Instituto Politécnico Nacional

Escuela Superior de Ingeniería Química e Industrias

Extractivas

Departamento de Ingeniería Química Industrial

Academia de Química Analítica
Especialidad en Análisis Instrumental

Laboratorio de Espectroscopia Molecular y Atómica

Practica N° 2
“ANÁLISIS CUANTITATIVO DE UN SOLO COMPONENTE”

(DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN BEBIDAS ENERGÉTICAS)

Equipo: N° 4

Sección: B

Integrantes:

 Durán Arellano Javier Eduardo

 Ramírez Anaya Adriel
 Sánchez Pino Javier Jefté

Grupo: 3IV65

Profesora:

 M en C. Karla Jenny Lozano Rojas

Fecha de Entrega: 25 /Abril /2018

  OBJETIVOS:

Manejar con mayor seguridad un espectrofotómetro UV-VIS

Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problema por medio de una curva de
Calibración, aplicando la ley de Beer.

 FUNDAMENTO TEORICO:

La absorción de la radiación ultravioleta o visible, se produce por lo general como consecuencia de la excitación
de los electrones de enlace debido a esto: la longitud de onda de los picos de absorción se puede correlacionar
con los tipos de enlaces existentes en la especie que se estudia.

Todos los compuestos orgánicos pueden absorber radiación electromagnética porque todos contienen
electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles de energía más altos.

La espectrometría ultravioleta visible tiene aplicaciones algo limitadas en el análisis cualitativo debido a que en
estos espectros existe un número relativamente escaso de máximos o mínimos. Las aplicaciones de los métodos
cuantitativos de absorción ultravioleta / visible son numerosos y abarcan todos los campos en que se demanda
información química cuantitativa.

El análisis cuantitativo esta basado en la Ley de Lambert – Beer que establece que la cantidad de luz absorbida
por la muestra, aumenta a medida que se incrementa la cantidad de dicha muestra o conforme es mayor el
camino óptico de la radiación a través de la misma.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la

concentración de la solución. Por tanto, la espectrometría UV/VIS puede usarse para determinar la
concentración de una solución. Es necesario saber con qué rapidez cambia la absorbancia con la concentración.
Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extinción molar) o, con más
exactitud, determinándolo a partir de una curva de calibración.

El espectrofotómetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografía Líquida de Alta Resolución
(CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentración. Para
resultados precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estándar, lo
que es muy similar al uso de curvas de calibración. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un
concentración particular se conoce como factor de respuesta.

LEY DE BEER-LAMBERT

La espectrometría UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para determinar las
concentraciones de especies absorbentes en solución, usando la Ley de Beer-Lambert:

-Fórmula Ley de Beer-Lambert

donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a
una determinada longitud de onda, I es la intensidad de transmisión, L la
longitud de ruta a través de la muestra, y c la concentración de las especies
absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, ε es una constante
conocida como absortividad molar o coeficiente de extinción. Esta constante
es una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una
temperatura y presión particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a
menudo, U/M * cm.

La absorbancia y extinción ε a veces son definidas en términos de logaritmo

natural en lugar de logaritmo de base 10.
Figura N° 1 “Representación de la transmitancia en
una muestra”
 MATERIAL Y EQUIPO
 Matraz aforado de 500 ml.
 Matraz aforado de 100 ml.
 Matraces aforados de 10 ml.
 Pipeta graduada de 1 ml.
 Balanza Analitica
 Espectrometro UV – VIS
 Celadas de Cuarzo de 1 cm.

 REACTIVOS
 Cafeína grado Q.P.
 Etanol gado Q.P.

 PREPARACION DE SOLUCIONES
 Solución de etanol al 10% V
 Medir 50 ml de etsnol y aforar a 500 ml con agua destilada.
 Solución de Cafeína de 100 ppm
 Pesar 10 g de Cafeína y aforar a 100 ml.

 DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
 A partir de la solución de cafeína de 100 ppm, preparar estándares de 5,10, 15, 20 ppm.
Establecer las siguientes condiciones de barrido:
 Encender la lámpara de UV.
 Seleccionar el modo ABS
 Colocar el intervalo de 𝜆 entre 300 a 200 nm.
 Seleccionar la velocidad de barrido de 240 nm/min.
 Velocidad de Carta 60 mm/min.
 Obtener el espectrograma de cada uno de los estándares y de la muestra problema diluido.
 Leer la absorbancia de cada uno de los estándares y de las muestras problema a la longitud de
onda de máxima absorción (𝜆𝑚𝑎𝑥 =272 nm).
  CÁLCULOS

 Preparación de Soluciones Patrón de Cafeína 5, 10, 15 y 20 (mg/L):

Fórmula:

(V2 )(C2 )
V1.i =
C1
mg
(10 ml) (5 )
V1.1 = l = 0.5 ml
mg
100
l
mg Estos patrones fueron aforados con
(10 ml) (10 ) alcohol etílico al 10 %.
V1.2 = l = 1 ml
mg
100
l
mg
(10 ml) (15 )
V1.3 = l = 1.5 ml
mg
100
l
mg
(10 ml) (20 )
V1.2 = l = 2 ml
mg
100
l

 Tabla de Absorbancias Obtenidas de los Estándares:

Concentración (mg/L) A (u.a)

Estándar I 5 0.27647
Estándar II 10 0.53008
Estándar III 15 0.81101
Estándar IV 20 1.1249
Tabla N° 1
Nota: Las absorbancias fueron obtenidas a una longitud de onda de 272 nm

1.20
1.10
R² = 0.9986
1.00 Mediante las absorbancias
A (Unidades Arbitrarias)

0.90 registradas de los estándares, se

0.80 construyó la curva de calibración
0.70 de la cafeína.
0.60
0.50
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
Concentracion (mg/L)

Figura N° 2 “Curva de Calibración de la Cafeína”

 1.20
1.10
A (Unidades Arbitrarias) 1.00
R² = 0.9977
0.90
0.80 Se compara el ajuste de la curva
de calibración con el coeficiente
0.70
de determinación.
0.60
0.50
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
Concentracion (mg/L)

Figura N° 3 “Curva de Calibración de la Cafeína”

 Tabla de Absorbancias Obtenidas de las Bebidas Energéticas:

Muestra A (u.a) Ésta absorbancia se

Kick 0.55125 eliminó porque no entra
en el rango de los
Yolo concentrado 1.2697 patrones.
Boost 0.45236
Rockstars 0.57769
Yolo Rebajado 0.46804
Tabla N° 2
Nota: Las absorbancias fueron obtenidas a una longitud de onda de 272 nm
 Gráfica:

Yolo conc.
A (Unidades Arbitrarias)

E. 4 Rockstars
Kick
E. 3
Boost

E. 2
Yolo reb.

E. 1

272 nm
Longitud de Onda λ (nm)
Figura N° 4 “Espectro de Absorción de la Cafeína en Bebidas Energéticas”
 Cálculo de Absorbancia de los Estándares:

Fórmula:
Abs.
ai =
(b)(c)
0.27647
a1 = mg = 0.05529
(1 cm) (5 )
l

0.53008
a2 = mg = 0.05301
(1 cm) (10 )
l

0.81101
a3 = mg = 0.05407
(1 cm) (15 )
l

1.12490
a4 = mg = 0.05625
(1 cm) (20 )
l

∑ ai
a̅ =
4

0.05529 + 0.05301 + 0.05407 + 0.05625

a̅ = = 0.05465
4

MÉTODO ANALÍTICO

 Cálculo de la Concentración de Cafeína en las Bebidas (Cc):

Fórmula:
Abs(muestra)
CCi =
(b)(a̅)
(0.55125) mg
CC(kick) = = 10.08691
(1 cm)(0.05465) l

(0.46804) mg
CC(yolo) = = 8.56431
(1 cm)(0.05465) l

(0.45236) mg
CC(boost) = = 8.27740
(1 cm)(0.05465) l

(0.57769) mg
CC(rockstar) = = 10.57072
(1 cm)(0.05465) l

 Cálculo de la Concentración Real en las Bebidas Energéticas (CR):

Fórmula:

Vaforo
CRi = (CCi ) ( )
Valicuota
 mg 10 ml mg
CR(kick) = (10.08691 )( ) = 336.23055
l 0.3 ml l

mg 10 ml mg
CR(yolo) = (8.56431 )( ) = 856.43183
l 0.1 ml l

mg 10 ml mg
CR(boost) = (8.27740 )( ) = 275.91338
l 0.3 ml l

mg 10 ml mg
CR(rockstar) = (10.57072 )( ) = 1057.07228
l 0.1 ml l

 Conversión de la Concentración Real (mg/l) a (mol/L)

mg 1 mol de cafeina mol

CR(kick) = 336.23055 ∗( ) = 1.73145
l 194.19 mg l

mg 1 mol de cafeina mol

CR(yolo) = 856.43183 ∗( ) = 4.41028
l 194.19 mg l

mg 1 mol de cafeina mol

CR(boost) = 275.91338 ∗( ) = 1.42084
l 194.19 mg l

mg 1 mol de cafeina mol

CR(rockstar) = 1057.07228 ∗( ) = 5.44349
l 194.19 mg l

 Calculo de la Concentración Real de Cafeína en los Estándares (Cc) :

Fórmula:

𝐴𝑏𝑠(𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟)
𝐶𝐶𝑖 =
(𝑏)(𝑎̅)
(0.27647)
𝐶𝐶(5 mg) = = 5.05892
l (1 𝑐𝑚)(0.05465)

(0.53008)
𝐶𝐶(10 mg) = = 9.69954
l (1 𝑐𝑚)(0.05465)

(0.81101)
𝐶𝐶(15 mg) = = 14.84007
l (1 𝑐𝑚)(0.05465)

(1.12490)
𝐶𝐶(20 mg) = = 20.58371
l (1 𝑐𝑚)(0.05465)

 Calculo de la Absortividad Molar de los Estándares de Cafeína ():

Fórmula:

𝐴𝑏𝑠(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎)
𝜀𝑖 =
(𝑏)(𝐶)
 (0.27647)
𝜀(5 mg) = = 0.05465
l (1 𝑐𝑚)(5.05892)

(0.53008)
𝜀(10 mg) = = 0.05465
l (1 𝑐𝑚)(9.69954)

(0.81101)
𝜀(15 mg) = = 0.05465
l (1 𝑐𝑚)(14.84007)

(1.12490)
𝜀(20 mg) = = 0.05465
l (1 𝑐𝑚)(20.58371)

MÉTODO GRÁFICO

 Curva de Calibración:

1.20
1.10
R² = 0.9986
1.00
A (Unidades Arbitrarias)

Con las absorbancias registradas se

0.90
interpoló en la curva de calibración
0.80 para identificar la concentración de
0.70 cafeína.
0.60
0.50
0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00
Concentracion (mg/L)

Figura N° 5 “Curva de Calibración de la Cafeína en Bebidas Energéticas”

 Tabla de Absorbancias Registradas en la curva de calibración:

Sustancia A (u.a) Concentración (mg/L)

Kick 0.55125 10.10
Yolo reb. 0.46804 8.53
Boost 0.45236 8.20
Rockstars 0.57769 10.59
Tabla N° 3

 Cálculo de la Concentración Real de las Muestras (Cr):

Fórmula:

Vaforo
CRi = Clc ∗
Valic.
 mg 10 ml mg
Cr(kick) = 10.10 ∗ = 336.6667
l 0.3 ml l

mg 10 ml mg
Cr(yolo) = 8.53 ∗ = 853.0000
l 0.3 ml l

mg 10 ml mg
Cr(boost) = 8.20 ∗ = 273.3333
l 0.3 ml l

mg 10 ml mg
Cr(rockstar) = 10.59 ∗ = 1059.0000
l 0.1 ml l

 Conversión de la Concentración Real (mg/L) a (moles/L)

mg 1 mol de cafeina mol

CR(kick) = 336.6667 ∗( ) = 1.73369
l 194.19 mg l

mg 1 mol de cafeina mol

CR(yolo) = 853.0000 ∗( ) = 4.39260
l 194.19 mg l

1 mol de cafeina mol

CR(boost) = 273.3333 ∗ ( ) = 1.40755
194.19 mg l

mg 1 mol de cafeina mol

CR(rockstar) = 1059.0000 ∗( ) = 5.45342
l 194.19 mg l

 Tabla de Resultados para Método Analítico:

Concentración de Concentración Real

Sustancia A (u.a) PH
Cafeína (mg/l) de Cafeína (mol/l)
Kick 10.0869 1.731 0.55125 4.5
Yolo reb. 8.5643 4.410 0.46804 1.5
Boost 8.2774 1.420 0.45236 3.5
Rockstars 10.5707 5.443 0.57769 3.5
Tabla N° 4

 Tabla de Resultados para Método Gráfico:

Concentración de Concentración Real

Sustancia A (u.a) PH
Cafeína (mg/l) de Cafeína (mol/l)
Kick 10.10 1.733 0.55125 4.5
Yolo reb. 8.53 4.392 0.46804 1.5
Boost 8.20 1.407 0.45236 3.5
Rockstars 10.59 5.453 0.57769 3.5
Tabla N° 5
 DURAN ARELLANO JAVIER EDUARDO
OBSERVACIONES:
El análisis de la cafeína de la bebida energética “Yolo” estaba demasiado concentrado, aun teniendo el
mismo volumen con el que se habían manejado los demás análisis de las bebidas energéticas. Por ello
se re analizo y bajamos aún más la concentración ya que el pico del espectro estaba muy por arriba de
las concentraciones estándares.
Al analizar cada bebida energética y teniendo en cuenta sus componentes energéticos o ingredientes,
podía darme cuenta que un componente tan importante como “la taurina” hacia que las bebidas
tuvieran un comportamiento similar en el espectro y sus concentraciones de este ingrediente en cada
bebida energética, a pesar de estar estudiando solo la cafeína.
Las bebidas energéticas, combinan por lo general los estímulos de la taurina y la cafeína como
elementos preponderantes, e intensifican la potencia de las contracciones cardíacas, mediante este
conocimiento nos dimos a la tarea de conocer los beneficios y las afectaciones que cada marca en el
mercado nacional proporcionan a nuestros organismos. Un ejemplo de una afectación es la
concentración del colorante que se ocupa para cada bebida.

CONCLUISIONES:
Mediante la experimentación el alumno pudo utilizar el equipo espectrofotómetro de UV-Vis con más
seguridad, teniendo en cuenta el manejo adecuado de las celdas, las soluciones a utilizar y la
información teórica para el buen funcionamiento del equipo. Mediante esta práctica el docente pudo
darse cuenta que un factor importante para el estudio en el equipo espectrofotómetro UV-Vis es la
concentración de las soluciones a utilizar (bebidas energéticas).
El alumno pudo concluir que las concentraciones real de las bebidas energéticas eran; 336 mg/l para
la marca “kick”, 856 mg/l para la marca “yolo”, 275 mg/l para la marca “boost” y 1057 mg/l para la
“rockstar”. Y que sus pH eran; 4.5 para la marca “kick”, 1.5 para la marca “yolo”, 3..5 para la marca
“boost” y 3.5 para la “rockstar”.
Concluyendo que la Absortividad molar de las bebidas energéticas era; 0.317 para la marca “kick”,
0.106 para la marca “yolo”, 0.321 para la marca “boost” y 0.105 para la “rockstar”.
Concluyendo que a menor Absortividad mayor Concentracion.