Spektrometri Massa

Elusidasi struktur
bahan alami
Pendahuluan

 Spekrometri massa: menggunakan elektron

dengan energi tinggi untuk memecah
molekul menjadi fragmen2

 Pemisahan dan analisis fragmen untuk

memberikan informasi
 Bobot molekul
 Konfirmasi struktur:
 Fragmentasi
 “Exact mass”
Teori
 Semburan elektron dengan energi tinggi
menyebabkan molekul kehilangan elektron
dan membentuk Kation radikal
 Spesies dengan muatan positif dan satu
elektron tidak bermuatan
H H
- -
H C H + e H C H + 2e
H H
Molecular ion (M+)
m/z = 16
Teori
 Selain itu, elektron dengan energi tinggi
dapat memecah molekul atau kation
radikal menjadi fragmen2
H H
+
H C C H molecular ion (M ) m/z = 30
H H

H H H H
-
H C C H + e + H
H C C
H H H H
m/z = 29

H H
m/z = 15 H C + C H (not detected by MS)
H H
Teori
 Molecular ion (parent ion):
 Kation radikal yang menunjukkan massa
dari molekul asal
H H H
H C H H C C H
H H H
 Umumnya ditemui sebagai massa tertinggi
pada spektrum
 Pengecualian: pada beberapa senyawa
molecular ion tidak terbentuk
Spektrometer massa
 Kation yang terbentuk dipisahkan oleh
defleksi magnetik
Teori
 Hanya kation yang terdeteksi.
 Radikal tidak terlihat” di SM.

 Jumlah defleksi yang teramati tergantung

oleh mass to charge ratio (m/z).
 Hampir semua kation memiliki muatan
+1, sehingga jumlah defleksi yang
teramati umumnya tergantung massa
ion.
Spektra massa

http://ionsource.com/tutorial/spectut/spec2.htm 8
Spektrum massa: etanol
base peak
M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)
Isotop
 Sebagian besar elemen muncul sebagai
campuran isotop.
 Keberadaan isotop yang lebih berat
dalam jumlah yang signifikan
menyebabkan puncak2 dengan
kelimpahan lebih kecil dengan massa
yang lebih besar dari puncak “parent
ion”
 M+1
 M+2
Kelimpahan Isotop

81Br

=>
Exercises

Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:

A practical Guide, Academic Press, USA
Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:
A practical Guide, Academic Press, USA
Kitson et al., 1996, Gas Chromatography and Mass Sectrometry:
A practical Guide, Academic Press, USA
 Relative intensities of ions expected for
various combinations of Bromine and Chlorine

Br Br2 Br3 Cl Cl2 Cl3 BrCl Br2Cl BrCl2

M+ 100 51 34 100 100 100 78 45 62
M+2 94 100 100 31 65 95 100 100 100
M+4 47 97 10 31 24 74 45
M+6 31 3 14 6

http://www.chemistry.ccsu.edu/glagovich/teaching/316/ms/brandcl.html
Tips untuk interpretasi spektrum MS
 Identifikasi fragmen ion karakteristik
 Identifikasi kehilangan fragmen dari
molecular ion
 Database/literatur
Rule of Thirteen
 Untuk mengidentifikasi kemungkinan
formula molekul CnHm.

 Step 1: n = M+/13

 Step 2: m = n + sisa step 1

Rule of Thirteen
 Example: M+ =106

 Step 1: n = 106/13 = 8 (Sisa = 2)

 Step 2: m = 8 + 2 = 10

 Formula: C8H10
Rule of Thirteen
 Jika terdapat heteroatom,
 BM-massa heteroatom
 Hitung formula hidrokarbon
 Tambahkan heteroatom pada formula
Elemen yang mudah dikenali:
 Nitrogen Rule
 Jumlah N ganjil = BM ganjil
+
M = 41
CH3CN

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)
 Elemen yang mudah dikenali
 Bromine:
 M+ ~ M+2 (50.5% 79Br/49.5% 81Br)

2-bromopropane

M+ ~ M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of Advanced Industrial

Science and Technology, 11/1/09)
Elemen yang mudah dikenali
 Chlorine:
 M+2 is ~ 1/3 as large as M+

Cl M+

M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)
Elemen yang mudah dikenali
 Sulfur:
 M+2 lebih besar dari biasanya (4% M+)

M+
S

M+2

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/1/09)
 Elemen yang mudah dikenali
 Iodine
 I+ 127 Large gap M+
 Jeda besar

ICH2CN I+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/2/09)
Pola fragmentasi
 Alkana
 Fragmentasi biasanya memecah grup
alkil sederhana
 Kehilangan metil M+ - 15
 Kehilangan etil M+ - 29
 Kehilangan propil M+ - 43
 Kehilangan butil M+ - 57

 Alkana bercabang cenderung mengalami

fragmentasi menjadi Karbokation yang
paling stabil
Pola fragmentasi
 2-metillpentana
 Pola fragmentasi
 Alkena:
Fragmentasi umumnya membentuk karbokation
alilik yang terstabilisasi dengan resonansi
 Pola fragmentasi
 Aromatik
 Frgmen pada karbon benzilik, membentuk
karbokation benzilik yang distabilkan oleh
resonansi (mengalami rearrangement menjadi
ion tropylium)
H H H
H C Br H C H C

or

M+
 Pola fragmentasi
Aromatik biasanya juga memiliki puncak pada m/z
= 77 untuk cincin benzene

77
NO2

M+ = 123
77
Pola fragmentasi
 Alkohol
 Mudah terfragmentasi sehingga seringkali
“parent ion” tidak terdeteksi
 Dapat kehilangan radikal hidroksil atau air
 M+ - 17 atau M+ - 18
 Biasanya kehilangan gugus alkil yang
terikat karbon kabinol untuk membentuk
ion oxonium
 1o alkohol biasanya memiliki puncak yang
signifikan pada m/z = 31 dari H2C=OH+
Pola fragmentasi
 1-propanol

CH3CH2CH2OH

H2C OH

M+-18 M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)
 Pola fragmentasi
 Amina
 M+ ganjil (nitrogen jumlah ganjil)
 a-cleavage mendominasi membentuk ion
iminium

CH3CH2 CH2 N CH2 CH2CH2CH3 CH3CH2CH2N CH2

H H
m/z =72
iminium ion
Pola fragmentasi
86

CH3CH2 CH2 N CH2 CH2CH2CH3

H

72
 Pola fragmentasi
 Eter
 a-cleavage membentuk ion oxonium

 Kehilangan gugus alkil membentuk ion oxonium

 Kehilangan gugus alkil membentuk Karbokation

Pola fragmentasi

Dietil eter (CH3CH2OCH2CH3)

H O CH2 CH3CH2O CH2

H O CHCH3
Pola fragmentasi
 Aldehid (RCHO)
 Fragmentasi dapat membentuk ion
acylium
RC O

 Fragmen yang lazim ditemui:

 M+ - 1 RC O

 M+ - 29 R (i.e. RCHO - CHO)

Pola fragmentasi
 Hidrosinamaldehid
105 91

H H O
C C C H
M+ = 134
H H
133 105
91

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)
Pola fragmentasi
O
 Keton RCR'
 Fragmentasi menyebabkan pembentukan
ion acylium

 Kehilangan R: R'C O

 Kehilangan R’ RC O
Pola fragmentasi O
CH3CCH2CH2CH3
 2-pentanone

CH3C O

CH3CH2CH2C O

M+

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)
Pola fragmentasi
 Ester (RCO2R’)
 Pola fragmentasi umum
 Kehilangan OR’
 M+ - OR’

 Kehilangan R’
 M+ - R’
Pola fragmentasi

77 105

O
C O CH3
77
M+ = 136
105

SDBSWeb : http://riodb01.ibase.aist.go.jp/sdbs/ (National Institute of

Advanced Industrial Science and Technology, 11/28/09)
Prinsip dasar:

 Kehilangan /ketambahan 1 elektron:

menghasilkan ion dengan jumlah elektron
ganjil
atau
 Kehilangan /ketambahan partikel
bermuatan: menghasilkan ion dengan jumlah
elektron genap
LC/MS vs GC/MS

LC/MS GC/MS
Analit : Analyte:
 Polar-semi polar  Volatile dan semi
 Non volatile volatile
 Thermolabile  Thermostable
 Non volatile dan non
stable, dapat melalui
tahapan derivatization

43
http://www.shimadzu.com/an/lcms/support/intro/lib/lctalk/48/
48intro.html
44
Triana232 #611 RT: 17.12 AV: 1 NL: 8.53E8
T: + c ESI sid=25.00 Full ms [ 100.00-1000.00]
474.0
100

95

90

85

80
H 20

75
H
N O
5 1 18 N+H
70 2 Br
6 13
65 4 8 12 19
NH 10 14
60 Br 3 17
7 11
55 9 O
15
472.2
50 475.9 16
45

40

35

30

25

20

15 229.2
301.3 476.9
10

5
246.2 327.2
146.0 172.0 392.8 430.4 521.8 603.8 647.7 678.7 744.9 883.1 928.3 969.4
0
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
m/z
Triana232 #651 RT: 17.96 AV: 1 NL: 7.86E8
T: + c ESI sid=25.00 Full ms [ 100.00-1000.00]
520.1
100
521.9
95

90

85 H 20
80 H
N O
75 5 1 18 N+H
2 I
70 6 13
4 8 12 19
65 NH 10 14
Br 3 17
7 11
60
9 O
55 15
16
50

45

40

35

30

25

20 349.2
522.9
229.2
15

10

5 292.3 474.3
350.3 463.8
150.2 174.0 232.2 293.2 543.9 641.5 695.8 709.2 796.6 855.8 928.4 960.1
0
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
m/z 47
Multiple Charging

Peptida dengan BM 10000

ESI-MS, muatan dengan penambahan jumlah H+

M + nH+  MnHn+

Ion2 yang terbentuk adalah:

z = 1 m/z = (10000+1)/1 = 10001
z = 2 m/z = (10000+2)/2 = 5002
z = 3 m/z = (10000+3)/3 = 3334.3
z = 4 m/z = (10000+4)/4 = 2501
z = 5 m/z = (10000+5)/5 = 2001
48
Figure from The Expanding Role of MS
in Bio-technology – G . Siuzdak

49
Multiple charge ion

http://www.astbury.leeds.ac.uk/facil/MStut/mstutorial.htm
 Spektrum Lysozyme
For example, if the ions appearing at m/z 1431.6 in the lysozyme spectrum have "n"
charges, then the ions at m/z 1301.4 will have "n+1" charges

1431.6 = (MW + nH+)/n and 1301.4 = [MW + (n+1)H+] /(n+1)

These simultaneous equations can be rearranged to exclude the MW term:

n(1431.6) - nH+ = (n+1)1301.4 - (n+1)H+
n(1431.6) = n(1301.4) +1301.4 - H+
n(1431.6 - 1301.4) = 1301.4 - H+
n = (1301.4 - H+) / (1431.6 - 1301.4)

hence the number of charges on the ions at m/z 1431.6 = 1300.4/130.2 = 10.
Putting the value of n back into the equation:

1431.6 = (MW + nH+) n

gives 1431.6 x 10 = MW + (10 x 1.008)
and so MW = 14,316 - 10.08
therefore MW = 14,305.9 Da

51