de la siguiente manera:

Adición de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 T

Sacarosa 0.3 M 2.0 ml 1.5 ml 1.0 ml 0.5 ml 0.25 ml 1.0 ml 0.05 ml 1.0 ml
(ml)

Regulador de acetatos 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
0.5 M Ph 4.72

Agua destilada 0.0 ml 0.5 ml 1.0 ml 1.5 ml 1.75 ml 1.9 ml 1.95 ml 1.0 ml

5 mins. De preincubación a temperatura ambiente

Invertasa 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 2ml de


[2.7984 UAE/ml] DNS
+ 0.5 ml
de E
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5 min. De incubación a temperatura ambiente

Inactivar con 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 0.0 ml
DNS

Desarrollo de calor. Hasta ebullición en baño de maría

Enfriar y diluir 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
con agua
destilada

3) Se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 540-550 nm.

Metodología parte 4. Efecto de la concentración de la enzima.

1) Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparación de la siguiente manera:

Adición de: P1 P2 P3 P4 P5 T

Sacarosa 0.3 M 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml


(ml)

Regulador de 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml


acetatos 0.5 M  4.7

Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Preincubación 5 minutos

Invertasa 0.5 ml 0.0528 0.0264 0.0132 0.0066 0.0033 2 ml de DNS


mgE/ml mgE/ml mgE/ml mgE/ml mgE/ml +0.5 ml de E

Inactivar con 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 0.0 ml


DNS

Desarrollo de En baño María hasta ebullición


calor

Enfriar y diluir 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
con agua
destilada

2. Se realiza la lectura en el espectrofotómetro a 450-550 nm.


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Preparación del reactivo DNS.

Reactivo de DNS. Acido 3,5-dinitrosalicílico (C7H4N2O7; PM 228,1) al 0,1% (p/v), tartrato sódico
potásico [NaK(COO)2(CHOH)2.4H2O; PM 282,23] al 30% (p/v) en NaOH (PM 40) 0,4 M. Disolver 1
g de ácido 3,5-dinitrosalicílico y 300 g de tartrato sódico potásico en 200 ml de hidróxido sódico 2
M (16 g de NaOH en 200 ml de agua destilada) y diluir hasta 1000 ml con agua destilada. La
disolución obtenida puede utilizarse durante 2 meses si se guarda en el refrigerador.

III.- RESULTADOS:

Elaboración de la curva patrón.

Los resultados obtenidos para la realización de la curva patrón son los siguientes:

Completar las siguientes tablas con los resultados generados en la práctica.

TUBOS [A] (mg/ml) ABSORBANCIA

P1

P2

P3

P4

P5

P6

Parte 1. Efecto de la temperatura en la velocidad de reacción.


DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

Se completa la tabla que presenta las absorbancias, temperaturas y velocidades de reacción.

Tubo Temperatura Abs Vrxn


(°C) (λ= 540 nm) (mgAR/mgE*min)

1 4

2 25

3 37

4 50

5 75

6 80

Parte 2. Efecto del  en la velocidad de la reacción.

TUBOS  absorbancia Concentración Vrxn(mg


azucares A.R/mg E min)
reductores
(mg/ml)

T1 2,5

T2 3,5

T3 4,5

T4 5

T5 6,5

T6 7
DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

TESTIGO 5

Parte 3. Efecto del sustrato.

Las velocidades de reacción obtenidas con diferentes concentraciones de sustrato se muestran en


el siguiente cuadro:

Concentración de Absorbancia 540 nm Concentración de Velocidad de reacción


sacarosa (mg/ml) Azucares Reductores (mgAR/mgE(min))
(mg/ml)

20,53

15,4

10,27

5,1

2,57

1,03

Parte 4. Efecto de la concentración de la enzima.

La siguiente tabla muestra las velocidades obtenidas a diferentes concentraciones de enzima.

Concentración de la Absorbancia Concentración de Vrxn


Enzima lectura Azucares mg /ml(min)
(mg/ml) 540nm Reductores (mg/ml)

0,0528

0,0256
DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACÓN

0,0132

0,0066

0,0033

Determinar el orden de la reacción gráficamente.

IV.- CUESTIONARIO:

1. ¿Qué es catálisis enzimática?

2. ¿Desde el punto de vista bioquímico como influencia el pH sobre la actividad enzimática?

3. Desde el punto de vista bioquímico como influencia la temperatura sobre la actividad


enzimática?

4. Que indica el parámetro KM?

5. Deduce la ecuación de Michaelis-Menten?

V.- DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN DE RESULTADOS:

VI.- BIBLIOGRAFÍA:

VII.- APENDICE:

VIII.- CÁLCULOS:

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