PROTOCOLO DE VALIDACION

NOMBRE DEL ESTABLECIMIENTO

Protocolo de validación No. Validación de una valoración analítica

Título

Protocolo redactado por:

Aprobación departamental: Fecha:

Aprobación de GC por: Fecha:

Objetivo: Demostrar mediante un estudio de laboratorio que las características funcionales del ensayo de hierro total en agua tratada por el método de la
ortofenantrolina son adecuada para la aplicación analítia de rutina. Registrar la información y los datos necesarios para establecer las especificaciones de operatividad de la
valoración. Confirmar y documentar que el desarrollo del procedimiento analítico, para cuantificar hierro en aguas tratadas son confiables para los análisis rutinarios.

Alcance: Aplica a las aguas tratatadas que llegan al laboratorio producto de los porcesos para potabilizarla.
Responsabilidad: Los analistas químicos y/o técnicos de laboratorio son los directamente responsables de efectuar los estudios de validación, adicionalmente de
registrar, analisar y documentar la información correspondiente. El supervisor planificará el estudio, redactará el protocolo, supervisará la operatividad y comprobará la
integridad de los registros. Garantia de Calidad examinará y aprobará el protocolo de validación; examinará y aprobará los datos del informe de validación.
 MATERIALES, EQUIPOS Y DOCUMENTOS
Materiales, equipos, documentos: PON y formularios de registro de datos para la valoración sometida a prueba. Los materiales y el equipo que se describan en el
PON. Remisión a los documentos donde se compruebe que el equipo que va a usarse está validado y calibrado.

ESTÁNDARES, REACTIVOS, MATERIALES , EQUIPOS

Estandares Reactivos usados:

Nombre Reactivos Estado
Código
Número Control
Fecha Control
Fecha vencimiento
% Potencia
% Humedad
Incertidumbre

Instrumentación usada: Material de volumétrico usado:

Fecha
CODIGO EQUIPO MARCA MATERIAL VOLUMEN
calibración

Otros materiales
Material Uso especifico Observación
ERIALES, EQUIPOS Y DOCUMENTOS
egistro de datos para la valoración sometida a prueba. Los materiales y el equipo que se describan en el
l equipo que va a usarse está validado y calibrado.

Marca

Material de volumétrico usado:

Tolerancia
 INTRODUCCION
Validación de métodos analíticos
Hojas de los procedimientos y del cálculo
Este programa contiene instrucciones y las hojas del cálculo para la validación interna de métodos analíticos cuantitativos. En caso de una validación interna señale las
pruebas a realizar dependiendo del método. En los casos de métodos nuevos, desarrollados en el laboratotio y/o normalizados donde se ampli el alcance ó han sido
modificados, es recomemdable realizar una validación completa con todos los parámetros descritos. Existe otros métodos normalizados donde no es posible realizar una
validación total (ejemplo pH), en estos casos se fijan los siguientes par´metros para validar: repetibilidad, precisión intermedia y reproducibilidad (si hay laboratorios para
comparar).
Presione click en los botones para ir a la hoja de cálculo especifica

4. IDEONIDAD DEL SISTEMA ID

ID
5.1 SELECTIVIDAD SL
SL
5.2 SELECTIVIDAD (CONDICIONES EXTREMAS) SE
SE
6. LINEALIDAD (PATRON) LP
LP
7. LINEALIDAD (PATRON + MATRIZ) LPM
LPM
8. REPETIBILIDAD RP
RP
9. PRECISION INTERMEDIA PI
PI
10.1 EXACTITUD EX
EX
10.2 EXACTITUD ADICIÓN DE PATRÓN EX
EX
11. LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION LD LC
LD LC

12. ROBUSTEZ RB
RB

13. CONFIRMACIÓN DE RUTINA CR

CR

14. INCERTIDUMBRE IN
IN

15. CONCLUSION Y CERTIFICADO IN

IN
 IN
IN

El esquema abajo puede ayudarte a decidir que estudios son necesarios para la validación. Las 6 cajas azules contienen todos los diversos estudios de la validación
posibles cuando una validación completa es necesaria. (validación de un nuevo método desarrollado).

Método de desarrollo de una nueva validación

Estudio de exactitud
Estudio de exactitud
Parámetros mínimos para todos
Estudio de repetibilidad los métodos analíticos en el
Estudio de repetibilidad
laboratorio
Selectividad / especificidad
Selectividad / especificidad

Limite de detección y cuantificación

Limite de detección y cuantificación

Estudio rango de linealidad

Estudio rango de linealidad

Estudio de precisión intermedia

Estudio de precisión intermedia

Estudio de robustez (opcional)

Estudio de robustez (opcional)

ESPECIFICACIONES DEL MÉTODO A VALIDAR

MÉTODO REFERENCIA Modificaciones Límite especificación Unidad

Contenido de hierro total en agua ASTM N/A 0.3 ppm

MODIFICACIONES DEL MÉTODO A VALIDAR

 ENSAYO DE IDEONIDAD DEL SISTEMA
DEFINICIÓN: El test de ideoneidad del sistema (system suitability test) consiste en un conjunto de ensayos que permiten comprobar en el momento de utilización del
método, que el sistema, (analista, reactivos e instrumental) es adecuado para llevar a cabo la determinación para la que se ha establecido y validado dicho método. Por lo
tanto, el test de idoneidad del sistema se ha de entender como parte integrante del procedimiento de análisis y requisito previo a su realización. Aunque el ensayo de
ideonidad del sistema aparentemente solo aplica a métodos donde se involucre instrumentación; es adecuado en métodos gravimétricos y volumétricos para tener mejor
confiabilidad.
Para verificarlo continúe con los siguientes pasos:
a) Se realiza la preparación independiente de dos estándares de referencia (estándar de cuantificación y comprobación) se aplica el procedimiento analítico descrito.
b) Se mide la respuesta del estándar de cuantificación 5 veces y el estándar de comprobación dos (2) veces.
c) El coeficiente de variación (CV) del estándar de cuantificación debe ser menores al 1% en métodos instrumentales y se aceptan CV menores del 2.0% para métodos
volumétricos y gravimétricos
d) Se calcula la correlación entre los dos estándares y debe estar entre el 0.98 a 1.02.
e) Recolectar datos primarios y anexar a la validación.

Correlación de estándares Fecha : 15/May/2007

°T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:

ml Std1 2.90 ml Respuestas Std cuantificación Prom. Áreas Std1 (Presición) 0.0600
1 0.06000
2 0.06100 Coef. de Variación (Precisión) 2.6352 %
3 0.06200
4 0.05900
5 0.05800

ml Std2 3.10 ml Respuestas Std comprobación Prom. Áreas Std2 (Verificación) 0.0600
1 0.06000
2 0.06000 Correl. de Estándares 1.0690
 SELECTIVIDAD
Definición:
Capacidad de un método analítico para medir y/o identificar simultánea o separadamente los analitos de interés, de forma inequivoca en presencia
de otras sustancias químicas que pueden estar presentes en la muestra. Frecuentemente el término especificidad se utiliza como sinónimo del
anterior, aunque debería reservarse para aquellas situaciones donde la respuesta obtenida solo se puede producir con una única entidad química,
algo que no es posible cuando se refiere a procedimientos analíticos que emplean instrumentación no específica. Como existen muy pocos métodos
que den respuesta a un único analito, el término selectividad es normalmente más apropiado.
La presencia de interferencia puede tener distintos efectos en la determinación del analito como: imposibilitar su inequivoca identificación (aparición
de falsos positivos), distorsionar la respuesta del analito (afectan normalmente la pendiente y la ordenada).
La selectividad de un método analítico se debería determinar antes de iniciar el estudio de cualquier otro parámetro, debe conocerse el grado de
respuesta del método proporcionada únicamente por el analito.

Procedimiento:
a) Para efectuar estudios de selectividad debemos realizar estudio bibliográfico de las interferencias posibles; en este punto es de vital importancia
la información que nos propociona métodos validados que aparezcan en libros oficiales (ASTM).
b) Realizar estudio experimental ó retrospectivo de las muestra a evaluar para verificar la existencia de interferencias de acuerdo a la literatura; la
exisencia de concentraciones altas de las interferncias de acuerdo al estudio experimental ó retrospectivo; conlleva a realizar un diseño experimental
para evaluar la incidencia de estas interferencias en la selectividad del método y verificar si es adecuado ó no para la matriz de interes.
c) Si con el estudio del punto anterior definimos la adecuación del método para la matriz de interes; realizamos replicas sextuplicadas con las
posibles calidades de agua para usar en el laboratorio.
d) Los coeficientes de variación de los sextuplicados debe de estar por debajo del 2.0%

e) Si alguna interferencia se evalua; se realizá el analisis seis veces adicionado la interferencia y sin adicionarla. Se observa el porcentaje de
discrepancia de a cuerdo a la formula: xxxxx y se concluye la incidencia de está sobre le resultado.
 Fecha :
Selectividad °T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:

V (mL) ó W (mg) 20.34 Blanco (H2OS / Al - Reac) V (mL) ó W (mg) 20.34 Blanco (H2OS / Al - Reac)
1 0.071 0.067 0.068 0.068 1 0.071 0.067 0.068 0.068
2 0.069 0.067 0.070 0.070 2 0.069 0.067 0.070 0.070
3 0.072 0.069 0.071 0.071 3 0.072 0.069 0.071 0.071
4 0.068 0.068 0.069 0.075 4 0.068 0.068 0.069 0.072
5 0.068 0.068 0.069 0.074 5 0.068 0.067 0.069 0.070
6 0.073 0.068 0.069 0.073 6 0.073 0.068 0.069 0.070
Promedio respuesta 0.070 0.068 0.069 0.072 Promedio respuesta 0.070 0.068 0.069 0.070
Desviación estándar 0.002 0.001 0.001 0.002 Desviación estándar 0.002 0.001 0.001 0.001
Coef. de variación 3.046 1.079 1.490 0.070 Coef. de variación 3.046 1.207 1.490 0.070

V (mL) ó W (mg) 20.34 Matriz sola (H2OS / Al + Reac) Promedio absorbancias 0.060
1 0.060 0.060 0.060 0.060 Desviación estándar 0.0018
2 0.060 0.061 0.062 0.063 Coef. de Variación 3.03 %
3 0.062 0.060 0.058 0.056
4 0.062 0.062 0.062 0.062
5 0.062 0.060 0.058 0.056
6 0.060 0.060 0.060 0.060

V (mL) ó W (mg) 20.34 Matriz + Fe + Al (0.3ppm y 0.2 ppm) Promedio absorbancia 0.062
1 0.061 0.061 0.063 0.061 Desviación estándar 0.0011
2 0.061 0.061 0.062 0.061 Coef. de Variación 1.71 %
3 0.061 0.061 0.062 0.062
4 0.061 0.061 0.063 0.062
5 0.063 0.061 0.064 0.063
6 0.063 0.063 0.064 0.063

% de discrepancia 2.90 %
Diferencia entre las medias 0.0017
Error estándar combinado 0.0009
T studen (estadistico) 2.2281
Intervalo de confianza -0.0002 A 0.0037
 SELECTIVIDAD (CONDICIONES EXTREMAS)
Definición: Se verifica el comportamiento del analito ante circunstancias no normales del laboratorio (Tempeatura, Luz; humedad relativa).

Procedimiento: a) Para efectuar estudios de selectividad debemos realizar estudio bibliográfico de la estabilida del analito de inters; en este punto es de vital importancia la
información
b) que nosexperimental
Realizar estudio propociona métodos validados
de las muestra que aparezcan
a evaluar en libros
para verificar oficiales (ASTM).
la incidencia en la estabilidad del analito a cuantificar. Se realizá un diseño experimental en tiempos

estipulados por el estudio bibliografico realizado.

c) la diferencia observada no debe influenciar en los resultados.
Fecha : 15/May/2007
Selectividad °T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:

V1 0.03 ml Estándar color luz artificial (0.3ppm) Promedio absorbancia 0.061

1 0.060 00 min Desviación estándar 0.0015
2 0.060 30 min. Coef. de Variación 2.42 %
3 0.059 60 min.
4 0.061 90 min.
5 0.063 120 min.
6 0.062 150 min.

V2 0.03 ml Estándar color al calor (0.3ppm) Promedio absorbancias 0.060

1 0.060 00 min. Desviación estándar 0.0017
2 0.060 30 min. Coef. de Variación 2.79 %
3 0.057 60 min.
4 0.061 90 min.
5 0.062 120 min.
6 0.060 150 min.

V3 0.03 ml Estándar sin trat. Luz artif.(0.3ppm) Promedio absorbancia 0.062

1 0.062 Día 0 Desviación estándar 0.0013
2 0.063 Día 1 Coef. de Variación 2.11 %
3 0.063 Día 3
4 0.061 Día 4
5 0.060 Día 5
6 N/A N/A

V3 0.03 ml Estándar sin trat.al calor(0.3ppm) Promedio absorbancia 0.061

1 0.062 Día 0 Desviación estándar 0.0014
2 0.060 Día 1 Coef. de Variación 2.32 %
3 0.063 Día 3
4 0.060 Día 4
5 0.060 Día 5
6 N/A N/A
 RANGO LINEAL DE TRABAJO
Para cualquier método analítico es necesario establecer su rango lineal de trabajo donde puede ser aplicado; de una manera general se trabaja alrededor de los límite de
especificación del analito que se quiere evaluar, no obstante se pueden definir rangos más amplios pero que incluya las especificacines del analito.
la gráfica siguiente ayuda a comprender la importancia de determinar este rango lineal; aunque existe otros métodos donde el comportamiento de la respuesta vs la
concentración del analito no es representación de una curva de primer orden (puede ser de primer , segundo ó tercer orden).

Rango de linealidad
Resultado

Concentración

En la practica es conveniente verificar la linealidad en el rango donde se espera la concentración de las muestras; tambien es muy util para diseñar una estrategia de calibración
de rutina al usar el método.
Procedimiento:
a) Se realiza curva de calibración de concentración vs respuesta del instrumento, usando cinco niveles de concentración del estándar de referencia certificado (cada nivel se
prepara por triplicado).
b) La curva se raliza alrededor de la concentración de especificación o las concentraciones que se trabajan de rutina (en la décima parte de la concentración de especificación y
el doble de la concentración de especificación).
c) Se halla la ecuación de la recta Y=mX + b.
d) Se tabulan los resultados y se grafican, se determinan lo coeficientes de correlación (r>0.999) y coeficientes de determinación (r2>0.998), adicionalmente.
e) t obtenido se compara con el t teórico para ensayos bilaterales (2 colas) con una probabilidad del 95% (p=0.05) para correlación lineal
f) Se verifica las varianzas en cada nivel de concentración para ver la incidencia de estos en los resultados, realizando un test de cochran (G), si Gexp< Gtab, las varianzas no
inciden sobre los resultados
Si tobt > ttab existe correlación lineal significativa
 Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:
Determinación de la linealidad (mínimo cuadrados). Analisis de varianzas
Dato X Y Xi-Xp (Xi-Xp) 2
Yi-Yp (Yi-Yp) 2 (Xi-Xp)(Yi-Yp) Factor (Y/X) Promedio S S2
1 0.05000 0.01100 -0.26000 0.06760 -0.05060 0.00256 0.01316 0.22000
2 0.05000 0.01100 -0.26000 0.06760 -0.05060 0.00256 0.01316 0.22000 0.220 0.000 0.00000
3 0.05000 0.01100 -0.26000 0.06760 -0.05060 0.00256 0.01316 0.22000
4 0.15000 0.03000 -0.16000 0.02560 -0.03160 0.00100 0.00506 0.20000
5 0.15000 0.02800 -0.16000 0.02560 -0.03360 0.00113 0.00538 0.18667 0.191 0.008 0.00006
6 0.15000 0.02800 -0.16000 0.02560 -0.03360 0.00113 0.00538 0.18667
7 0.30000 0.05900 -0.01000 0.00010 -0.00260 0.00001 0.00003 0.19667
8 0.30000 0.06100 -0.01000 0.00010 -0.00060 0.00000 0.00001 0.20333 0.200 0.003 0.00001
9 0.30000 0.06000 -0.01000 0.00010 -0.00160 0.00000 0.00002 0.20000
10 0.45000 0.08900 0.14000 0.01960 0.02740 0.00075 0.00384 0.19778
11 0.45000 0.09000 0.14000 0.01960 0.02840 0.00081 0.00398 0.20000 0.199 0.001 0.00000
12 0.45000 0.08900 0.14000 0.01960 0.02740 0.00075 0.00384 0.19778
13 0.60000 0.11900 0.29000 0.08410 0.05740 0.00329 0.01665 0.19833
14 0.60000 0.11900 0.29000 0.08410 0.05740 0.00329 0.01665 0.19833 0.198 0.000 0.00000
15 0.60000 0.11900 0.29000 0.08410 0.05740 0.00329 0.01665 0.19833
Suma 4.65000 0.92400 0.00000 0.59100 0.00000 0.02314 0.11691
Gexp 0.82286
Promedio 0.31000 0.06160 0.00000 0.03940 0.00000 0.00154 0.00779

b 0.0003 m 0.1978
r 0.9997 r2 0.9994 r=
 {(X – X) (Y – Y)}
i i

tr 153.35
(X – X) ] [(Y – Y) ]
i
2
i
2 1/2

Linealidad

0.14000
r=

| r | n-2
0.12000
ÁREA

f(x) = 0.1978172589x + 0.0002766497

0.10000 R² = 0.9994475158  - r2
0.08000
Volver
0.06000
0.04000
  (X – X) (Y – Y)
i i
Volver
Intro
m= Intro
0.02000
0.00000
 (X – X) i
2

0.00000 0.10000 CONCENTRACION

0.20000 %
0.30000 0.40000 0.50000 0.60000 0.70000
 LINEALIDAD MATRIZ + PATRON
Procedimiento:
a) Se realiza curva de calibración de concentración vs respuesta del instrumento, adicionando estándar de referencia a una matriz para los cinco nivles de concentración
especificados en la prueba de linealidad (cada adición del nivel se prepara por triplicado)
b) Se halla la ecuación de la recta Y = mX + b
c) Se tabulan los resultados y se grafican , se determinan los coeficientes de correlación (r>0.999) y coeficiente de determinación (r 2>0.998), adicionalmente se calcula el valor de
t = | r | (n-2)1/2 / (1 - r2) 1/2
d) t obtenido se compara con el t teórico para ensayos bilaterales (2 colas) con una probabilidad del 95% (p=0.05) para correlación lineal.
Si tobt > ttab existe correlación lineal significativa
e) Se verifica las varianzas en cada nivel de concentración para ver la incidencia de estos en los resultados, realizando un test de cochran (G), si Gexp < Gtab, las varianzas no
inciden sobre los resultados.
Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:

Analisis de varianzas
Blanco
Dato X Y Xi-Xp (Xi-Xp) 2
Yi-Yp (Yi-Yp) 2 (Xi-Xp)(Yi-Yp) Factor (Y/X) Promedio S S2
1 0.05000 0.02800 -0.26000 0.06760 -0.05147 0.00265 0.01338 0.56000 -0.090
2 0.05000 0.02700 -0.26000 0.06760 -0.05247 0.00275 0.01364 0.54000 Matriz 0.547 0.012 0.00013
3 0.05000 0.02700 -0.26000 0.06760 -0.05247 0.00275 0.01364 0.54000 0.018
4 0.15000 0.04700 -0.16000 0.02560 -0.03247 0.00105 0.00519 0.31333
5 0.15000 0.04800 -0.16000 0.02560 -0.03147 0.00099 0.00503 0.32000 0.320 0.007 0.00004
6 0.15000 0.04900 -0.16000 0.02560 -0.03047 0.00093 0.00487 0.32667
7 0.30000 0.07600 -0.01000 0.00010 -0.00347 0.00001 0.00003 0.25333
8 0.30000 0.07700 -0.01000 0.00010 -0.00247 0.00001 0.00002 0.25667 0.256 0.002 0.00000
9 0.30000 0.07700 -0.01000 0.00010 -0.00247 0.00001 0.00002 0.25667
10 0.45000 0.10800 0.14000 0.01960 0.02853 0.00081 0.00399 0.24000
11 0.45000 0.10600 0.14000 0.01960 0.02653 0.00070 0.00371 0.23556 0.238 0.002 0.00000
12 0.45000 0.10700 0.14000 0.01960 0.02753 0.00076 0.00385 0.23778
13 0.60000 0.13700 0.29000 0.08410 0.05753 0.00331 0.01668 0.22833
14 0.60000 0.13900 0.29000 0.08410 0.05953 0.00354 0.01726 0.23167 0.231 0.002 0.00000
15 0.60000 0.13900 0.29000 0.08410 0.05953 0.00354 0.01726 0.23167
Suma 4.65000 1.19200 0.00000 0.59100 0.00000 0.02383 0.11863
Promedio 0.31000 0.07947 0.00000 0.03940 0.00000 0.00159 0.00791 Gexp 0.7012987
 b 0.01724 m 0.2007
r 0.9997 r2 0.9994
tr 151.88 r=
 {(X – X) (Y – Y)}
i i

(X – X) ] [(Y – Y) ]
i
2
i
2 1/2

Linealidad

0.16000
r=

| r | n-2
0.14000
ÁREA

f(x) = 0.2007275804x + 0.0172411168 1- r2

0.12000
R² = 0.9994367236
0.10000
0.08000
0.06000
0.04000 r=
  (X – X) (Y – Y)
i i

0.02000  (X – X) i
2

0.00000 Volver
Volver
0.00000 0.10000 0.20000CONCENTRACION
0.30000 0.40000% 0.50000 0.60000 0.70000 Intro
Intro
 PRECISION / REPETIBILIDAD
Definiciones:
La precisión expresa el grado de concordancia (grado de dispersión) entre una serie de medidas de tomas múltiples a partir de una misma muestra homogénea en las
condiciones prescritas; la procedencia de las muestras destinadas al estudio de la precisión puede ser de muestras reales o preparadas en el laboratorio.
El objetivo del estudio de la precisión es conocer la variabilidad o el más-menos del método de ensayo. Esta variabilidad es debida a errores aleatorios inherentes a todo
método de ensayo. Como consecuentia de la existencia de estos errores los análisis efectuados sobre muestras idénticas en las mismas circunstancias no conducen
generalmente a resultados idénticos. Los factores susceptibles de influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados (analista, equipo,
instrumentarl, reactivos, tiempo,etc.) de aquí la importancia del estudio de la precisión.
La precisión engloba diferentes tipos de estudios:

La precisión de un método analítico se expresa generalmente como el coeficiente de variación (CV) de una serie de medidas y se calcula matemáticamente de la siguiente
manera:
CV (%) = (s/ x)*100; donde "s" = desviación estándar y " x " media aritmética de los resultados

Factores que inciden en estudio de precisión

Repetibilidad Precisión intermedia Reproducibilidad
Instrumento Igual Diferente Diferente
Día de análisis Igual Diferente Diferente
Analista Igual Diferente Diferente
Otros factores (ej: columnas cromatográficas, resctivos,
Igual Diferente Diferente
condiciones ambientales, etc.)
Laboratorio Igual Diferente Diferente
Procedimiento:
a) El ensayo de repetibilidad del método se efectúa sobre una serie de alicuotas de una muestra homogénea que se analiza independientemente desde el principio
(preparación de muestra) hasta el final (lectura de resultados) por el mismo instrumento y el mismo analista.
b) Se realiza la prueba entre 7 a 10 veces
c) Esta muestra homogénea puede ser preparada en el laboratorio ó una muestra de planta.
d) Se halla los coeficientes de variación (CV); para la mayoría de ensayos instrumentales los CV <2.0%, para análisis de trazas ó límites se admiten CV < 5.0% ó más altos.
RECOLECCIÓN DE DATOS PARA VALIDACIÓN

Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :
Repetibilidad °T máxima: %HR máxima:
Analista No.1

V ó W (teórico) 10.00000 Agua dest. Cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.0384

10.00000 1 0.03800 0.03800 Desviación estándar 0.0011

10.00000 2 0.03900 0.03900 Coef. de Variación 2.9507 %
10.00000 3 0.03900 0.03900
10.00000 4 0.03900 0.03900
10.00000 5 0.03600 0.03600
10.00000 6 0.03900 0.03900
10.00000 7 0.03900 0.03900

Analista No.2
V ó W (teórico) 10.00000 Agua dest. Cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.0383
10.00000 1 0.03800 0.03800 Desviación estándar 0.0013
10.00000 2 0.03900 0.03900 Coef. de Variación 3.2742 %
10.00000 3 0.03900 0.03900
10.00000 4 0.03800 0.03800
10.00000 5 0.03800 0.03800
10.00000 6 0.03600 0.03600
10.00000 7 0.04000 0.04000
 PRECISION INTERMEDIA
Definiciones:
Estudia la variabilidad del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra pero en condiciones operativas diferentes (diferentes analistas, aparatos,
días, etc) y en un mismo laboratorio.
El objetivo del estudio de la precisión intermedia es determinar la variabilidad del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra en un mismo
laboratorio pero en condicones operativas diferentes.

En el estudio de la precisión intermedia se deben considerar aquellas circunstancias en las que se pretende desarrollar el método de ensayo. El analista debe evaluar
los efectos usados al variar una serie de factores. Típicos factores a estudiar incluyen el día, el analista, el instrumento, etc. (ver tabla 1) no es necesario estudiar cada
uno de estos factores individualmente sino que es suficiente comprobar que la variabilidad aportada por el conjunto de factores está dentro de los límites establecidos.

Procedimiento:
El ensayo de precisión intermedia del método se efectúa sobre una serie de alicuotas de una muestra homogénea que se analiza independientemente desde el
principio (preparación de muestra) hasta el final (lectura de resultados) por el mismo instrumento y el mismo analista.
Se realiza la prueba entre 3 veces cada analista participante por cada día de la prueba.
La muestra homogénea puede ser preparada en el laboratorio o una muesta de planta
Se halla los coeficientes de variación (CV); CVtotal < 2 CVrepetibilidad

Precisión intermedia Fecha : 15/May/2007

°T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:
Datos analistas:
V (mL) W (mg) 50 Respuestas matriz cargada Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.039
50 1 0.038 0.038 Desviación estándar 0.0012
1 50 2 0.039 0.039 Coef. de Variación total 3.02
50 3 0.039 0.039
50 4 0.038 0.038
Dia 1 2 50 5 0.039 0.039
50 6 0.039 0.039
50 4 0.039 0.039
3 50 5 0.036 0.036
50 6 0.038 0.038
50 1 0.040 0.040
1 50 2 0.040 0.040
50 3 0.041 0.041
50 4 0.039 0.039
Dia 2 2 50 5 0.041 0.041
50 6 0.040 0.040
50 4 0.040 0.040
3 50 5 0.039 0.039
50 6 0.039 0.039
Datos analista 1:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.039
50 1 0.038 0.038 Desviación estándar 0.0006
Dia 1 1 50 2 0.039 0.039 Coef. de Variación indi. 1.49
50 3 0.039 0.039
Datos analista 2:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.039
50 1 0.038 0.038 Desviación estándar 0.0006
Dia 1 2 50 2 0.039 0.039 Coef. de Variación indi. 1.49
50 3 0.039 0.039
Datos analista 3:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.038
50 1 0.039 0.039 Desviación estándar 0.0015
Dia 1 3 50 2 0.036 0.036 Coef. de Variación indi. 4.06
50 3 0.038 0.038
Datos analista 1:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.040
50 1 0.040 0.040 Desviación estándar 0.0006
Dia 2 1 50 2 0.040 0.040 Coef. de Variación indi. 1.43
50 3 0.041 0.041
Datos analista 2:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.040
50 1 0.039 0.039 Desviación estándar 0.0010
Dia 2 2 50 2 0.041 0.041 Coef. de Variación indi. 2.50
50 3 0.040 0.040
Datos analista 3:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.039
50 1 0.040 0.040 Desviación estándar 0.0006
Dia 2 3 50 2 0.039 0.039 Coef. de Variación indi. 1.47
50 3 0.039 0.039
 Precisión intermedia (cambio de instrumento)
Datos analista 1:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.094
50 1 0.093 0.093 Desviación estándar 0.0023
1 50 2 0.093 0.093 Coef. de Variación indi. 2.45
50 3 0.097 0.097
Datos analista 2:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.093
50 1 0.094 0.094 Desviación estándar 0.0006
2 50 2 0.093 0.093 Coef. de Variación indi. 0.62
50 3 0.093 0.093
Datos analista 3:
V (mL) W (mg) 50 Agua des. cargada (0,2ppm) Resp. Correg. Promedio absorbancias 0.094
50 1 0.095 0.095 Desviación estándar 0.0010
3 50 2 0.094 0.094 Coef. de Variación indi. 1.06
50 3 0.093 0.093
 EXACTITUD
Definición y generalidades:
La exactitud de un procedimiento analítico expresa la proximidad entre el valor que es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor
experimental encontrado.
No deben confundirse exactitud con precisión. La precisión está relacionada con la dispersión de una serie de medicines, pero no da ninguna indicación de lo cerca que
está del valor verdadero. Se puede tener mediciones muy precisas pero poco exactas; sin embargo, para que un método sea exacto se requiere un cierto grado de
precisión.
La exactitud se expresa como porcentaje de recuperación en la valoración de una cantidad conocida de analito añadida sobre la muestra o como la diferencia entre la
media obtenida y el valor aceptado como verdadero junto a los intervalos de confianza

Porcentaje de recuperación ® = Xm / m * 100

Diferencia = Xm - m
Donde:
Xm = valor medio hallado
m= Valor aceptado como verdadero

Método de placebo cargado: Se prepara un placebo del problema que contiene todos los ingredientes excepto el analito a determinar. Sobre dicho placebo se añaden
cantidades conocidas de un analito patron a tres niveles de concentración dentro del rango a estudiar. El ensayo de recuperación se realiza como mínimo con 3 replicados
para cada nivel. El analito se determina en cada muestra utilizando el mismo método analítico a evaluar y se calcula la recuperación (Greeb, 1996 Carr. 1990, Mehta 1989).
El problema del método de placebo cargado está en como se introduce el analito sobre el placebo. El proceso de adición, por mucho que simule lo más exactamente
posible la preparación del producto acabado, solo se trata de una aproximación ya que en el producto acabado real el analito o principio activo está intimamente mezclado
con los otros ingredientes. Po lo tanto, la eficacia de la recuperación obtenida con el método del placebo cargado puede llegar a ser más elevada de lo que en realidad es.
Aún teniendo en cuenta este inconveniente.

Procedimiento:
a.) Se prepara placebo o matriz sin el analito
b.) Añadir cantidades exactas del analito en tres niveles de concentración del rango lineal, realizar triplicado en cada nivel.
c.) Se prepara para cada nivel de adición estándares por duplicado.
d.) Se halla los porcentajes de recuperación de las muestras adicionadas de acuerdo a la fórmula:
Porcentaje de recuperación ® = Xm / m * 100
Diferencia = Xm - m
Donde:
Xm = valor medio hallado
m= Valor aceptado como verdadero

e.) Los porcentajes de recuperación deben estar entre 98.0% y 102.0%, para análisis de trazas o límites se admiten recuperaciones entre el 95.0% y
105.0%.
f.) Se verifica las varianzas en cada nivel de concentración para ver la incidencia de estos en los resultados, realizando un test de cochran (G), si Gexp < Gtab, las
varianzas no inciden sobre los reultados.
g) Finalmente se aplica test t. (p = 0.05; gl =_ 3 - 1 = 2) = 4.303
 |100 - x | * n Al ser t exp < t tab no existe diferencia significativa entre la recuperación medida y el 100% por
t exp=
lo que la exactitud es correcta
CV
X = promedio de recuperaciones
n = número de niveles
CV= coeficiente de variación de recuperaciones

Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :

A b s o rb a n c ia enc o nt ra d a
°T máxima: %HR máxima:
Cuadro 4. Determinación de la exactitud.
Dato X Y XY X2 Y2 %R
1 1.117 1.019 1.138 1.248 1.039 91.25
3.000
2 1.117 1.075 1.201 1.248 1.156 96.26
2.500
3 1.117 1.052 1.175 1.248 1.107 94.18
2.000
4 1.299 1.273 1.653 1.688 1.620 97.96
f(x) = 1.791555747x - 0.9850074419
1.500
5 1.299 1.308 1.699 1.688 1.711 100.69 R² = 0.5859851021

1.000
6 1.299 1.280 1.663 1.688 1.638 98.51
0.500
7 1.559 2.492 3.885 2.430 6.209 159.83
0.000
8 1.559 1.512 2.356 2.430 2.285 96.95 1.000 1.100 1.200aceptada
Absorbancia 1.300 1.400
como verdadera% 1.500 1.600

9 1.559 1.490 2.322 2.430 2.219 95.55

Suma 11.925 12.500 17.093 16.097 18.982 931.183 G tablas ( a =0.05;K=3;n = 3 ) = 0.8709
Promedio 1.325 1.389 103.465 Donde "k" el número de grupos y "n" el número de determinaciones por
grupo
s 21.306
CV 20.592
t exp 0.291

Analisis de varianzas (test de

Datos corregidos para exactitud por debajo de la concentración nóminal
cochran)
V (mL) ó W Resp.
(mg)
20.00 Respuestas
Correg.
Prom. Abs. std 1.117 %R Promedio S S2
20.80 1 1.060 1.019 Desviación estánd. 0.0000 91.25 93.896 2.519 6.344
Muestra 21.00 2 1.129 1.075 Coef. de Variación 0.00 96.26
20.80 3 1.094 1.052 94.18
20.09 1 1.122 1.117 97.96 99.055 1.442 2.079
Estándar 20.09 2 1.122 1.117 100.69
20.09 3 1.122 1.117 98.51
159.83 117.443 36.712 1347.765
96.95
95.55

Gexp 0.994
 Datos corregidos para exactitud en la concentración nóminal
V (mL) ó W Resp.
(mg) 25.00 Respuestas Prom. Abs. std 1.299
Correg.
25.40 1 1.293 1.273 Desviación estánd. 0.0000
Muestra 25.40 2 1.329 1.308 Coef. de Variación 0.00
25.57 3 1.309 1.280
24.94 1 1.296 1.299
Estándar 24.94 2 1.296 1.299
24.94 3 1.296 1.299

Datos corregidos para exactitud por encima de la concentración nóminal

V (mL) ó W Resp.
(mg)
30.00 Respuestas Prom. Abs. std 1.559
Correg.
30.10 1 2.500 2.492 Desviación estánd. 0.0000
Muestra 29.97 2 1.510 1.512 Coef. de Variación 0.00
30.29 3 1.504 1.490 Volver
Volver
30.00 1 1.559 1.559 Intro
Intro
Estándar 30.00 2 1.559 1.559
30.00 3 1.559 1.559
 EXACTITUD ADICION PATRON
Definición y generalidades:
Método de adición de patrón: Se utiliza esta aproximación cuando no es posible preparar un placebo de la matriz de la muestra que no contenga el analito. Este podría ser
el caso de las muestras liofilizadas en los que la presencia o ausencia del analito es significativamente distinta. Se añaden sobre una o varias muestras cantidades
conocidas de un analito patrón a tres niveles de concentración dentro del rango a estudiar. Se realizan como mínimo 3 replicados para cada nivel y se analizan las
muestras adicionadas y no adicionadas según el método analitico calculando finalmente la recuperación. Este método tiene la ventaja de utilizar muestras reales y no
requiere la preparación especial de un placebo cargado. ya que la adición de un patrón sobre una muestra no es exactamente lo mismo que el producto acabado real.
Procedimiento:
a) Se trabaja con la ecuación de la curva del rango lineal.
b) A una cantidad de matriz del proceso se añade cantidades conocidas exactas del analito en tres niveles de concentración del rango lineal, realizar triplicado en cada
nivel.
c) Se hallan las respuestas experimentales netas para las concentraciones adicionadas y se compara con los resultados obtenidos por interpolación con la recta de
calibración para las mismas concentraciones del analito.
d) Los porcentajes de recuperación deben estar entre 98.0% y 102.0%, para análisis de trazas ó límites se admiten recuperaciones entre 95.0% y 105.0%.
e) Se verifica las varianzas en cada nivel de concentración para ver la incidencia de estos en los resultados, realizando un test de cochran (G), si Gexp < Gtab, las
varianzas no inciden sobre los resultados.
f) Finalmente se aplica test t. (p = 0.05; gl =_ 3 - 1 = 2) = 4.303

|100 - x | * n Al ser t exp < t tab no existe diferencia significativa entre la recuperación medida y el 100% por
t exp=
lo que la exactitud es correcta
CV
X = promedio de recuperaciones
n = número de niveles
CV= coeficiente de variación de recuperaciones
 Ecuación de la recta de linealidad Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :

A b s o rb a n c ia e n c o n t ra d a
m= 0.19782 b= 0.00028 °T máxima: %HR máxima:
Cuadro 4. Determinación de la exactitud.
Dato X Y XY X2 Y2 %R
1 0.09999 0.10139 0.010 0.010 0.010 101.40
2 0.09999 0.09633 0.010 0.010 0.009 96.34 0.35000

0.30000
3 0.09999 0.10645 0.011 0.010 0.011 106.46 f(x) = 1.0282953171x - 0.0019943464
R² = 0.9964284357
0.25000
4 0.19996 0.20249 0.040 0.040 0.041 101.27 0.20000
5 0.19996 0.20755 0.042 0.040 0.043 103.80 0.15000

6 0.19996 0.19744 0.039 0.040 0.039 98.74 0.10000

7 0.29991 0.30865 0.093 0.090 0.095 102.91 0.05000

0.00000
8 0.29991 0.31371 0.094 0.090 0.098 104.60 0.05000 0.10000 0.15000
Absorbancia 0.20000
aceptada 0.25000
como verdadera% 0.30000 0.35000

9 0.29991 0.29854 0.090 0.090 0.089 99.54

Suma 1.800 1.833 0.428 0.420 0.437 915.060 G tablas ( a =0.05;K=3;n = 3 ) = 0.8709
Promedio 0.200 0.204 101.673 Donde "k" el número de grupos y "n" el número de determinaciones por
s 3.148 grupo
CV 3.096
t exp 0.936
Concentración patrón 1000 ppm
Analisis de varianzas (test de
Concentración
V (mL) mta V (mL) patrón V (mL) final final de Respuesta
Respuesta
corregida
cochran)
recuperación %R Promedio S S2
50 0.0000 50.0000 0.00000 0.010 N/A 101.400 98.872 3.575 12.780
50 0.0000 50.0000 0.00000 0.010 N/A 96.344
50 0.0000 50.0000 0.00000 0.009 N/A 106.456
50 0.0050 50.0050 0.09999 0.030 0.020 101.267 102.531 1.788 3.196
50 0.0050 50.0050 0.09999 0.029 0.019 103.795
50 0.0050 50.0050 0.09999 0.031 0.021 98.739
50 0.0100 50.0100 0.19996 0.050 0.040 102.915 103.758 1.192 1.421
50 0.0100 50.0100 0.19996 0.051 0.041 104.600
50 0.0100 50.0100 0.19996 0.049 0.039 99.544
50 0.0150 50.0150 0.29991 0.071 0.061
50 0.0150 50.0150 0.29991 0.072 0.062 Volver
Volver Gexp 0.7346429037
50 0.0150 50.0150 0.29991 0.069 0.059 Intro
Intro
 LIMITE DE DETECCCION Y CUANTIFICACION
Definición y generalidades:
Dado un método analítico determinado se entiende por límite de cuantificación (LC) de dicho método, la mínima cantidad de analito presente en la muestra que se puede cuantificar bajo las
condiciones experimentales descritas, con una adecuada precisión y exactitud; y por límite de detección (LD) la mínima cantidad de analito en la muestra que se puede detectar aunque no
necesariamente cuantificar bajo dichas condiciones experimentales (ICH, QZA)
El límite de cuantificación es por tanto un término cuantitativo mientras que el límite de detección es solo cuantitativo, encontrándose entre ambos términos un rango de concentraciones en el
que si bien o puede cuantificarse el analito en cuestión con razonable certeza, si puede detectarse su presencia sin incurrir en falsos positivos.
Existe gran variedad de métodos estadísticos para hallar el límite de detección y cuantificación; en el presente protocolo de validación aplicaremos el método de extrapolación de la recta
de calibrado a concentración cero ( 0 ).
Procedimiento:
a.) Se trabaja con la ecuación de la curva del rango lineal (Y = mX+b), y se hacen correcciones de los valores de Y.
b.) Se calcula los residuos al cuadrado (Yexp - Yc)2.
c.) Se calcula la desviación estándar del blanco S (x/y)
SX/Y = {[ ( Y - Y1)2]/ (n-2)}1/2
Y = Respuestas
Y1 = Respuesta corregida
n = # de datos
d.) Se calcula los límites de cuantificación y detección.
LD = YB + 3SX / Y
LC = YB + 10SX / Y

e.) Se preparan para calcular estos límites tres muestras a concentraciones que se suponen cercanas al LC y se analizan en las condiciones descritas en el método obteniendo la siguiente
tabla de resultados:
f.) De este pequeño estudio de linealidad a concentraciones bajas se deduce una nueva recta de calibrado que será la que se extrapole. ( Y= mX +b)
g.) Se calcula r, r2 y T estadísticos, adicionalmente el test de cochran
h.) Se prepara una nueva curva (Y = mx + b) de desviación estándar de las medidas (eje Y) vs las concentraciones (eje X).
i.) Esta ecuación nos proporciona un nuevo valor de la ordenada en el origen Sbl.
j.) Se calculan los nuevos límites de detección y cuantificación de acuerdo a la ecuaciones:

LD (K=3) CD = Ybl + (3*Sbl)

------------------------------
m* 3

Ybl + (10*Sbl)
LC (K=10) CD = ---------------------------
m* 3

Nota: Lo que se trata de probar es la linealidad en este rango y la probabilidad de tener límites de cuantificación y de detección más bajos; de igual forma la decisión final depende de las
exigencias del método que se está validando.
 Fecha : 15/May/2007

°T mínima: %HR mínima :

°T máxima: %HR máxima:

Ecuación de la recta de linealidad Curva en rango bajo LD y LC.

Dato X Y XY X2 Y2 (Y/X)*100
m= 0.19782 b= 0.00028 1 0.050 0.011 0.00055 0.00250 0.00012 22.000
2 0.050 0.012 0.00060 0.00250 0.00014 24.000
Dato Cnc "X" Área "Y" Y1=mX+b (Y-YI) (Y- Y1)2 3 0.050 0.010 0.00050 0.00250 0.00010 20.000
1 0.050 0.011 0.010 0.00083 0.0000007 4 0.075 0.015 0.00113 0.00563 0.00023 20.000
2 0.050 0.011 0.010 0.00083 0.0000007 5 0.075 0.014 0.00105 0.00563 0.00020 18.667
3 0.050 0.011 0.010 0.00083 0.0000007 6 0.075 0.015 0.00113 0.00563 0.00023 20.000
4 0.150 0.030 0.030 0.00005 0.0000000 7 0.100 0.019 0.00190 0.01000 0.00036 19.000
5 0.150 0.028 0.030 0.00195 0.0000038 8 0.100 0.021 0.00210 0.01000 0.00044 21.000
6 0.150 0.028 0.030 0.00195 0.0000038 9 0.100 0.019 0.00190 0.01000 0.00036 19.000
7 0.300 0.059 0.060 0.00062 0.0000004
8 0.300 0.061 0.060 0.00138 0.0000019
9 0.300 0.060 0.060 0.00038 0.0000001 Suma 0.67500 0.136 0.011 0.054 0.002 183.667
10 0.450 0.089 0.089 0.00029 0.0000001
11 0.450 0.090 0.089 0.00071 0.0000005
12 0.450 0.089 0.089 0.00029 0.0000001
13 0.600 0.119 0.119 0.00003 0.0000000 Promedio 0.07500 0.015 20.40741
14 0.600 0.119 0.119 0.00003 0.0000000 s 1.70602
15 0.600 0.119 0.119 0.00003 0.0000000 CV 8.35979
Suma: 0.00001 m 0.17 b (Ybl) 2.1E-03
SX/Y: 0.00099 r 0.973480 r2 0.94766
Límite de Detección 0.015039 mg/L tr 11.26
Límite de Cuantificación 0.050130 mg/L
 LC y LD
Linealidad

0.140 0.025

ÁREA
0.120
Àrea

f(x) = 0.1978172589x + 0.0002766497 0.020

0.100
R² = 0.9994475158 f(x) = 0.1733333333x + 0.0021111111
0.080 0.015 R² = 0.9476635514
0.060
0.010
0.040
0.020 0.005
0.000 0.000
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.040 0.050 0.060 CONCENTRACION
0.070 0.080% 0.090 0.100 0.110
Concentración (%)

Dato X Y Ym S LC y LD
1 0.011 1.40E-03
1.20E-03
2 0.05000 0.012 0.011 1.00E-03
1.00E-03
3 0.010

S
8.00E-04 f(x) = 0.0030940108x + 0.0006786328
4 0.015 R² = 0.0669872981
6.00E-04
5 0.07500 0.014 0.015 5.77E-04 4.00E-04
6 0.015 2.00E-04
0.00E+00
7 0.019
0.04000 0.05000 0.06000CONCENTRACION
0.07000 BAJA
0.08000 0.09000 0.10000 0.11000
8 0.10000 0.021 0.020 1.15E-03
9 0.019

Volver
Volver
Ybl = 2.11E-03 LD = (Ybl + (3 x Sbl)) / (m x (3)1/2) 0.014043 Intro
Intro
Sbl = 0.0007 LC = (Ybl + (10 x Sbl)) / (m x (3) 1/2) 0.030384
 Robustez
La guía ICH, Q2A define la robustez de un método analítico como la medida de su capacidad para permanecer inalterado ante pequeñas pero deliberadas variaciones en ciertos parámetros, proporcionando

idea de su fiabilidad o "estabilidad" durante su empleo en rutina. es por tanto la capacidad que demuestra el procedimiento de análisis para proporcionar resultados válidos en presencia de pequeños cambios

respecto de las condiciones descritas en el método, susceptibles de producirse durante su utilización.

La robustez (Robustness) no debe confundirse con el término Ruggedness que es el grado de reproducibilidad de los resultados mediante el análisis de las mismas muestras bajo una variedad de condiciones
tales como diferentes laboratorios, diferentes analistas, diferentes instrumentos, lotes de reactivos, días, tiempos, diferentes, temperaturas, etc.; es decir se sigue el método analítico dentro de los parámetros
especializados en él, pero introduciendo las condiciones experimentales las variaciones habituales de laboratorio a laboratorio. Da una idea de la influencia que tienen las variables ambientales y operacionales
del método en los resultados, por lo que podría asimilarse al término reproducibilidad.
Para los estudios de robustez normalmente se utilizan métodos donde se plantea un factorial; el usado en el siguiente protocolo es el de youlder-steiner; donde plantea la variabilidad de siete factores para
producir 8 ensayos.
Fecha : 15/May/2007
°T mínima: %HR mínima :
°T máxima: %HR máxima:
Factor Condición Factor Factor
Factor validado Condición validado Experimento Factor A/a Factor B/b Factor C/c Factor D/d
E/e F/f
Factor G/g Resultado
modific. modificada
1 A B C D E F G 0.060
a
A 2 A B c D e f g 0.061
3 A b C d E f g 0.063
b
B 4 A b c d e F G 0.059
5 a B C d e F g 0.061
c
C 6 a B c d E f G 0.057
7 a b C D e f G 0.059
d
D 8 a b c D E F g 0.059
Cálculo del
e
E efecto 0.002 0.000 0.002 0.000 0.000 0.000 0.002

f AFECTA NO AFECTA AFECTA NO AFECTA NO AFECTA NO AFECTA AFECTA

F
Volver
Volver
g Intro
Intro
G
 Confirmación de rutina
Posterior a la validación se realiza una confirmación a lotes de rutina; confrontados frente a la recta de calibración de la validación; adicionalmente las muestras se cargan con
cantidades conocidas de patrones para verificar su recuperación.

Blanco:
Ecuación de la recta de linealidad
BK1(X1) BK2
Lote1 0.041 0.040 0.19782 Pendiente (m)
Lote2 0.059 0.059 0.00028 Intercepto (b)
Lote3 0.040 0.040
Lote4 0.042 0.043
Lote5 0.041 0.041
Lote6 0.043 0.043
Suma 0.266000 0.266000
S 0.007 0.007
St 0.007

Estándar 0,3 ppm: Estándar 0,1 ppm:

STD1 STD2 Correl. STD1 STD2 Correl.

Lote1 0.066 0.062 1.065 Lote1 0.021 0.019 1.105
Lote2 0.059 0.059 1.000 Lote2 0.020 0.020 1.000
Lote3 0.059 0.060 0.983 Lote3 0.020 0.020 1.000
Lote4 0.058 0.057 1.018 Lote4 0.018 0.018 1.000
Lote5 0.060 0.060 1.000 Lote5 0.021 0.020 1.050
Lote6 0.060 0.061 0.984 Lote6 0.018 0.019 0.947
Suma 0.362000 0.359000 Suma 0.118 0.116
S 0.003 0.002 S 0.001 0.001
St 0.002 St 0.001
Muestra 1A: Muestra 2A:

M1 M2 Conc. 1 Conc. 2 M1 M2 Conc. 1 Conc. 2

Lote1 0.061 0.057 0.307 0.287 Lote1 0.058 0.060 0.292 0.302
Lote2 0.016 0.015 0.079 0.074 Lote2 0.016 0.016 0.079 0.079
Lote3 0.013 0.018 0.064 0.090 Lote3 0.021 0.017 0.105 0.085
Lote4 0.015 0.015 0.074 0.074 Lote4 0.015 0.016 0.074 0.079
Lote5 0.019 0.022 0.095 0.110 Lote5 0.017 0.018 0.085 0.090
Lote6 0.027 0.026 0.135 0.130 Lote6 0.031 0.030 0.155 0.150
Suma 0.151000 0.153000 Suma 0.158 0.157
S 0.018 0.016 S 0.017 0.017
St 0.016 St 0.016

Muestra 1 + 0.2 ppm:

MA1 MA2 MA1-MA MA1-MA Recuperación

Recuperación
1 R (%) R (%)
2
Lote1 0.102 0.100 0.041 0.043 0.206 0.216 102.9 108.0
Lote2 0.046 0.046 0.030 0.031 0.150 0.155 75.1 77.7
Lote3 0.054 0.058 0.041 0.040 0.206 0.201 102.9 100.4
Lote4 0.056 0.057 0.041 0.042 0.206 0.211 102.9 105.5
Lote5 0.062 0.062 0.043 0.040 0.216 0.201 108.0 100.4
Lote6 0.067 0.068 0.040 0.042 0.201 0.211 100.4 105.5
Suma 0.387 0.391
S 0.020 0.019
St 0.018

Muestra 2 + 0.10 ppm:

MA2 MA2 MA1-MA MA1-MA Recup. 1 Recup. 2 R (%) R (%)

Lote1 0.078 0.079 0.020 0.019 0.100 0.095 99.7 94.6
Lote2 0.035 0.036 0.019 0.020 0.095 0.100 94.6 99.7
Lote3 0.041 0.037 0.020 0.020 0.100 0.100 99.7 99.7
Lote4 0.033 0.032 0.018 0.016 0.090 0.079 89.6 79.5
Volver
Lote5 0.039 0.037 0.022 0.019 0.110 0.095 109.8 94.6 Volver
Lote6 0.049 0.050 0.018 0.020 0.090 0.100 89.6 99.7 Intro
Intro
Suma 0.275 0.271
S 0.017 0.018
St 0.016
 Confirmación de rutina
ina; confrontados frente a la recta de calibración de la validación; adicionalmente las muestras se cargan con
Introducción:
Los entes coordinadores de la calidad a nivel mundial como ISO, EA, EURACHEM entre otros reconoce la Guía para la expresión de la incertidumbre de medida (GUM); como
documento de referencia en lo que respecta a la incertidumbre de medida. De este modo, las directrices o recomendaciones específicas para la evaluación de la incertidumbre de
medida en cualquier campo deben estar relacionadas con la GUM.
En general, la GUM puede aplicarse también a los ensayos, aunque existen diferencias importantes entre los procedimientos de medida y ensayo. La propia naturaleza de algunos
procedimientos de ensayo puede dificultar la aplicación estricta de la GUM. Para este caso es posible por optar otras directrices.
En la medida de lo posible, los laboratorios de ensayo acreditados tienen que indicar las Incertidumbres asociadas a los resultados cuantitativos según se establece en la GUM.

Un requisito básico de la GUM es la utilización de un modelo matemático para evaluar la incertidumbre. Dicho modelo debe incluir todas las magnitudes que puedan realizar una
contribución significativa a la incertidumbre asociada al resultado del ensayo. No obstante, pueden darse circunstancias en que no sea necesario el esfuerzo de crear un modelo
detallado, en cuyo caso habrá que adoptar otras directrices y utilizar otros métodos basados, por ejemplo, en datos sobre la validación y las características del método.

Campo de aplicación
Este protocolo tiene como finalidad proporcionar una directriz relativa a la evaluación1 de la incertidumbre en los ensayos cuantitativos en los métodos usados en el laboratorio de agua

potable de EMCALI. Todo ensayo consistente en determinar el valor numérico de un mensurando o una característica se denomina ensayo cuantitativo

Criterios para el cálculo de la incertidumbre

1. La expresión de la incertidumbre de medida debe proporcionar información suficiente para fines comparativos
2. La GUM y la ISO/IEC 17025 constituyen los documentos básicos, pero es posible que se necesiten interpretaciones específicas en cada sector.
3. Como requisito básico debe estimarse la incertidumbre global o determinarse sus principales componentes, seguido de un intento de estimar su magnitud y la magnitud de la
incertidumbre combinada.
4. Como base para estimar la incertidumbre de medida, hay que utilizar los datos experimentales disponibles (como gráficos de control de calidad, validación, ensayos de ínter
comparación, ensayos de aptitud, MRC, manuales, etc.).
5. Cuando se utiliza un método de ensayo normalizado, pueden darse tres casos:
• Si se utiliza un método de ensayo normalizado que contiene directrices relativas a la evaluación de la incertidumbre, los laboratorios de ensayo tienen que limitarse a seguir el
procedimiento de evaluación de la incertidumbre descrito en el método.
• Si en una norma se especifica una incertidumbre típica de medida para los resultados del ensayo, los laboratorios pueden dar esa cifra siempre que sean capaces de demostrar su
plena conformidad con el método de ensayo.
• Si en una norma se incluye de forma implícita la incertidumbre de medida en los resultados del ensayo, no sería necesaria ninguna acción adicional.

Breve descripción de la GUM

Desarrollo del modelo de medida. Puesto que, en general, esta es la parte más difícil de la evaluación, se recomienda utilizar una relación causa-efecto que vincule las magnitudes de
entrada con el mensurando.
• La incorporación al modelo de funciones de densidad de probabilidad (FDP) para las magnitudes de entrada, siempre que exista información sobre dichas magnitudes. En la práctica a

menudo basta con especificar el valor esperado y la desviación típica de cada FDP; es decir, la mejor estimación de cada magnitud y la incertidumbre típica asociada a esa estimación.
• Propagación de la incertidumbre. El procedimiento básico (la ley de propagación de la incertidumbre) puede aplicarse a los modelos lineales, pero está sujeto a ciertas restricciones.

• La expresión del resultado completo de la medición, indicando la mejor estimación del valor del mensurando, la incertidumbre típica combinada asociada a ese valor estimado y una
incertidumbre expandida.

Utilización de datos sobre la validación y las caraterísticas del método para evaluar la incertidumbre
La determinación de las características de un método de ensayo es, con frecuencia, esencial para evaluar la incertidumbre asociada a los resultados. Esto es particularmente cierto
cuando los resultados están sujetos a efectos importantes e imprevistos, que mejor se pueden considerar aleatorios, o cuando es imposible crear un modelo matemático detallado. Los
datos sobre las características del método suelen considerar también el efecto simultáneo de distintas contribuciones a la incertidumbre y, por tanto, su utilización puede simplificar
considerablemente el proceso de evaluación de la incertidumbre. La información sobre las características del método de ensayo suele derivarse de:
• Datos obtenidos durante la validación y verificación de un método de ensayo antes de su aplicación en las condiciones del ensayo.
• Estudios de ínter comparación conforme a ISO 5725.
Datos obtenidos de los controles de calidad (es decir, con muestras de control);
• Programas de ensayos de aptitud.
Procedimiento
En la práctica, la idoneidad de los métodos de ensayo utilizados para realizar ensayos rutinarios suele comprobarse por medio de estudios de validación y verificación del método. Los
datos así obtenidos sirven para evaluar la incertidumbre global del método de ensayo evaluado.
Se utiliza el siguiente modelo matemático:

Incertidumbre debida a la precisión:

La incertidumbre debida a la precisión corresponde a la precisión intermedia del método analítico. La precisión intermedia del método puede obtenerse a partir del análisis del CRM ya
que éste se analizó en condiciones intermedias.

S = Desviación estándar del ensayo de precisión intermedia en la validación

N = Número de veces que se analiza la muestras de rutina.

Incertidumbre debida al proceso de verificación de la trazabilidad:

Se calcula teniendo en cuenta la incertidumbre de la referencia y la precisión Intermedia del método.

UCRM = Incertidumbre expandida del material de referencia ó tolerancia del patrón de referencia.
K = Factor de cobertura del material de referencia certificado ó (3) 1/2.
S = Desviación estándar del ensayo de precisión intermedia en la validación
n = Número de veces de análisis en la precisión intermedia.

Incertidumbre debida al proceso heterogeneidad de la muestra

Para calcular la incertidumbre de la heterogeneidad, se analiza por lo menos seis muestras naturales ó matriz cargadas en condiciones de repetibilidad.

S = Desviación estándar del ensayo de repetibilidad en la validación.

Incertidumbre debida a otros términos:

En caso de que el laboratorio analice que la matriz de la muestra, otras condiciones del análisis en rutina, factores ambientales críticos, el muestreo, datos de bibliografías entre otros,
afecte al resultado final. Dicho efecto debe considerarse como un término más de incertidumbre y realizar el cálculo correspondiente.
 Tratamiento de muestra
1. Incertidumbre debida a la precisión
50ml muestra
50ml muestra Incertidumbre estándar U(x)
0.00299 ppm
Adición de 2 mL HCl + 1 mL NH2OH.HCl
Adición de 2 mL HCl + 1 mL NH2OH.HCl

Adición de perlas de ebullición

Adición de perlas de ebullición
2. Incertidumbre debida a la verificación de la trazabilidad
Calentar hasta ebullicón
Calentar hasta ebullicón
Incertidumbre estándar U(x)
Evaporar hasta volumen de 15 mL a 30 mL 0.00152 ppm
Evaporar hasta volumen de 15 mL a 30 mL

Enfriar a temperatura ambiente

Enfriar a temperatura ambiente
3. Incertidumbre debida a la heterogeneidad de la muestra
Transferir a Balón volumétrico de 50 mL
Transferir a Balón volumétrico de 50 mL
Incertidumbre estándar U(x)
Adición de 10 mL buffer de NH C H O + 4 mL de solución de 0.00573 ppm
Adición de 10 mL buffer de NH4C4 2H2 3O3 2 +2 4 mL de solución de
fenantrolina
fenantrolina

Homogenizar y enrazar a 50 mL con H2O destilada 4. Incertidumbre debida a otros terminos

Homogenizar y enrazar a 50 mL con H2O destilada
Distribución Incertidumbre
Observación Aporte
Rec (1) ó Triang. (2) estándar
Dejar desarrollar color mínimo 10 minutos y leer a 510 Pureza estándar 99.99 +/- 0.01% 1 0.0001 5.8E-05
Dejar desarrollar color mínimo 10 minutos y leer a 510
nm 1 0
nm V pipeta 0 0.0E+00
V balón 50 mL +/- 0.07mL 2 0.07 2.9E-02
Otro 1 0 1 0 0.0E+00
Otro2 0 1 0 0.0E+00
otro 3 0 1 0 0.0E+00
otro 4 0 1 0 0.0E+00
otro 5 0 1 0 0.0E+00
 Ecuación de la recta de linealidad

m= 0.19782 b= 0.00028
Incertidumbre precisión intermedia: Incertidumbre verificación de la trazabilidad del método

Concentración 0.2 ppm Concentración del patrón 1000.00 ppm

# de anal / rutina 2 Incertidumbre expandida del MRC/tolerancia del patrón 0.001
Respuesta Concentración Factor de cobertura ó (3)1/3 1.732
0.038 0.191 Numero de veces de análisis de precisión intermedia 18 4.24
0.039 0.196
0.039 0.196
0.038 0.191 Incertidumbre heterogeneidad de la muestra:
0.039 0.196 Concentración 0.2 ppm
0.039 0.196 # de anal / rutina 2
0.039 0.196 Respuesta Concentración
0.036 0.181 0.038 0.191
0.038 0.191 0.039 0.196
0.040 0.201 0.039 0.196
0.040 0.201 0.039 0.196
0.041 0.206 0.036 0.181
0.039 0.196 0.039 0.196
0.041 0.206 0.039 0.196
0.040 0.201 S 0.006
0.040 0.201
0.039 0.196
0.039 0.196
S 0.006

Tabla de resumen de incertidumbre

Descripción Valor (X) U(x) U(x)/X

Precisión 0.2 3.0E-03 1.5E-02
Trazabilidad 0.2 1.5E-03 7.6E-03
Heterogeneidad 0.2 5.7E-03 2.9E-02
Pureza estándar 1000 5.8E-05 5.8E-08
V pipeta 1 0.0E+00 0.0E+00
V balón 50 2.9E-02 5.7E-04
Otro 1 1 0.0E+00 0.0E+00
Otro2 1 0.0E+00 0.0E+00
otro 3 1 0.0E+00 0.0E+00
otro 4 1 0.0E+00 0.0E+00
otro 5 1 0.0E+00 0.0E+00
0.0E+00

5.0E-03

1.0E-02

1.5E-02

2.0E-02

2.5E-02

3.0E-02

3.5E-02
Incertidumbre combinada (Uc) 0.03321
Volver
Incertidumbre Expandida (2x Uc) 0.06643 Volver
Intro
Intro
Efecto de incertidumbre con la concentración (ppm) =
 CERTIFICADO DE LA VALIDACION PARA DETERMINAR HIERRO TOTAL EN AGUA
POTABLE

PARAMETRO EVALUADO ESPEFICACIONES RESULTADO OBSERVACIONES

Selectividad N/A N/A Ver conclusiones

Coef. Correl.(R) > 0.9990 0.9997 CUMPLE
Coef. Deter.(R ) > 0.9980
2
0.9994 CUMPLE
Linealidad patrón
T. student (exp) > 2.15 153.35 CUMPLE
Gexp Cochran < 0.6838 0.8229 Ver conclusiones
Coef. Correl.(R) > 0.999 0.9997 CUMPLE
Coef. Deter.(R ) > 0.998
2
0.9994 CUMPLE
Linealidad patrón + matriz
T. student (exp) > 2.15 151.88 CUMPLE
Gexp Cochran < 0.6838 0.7013 Ver conclusiones
Repetibilidad Coef. Variac.(%) < 5.0 3.0 CUMPLE
Precisión intermedia Coef. Variac.(%) < 5.0 3.0 CUMPLE
95.0> Recup. (%) >105.0 103.5 NO CUMPLE
Exactitud T. student (exp) < 2.31 0.29 CUMPLE
Gexp Cochran < 0.8709 0.9938 Ver conclusiones
95.0> Recup. (%) >105.0 101.7 NO CUMPLE
Exactitud adición patrón T. student (exp) < 2.31 0.94 CUMPLE
Gexp Cochran < 0.8709 0.7346 CUMPLE
Límite de detección N/A 0.0140 Ver conclusiones
Límite de cuantificación N/A 0.0501 Ver conclusiones
 CERTIFICADO DE LA VALIDACION PARA DETERMINAR HIERRO TOTAL EN AGUA
POTABLE
Conclusiones:

Fecha:

Analista 1: Analista 2:

Preparado por: Aprobado por: