Manual Micro Ing. Bioq. 2017

Fecha de Edición:
Instituto Tecnológico Superior de Edición

Unidad:
Coatzacoalcos. No. 2
FEBRERO / 2017
Departamento: Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
MANUAL DE PRÁCTICAS BASADO

EN COMPETENCIAS
MATERIA: MICROBIOLOGÍA
CARRERA: INGENIERÍA BIOQUÍMICA
CLAVE DE LA ASIGNATURA: BQO - 0525
SATCA: 3-4-10
SEMESTRE: Sexto
ELABORADO POR: M. C. Martha Elena Ortiz Romero
Revisión Autorización
H. Academia de Jefe de División de

Ingeniería Bioquímica Ingeniería Bioquímica
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Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
ÍNDICE DE PRÁCTICAS
No. de Nombre de la práctica Página

Práctica
No.1 REGLAMENTO DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 5

Y QUÍMICA
No. 2 TÉCNICAS MICROBIANAS 1 7
No. 3 TÉCNICAS MICROBIANAS 2 9
No. 4 TINCIÓN DIFERENCIAL. 12
No. 5 MOHOS Y LEVADURAS 15
No. 6 METABOLISMO DE LEVADURAS 17
No. 7 ESTERILIZACIÓN I 20
No. 8 ESTERILIZACIÓN II 22
No. 9 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS 24
No. 10 SIEMBRA DE MICROORGANISMOS 26
No. 11 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICA DE LAS 28

COLONIAS MICROBIANAS
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Fecha de Edición:
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FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
PRESENTACIÓN
El presente manual tiene como finalidad que los estudiantes adquieran las
herramientas necesarias para la manipulación y control de los microorganismos en
procesos bioquímicos para el aprovechamiento racional de los recursos naturales.
Durante el desarrollo de la materia se realizaran una serie de prácticas que le

permitan al estudiante aplicar en el estudio un conocimiento integrado de la
estructura y mecanismos implicados en la microbiología, sus interrelaciones con el
ambiente, así como de los principios bioquímicos que les regulan y sus
aplicaciones e implicaciones socioeconómicas
Como parte del manual de prácticas se desarrollaran cada una de estas de la

siguiente forma:Se organiza agrupando los contenidos de la asignatura en 11 practicas.
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Microbiología
COMPETENCIAS A DESARROLLAR.
Competencias específicas Competencias genéricas
 Analiza los hechos sobresalientes

que dieron origen a la Microbiología,
sus relaciones con otras ciencias, Competencias instrumentales
así como sus perspectivas actuales
y futuras.  Capacidad de análisis y síntesis
 Conoce, selecciona y aplicará las  Capacidad de organizar y planificar
metodologías empleadas en el  Habilidades básicas de manejo de la
estudio, caracterización, computadora
identificación y preservación de los  Habilidad para buscar y analizar
microorganismos. información proveniente de fuentes
 Identifica la estructura, fisiología, diversas
clasificación de eubacterias y  Solución de problemas
archeobacterias y, analiza su  Toma de decisiones.
importancia en los diferentes
ámbitos.
 Identifica la estructura, fisiología y Competencias interpersonales
criterios de clasificación de
microorganismos eucariotas y
analiza su importancia en los
diferentes ámbitos.  Capacidad crítica y autocrítica.
 Conoce las características  Trabajo en equipo.
relevantes de los virus y partículas  Habilidades interpersonales.
subvirasicas y analizará su
aplicación en el mejoramiento de
cepas. Competencias sistémicas
 Propaga cultivos microbianos;
cuantifica el crecimiento y evalúa el
efecto de los factores físicos y
químicos sobre éste.  Capacidad de aplicar los conocimientos
 Comprende los mecanismos en la práctica.
genéticos y analiza la aplicación de  Habilidades de investigación
los microorganismos en Ingeniería  Capacidad de aprender.
Genética.  Capacidad de generar nuevas ideas
(creatividad).
 Habilidad para trabajar en forma
autónoma.
 Búsqueda de la calidad constante.
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Microbiología
Práctica No. 1
Nombre de la práctica: REGLAMENTO DE LABORATORIO
1. Competencia específica a desarrollar.
Llevar a cabo actividades prácticas con seguridad y buen manejo que

promuevan el desarrollo de habilidades para la experimentación, tales
como: observación, identificación manejo y control de variables y datos
relevantes, planteamiento de hipótesis, de trabajo en equipo.
2. Introducción.
El Instituto Tecnológico Superior de Coatzacoalcos, fundado en el año de 1999,

cuenta actualmente con un moderno Laboratorio de Ingeniería Bioquímica y
Química el cual tiene como objetivo principal la atención al alumno en la
realización de las prácticas del docente, así mismo atender las solicitudes de
Proyectos Empresariales Estudiantiles y prestar servicios externos a las
dependencias que los soliciten.
Por lo anterior se hace necesario el trabajo en equipo, armonía y respeto en el
desarrollo de nuestras actividades dentro del Laboratorio, obteniendo así la
calidad y exactitud en los resultados y por ende la certificación de nuestro
Laboratorio.
El presente reglamento tiene como fin lograr los resultados antes mencionados. Es
por ello que se pide analizar y poner en práctica los lineamientos aquí indicados,
así como el estatuto escolar del Instituto Tecnológico Superior de Coatzacoalcos,
del estado de Veracruz.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales Equipos Reactivos

 Reglamento impreso  N.A. . N.A
4. Procedimiento.
Lectura del reglamento del laboratorio
Análisis del reglamento del laboratorio.
Hacer comentarios finales
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Microbiología
5. Cuestionario.
1. ¿Qué utensilios de limpieza debe traer el alumno?
2. ¿Cuáles son las normas de vestimenta en el laboratorio?
3. ¿Cuál es la sanción en caso de incumplir con la vestimenta indicada?
4. En cuanto al material y equipo ¿cuáles son las principales
recomendaciones?
5. En cuanto a la seguridad, ¿cuáles son las principales
recomendaciones?
6. Referencias bibliográficas.
A reglamento de laboratorio de ingenierías bioquímica y química y laboratorio de

ciencias básicas
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Microbiología
Práctica No. 2
Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS I
Observar e identificar las características, semejanzas y diferencias entre las

bacterias y los protozoarios
2. Introducción.
El Reino Monera agrupa organismos muy abundantes en la naturaleza, como las

bacterias, que son células que carecen de núcleo definido; pueden presentar
diferentes formas, por lo que se clasifican en cocos, bacilos y espirilos. Para
realizar la observación microscópica de esto organismos es necesaria realizar
frotis y observar al microscopio en objetivo de inmersión.
El Reino Protista presenta organismos unicelulares y pluricelulares que dependen
principalmente de la difusión para vivir, sus células tienen núcleo bien definido y
organelos delimitados por membrana. Representantes de este grupo son los protozoarios
y las algas. Un método muy eficiente para la observación de estos microorganismos es el
uso de la gota suspendida ya que nos permite observar el movimiento típico flagelar y
ciliar que presentan.

1 Microscopio 1 Microscopio óptico con 1 Cucharada de
1 Portaobjetos excavado objetivos de 10X, 40X y yogurt natural
2 Porta y cubreobjetos 100X 150 ml. de agua
1 Mechero
destilada
1 Gotero
1 Agitador Azul de metileno
1 Pinzas Aceite de
1 Cuchara sopera inmersión
Alcohol
Agua sucia
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Microbiología
4. Procedimiento.
Parte A: Observación de bacterias:
1. Vierte el yogurt natural en el vaso de precipitado. Agrega 50 ml. de agua
destilada, mezcla suavemente y obtén una solución homogénea.
2. Vierte dos gotas de la solución de yogurt en un extremo del porta objeto,
coloca el filo angosto de otro portaobjetos sobre las gotas formando un ángulo
con el primer portaobjetos, desliza suavemente para dejar una película muy
delgada y homogénea
3. Seca el frotis al aire libre y luego fija al calor de la flama, cuida que no se
queme.
4. Después cubre con alcohol el frotis para eliminar el exceso de grasa,
5. Coloca una gota de azul de metileno, espera 30 segundos escurre, enjuaga y
deja secar al aire perfectamente.
6. Coloca, sin que se formen burbujas, una gota de aceite de inmersión sobre el
frotis
7. Observa al microscopio en objetivo de inmersión (100X)
Parte B: Observación de protozoarios:

1. Coloca una gota de agua de florero y una de metil celulosa en el portaobjetos
excavado y cúbrelo
2. Localiza un organismo a bajo aumento y céntralo en el campo para observar a
mayor aumento. Observa por lo menos cinco minutos, mientras mas paciente
seas más podrás ver. Describe su movimiento
3. Conforme se evapora el agua del portaobjetos, el organismo no podrá
moverse. Es el momento adecuado para usar el mayor aumento y observar
detenidamente su constitución
4. Identifica en los esquemas los organismos observados
5. Cuestionario.
¿Cuál es la importancia biológica de los organismos observados?
¿Cuál es la importancia económica de los organismos observados?
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
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Microbiología
Práctica No. 3
Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS II
Elaborar correctamente frotis para coloración microbiológica e identificar

la utilidad e importancia del manejo de estas técnicas
2. Introducción.
Existe un gran número de compuestos orgánicos colorantes (tintes), que se

emplean para la tinción de los microorganismos. Estos compuestos se
clasifican de acuerdo con su carácter químico: ácido, básico o neutro.
Los colorantes ácidos son aquellos en que la propiedad colorante
corresponde al ión con carga negativa, los básicos corresponden a dicha
propiedad con un ión con carga positiva y los neutros son sales complejas de
un colorante ácido y otro básico. Los ácidos tiñen en general los componentes
básicos de la célula y los básicos los componentes ácidos.

4 Portaobjetos Microscopio óptico con Azul de metileno
1 Mechero objetivos de 10X, 40X y Aceite de
1 Pinza 100X inmersión
1 Asa de siembra
Agua destilada
1 tapa de metal
(mayonesa o mermelada) Fucsina
1 Puente de tinción Suero sanguíneo
Verde malaquita
CuSO4
4. Procedimiento.
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Microbiología
Parte A: Preparación de un frotis para tinción:

1. Limpiar perfectamente una laminilla y flamearla ligeramente
2. Coloca una gota de agua destilada en la parte media de la laminilla
3. Con un asa estéril y fría transporta la cantidad deseada del cultivo a examinar y
hacer una suspensión en la gota de agua
4. Realiza una extensión de 1 cm2 aproximadamente con ayuda del asa.
5. Deja secar al aire (el frotis se torna opaco)
6. Fija el frotis pasándolo rápidamente sobre la flama del mechero (en la parte
más alta de la flama) por el lado en que no esta la extensión de la muestra.
7. Deja enfriar y la extensión está lista para teñirse
8. Tiñe el frotis durante un minuto con azul de metileno
9. Lávalo con agua
10. Escurre y dejar secar al aire
11. Deposita una gota de aceite de inmersión sobre el frotis teñido y seco
12. Observa al microscopio con el objetivo de 100X (seco fuerte).
Nota: una buena extensión no debe tener una cantidad excesiva de bacterias, procure seguir
estas indicaciones con mucho cuidado, ya que de ello depende el éxito de su tinción y
observación.
Parte B: Coloración de esporas:

1. Prepara un frotis de la manera usual (pasos del 1 al 7 de la parte A)
2. Cúbrelo con una solución de verde malaquita
3. Déjalo actuar 40 a 60 segundos en frío y a continuación calienta a ignición de
vapores por 1 minuto
4. Lávalo con abundante agua y escurre
5. Cúbrelo con safranina durante 30 segundos
6. Lávalo, escurre y dejar secar al aire
Nota: las esporas se observan de color verde y la zona central (celular) de color roja
Parte C: Coloración de capsula (método de Hiss):

1. Use una gota de suero sanguíneo para elaborar el frotis
2. Sécalo al aire y fíjalo al calor
3. Cubre con fucsina y deja actuar 30 segundos
4. Calienta a emisión de vapores
5. Lava con una solución al 20% de CuSO 4
6. Deja secar
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Microbiología
5. Cuestionario.
1. ¿Cuál es la constitución básica de las esporas (formas de resistencia
bacteriana)?
2. ¿En qué consisten los procesos de tinción?
3. ¿Cómo se llama la técnica de tinción de esporas?
4. ¿Qué es la cápsula?
5. ¿Cómo se comprueba la rigidez de la cápsula bacteriana?
La biología de los microorganismos
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Microbiología
Práctica No. 4
Nombre de la práctica: TINCIÓN DIFERENCIAL.

Realizar la observación de microorganismos a través de técnicas de tinción
diferencial para llevar a cabo su identificación.
2. Introducción.
Los procedimientos de coloración que ponen de manifiesto diferencias entre las

células bacterianas, o entre partes de una misma célula, se denominan técnicas
de tinción diferencial o especial. Son algo más complicados que los de tinción
simple, por cuanto se expone la preparación a más de una solución colorante, o
se emplean ciertos reactivos complementarios para la tinción.
Existen distintos métodos: tinción de Gram., coloraciones ácido resistentes,

método de Giemsa, coloraciones para descubrir estructuras celulares y tinción
negativa.

4 Portaobjetos Microscopio óptico con Rojo Congo al 2%
1 Mechero objetivos de Tinta china
1 Pinza 10X, 40X y 100X. Yodo
1 Asa de siembra
Cristal violeta
Safranina
Alcohol acetona
Carbol fucsina
Alcohol ácido
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
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Microbiología
4. Procedimiento.
Parte A. Coloración negativa (Método de la tinta china):
1. Coloque una gota de tinta china en el extremo de un portaobjetos perfectamente

limpio.
2. Con el asa estéril y fría, tome una pequeña muestra del cultivo por examinar y
mézclelo cuidadosamente con el colorante.
3. Con otro cubreobjetos limpio extienda la suspensión.
4. Dejar secar al aire y observar al microscopio en objetivo de inmersión
Parte B. Tinción de Gram.
1. Limpiar perfectamente el portaobjetos

2. Colocar una gota de agua destilada en la parte media del portaobjetos.
3. Con un asa fría esterilizada transportar la cantidad deseada del cultivo y hacer una
suspensión en la gota de agua.
4. Deje secar al aire.
5. Fijar el frotis pasándolo sobre la flama y deje enfriar.
6. Teñir durante un minuto con la solución de cristal violeta, lavar con agua.
7. Escurra y cubra con lugol dejándolo actuar 1 minuto.
8. Escurra el lugol y lave con agua, cubra la preparación con alcohol acetona 1 minuto y
lave abundantemente con agua
9. Cubra la preparación con safranina por un minuto y lave con agua.
10. Escurrir y dejar secar al aire
11. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observar en objetivo 100X
Parte C. Coloración de Zhiel Neelsen
1. Prepara un frotis del esputo, deje secar al aire y fíjelo al calor

2. Cubra la preparación con carbol fucsina y calienta a emisión de vapores
durante 5 minutos, cuidando que no hierva el colorante. Añadir colorante de
vez en cuando para evitar que el éste se seque.
3. Lave con agua y luego decolore con alcohol ácido
4. Lave con agua y cubra la preparación con azul de metileno durante 1 minuto
5. Lave con agua y deje secar al aire
6. Coloca una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observa en objetivo
100x
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Materia:
Microbiología
5. Cuestionario.
1. ¿A qué se llama coloración negativa y cuál es su utilidad?

2. ¿Por qué ciertas bacterias no se tiñen con los colorantes usuales?
3. ¿A qué se le llama bacteria Gram positiva y cuáles se consideran Gram negativa?
4. ¿De qué depende la retención de Gram por algunas bacterias?
5. ¿Por qué se utiliza alcohol acetona como agente diferencial?
6. ¿A qué se le llama mordiente y qué propiedades ofrece el lugol en el caso
particular de la tinción de Gram?
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Microbiología
Práctica No. 5
Nombre de la práctica: MOHOS Y LEVADURAS

Observar las características morfológicas macro y microscópicas de
ejemplares de diferentes clases de hongos e identificarlas.
2. Introducción.
El Reino Fungí está formado por hongos y levaduras, es un grupo muy

diversificado de organismos terrestres generalmente, no contienen clorofila por lo
que son heterótrofos, generalmente saprofitos o parásitos, son unicelulares o
compuestos por filamentos (hifas) que conforman el cuerpo del micelio u hongo.
Las hifas pueden crecer separadas unas de otras o en una masa compacta, que le
da la estructura bien definida a los hongos de seta. Su reproducción es sexual y
asexual por esporas (a excepción de los hongos imperfectos que solo presentan
reproducción asexual).

3 Portaobjetos Microscopio óptico con 2 ml de
3 Cubreobjetos objetivos de 10X, 40X y fermentado
3 Cajas de petri 100X. (pulque, tepache)
1 Aguja de disección
1 tortilla enlamada
1 Gotero
1 navaja de afeitar o 1 pan enlamado
bisturí Queso enlamado
1 Lupa Azul de metileno
4. Procedimiento.
Parte A: Comparación macroscópica:
Observa macroscópicamente la muestra de pulque, tortilla, pan y queso. Y
completa la siguiente tabla:
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Materia:
Microbiología
Muestra Color Olor Consistencia

Pulque
Tortilla
Pan
Queso
Parte B: Comparación microscópica:

1. Realiza un frotis de tinción simple (azul de metileno) común de levaduras y
observa al microscopio
2. Haz una preparación en fresco de pulque, obsérvalo al microscopio en
aumento de 10X y 40X
3. Lava perfectamente tu porta y cubre objetos
4. Haz una preparación en fresco del hongo del pan, tomando con la aguja de
disección un poco de lama sobre el portaobjetos y disuelve en una gota de
agua, cúbrelo y observa al microscopio en aumento de 10X y 40X
5. Repite el paso anterior con todas las muestras de hongo
5. Cuestionario.
1. ¿Qué importancia económica tienen los hongos para el hombre?

2. ¿Qué importancia biológica tienen los hongos?
3. ¿Menciona 5 hongos patógenos para el hombre?
4. ¿A que clase pertenecen los hongos de las muestras que observaste?
5. ¿A que clase pertenece el hongo Penicillium y cuál es su importancia?
6. ¿Cuáles son las características distintivas de los Deuteromicetes?

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Microbiología
Práctica No. 6
Nombre de la práctica: METABOLISMO DE LEVADURAS

Comprobar y describir el tipo de respiración celular y la reproducción típica
de estos microorganismos
2. Introducción.
3.
Los organismos como las levaduras son de gran importancia biológica y
económica, por lo que resultan de gran relevancia estudiar sus principales
procesos vitales, tales como la respiración y reproducción típica que presentan.
Las levaduras degradan glucosa y producen alcohol etílico como producto de su
respiración anaerobia (fermentación). Cuando las levaduras efectúan este
proceso, este proceso en presencia del azul de metileno, éste atrapa los iones
liberados, por lo que cambia su coloración. La reproducción es típicamente por
gemación en la cual la célula madre aumenta de tamaño, el núcleo se divide y
finalmente la célula se separa, ocasionalmente la célula madre e hija quedan
unidas temporalmente

Microscopio óptico con Azul de metileno
objetivos de 20 gr. de levadura
1 Gradilla
2 Tubos de ensaye 10X, 40X y 100X. de pan
1 Pipeta de 5 ml 2 cápsulas de
3 Vasos de precipitado de levadura de
100 ml cerveza
1 Equipo de calentamiento 10 ml de solución
4 Porta y cubreobjetos de azúcar al 5%
1 Agitador
1 Pinzas 50 ml de agua
1 Gotero 20 gr. de azúcar
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Fecha de Edición:
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Materia:
Microbiología
5. Procedimiento.
Parte A: Respiración:
Acomoda los tubos de ensaye en la gradilla y etiquetalos con el número 1 y 2
Tubo #1
1. Coloca la solución de azúcar en el tubo 1 y sujétalo con las pinzas. Caliéntalo a
flama directa por 15 segundos
2. Vacía el contenido de una cápsula de levadura de cerveza en la solución de
azúcar. Agita suavemente hasta formar una solución homogénea
3. Toma con el gotero una pequeña cantidad de azul de metileno y añade una
gota del colorante en el tubo agita suavemente y repite la operación hasta
obtener un solución de color azul claro
4. Deposita 50 ml de agua tibia en el vaso de precipitado. Coloca el tubo de
ensayo dentro del vaso y déjalo reposar 15 minutos. Observa lo que sucede
cada 5 minutos.
Tubo #2
1. Vierte el contenido de la segunda cápsula en el tubo 2. Toma con la pipeta.
Toma con la pipeta 5 ml de solución de azúcar al 5% y viértela en el interior del
tubo
2. Sujeta el tubo con las pinzas y caliéntalo a flama directa por 5 minutos y
retíralo
3. Toma con el gotero un poco del colorante y agrégalo gota a gota hasta que la
coloración se torne azul claro
4. Coloca el tubo en la gradilla y déjalo reposar 15 minutos. Observa lo que
sucede cada 5 minutos.
5. Compara la coloración de ambos tubos después de transcurrido el tiempo
Parte B: Reproducción:
1. Deposita la levadura de pan en un vaso de precipitado con 50 ml de agua,
agita hasta obtener una mezcla homogénea
2. Coloca una gota de la solución de levadura en el portaobjetos y cúbrela
3. Observa al microscopio en seco débil (10X) y seco fuerte(40X)
4. Agrega una cucharada de azúcar a la solución de la levadura y caliéntala por
10 segundos, retírala del fuego y espera 4 minutos
5. Agita la solución y toma una gota de la solución de levadura en el portaobjetos
y cúbrela
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Materia:
Microbiología
7. Repite la operación anterior agregando una gota de azul de metileno a la

solución de levadura
9. Observa e identifica estructuras antes y después de añadir el colorante
6. Cuestionario.
1. ¿Cuáles son los distintos tipos de reproducción de las levaduras? Explícalos.

2. ¿Cómo es el ciclos biológicos de Saccharomyces cerevisiae?
3. ¿Qué es la hibridación de levaduras?
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Microbiología
Práctica No. 7
Nombre de la práctica: ESTERILIZACIÓN I

Esterilizar medios de cultivo líquidos en ambiente húmedo a través del uso
de la autoclave.
2. Introducción.
Los términos estéril, esterilizar y esterilización se refieren a la ausencia o

destrucción completa de los microorganismos y no se usa en términos relativos.
Los microorganismos son susceptibles a los cambios en las condiciones físicas el
medio, el vapor a presión es el agente esterilizante mas práctico y seguro, ya que
la temperatura del vapor a presión es mas elevada a la de ebullición normal,
además ofrece las ventajas de rapidez de calefacción, penetración y humedad
abundante, que favorecen la coagulación de las proteínas, lo cual es la principal
causa de destrucción de los microorganismos. Este método se emplea para
esterilizar medios de cultivo en cajas Petri, matraces o tubos de ensayo.

4 Cajas de petri Autoclave Agua destilada
2 Matraces Erlenmeyer Balanza digital Agar simple
5 Tubos de ensayo Caldo nutritivo
Algodón y gasa
Papel aluminio
4. Procedimiento.
1. Lavar perfectamente el material
2. Prepara 500 ml del agar de acuerdo con las instrucciones del envase
3. Prepara 1L de caldo nutritivo (suspender en el agua y dejar remojar 15
minutos), hervir a Baño María hasta completar la disolución
4. Realizar un tapón con el algodón y la gasa para cubrir la boca del matraz y
tubos de ensayo, amarra con hilo
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Materia:
Microbiología
5. Realiza un cucurucho de papel aluminio y colócalos sobre los tapones a

manera de protección
6. Coloca en el autoclave a 15 lb./pulgada de presión (aproximadamente 121°C)
durante 20 minutos
7. Deja bajar la presión del autoclave y una vez fría retira tus medios
5. Cuestionario.
1. Investiga las definiciones de: desinfectante, antiséptico, saneamiento,

germicida, bactericida, bacteriostasis
2. ¿Qué son los agentes antimicrobianos, cuál es su importancia?
3. Además del uso del autoclave ¿qué otros métodos de esterilización
corresponden al calor húmedo?

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Microbiología
Práctica No. 8
Nombre de la práctica: ESTERILIZACIÓN II

Esterilizar material en ambiente seco por medio del uso y manejo del horno
de laboratorio.
2. Introducción.
La esterilización con calor seco, o aire caliente, se recomienda cuando no se
desea o quiere que el vapor a presión tenga contacto directo y completo con el
material a esterilizar, como artículos de vidrio de laboratorio, cajas de petri,
pipetas, aceites, polvos y sustancias similares. Las células vegetativas mueren a
temperaturas comprendidas entre los 50°C y 70°C (calor húmedo), para matar
esporas son necesarias temperaturas mucho más altas, superiores a los 100°C
(calor seco) que deshidrata a las células y también destruye a los
microorganismos por oxidación de sus constituyentes intracelulares.

4 Cajas de petri Horno N.A
3 Pipetas
5 Tubos de ensayo
1 Termómetro
Algodón
Gasa
Papel aluminio
Papel de estraza
Agitadores de
madera
4. Procedimiento.
1. Lavar perfectamente el material

2. Dejar secar al aire
3. Envolver con papel de estraza a las cajas petri y pipetas
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Fecha de Edición:
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Materia:
Microbiología
4. Envolver con papel de estraza y realizar un tapón con el algodón y la gasa para
cubrir la boca de los tubos de ensayo, amarra con hilo
5. Realiza un cucurucho de papel aluminio y colócalos sobre los tapones a
manera de protección
6. Coloca en el horno a 160°C durante 2 horas.
5. Cuestionario.
1. ¿En qué consiste la esterilización por incineración?

2. ¿En qué consiste la esterilización por bajas temperaturas?
3. ¿En qué consiste la esterilización por desecación?
4. ¿En qué consiste la esterilización por presión osmótica?
5. ¿Por qué no debe usarse este método de esterilización con soluciones líquidas
alcohólicas o acuosas?
6. Bibliografía.

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Materia:
Microbiología
Práctica No. 9
Nombre de la práctica: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
Elaborar diferentes medios de cultivo para diversos tipos de microorganismos

2. Introducción.
El material donde se desarrollan los microorganismos en el laboratorio se

denominan medios de cultivo. Los medios de cultivo microbiológicos constan de
varias sustancias nutritivas que sustentan el desarrollo de determinado tipo de
microorganismos. Algunos medios contienen sales orgánicas en solución y se
complementan con uno o mas compuestos orgánicos, en cambio, otros se
preparan con ingredientes complejos como extractos o productos digeridos de
tejidos animales o vegetales.

1 Termómetro estéril Balanza digital Alcohol
10 Cajas petri Medios de cultivo
desechables esterilizadas Autoclave
deshidratados
1 Pinza para matraz
Agua destilada
1 Probeta
2 Matraces de 250 ml.
1 Mechero
Cinta adhesiva
Algodón estéril
Papel aluminio
Jeringa estéril
Agitador de madera estéril
Guantes
Cubre bocas
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Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
4. Procedimiento.
1. Pesa la cantidad exacta del medio sobre un papel de aluminio (la cantidad esta
indicada en cada frasco y se determina por una regla de tres dependiendo la
cantidad a elaborar)
2. Se marca el matraz con la cinta adhesiva indicando el tipo de medio
3. En el matraz se mide la cantidad correcta de agua con una probeta, se agrega
el polvo hidratándolo y se utiliza un agitador de madera para disolverlo y
agitarlo
4. Se toma el matraz con unas pinzas y se coloca directamente sobre el mechero
y se calienta hasta su ebullición y retíralo
5. Se deja enfriar un poco y se le coloca un tapón de gasa y algodón amarrado
con un hilo y se le coloca el cucurucho de papel aluminio
6. El matraz se introduce en el autoclave hasta aproximadamente 15 lb. de
presión y 120 °C
7. Se baja la temperatura por 15 minutos y se apaga
8. Se destapa la autoclave hasta que tenga 0 lb. de presión y se saca el matraz
9. Sin destapar por un lado del tapón introduce el termómetro esterilizado y deja
enfriar hasta 45°C
10. Usa tus guantes y cubre bocas
11. Vacía el medio en las cajas petri frente al mechero encendido y flamea la boca
del matraz cada vez que vacíes en el liquido en la caja
12. Deja enfriar el medio en las cajas de petri hasta que cuaje
13. Una vez cuajados los medios se invierten las cajas de petri y se refrigeran en
esa posición
14. Si el medio es agar sangre antes de que cuaje el medio pero ya frío se vacía
la sangre (5 ml)
5. Cuestionario.
1. ¿Que tipos de organismos se desarrollan en cada medio preparado en el laboratorio?
6. Bibliografía.

Página | 25
Fecha de Edición:
Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
Práctica No. 10
Nombre de la práctica: SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Sembrar diferentes microorganismos en los distintos medios de cultivo
elaborados.
2. Introducción.
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente

debido a su tamaño tan pequeño, por lo que es necesario recurrir a medios
nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar rápidamente y producir
grandes poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular y efectuar las
investigaciones deseadas.
Los materiales nutritivos donde se desarrollan y multiplican los microorganismos

contienen los nutrientes necesarios para su crecimiento, y se denominan medios de
cultivo, cuyos componentes son muy variados. La elección del medio se basa en el
propósito del estudio. En general, los medios son ricos en proteínas no específicas,
con el fin de estimular el crecimiento de los microorganismos que se desean aislar. La
mayor parte de los microorganismos requieren un medio enriquecido o suplementado
por substancias como sangre, suero, vitaminas, etc.
Cuando se inocula un medio solidificado adicionado de agar, contenido en una caja de

Petri, las bacterias pueden esparcirse en la superficie, mediante una técnica de rayado
(estriado) con el asa , en tal forma que las células queden separadas individualmente,
lejos unas de otras. Durante la incubación, cada célula bacteriana se reproduce tan
rápidamente, que en 18 a 24 hrs. se producen masas bacterianas visibles a simple
vista, denominadas colonias.
Página | 26
Fecha de Edición:
Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología

Mechero Campana de flujo laminar Medios de cultivo
Asa de siembra Guantes ya elaborados
Cubre bocas Cultivos de varios
microorganismos
Agua destilada
4. Procedimiento.
1. De acuerdo con tu investigación elige el medio correspondiente a cada

microorganismo proporcionado.
2. Usa tus guantes y cubre bocas
3. Coloca un mechero encendido y trabaja siempre cerca de el
4. Abre el cultivo cerca de la flama toma tu muestra con el asa, cierra la caja y
déjala sobre la mesa; el asa de siembra con la muestra no debe ser alejada de
la flama, toma tu medio de cultivo y realiza la siembra.
5. Con el asa de siembra esterilizada pasa una porción de la muestra a la
superficie del medio de cultivo hecho a base de agar
6. Siembra en el medio por estrías
7. Siembra en el medio por difusión (varilla de cristal esterilizada esparciendo la
muestra sobre la superficie del agar)
8. Esteriliza el asa de siembra y/o varilla de vidrio antes de tomar una muestra
del microorganismo y realizar la siembra en el medio de cultivo y después
vuelve a esterilizar el asa de siembra o varilla de vidrio para evitar la
contaminación de las superficies de trabajo y otros medios
5. Cuestionario.
1. ¿Cuál es la importancia de las características coloniales bacterianas?

2. ¿Qué es el aislamiento bacteriano?
3. ¿Qué es un cultivo puro?
6. Bibliografía.

Página | 27
Fecha de Edición:
Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
Práctica No. 11
Nombre de la práctica: CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICA DE LAS

COLONIAS MICROBIANAS

Observar el aspecto de las colonias de bacterias en diferentes medios
2. Introducción.
Uno de los principales distintivos de las bacterias es el aspecto resultante del

crecimiento en diversos medios. Características tan triviales como el color
(cromo génesis), la abundancia del crecimiento y aun el color del medio de
cultivo, proporcionan información básica para la identificación del organismo
cultivado

4 Portaobjetos Microscopio óptico con Cristal violeta
1 Mechero objetivos de Safranina
1 Lupa 10X, 40X y 100X. Alcohol acetona
1 Pinza
Carbol fucsina
1 Asa de siembra
1 Lámpara Alcohol ácido
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
4. Procedimiento.
Parte A. Observación del aspecto de las colonias

Elabora un cuadro comparativo con las observaciones que realices en cada medio
de acuerdo con las siguientes características:
Página | 28
Fecha de Edición:
Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
Tamaño Margen Elevación Cromogénesis Óptica Consistencia Cambios en
el medio
<10mm Perfecto Plana Pigmentadas Opacas Mantecosa Hemólisis
10mm < Irregular Semiesférica No pigmentadas Transparentes Viscosa Decoloración
Hendido Elevada Matizadas Opalescentes Filamentosa Coloración
Filiforme Seca
Enraizado húmeda
Parte B. Identificación de bacterias por medio de la Tinción

de Gram.
Completa tu cuadro anterior indicando si la colonia analizada es Gram positiva o negativa
y que forma tiene:
Tinción de Gram:
1. Limpiar perfectamente el portaobjetos

2. Colocar una gota de agua destilada en la parte media del portaobjetos .
3. Con un asa fría esterilizada transportar la cantidad deseada del cultivo y hacer una
suspensión en la gota de agua.
4. Deje secar al aire.
5. Fijar el frotis pasándolo sobre la flama y deje enfriar.
6. Teñir durante un minuto con la solución de cristal violeta, lavar con agua.
7. Escurra y cubra con lugol dejándolo actuar 1 minuto.
8. Escurra el lugol y lave con agua, cubra la preparación con alcohol acetona 1 minuto y
lave abundantemente con agua
9. Cubra la preparación con safranina por un minuto y lave con agua.
10. Escurrir y dejar secar al aire
11. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observar en objetivo 100X
5. Cuestionario.
¿Cuáles son los principales materiales que enriquecen los medios?
Página | 29
Fecha de Edición:
Unidad:
FEBRERO / 2017
Materia:
Microbiología
¿Cuáles son los llamados factores de crecimiento bacteriano?
¿A qué se les llama medios selectivos?
¿A qué se les llama medios diferenciales?
6. Bibliografía.

Página | 30

Manual Micro Ing. Bioq. 2017

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Fecha de Edición:

Instituto Tecnológico Superior de Edición

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

MANUAL DE PRÁCTICAS BASADO

CARRERA: INGENIERÍA BIOQUÍMICA

CLAVE DE LA ASIGNATURA: BQO - 0525

ELABORADO POR: M. C. Martha Elena Ortiz Romero

H. Academia de Jefe de División de

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

No. de Nombre de la práctica Página

No.1 REGLAMENTO DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 5

No. 3 TÉCNICAS MICROBIANAS 2 9

No. 4 TINCIÓN DIFERENCIAL. 12

No. 5 MOHOS Y LEVADURAS 15

No. 6 METABOLISMO DE LEVADURAS 17

No. 9 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS 24

No. 10 SIEMBRA DE MICROORGANISMOS 26

No. 11 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICA DE LAS 28

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Durante el desarrollo de la materia se realizaran una serie de prácticas que le

Como parte del manual de prácticas se desarrollaran cada una de estas de la

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

 Analiza los hechos sobresalientes

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Nombre de la práctica: REGLAMENTO DE LABORATORIO

1. Competencia específica a desarrollar.

Llevar a cabo actividades prácticas con seguridad y buen manejo que

El Instituto Tecnológico Superior de Coatzacoalcos, fundado en el año de 1999,

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

A reglamento de laboratorio de ingenierías bioquímica y química y laboratorio de

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS I

1. Competencia específica a desarrollar.

Observar e identificar las características, semejanzas y diferencias entre las

El Reino Monera agrupa organismos muy abundantes en la naturaleza, como las

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Parte B: Observación de protozoarios:

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS II

1. Competencia específica a desarrollar.

Elaborar correctamente frotis para coloración microbiológica e identificar

Existe un gran número de compuestos orgánicos colorantes (tintes), que se

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Parte A: Preparación de un frotis para tinción:

Parte B: Coloración de esporas:

Parte C: Coloración de capsula (método de Hiss):

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

8. Observa al microscopio con el objetivo de 100X (seco fuerte).

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

Nombre de la práctica: TINCIÓN DIFERENCIAL.

1. Competencia específica a desarrollar.

Los procedimientos de coloración que ponen de manifiesto diferencias entre las

Existen distintos métodos: tinción de Gram., coloraciones ácido resistentes,

3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales Equipos Reactivos

Departamento: Ingeniería Bioquímica.

1. Coloque una gota de tinta china en el extremo de un portaobjetos perfectamente