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1) Estudando uma condição genética comum de um doença, você verifica que o alelo referente
a doença difere do alelo do tipo selvagem (não afetado) por uma substituição de um único par
de bases ou pb. Essa substituição elimina o local de atuação da enzima de restrição NheI, que
está presente no alelo do tipo selvagem. (OBS: O alelo mutante não é cortado pela NheI.) Uma
árvore genealógica de uma família exibindo a doença é mostrada abaixo:
2) Considere a região cromossômica hipotética a seguir contendo dois genes, fadA e fadB,
necessários para a quebra do ácido oléico em uma bactéria.
P = Promotor
O = Operador
A proteína FadX, a qual é continuamente produzida, se liga ao operador na presença
de ácido oléico. Pergunta-se:
a) A proteína FadX é um repressor ou ativador dos genes fadA e fadB? Justifique brevemente
seu raciocínio.
b) Para cada um dos mutantes a no quadro (m1 a m4), estime o nível de proteína FadA na
presença de ácido oléico. Faça um círculo em “Baixo” ou “Alto”.
P = Promotor
O = Operador
3) Determine se cada uma das afirmações a seguir é verdadeira ou falsa. Se a afirmação for
falsa, corrija-a ou forneça uma breve explicação.
5) O modelo do operon, formulado por Jacob e Monod, serve para explicar a regulação gênica
das enzimas que degradam a lactose em E. coli. Explique o que ocorre se houvesse:
a) A presença de triptofano no meio celular;
b) Uma mutação do tipo substituição de base silenciosa do gene operador (O);
c) Uma mutação do tipo deleção de base nos genes estruturais (Z, Y, A);
d) Presença de glicose no meio celular;
e) Uma mutação de sentido errado no primeiro gene estrutura.
10) O operon trp é responsável pela produção de enzimas que participam da reação
metabólica de síntese de triptofano e é constituído por 5 genes estruturais, um operador que
responde à um complexo repressor/co-repressor, e um promotor. O seu gene regulador
situa-se em um outro ponto do DNA. Na ausência de triptofano ocorre síntese enzimática?
Porquê?
11) Em Escherichia coli o operon da lactose compreende 3 genes estruturais: galk, galt e gale,
cujos produtos estão envolvidos no metabolismo do açúcar galactose. Galr codifica um
repressor e a galactose é um indutor do sistema. Descreva a sequência de processos:
a) Na ausência da galactose;
b) Na presença da galactose.
Gabarito
1)
a) Autossomo, pois o indivíduo 6, um homem, tem dois alelos.
b) O fenótipo mutante é recessivo, pois os indivíduos 5 e 6 têm uma cópia do alelo mutante m
e são fenotipicamente normais.
c) 1/4. Como os indivíduos 3 e 4 já têm um filho afetado, eles devem ser ambos heterozigotos.
2)
i) A proteína FadX é um ativador, pois FadA e FadB necessitam ser sintetizadas na presença de
ácido oléico.
ii) m1: Se FadX não pode se ligar ao operador, a transcrição de fadA será baixa.
m2: Sem um ativador funcional da FadX, a transcrição de fadA será baixa.
m3: A RNA polimerase não pode se ligar e transcrever o gene daFadA, levando a um nível baixo
de FadA.
m4: Se FadX estiver sempre ligada, ela levará a expressão constitutiva de fadA, conduzindo a
um alto nível de FadA.
3)
i) Falso: procariotos --> eucariotos
ii) Falso: Intensificadores de expressão --> Fatores de transcrição. Os intensificadores são
seqüências
de DNA.
iii) Falso: Tradução --> Transcrição
6)
a) Lac - O operon permanece inativado porque a proteína repressora, sintetizada pelo gene
regulador, se liga ao sítio operador, inibindo o promotor. Isto impede o acoplamento da RNA
polimerase, e deste modo, não há transcrição nem tradução.
Trp - O repressor sintetizado pelo gene regulador é inativo, não sendo capaz de se ligar ao sítio
operador do operon. Logo a RNA polimerase acopla-se ao promotor, ocorrendo transcrição e
tradução.
b) Lac - É induzido pela lactose que, quando presente, estabelece um complexo com o
repressor, inativando-o. Este perde a capacidade de se ligar ao operador, liberando assim o
promotor, o que faz com que haja transcrição e subsequente síntese enzimática.
Trp - O triptofano age como co-repressor que se liga ao repressor ativando-o. O complexo
repressor/co-repressor ocupa o sítio operador, inibindo o promotor, que não aceita a ligação
da RNA polimerase. Não há tradução nem transcrição.
7) Os operons são sistemas de regulação que respondem a estímulos diretos do meio externo.
Sendo eficientemente tamponados contra a maioria das influências externas os eucariotos não
necessitam de mecanismos de resposta direta mas, por outro lado, uma vez que comportam
reações metabólicas muito mais complexas, também necessitam de sistemas de regulação
gênica muito mais elaborados, o que é assegurado pelos chamados “circuitos pré programados
de expressão gênica”. Nestes, que comportam vários escalões de genes, a ativação sempre
ocorre em cadeia, e a regulação processa-se tanto a nível de transcrição como de
processamento de hnRNA.
8)
a) O operon expressa-se continuamente;
b) Idem;
c) O operon nunca se expressa;
d) Idem;
e) Ocorre síntese da beta-galactosidase, mas a cadeia da beta-galactosídeo permease é
sintetizada apenas até o ponto da mutação e não há síntese de beta- galactosídeo
transacetilase;
f) Acumulo de mRNA na célula, sempre degradando lactose.
9) Repressor - é uma proteína sintetizada pelos genes reguladores e é específica para cada
operon. A sua função é ligar-se ao sítio operador inibindo a expressão do operon.
Indutor - é uma molécula efetora que atua nos sistemas de indução e, uma vez presente,
forma um complexo com o repressor, impedindo a sua ligação ao operador, deprimindo assim
o operon.
10) Sim porque se tratando de um operon reprimível, a sua expressão é contínua a menos que
esteja presente o co-repressor específico que, neste caso, é o triptofano.
11)
a) Galr sintetiza o repressor que se liga ao operador, isto provoca a inibição do promotor, que
não aceita a ligação da RNA polimerase e, portanto, não há expressão do operon pois não
haverá transcrição nem tradução.
b) Como indutor, a galactose liga-se ao repressor sintetizado por galr, impedindo sua ligação
ao operador. Logo haverá o acoplamento da RNA polimerase e a consequente transcrição e
tradução do operon.
1) As enzimas de restrição
a) Quebram ligações fosfodiester somente em posições opostas na fita dupla de DNA
b) Atuam especificamente sobre seqüências de bases com repetições em tandem.
c) Reconhecem sítios palindrômicos e retiram bases das duas fitas do DNA.
d) Ligam-se a sítios com espaçamento regular ao longo do DNA.
e) Clivam as duas fitas de DNA dentro de sítios palindrômicos.
2) Os sítios de restrição
a) são mais frequentes em DNA viral.
b) são muito raros em DNA eucarioto.
c) ocorrem com uma frequência proporcional ao seu tamanho (em pb).
d) são tanto mais raros quanto maiores (em pb), em qualquer DNA.
e) podem conter trechos compostos pela repetição de uma única base.
3) Para gerar com a enzima de restrição A fragmentos de DNA com tamanho maior do que os
gerados com uma enzima B, como se deve proceder? Por que?
a) A enzima A deve agir à temperatura mais baixa que a enzima B, porque assim vai
reconhecer sítios de restrição com baixa estringência e, consequentemente, com maior
frequência, e portanto cortar o DNA em fragmentos maiores
b) A enzima B deve reconhecer sítios compostos de menor número de bases, porque desta
forma os fragmentos gerados serão menores.
c) A temperatura na qual a enzima A atua deverá ser necessariamente maior do que a que B
atua, independente do tamanho do sítio de restrição, porque a alta temperatura favorece a
atividade enzimática e fará com que a enzima A corte com maior frequência e gere fragmentos
menores.
d) Não é possível produzir fragmentos de restrição de tamanhos médios distintos, porque os
sítios para qualquer enzima de restrição ocorrem ao acaso.
e) O sítio de restrição da enzima A deve ser maior do que o da enzima B, porque a
probabilidade dele ocorrer no DNA alvo será menor do que o da enzima B, o que implica que a
enzima A cortará menos frequentemente que a enzima B.
Use a figura abaixo sobre a construção do cDNA para clonagem unidirecional, nas questões 5 e
6.
3) O que é um OGM
a) É um ser vivo cuja estrutura genética foi alterada pela inserção de genes de outro
organismo, de modo a atribuir ao receptor características não programadas pela natureza.
b) É um ser vivo cuja estrutura genética foi alterada pela inserção de genes do mesmo
organismo, de modo a atribuir ao receptor características não programadas pela natureza.
c) É um ser vivo cuja estrutura genética foi alterada pela inserção de RNA de outro organismo,
de modo a atribuir ao receptor características não programadas pela natureza.
d) É um ser vivo cuja estrutura fenotípica foi alterada pela inserção de genes de outro
organismo, de modo a atribuir ao receptor características não programadas pela natureza.
5) Sabemos que cada tipo de célula possui um período específico para a realização do ciclo
celular. Entretanto, durante um ciclo, sabe-se que o maior período é o da:
a. Apoptose.
b. Interfase
c. Meiose
d. Mitose
10) Certos fármacos, como a colchicina, ligam-se às moléculas de tubulina e impedem que elas
se associem para formar microtúbulos. Quando células em divisão são tratadas com essas
substâncias, a mitose é interrompida na metáfase. Células contendo dois pares de
cromossomos homólogos foram tratadas com colchicina, durante um ciclo celular. Após o
tratamento, essas células ficaram com:
a) quatro cromossomos.
b) dois cromossomos.
c) seis cromossomos.
d) dez cromossomos.
e) oito cromossomos.
11) Para fazer o estudo de um cariótipo, qual a fase da mitose que seria mais adequada usar,
tendo em vista a necessidade de se obter a maior nitidez dos cromossomos, em função do seu
maior grau de espiralização?
a) Prófase.
b) Pró-Metáfase.
c) Anáfase.
d) Telófase.
e) Metáfase.
12) Células eucarióticas diplóides em interfase foram colocadas para se dividir em um tubo de
ensaio contendo meio de cultura, no qual os nucleotídeos estavam marcados radiativamente.
Essas células completaram todo um ciclo mitótico, ou seja, cada uma delas originou duas
células filhas. As células filhas foram transferidas para um novo meio de cultura, no qual os
nucleotídeos não apresentavam marcação radiativa, porém o meio de cultura continha
colchicina, que interrompe as divisões celulares na fase de metáfase. Desconsiderando
eventuais trocas entre segmentos de cromátides de um mesmo cromossomo ou
decromossomos homólogos, a marcação radiativa nessas células poderia ser encontrada:
b) Explique de que maneira as características reprodutivas das bactérias contribuem para seu
rápido crescimento populacional.
O crescimento populacional bacteriano é possibilitado pela multiplicação assexuada
desses seres por divisão binária (por meio da ocorrência de mitose), processo extremamente
simples e rápido, que depende apenas da duplicação do material genético e da bipartição
celular.
15) A corrida contra o câncer. Se um dia você ouvir que foi encontrada a cura do câncer, não
leve a sério. O que chamamos de câncer é, na verdade, um conjunto de mais de cem doenças
que, em comum, têm apenas a célula maligna. Assinale a afirmativa INCORRETA.
a) A resposta terapêutica pode depender de características próprias de cada tipo de tumor e
próprias do paciente.
b) As células cancerosas diferem das células normais das quais elas se originam,
principalmente por perder o controle sobre a divisão celular.
c) Nos tumores benignos, as células não sofreram mutações sendo, portanto, idênticas ao
tecido do qual se originaram.
d) As células tumorais malignas normalmente diferem das células do tecido de origem e alguns
tumores podem ser causados por vírus.
Outra ocorrência envolvendo alterações do ciclo celular é relativa aos telômeros, que
são segmentos de moléculas de DNA com repetições de bases que atuam como “capas
protetoras” da extremidade dos cromossomos. Em células humanas normais, a cada ciclo
celular os telômeros são progressivamente encurtados, as extremidades dos cromossomos
ficam cada vez mais curtas, até atingir um limite mínimo de tamanho incompatível com a vida
da célula, paralisando-se as divisões celulares e sinalizando o fim da vida da célula.
Em células cancerosas esse limite é transposto graças a atividade de uma enzima, a
telomerase, que atua na reposição constante dos telômeros, mantendo-os sempre com o
tamanho original, permitindo assim, que as células se dividam continuamente e se tornem
praticamente “imortais”
Pergunta-se:
O controle do ciclo celular quando não eficaz pode gerar risco para uma divisão celular
correta. Quais os principais fatores que podem induzir essa perda do controle da divisão?
Correlacione com o surgimento do câncer, que é uma divisão exagerada da célula.