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Introducción
Las infecciones de tracto urinario (ITUs) son una de las principales causas de muerte a
nivel mundial, estas son causadas por microorganismos patógenos que logran invadir y colonizar
alguna región de este aparato, ya sean las vías bajas (uretra, vejiga y próstata) o las altas
(riñones). El desarrollo de la infección puede ser sintomático o asintomático, con lo que se
dificulta su detección y por lo tanto el inicio de un tratamiento adecuado. Escherichia coli
uropatógena (UPEC) es responsable de más del 80% de las ITUs. La anatomía del aparato
genitourinario femenino es un factor que influye en que estas infecciones se desarrollen
mayormente en mujeres que, en hombres, entre el 16.8% y el 46% de las ITUs son observadas en
pacientes con anomalías del tracto urinario.
E. coli es un bacilo Gramnegativa que se encuentra en el tracto gastrointestinal de
humanos y animales de sangre caliente. Es la bacteria anaerobia facultativa comensal más
abundante de la microbiota intestinal; así mismo, es uno de los organismos patógenos más
relevantes en el hombre, tanto en la producción de infecciones gastrointestinales como de otros
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Los antibióticos más usados para tratar las infecciones de vías urinarias son el
trimetoprim, la amoxicilina y la ampicilina. También una clase de fármacos llamados quinolonas
han sido aprobados en los últimos años para el tratamiento de las infecciones del tracto urinario,
como son la ofloxacina, ciprofloxacina y trovafloxina.
La resistencia antimicrobiana es un problema continuo y en aumento. Se hace aun mayor
cuando un microorganismo presenta más de un mecanismo de resistencia y cuando tiene la
facultad de transmitirlo a otras bacterias de su misma o diferente especie. Los fenómenos de
resistencia antimicrobiana son variados, destacando entre ellos cuatro mecanismos principales: 1)
Enzimas hidrolíticas, 2) Modificación del sitio activo, 3) Disminución de permeabilidad de la
pared celular al ingreso del antimicrobiano y 4) Bombas de expulsión del antimicrobiano.
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Objetivo
Analizar la relación entre el grupo filogenético y la producción de β-lactamasas de
espectro extendido en E. coli uropatógena.
Metodología
Se analizaron cepas de E. coli, previamente aisladas de pacientes con ITUs, los cuales
fueron captados en la clínica del ISSTE de Chilpancingo de los Bravo durante en el periodo
2013-2014. Las cepas fueron conservadas en congelación con glicerol a -80°C. Para ser utilizadas
fueron nuevamente sembradas en agar por estría cruzada e incubadas a 35°C durante 24 horas.
Prueba de BLEE (doble disco combinado). Se realizó con una suspensión al 0.5
Macfarlan a partir de un cultivo fresco (de 18 a 24 horas), para esto se tomó una asada de 2 a 3
colonias cultivadas en placas de agar MacConkey, poco a poco las colonias se disolvieron en
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solución salina fisiológica contenidos en tubos de 13x100mm, esto se realizó hasta alcanzar la
turbidez parecida al patrón de 0.5 de Macfarlan, lista la suspensión bacteriana se introdujo un
hisopo estéril, se escurrió muy bien por las paredes del tubo y se procedió a sembrar por estría
masiva en una caja de agar Mueller Hinton, la diseminación del inóculo en la caja se hizo tres
veces para lograr una siembra homogénea en el agar. Posteriormente se colocaron los discos con
antibióticos Ceftazidima (CAZ), CAZ + Ácido clavulámico, Cefotoxima (CTX), CTX + Ácido
clavulámico (AC), cada uno a distancia de 30 milímetros, figura 1.
La prueba se consideró positiva cuando hubo una diferencia de 5mm entre los discos de
CTX, CTX + AC y CAZ, CAZ + AC. Se consideró la prueba negativa cuando los halos de
inhibición fueron iguales. Es importante señalar que para validar la técnica se incluyó un control
positivo (Klepsiella pneumoniae ATCC 700603) y un control negativo (E. coli ATCC 25922).
Identificación del grupo filogenético
A todas las cepas utilizadas en este estudio previamente les realizó extracción de ADN
por choque térmico. Posteriormente se llevó a cabo una PCR cuádruple para identificación del
grupo filogenético. La reacción de PCR estuvo compuesta por 4.5 µl de agua, 2 µl de buffer 10x,
2.5 µl de dNTP´S (10 mM), 0.75 µl de MgCl2 (50 mM), 1 µl de cada oligonuclotido, 0.25 µL de
Taq polimerasa y 2 µl de ADN. Los oligonucleótidos chuA,yjA, TsPE, se trabajó a una
concentración de 20 pmol y los cebadores de Arpa a 40 pmol.
Para confirmar el grupo filogenético se realizó otra reacción de PCR para diferenciar el
grupo C del A y el grupo E del D, para ello se utilizaron diferentes juegos de oligonucleótidos
dirigidos al gen de Arpa y trpA. La PCR cuádruplex y de grupo C se corrieron bajo las siguientes
condiciones: Un ciclo a 94ºC x 4 min, 30 ciclos a 94ºC x5seg, 59ºC x 20 seg, 72ºC x 30 seg y un
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ciclo final de 72ºC x5min. Para la diferenciación entre el grupo E o D solo cambio la temperatura
de alineamiento a 59ºC.
Resultados
Producción de BLEE. En este verano se tuvo la oportunidad de aprender y practicar esta técnica
fenotípica. En la figura 2, se muestran imágenes de las pruebas realizadas. Por un lado, tenemos
una cepa BLEE (-) y otra BLEE (+).
A) B)
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Relación del grupo filogenético con la producción de BLEE. Se buscó la asociación del grupo
filogenético de las cepas causantes de infecciones urinarias con la resistencia a antibióticos
mediada por enzimas BLEE, mediante una prueba estadística. Dando un valor de p= 0.010, lo
cual es estadísticamente significativo.
Tabla 2. Relación del grupo filogenético con la producción de BLEE
Grupo Prueba de BLEE
filogenéticoa n(%) Total
Negativo Positivo
A 1 (2.27) 10(14.29) 11(9.65)
B1 3(6.82) 5(7.14) 8(7.02)
B2 23(52.27) 32(45.71) 55(48.25)
C 5(11.36) 5(7.14) 10(8.77)
D 2(4.55) 3(4.29) 5(4.39)
E 1(2.27) 0(0.00) 1(0.88)
F 4(9.09) 15(21.43) 19(16.67)
Clado I 5(11.36) 0(0.00) 5(4.39)
Total 44(100) 70(100) 114(100)
aValor de p calculado con la prueba exacta de Fisher, p= 0.010 (valor p estadísticamente significativo).
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Conclusiones
Se encontró relación entre el grupo filogenético y la producción de betalactamasas de
espectro extendido en cepas de E. coli uropatógenas.
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El grupo filogenético con mayor prevalencia fue el B2, el cual se ha relacionado con una
mayor expresión de factores de virulencia.
Es importante seguir haciendo investigación sobre los mecanismos de resistencia
expresados en las diferentes bacterias aisladas en la comunidad para con ello informar a
los profesionales de la salud y con esto puedan retomar o emplear nuevas estrategias para
evitar su diseminación.
La prueba de BLEE es una prueba de bajo costo estandarizada que permite determinar la
resistencia a cefalosporina de expectro extendido, con esto los tratamientos con
antibióticos resultarían más exitosos, ahorrando dinero y esfuerzo.
Bibliografía
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