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Concepto de mutagénesis dirigida.

Objetivo de realizar una mutagénesis dirigida.


Técnicas para llevar a cabo la mutagénesis dirigida.
Mutagénesis dirigida.
La mutación se crea en un sitio definido, dela secuencia de ADN
Primera aproximación fue en 1973 por Charles Weissmann.
Método Hutchison y Smith año 1978
Ellos realizaron un método más flexible, este se basó en la amplificación del
ADN, con una polimerasa utilizando cebadores (primers), con la mutación
deseada.

Otro sistema es el Fago M13, este es un sistema de clonación, para


introducir de forma fácil, mutaciones en el gen clonado.
Como ejemplo tenemos a un fago filamentoso que infecta, a E. Coli

Dentro del Protocolo.


Como primer punto, tenemos que considerar que debemos general el
fragmento/gen que deseamos modificar, en forma de cadena sencilla.
(Vector M13).
Debemos de generar y diseñar el primer con el cambio.
Enseguida hacer la reacción de polimerización, para general el vector en
forma de cadena doble.
Enseguida se usa el fragmento de Klenow