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Actas del XXVII Congreso Anual de la Sociedad Española de Ingenierı́a Biomédica

Adquisición de imágenes de resonancia magnética funcional


(fMRI) en cerebro de rata

C. Chavarrías1, M. Benito1, P. Montesinos1, V. García-Vázquez2, J. Taylor3, E. Goiriena3, M. Desco1


1
Laboratorio de Imagen Médica. Unidad de Medicina y Cirugía Experimental, Hospital General Universitario Gregorio
Marañón, Madrid, España, desco@hggm.es
2
Centro de investigación en red en salud mental (CIBERSAM), Madrid, España
3
Grupo de Función Sensitivomotora. Hospital de Parapléjicos de Toledo SESCAM, Toledo, España

resultados de fMRI robustos durante la estimulación de


Resumen las extremidades del animal, existiendo una fuerte
En el presente trabajo se ha llevado a cabo la puesta a punto de coincidencia en el área de activación y la intensidad de la
la configuración experimental necesaria para realizar misma [9,10]. Asimismo se ha estudiado, mediante
experimentos de resonancia magnética funcional (fMRI) con trabajos de alta resolución temporal y espacial, la
estímulos somatosensoriales en cerebro de rata. Se ha
procedencia anatómica de la señal de fMRI. En concreto ,
modificado el software de adquisición de la máquina de
resonancia para generar señales de sincronismo que controlen
se ha analizado la diferente contribución de los pequeños
el estimulador eléctrico, se ha calibrado dicho estimulador y se y grandes vasos sanguíneos a la señal BOLD [11].
han ajustado los parámetros de adquisición de la secuencia EPI Además se han publicado comparativas entre distintos
y del estimulador. tipos de fMRI: BOLD, perfusión y fMRI basada en el
volumen de sangre [9,12].

1. Objetivo Las adquisiciones de fMRI consisten en comparar series


de imágenes obtenidas durante el estado basal con las
Uno de los avances más interesantes en MRI se basa en la obtenidas durante estimulación. Podría servir una
posibilidad de obtener imágenes funcionales (fMRI), secuencia de adquisición sencilla de eco de gradiente;
como por ejemplo los mapas de activación cerebral pero si consideramos las altas exigencias de resolución
BOLD (Blood-Oxygen-Level Dependent), en los que la temporal requeridas para analizar la evolución temporal
señal se genera de manera endógena, normalmente de la respuesta hemodinámica, es necesario acudir a
vinculada con un estímulo externo. técnicas rápidas de adquisición de imagen. Un ejemplo
El contraste BOLD fue descrito por primera vez por son las secuencias EPI (Echo-Planar Imaging) [13],
Ogawa et al. [1-3] en estudios de cerebro de rata con alto combinadas con adquisiciones de Fourier parcial [14] y
campo magnético (7 y 8.4T). El fenómeno es debido a las antenas phased-array, que permiten adquirir en paralelo
inhomogeneidades de campo magnético que produce la [15].
desoxi-hemoglobina (dHb), de modo que actúa como En el presente trabajo se pretende implementar los
agente de contraste. Las propiedades magnéticas de la detalles necesarios para ajustar la secuencia EPI, la
dHb [4] junto con el hecho de que esté restringida a los sincronización de la máquina de MRI con un estimulador
vasos sanguíneos, producen diferencias de susceptibilidad eléctrico, la calibración del estimulador y la elección del
magnética entre vasos y tejidos adyacentes, generando paradigma de estimulación, para poder realizar estudios
gradientes de campo magnético alrededor de los mismos con contraste BOLD en cerebro de rata durante la
[5]. Las secuencias de adquisición de MRI que enfatizan estimulación eléctrica de una de sus patas inferiores.
dichas variaciones de susceptibilidad magnética presentan
diferencias cuando el nivel de dHb varía. Estas 2. Material y métodos
inhomogeneidades inducidas por la dHb deberían
producir una caída de la señal, y sin embargo la realidad 2.1. Material
es que la señal BOLD aumenta respecto al nivel basal
[6,7]. Esto se debe a que la activación neuronal produce Este trabajo fue realizado con un equipo de resonancia
un aumento del flujo sanguíneo cerebral (cerebral blood magnética Bruker 70/20 USR (Ultra Shielded) con campo
flow, CBF) y del consumo de glucosa, pero no un magnético principal de 7 Teslas y software Paravision
aumento acorde del consumo de oxígeno [8]. Esto 5.0. La máquina dispone de 4 salidas TTL que pueden
conduce a un descenso de la fracción de extracción de controlarse durante la adquisición mediante código
oxígeno y una menor concentración de dHb por unidad de insertado en la secuencia de pulsos.
volumen de tejido. El estimulador eléctrico utilizado es el CS-220 de la
La corteza somato-sensorial de la rata ha supuesto un compañía CIBERTEC S.A., que se empleó en modo
modelo excelente para el estudio de materias relacionadas GATED en el presente trabajo.
con fMRI. Un gran número de grupos ha publicado

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2.2. Sincronización estereotáxica, introduciendo los electrodos en los dedos 1


y 3 de la pata trasera izquierda y el de tierra por debajo de
Se sincronizó la máquina de resonancia con el
la piel en el área del tobillo de la misma pata, y ajustando
estimulador eléctrico modificando la secuencia de
sobre la cabeza una antena phased-array.
EPI_FID de Bruker y utilizando las salidas TTL de
propósito general. En el editor de secuencias se añadió un Mediante una almohadilla neumática y un sensor de
nuevo parámetro (Nrep) que indica el número de temperatura rectal se tuvieron monitorizadas la
imágenes completas de MRI que se adquieren durante respiración y la temperatura del animal, con un módulo de
cada bloque de estimulación. La secuencia modificada monitorización 1025 de SAII (Small Animals Intruments,
permite comprobar el número de la imagen que se está Inc.). Su temperatura se mantuvo aproximadamente a
adquiriendo y poner en la salida TTL el nivel 36ºC mediante un dispositivo de aire caliente de
correspondiente cada Nrep imágenes (Figura 1). desarrollo propio.
A continuación se le administró un bolo intraperitoneal de
0.05 mg/kg de medetomidina. Tras 5 minutos se suprimió
el isofluorano, y 10 minutos más tarde se comenzó una
infusión continua de medetomidina de 1 ml/hora de
concentración 0.1 mg/kg, que se mantuvo durante el resto
del experimento.
Figura 1. Cronograma explicativo de sincronización entre la
máquina de MRI y el estimulador. 2.4. Calibración
Tras colocar a cada animal en la camilla se calibró el
2.3. Montaje experimental y sujetos de estudio amperaje de salida del estimulador (puesto que cada
animal posee una resistencia corporal diferente) mediante
Toda la manipulación del animal se ha realizado según las
el montaje de la Figura 2, con una resistencia de 1kΩ y un
normas sobre protección de los animales utilizados para
osciloscopio, con el objetivo de lograr un nivel de
experimentación aplicada en la Unidad de Medicina y
estimulación sensorial pero no doloroso.
Cirugía Experimental (Directiva 86/609/CEE y RD
1201/2005)
En el experimento in vivo se empleó 1 rata Wistar de unos
300g de peso. La anestesia se indujo con isofluorano al
1.2%, y a continuación se colocó al animal en una cama

Figura 2. Esquema de calibrado de la corriente de estimulación. Se calibraron 3 niveles diferentes de amplitud: 1mA, 2mA y 5mA.
(Dibujo adaptado del Manual de Usuario del sistema de monitorización 1025 de SAI, Inc.)

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2.5. Ajuste de los parámetros de la secuencia EPI y


del estimulador
Se realizó mediante el mismo montaje de la Figura 2, pero
sin osciloscopio ni resistencia añadida.
Se utilizó una secuencia EPI_FID con los siguientes
parámetros: FOV = 2.27mm (sin bandas de saturación);
matriz = 80 x 80; nº de rodajas = 3 (entrelazadas); espesor
de rodaja = 1 mm; TE = 20 ms; TR = 2000 ms (superior
al mínimo permitido); ancho de banda = 250 kHz; factor
de aceleración de la antena = 2 (GRAPPA); factor de
aceleración de Fourier parcial = 1.4; dummy scans = 4;
flip-angle = 80º.
Se eligió un TE de valor similar al T2* medido con un Figura 4. Mapas de activación obtenidos para p<0.05. Los
mapa de T2* previo. Tras esto se consultó en el atlas de tonos claros indican píxeles más significativos
Paxinos [16] la extensión de la zona de corteza somato- (Bregma-2mm)
sensorial que debería activarse (“HL, hindlimb”. Aprox.
-1 a -2 mm a Bregma) para elegir el número de rodajas,
que se localizaron mediante imágenes anatómicas
adquiridas previamente con secuencias RARE. Se ajustó
visualmente el flip-angle, se incluyeron las correcciones
necesarias para evitar artefactos y deformaciones y el
tiempo mínimo de repetición (TRmin) quedó fijado por
estos parámetros previos.
De acuerdo con la literatura previa al respecto[17-20],
fijamos la duración de los pulsos de estimulación y su
frecuencia en 0.3 ms y 3 Hz. En casi todos los trabajos
mencionados se emplean corrientes de estimulación entre
0.5 y 2 mA para estudios sensoriales, por lo que fijamos
la corriente en 1 mA.
Figura 5. Mapas de activación obtenidos para p<0.01. Los
tonos claros indican píxeles más significativos
3. Resultados (Bregma-2mm)
Se realizó un experimento siguiendo un diagrama de
estimulación como el de la Figura 3, con 1 bloque de
estimulación y 2 de reposo. El número de imágenes por
bloque en el primer experimento fue de 40, lo que supone
4. Discusión y Conclusiones
una duración de cada bloque de 80 s y un tiempo de Se han completado con éxito la sincronización de la
adquisición total de 4 minutos. máquina con el estimulador eléctrico, la calibración del
mismo y la puesta a punto de la secuencia EPI para la
adquisición de imágenes de fMRI.
En resumen, se concluye que la configuración técnica de
los experimentos para realizar fMRI en cerebro de rata
funciona correctamente, aunque aún queda refinar el
diseño biológico de los mismos.

Referencias
Figura 3. Diagrama de bloques de las adquisiciones realizadas.
[1] Ogawa S and Lee T M. Magnetic resonance imaging
of blood vessels at high fields: in vivo and in vitro
Las imágenes fueron analizadas con SPM5, seleccionando measurements and image simulation. 1990 Magn.
sólo las 8 primeras imágenes en estimulación (16 s). Se Resonance Med. 16: p. 9-18.
suavizaron con un kernel gaussiano con una FWHM de 8 [2] Ogawa S, Lee T M, Kay A R and Tank D W. Brain
veces el tamaño de vóxel, y se enmascararon para obtener magnetic resonance imaging with contrast dependent
sólo el cerebro. on blood oxygenation. 1990b Proc. Natl Acad. Sci.
USA. 87: p. 9868-9872.
Se observa activación positiva en la localización esperada [3] Ogawa S, Lee T M, Nayak A S and Glynn P.
(“HL, hindlimb” en Paxinos). Ver Figura 4. Por otra Oxygenation-sensitive contrast in magnetic resonance
parte, al realizar el análisis para p<0.01 (Figura 5), la zona image of rodent brain at high magnetic fields. 1990a
Magn. Resonance Med. 14: p. 68-78.
de activación disminuye como era de esperar.

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