Potensi Fraksi Etanol Benalu Mangga (Dendrophthoe pentandra) sebagai Agen Anti

Kanker Kolon pada Mencit (Mus musculus Balb/c) setelah Induksi Dextran Sulvat (DSS)
danAzoxymethane (AOM)
Moch Hardi Baramada Wicaksono, Sofy Permana

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya
Jalan Veteran Malang, Jawa Timur, Indonesia

Alamat Korespondensi: hardi.blackhat@gmail.com

ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan Dendrophthoe pentandra dalam memperbaiki
perubahan jaringan akibat kanker kolon. Fraksi etanol benalu manga diberikan pada tiga kelompok
mencit dengan dosis 0,125 mg/gram BB, 0,250 mg/gram BB dan 0,500 mg/gram BB yang sudah
diinduksi kanker kolon dengan 10 mg/kg AOM dan 5 % DSS dan setelah 11 minggu organ kolon
diisolasi dan dibuat preparat jaringan dengan metode parafin H&E. Parameter yang diamati meliputi
jumlah sel goblet dan abnormalitas struktur jaringan (dysplasia). Data diuji secara statistik
menggunakan uji normalitas dan uji homogenitas.Hasil penelitian menunjukan terjadi perbaikan sel
goblet pada perlakuan dosis fraksi etanol benalu mangga 0,500 mg/gram BB.Fraksi etanol benalu
mangga mampu memperbaiki abnormalitas jaringan kolon yang ditunjukkan dengan tidak terjadinya
dysplasia pada perlakuan fraksi etanol benalu mangga 0,250 mg/gram BB dan 0,500 mg/gram
BB.Benalu mangga berpotensi sebagai agen anti kanker kolon.

.Kata kunci :AOM, benalu mangga, DSS, kanker kolon,nitrotyrosine, sel goblet,

ABSTRACT
The purpose of this study was to determine the ability of Dendrophthoe pentandra in tissue that are
repairing by colon cancer. The ethanol fraction of mango parasite was given to three groups of mice by
oral single dosages of 0.125 mg/g B W, 0.250 mg/g B W and 0.500 mg /g B W which is induced colon
cancer by 10 mg/kg AOM and 5 % DSS and after 11 weeks of organ colon was isolated and was made
preparations by methodsof paraffin with H & E staining. Parameters were observed from H & E
staining include the number of goblet cells and tissue structure abnormalities (dysplasia), the data were
statistically analyzed using a normality test and homogeneity tests. The results showed an recovery of
goblet cells in the treatment of ethanol fraction of mango parasite dose of 0.500 mg / g BB. Ethanol
fraction of mango parasite is able to repair abnormalities mango colonic tissue indicated by the absence
of dysplasia in the treatment of parasites mango ethanol fraction 0.250 mg / g BB and 0.500 mg / g BB.
The mango parasite has a potency as the agent of anti colon cancer.

Keywords: AOM, colon cancer, DSS, mango parasite, goblet cell, Nitrotyrosine

PENDAHULUAN secara tidak normal [3]. Abnormalitas jaringan

Kanker kolon merupakan kanker yang
sering menyerang manusia diantara jenis
kanker lainnya dan penyakit ini sering terjadi
di negara-negara maju [1].Tahun 2003-2007
jumlah pasien kanker kolon di Indonesia
dengan kisaran usia dibawah 40 tahun rata-rata
telah mencapai 28,17% [2].
Kanker merupakan penyakit yang
disebabkanoleh abnormalitas sel yang
diakibatkanoleh adanya mutasi pada DNA. Sel
abnormal membentuk klon dan berproliferasi
pada kanker kolon dapat dilihat dari beberapa
ekspresi protein seperti Nitric oxide synthases
(iNOS) dan Nitrotyrosine[4].Ekspresi
nitrotyrosine dapat menunjukan adanya
inflamasi pada perkembangan sel kanker kolon
[4].
Perkembangan industri farmasi yang
sangat pesat dalam menciptakan obat-obat
sintetis saat ini bertujuan untuk mencegah dan
mengobati penyakit kanker, namun sebagian
besar bersifat toksik.Teknologi pengobatan
seperti pembedahan, kemoterapi dan

Jurnal Biotropika | Edisi 1 No. 2 | 2013 75

radioterapi dapat memberikan efek samping Pewarnaan Hematoksilin dan Eosin.
pada penderita serta memerlukan biaya yang
Organ diiris dengan microtom 4-5 µm lalu
relatif mahal [5].Hal ini menyebabkan
dimasukan kedalam xylol selama 10 menit,
pengobatan kanker menjadi tidak efektif dan
kemudian dilakukan seri alkohol 100 %, 95 %,
memerlukan biaya yang relatif mahal.
90 %, 80% dan 70 % (masing-masing 5 menit).
Beberapa obat herbal telah
Irisan organ usus mencit direndam dalam
dikembangkan untuk menggantikan peranan
Hematoxylin dan dicuci dengan air mengalir
obat sintetis yang memiliki kemungkinan
selama 5 menit.Potongan usus dicelupkan ke
efektif, namun masih perlu dilakukan
dalamakuades, kemudian dilakukan seri
eksplorasi dan keefektifan obat herbal untuk
alkohol 30 %, 40 %, 50 %, 60 % dan 70 %
meningkatkan daya tahan bagi pasien kanker
(masing-masing 3 menit) dan direndam dalam
[6]. Hasil Uji farmakologis flavonoid
Eosin. Preparatdirendam dalamseri alkohol 70
menunjukan benalu mangga memiliki aktivitas
%, 80 %, 90 %, 95 %, 100 %(masing-masing 5
penghambatan pertumbuhan kanker pada
menit), kemudian direndam dalam xylol 10
mencit [7].Berdasarkan haltersebut, penelitian
menit dan mountingmenggunakan entelan dan
ini dilakukan untuk mengetahui dan memberi
diamati pada mikroskop (Olympus BX51).
informasi baru tentang kemampuan fraksi
etanol benalu mangga dalam memperbaiki
Pengamatan.
strukturjaringan kanker kolon.
Spesimen organ kolon diobservasi dengan
METODE mengambil 5 bidang pandang secara acak,
kemudian pada masing-masing bidang
Rancangan Penelitian. pandang tersebut dihitung jumlah total
selgoblet dan selanjutnya di rata-rata. Hasil
Penelitian ini dilakukan dengan rancangan true
rata-rata digunakan sebagai referensi jumlah
experimental-post test onlycontrol group
total sel pada setiap bidang pandang. Jumlah
design.Digunakan 70 ekor Mus musculus
penghitungan sel goblet dan hasilnya
Balb/c jantan umur 8-10 minggu, berat antara
dikonversi menjadi bentuk persen.Spesimen
25-30 gram yang diperoleh dari PUSVETMA
organ kolon juga diamati abnormalitas jaringan
Surabaya diaklimatisasi selama satu minggu
yang terjadi (grade dysplasia).Organ kolon
sebelum perlakuan.Rancangan penelitian
yang mengalami kerusakan dianalisis secara
induksi kanker usus pada Mus musculus Balb/c
deskriptif[10].
berdasarkan Kohno et al., (2005) dan lowe et
al.,(2010) [8, 9].
Analisis Data.
Preparasi JaringanMetode Paraffin. Pengamatan histopatologi dengan pewarnaan
Hematoxilin-Eosin difokuskan pada
Usus mencitdidehidrasi dengan menggunakan
gradedysplasia atau tingkat kerusakan kanker
serialkohol bertingkat dimulai dari 30 %, 40
kolon yang diamati secara deskriptif dan diuji
%, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %
statistik menggunakan Oneway Anova.
(masing-masing 20 menit) dan 100 % (masing-
masing 60 menit). Usus mencit dibersihkan
melaluiproses clering dengan menggunakan HASIL DAN PEMBAHASAN
alkohol absolut: xilol, xilol 1 dan xilol 2
Pengamatan pada perlakuan kontrol
(masing-masing 15 menit), kemudian
positif menunjukan tidak adanya sel goblet
dilanjutkan dengan proses infiltrasi
yang diikuti perubahan struktur histologi
menggunakan parafin: xilol (1:1) (masing-
mukosa dibandingkan dengan perlakuan
masing30 menit), parafin 1 dan parafin 2
kontrol negatif.Perlakuan pada kelompok B, C
(masing-masing60 menit). Kotak dari kertas
dan D dibandingkan dengan kontrol positif
atau karton dengan disiapkan untuk proses
terdapat perbedaan pada jumlah sel
Embedding, lalu organdiletakkan didalam
goblet.Perlakuan E (5 % dextran sulfate
karton dan dituangkan parafin kedalam block
sodium salt) selama ± 1 minggu tidak
(hingga mengeras).
menunjukan adanya perubahan secara histologi
seperti pada kontrol positif, tetapi memiliki
perbedaan jumlah sel goblet.

Jurnal Biotropika | Edisi 1 No. 2 | 2013 76

 30.00

Rata rata Jumlah Sel Goblet (%)

e (24.13) e (25.04)
25.00

d (19.00)
20.00
c (13.21)
15.00
b (9.20)
10.00

5.00
a (0.00)
0.00
A B C D E F

Perlakuan

(A) (B)
Gambar 1.Sel Goblet pada organ kolon Mus musculus Balb/cjantan perlakuan: (A) Kontrol positif (10
mg/kg Azoxymethane dan 5% Dextran Sulfate Sodium Salt), (B) fraksi etanol benalu
mangga 0,125 mg/gram BB, (C) fraksi etanol benalu mangga 0,250 mg/gram BB,
(D)fraksi etanol benalu mangga 0,500 mg/gram BB, (E) 5% Dextran Sulfate Sodium Salt
(F) Aquades. Pewarnaan H&E. Perbesaran 400x skala 500 µm (A-F). Sel goblet
( )
Analisis statistika lebih lanjut terhadap zat kimia dari makanan atau zat kimia
menunjukan bahwa terdapat perbedaan yang berbahaya dan mencegah penempelan bakteri
sangat nyata antara perlakuan fraksi etanol patogen yang akan masuk ke dalam sel epitel
benalu mangga 0,125 mg/gram BB, fraksi [14].
etanol benalu mangga 0,250 mg/gram BB, Pengamatan yang telah dilakukan pada
fraksi etanol benalu mangga 0,500 mg/gram masing-masing perlakuan menunjukkan bahwa
BB dengan kontrol positif (p<0,05) (Gambar telah terjadi dysplasia atau abnormalitas
1B). Perlakuan fraksi etanol benalu mangga jaringan kolon.Penentuan tingkat dysplasia
0,500 mg/gram BB dengan kontrol negatif pada jaringan kolon berdasarkan Riddel dkk.
tidak menunjukan bedanyata (p>0,05) (1983) di dalam Noam & Alexandros (2010)
(Gambar 1B).Hal ini menunjukan fraksi etanol dari hasil pengamatan ditandai dengan ciri dari
benalu mangga 0,500 mg/gram BB memiliki masing-masing perlakuan yaitu (A) mukosa
efek dalam recovery sel goblet pada kanker rusak, hilangnya crypt dan sel goblet serta
kolon. terjadi pleumorphic dan hilanngya polaritas sel
Tahapan awal pada prosestumorigenesis (HGD), (B) pemanjangan crypt dan
kolon ditunjukan dengan terjadi perubahan berkurangya sel goblet (LGD), (C) normal, (D)
patologi pada bentuk crypt dan penurunan normal, (E) pemanjangan crypt dan
jumlah dari sel goblet pada kolon [11,12]. Sel berkurangya sel goblet disertai
goblet pada kolon memiliki fungsi sebagai mildpleomorphic (LGD), (F) normal (Gambar
barier pada bagian mukosa kolon dengan 2 B1).
mengeluarkan senyawa mucin.Keberadaan sel
goblet berhubungandengan sekresi senyawa
mucin khususnya Muc2 [13].Muc2merupakan
ekspresi yang keberadaannya dipengaruhi oleh
kondisi kanker kolon.Teraktivasinya jalur β-
catenin merupakan salah satu mekanisme pada
kanker kolon, β -catenin dapat menghambat
keberadaan ekspresi Muc2 dari sel goblet [13].
Fungsi barrier dari sel goblet untuk melindungi

Jurnal Biotropika | Edisi 1 No. 2 | 2013 77

 (A1)(Noam & Alexandros, 2010) (B1)
Gambar 2. Grade Dysplasia Pada histologi organ kolon Mus musculus Balb/cjantan; (A1): Grade
dysplasia: High Grade Dyslasia (A-C), Low Grade Dysplasi (D-F), (B1): (A) mukosa
rusak, hilangnya crypt dan sel goblet serta terjadi pleumorphic dan hilanngya polaritas sel
(HGD), (B) pemanjangan crypt dan berkurangya sel goblet (LGD), (C) normal, (D)
normal, (E) pemanjangan crypt dan berkurangya sel goblet disertai mildpleomorphic
(LGD), (F) normal. Pewarnaan H&E. Perbesaran 400x skala 500 µm (A-F)

Berdasarkan pada pengamatan penam- mg/gram BB mampu memperbaki perubahan

pang histologi yang telah dilakukan,
didapatkan hasil bahwa terdapat perbedaan
tingkat perubahan abnormalitas struktur
jaringan kolon. Perubahan struktur jaringan
atau dysplasiamerupakan perubahan neoplastic
(massa abnormal jaringan sebagai akibat dari
proliferasi abnormal) tanpa diikuti oleh invasi
[15]. Dysplasia dibagi menjadi 2 katagori yaitu
berdasarkan pada tingkat pleumorphicdan
polaritas sel yaitu Low Grade Dysplasia
(LGD) dan High Grade Dysplasia (HGD).
Klasifikasi tingkatan dysplasia menurut noam
and alexandros (2010) Low Grade Dysplasia
(LGD): terjadi Pemanjangan pada crypt dan sel
epitel, mild pleomorphic dan inti memadat,
pemanjangan pada Crypt, tidak adanya sel
goblet dan High Grade Dysplasia (HGD):
terjadi pleomorphic dan hilangnya polaritas
sel, rusaknya mukosa dan hilangya polaritas
sel sebagian pada sel epitel, pemanjangan crypt
di sertai rusaknya mukosa dan hilangya sel
Goblet (Gambar 2 A1)[15,16].
KESIMPULAN
Perlakuan fraksi etanol benalu mangga
500 mg/gram BB mampu recovery sel goblet
serta dosis 0.250 mg/gram BB dan 500
struktur jaringan kanker kolon (dysplasia).
UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terimakasih yang sebesar-sebesarnya
penulis ucapkan kepada Ibu Agustina Tri
Endharti sebagai pimpinan peneliti dan Sri
Widyarti sertaAris Soewondo atas saran dan
masukan selama penelitian.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Ferlay, J, Bray, F, Bray, P.& Parkin, D.
M. 2002. Cancer Incidence, Mortality
and Prevalence Worldwide IARC
CancerBase No. 5. version 2.0,
IARCPress, Lyon.
[2] Roche. 2012. Kanker Kolorektal.
http://www.roche.co.id/fmfiles/re717
5008/Indonesian/media/lembar.infor
masi/Onkologi/Avastin/Lembar.Infor
masi.Kanker.Kolorektal.pdf. Diakses
tanggal 10 Juni 2012.
[3] Garrett, M. D. 2001. Cell Cycle
Control and Cancer. Current
Science.81(5).
[4] Gochman, E., Mahajna, J., Shenzer, P.,
Dahan, A., Blatt, A., Elyakim, R.

Jurnal Biotropika | Edisi 1 No. 2 | 2013 78

 &Reznick, A. Z. 2012. The
expression of iNOS and nitrotyrosine
[5] Fityana, I. N. 2011. Aktivitas Ekstrak
Mentimun Laut stichopus horrens
dalam Menginduksi P53-Independent
Apoptosis pada Sel Hela. Jurusan
Biologi.Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas
Brawijaya. Malang. Skripsi.
[6] Kun Li, Q., Li, Z., Han, J., Li, D.,
Gao, Z.& Liu, F. Z. 2008. Alkaloid
from Angelicae dahuricae Inhibits
HeLa Cell Growth by Inducing
Apoptosis and Increasing Caspase-
3 Activity. Labmedicine.39(9).
[7] Sukardiman. 1999. Efek Antikanker
Isolat Flavonoid dari Herba Benalu
Mangga (Dendrophtoe petandra ).
Fakultas Farmasi Universitas
Airlangga. Surabaya. Skripsi
[8] Kohno, H., Suzuki, R, Sugie, S. &
Tanaka T. 2005. Suppression of
colitis-related mouse colon
carcinogenesis by a COX-2 inhibitor
and PPAR ligands.BMC Cancer.
5:46.
[9] Lowe, E. L., Crother, T. R., Rabizadeh,
S., Hu, B. & Wang, H. 2010 Toll-like
receptor 2 signaling protects mice
from tumor development in a mouse
model of colitis-induced cancer.
PLoS ONE.5(9).
[10] Soni A, Widyarti S, Soewondo A. 2013.
Study of Necrosis in the Liver of
Jurnal Biotropika | Edisi 1 No. 2 | 2013
in colitis and colon cancer in hum-
ans.Acta Histochem; 114(8):82735
ormaldehyde and Benzo(α)Pyrene
Exposured-Mice. The Journal of
Tropical Life Science; Vol. 3, No. 1,
pp. 58- 62.
[11] Pinto D, Gregorieff A, Begthel H. 2003.
Canonical Wnt signals are essential
for homeostasis of the intestinal
epithelium. Genes Dev.17:1709-13
[12] Grady W.M. 2004. Genomic instability
and colon cancer. Cancer Metastasis
Rev, 23, 11-27.
[13] Yang Q, Bermingham NA, Finegold MJ.
2001. Requirement of Math1for
secre- tory cell lineage commitment
in the mouse intestine. Science.
294:2155-58.
[14] Young, S. K. & Samuel, B. H. 2010.
Intestinal Goblet Cells and Mucins in
Health and Disease: Recent Insights
and Progress. Curr Gastroenterol.
2(5): 319-330.
[15] Riddell R.H, Goldman H, Ransohoff
DF. 1983. Dysplasia in inflammatory
bowel disease: standardized clas-
sification with provisional clinical
applications. Hum Pathol:
14(11):931–968.
[16] Noam, H.& Alexandros, D. 2010.
Colorectal Dysplasia in Chronic
Inflammatory Bowel Disease.Arch
Pathol Lab Med. Vol 134.
79