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PROTOCOLO PARA USO DE LA CENTRIFUGA Versión: 01

PROTOCOLO PARA USO DE LA CENTRIFUGA

Elaboró: Omayra Marriaga Revisó: Jacqueline Saavedra Aprobó: Jacqueline Saavedra

Cargo: Asistente de Calidad Cargo: Directora Administrativa Cargo: Directora Administrativa
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1. OBJETIVO
Identificar y conocer las características y condiciones de operación de la centrífuga.

2. ALCANCE
Este protocolo aplica a todo el personal que interviene en el uso y manipulación de la
centrifuga.

3. DEFINICIONES
Tapa: Impide el acceso a las muestras, mientras estas están en movimiento. En la mayoría de
modelos funciona en forma automática, de modo que no pueda ser
abierta mientras la centrífuga está en funcionamiento.

Cámara o gabinete: Es el espacio físico donde se realiza el proceso de centrifugación. Dentro

de esta gira el rotor (araña).

Base: Está construida generalmente de materiales pesados, y con sistemas de fijación a las
superficies, de modo que brinda estabilidad al equipo. Generalmente aquí están ubicados los
controles.

Interruptor de encendido: Permite controlar el suministro de energía al

equipo, a modo de encenderlo, apagarlo, y generalmente incluye
selección de modo de operación.

Control de Tiempo y Velocidad: Permite controlar el tiempo y la velocidad de centrifugación.

Generalmente también permite visualizar el tiempo transcurrido o pendiente para que finalice
un proceso seleccionado.
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El rotor: También conocido como araña, es la parte en la cual se colocan las portas muestras.
Para su conservación es importante seguir las instrucciones de cargado de la centrífuga.

4. INTRODUCCIÓN
Funcionamiento
El principio físico en que se basa el funcionamiento de la Centrifugadora se puede ilustrar
examinando el proceso de sedimentación de un puñado de arena introducido en un recipiente
con agua. Al agitar la mezcla de agua y arena, la fuerza de atracción que ejerce la tierra actúa
sobre los granos de arena con más intensidad que sobre las partículas de agua, porque la masa
de aquellas es mayor. Los granos de arena son atraídos hacia el fondo de la vasija y cuando,
después de transcurrido cierto tiempo, el sistema llega a alcanzar el estado de reposo, se
pueden distinguir en ellas dos capas bien distintas, a saber, una inferior de arena y otra superior
de agua que la cubre.

Este proceso de separación se puede realizar también en una Centrifuga, un cuyo caso el efecto
se acelera, al actuar sobre las partículas una fuerza centrífuga que es superior a la fuerza de
atracción gravitatoria. En la Centrifugada, la mezcla a separar se hace girar a gran velocidad en
un tambor alrededor de un eje vertical. La magnitud de la fuerza centrífuga que va dirigida desde
el eje de giro hacia la periferia del tambor, depende principalmente del número de revoluciones
de éste último.

Los tambores son accionados generalmente por un Motor eléctrico a través de una transmisión
que impulsa el árbol de accionamiento fijo al cuerpo del tambor.

CLASIFICACIÓN
Centrifugas de baja velocidad o clínicas: son útiles para partículas grandes como células,
precipitados de sales insolubles.

Centrifugas de alta velocidad: son útiles en la separación de fracciones celulares insuficientes

para la separación de ribosomas, virus, macromoléculas.
Ultracentrífugas: son de 2 tipos.

 Analíticas: obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación

 Preparativas: aislamiento de partículas de bajo S (coeficiente de sedimentación)
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TIPOS DE CENTRIFUGADORAS
Centrifuga médica
Existen varios tipos en dependencia de la aplicación que se le dé y el tipo de mezcla que se
desea separar.
Centrífuga de sedimentación: Esta contiene un cilindro o un cono de pared sólida que gira
alrededor de un eje horizontal o vertical. Por fuerza centrífuga, una capa anular de líquido de
espesor fijo se sostiene contra la pared. A causa de que esta fuerza es bastante grande
comparada con la de la gravedad, la superficie del líquido se encuentra esencialmente paralela
al eje de rotación, independientemente de la orientación de la unidad. Las fases densas "se
hunden" hacia fuera y las fases menos densas se levantan hacia dentro. Las partículas pesadas
se acumulan sobre la pared y deben retirarse continua y periódicamente.
Centrífugas de filtro: Estas operan como el tambor de rotación de una lavadora doméstica. La
pared de la canasta está perforada y cubierta con un medio filtrante, como una tela o una rejilla
fina, el líquido pasa a través de la pared impelido por la fuerza centrífuga dejando una torta de
sólidos sobre el medio filtrante. La rapidez de filtración se incrementa con esta fuerza y con la
permeabilidad de la torta sólida. Algunos sólidos compresibles no se filtran bien en una
centrífuga a causa de la deformación que sufren las partículas por la acción de la fuerza
centrífuga, por lo que la permeabilidad de la torta se ve reducida considerablemente. La cantidad
de líquido que se adhiere a los sólidos después que éstos se han centrifugado depende también
de la fuerza centrífuga aplicada; en general, el líquido retenido es considerablemente menor
que el que queda en la torta que producen otros tipos de filtros.

TIPOS DE CENTRIFUGACIÓN
Centrifugación Diferencial: Es el método más común de separación. En este método el tubo
de centrifuga se llena con una mezcla uniforme. Tras la centrifugación se obtienen dos
fracciones: un tubo que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no
sedimentado. El método es bastante inespecífico y no se puede saber si la partícula buscada
quedara en el sobrenadante, en el tubo o repartido entre ambos; sin embargo es una técnica
muy útil para aislamiento de organeras subcelulares.
Centrifugación en Gradiente de Concentración: este método es algo más complicado que
la centrifugación diferencial. La técnica no solo permite la separación de varios sino de todos
los componentes de la muestra, también permite realizar medidas analíticas. Este método
implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la
inferior.

Existen 2 variaciones dentro de la centrifugación en gradiente de densidad:

Centrifugación de equilibrio en gradiente o isopicnica: esta técnica se emplea para
separar partículas similares en tamaños pero distintas en densidad. Puestos que las proteínas
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poseen casi la misma densidad, este método no suele utilizar para su separación, sin
embargo, en situaciones donde intervienen diferentes densidades, la centrifugación isopicnica
es el método adecuado.
Centrifugación zonal: la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente
de densidad preformado. Bajo fuerza centrífuga las partículas comenzaran a sedimentar a
través del gradiente, moviéndose cada partícula a diferentes velocidades dependiendo de su
masa.
PARTES DE UNA CENTRIFUGADORA
Sus componentes son:

Rotor: Dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos.

Existen varios tipos:
Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla) que, al girar el rotor, se
coloca en disposición perpendicular al eje de giro. Así pues los tubos siempre giran situados
perpendicularmente al eje de giro.
Rotor de ángulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El
caso extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sitúa paralelo al eje de giro.
Este tipo de rotores es típico de ultracentrífugas y se emplea en separaciones de moléculas en
gradientes de densidad autogenerados (por ej. de cloruro de cesio).

Motor: Es eléctrico y capaz de girar a docenas de miles de veces por minuto. Permite que la
técnica sea ejecutada.
Cámara de Vacío: Es una pieza cóncava que sirve para contener dentro de ella el rotor y su
respectivo soporte que lo une o conecta con el motor.
Control de Velocidad, Tiempo y Temperatura: Regula la velocidad del dispositivo al igual
que el dispositivo regulador de la temperatura necesaria para la centrifugación de las
muestras.

5. DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES

5.1 Instrucciones para centrifugar
1. Levante la tapa de la centrifuga y verifique que todos los porta muestras estén ajustados
y vacíos.
2. Compare el peso de las muestras antes de llevarlas al porta muestra, organizándolos de
acuerdo a su similitud para equilibrar el rotor de la centrifuga.
3. cierre la centrifuga y ajuste la tapa.
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4. Ajuste los parámetros de centrifugación requeridos para el procedimiento, gire el botón

del tiempo para marcar el tiempo requerido, accione el interruptor de encendido a la posición
ON para poner en marcha el equipo. Cuando termine los minutos de centrifugación
requeridos, la centrifuga automáticamente se detiene. No se debe levantar la tapa cuando
esta se encuentre encendida.
5. Verifique la centrifuga haya terminado su ciclo, levante la tapa y retire los tubos.
6. Cierra la centrifuga y verifique este apagada y desconectada.

5.2 Cargado de la centrifuga

El cargar la centrífuga en una forma adecuada es muy importante para el funcionamiento
correcto de la misma, y su preservación. Un procedimiento incorrecto de cargado, ocasiona
que la centrífuga vibre durante el proceso de centrifugación, lo que ocasiona que el rotor
sufra daños que pueden llevar a su sustitución.
Un procedimiento de cargado correcto, implica el colocar las cargas en el rotor en forma
balanceada. Las centrífugas están diseñadas para obtener un balance cuando están en
movimiento. Para esto es necesario cumplir los siguientes
requisitos:

a) Colocar las cargas de modo que las cargas que tienen la misma masa o peso queden
colocadas de forma opuesta en el rotor. Si tiene un número impar de muestras para ser
cargadas, busque otra muestra de igual peso a modo de siempre formar pares opuestos de
igual peso; nunca coloque un número impar de muestras dentro de la centrífuga. Utilice la
balanza para estar seguro de la igualdad de los pesos.

b) Además de tener la misma masa (peso), deben tener el mismo centro

de gravedad, es decir: no coloque tubos y recipientes como pares
contrapuestos, que tengan diferente forma, tamaño, espesor, etc.

c) Utilice la centrífuga colocando todos los accesorios en el rotor, ya que

estos equipos han sido diseñados para trabajar con estos.

d) Utilice el rotor y accesorios originales del equipo. Las piezas no

originales pueden producir un desbalance y acortamiento de la vida
útil del equipo.

e) Complemente estas recomendaciones con las instrucciones del fabricante.

5.3 Precauciones que se asocian al uso de la centrifuga:

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Los tubos utilizados pueden romperse, la rotura es más probable que ocurra si las
instrucciones del fabricante no son seguidas, tales como el uso de tubos de tamaño no
correcto y la no utilización de amortiguadores.

Los rotores pueden descolocarse o fallar, posiblemente por la pérdida de una tuerca de
sujeción o el emplazamiento de un tubo desequilibrado; el fallo del rotor o de algún tubo
puede resultar sobre el operador en una exposición a riesgos físicos o infecciosos.

El operador puede dañarse mientras intenta disminuir o parar la velocidad del rotor con la
mano. Por este motivo, la tapa del equipo no debería nunca ser abierta mientras el rotor
está girando. Y si además existe una tapa de protección interna, usarla.

También existen riesgos cuando la centrífuga no esté funcionando; por ejemplo, cristales
rotos, posiblemente contaminados con sangre, que pueden ser encontrados dentro de la
centrífuga durante la limpieza o la inspección y mantenimiento preventivo.

Se debe cuidar que estén presentes las instrucciones de uso y mantenimiento, realizar la
instalación y el montaje con las debidas medidas que garanticen la seguridad. Como
mínimo las unidades deberían tener una tapa con enganche que prevenga a la centrífuga
de ser abierta en el caso de un fallo mientras el rotor está dando vueltas. Una seguridad de
bloqueo, la cual permite a la tapa ser abierta sólo después que el rotor haya
parado o alcanzado una velocidad muy baja, es preferible, que todas las nuevas unidades
tengan esta característica.

6. BIBLIOGRAFÍA
Tomado de:
http://www.javeriana.edu.co/documents/17504/4327976/Instituto+de+Errores+Innatos+del+Met
abolismo+-+Instructivo+Uso+de+centr%C3%ADfuga+Damon/f9c1a220-547d-44ff-95f6-
5b30f2c73d55?version=1.1
Tomado de: https://www.ecured.cu/Centr%C3%ADfuga