FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AGRÓNOMA

TEMA: Extracción de ADN

PRÁCTICA: 5

CURSO: Biología general

POFESOR: Blga. Acui. Yzásiga Barrera

CICLO: III

INTEGRANTES: Loyola Cano Brenda Elizabeth

Quiñones Marreros Mili Milagros

Ramos López Uber

Nuevo Chimbote - Perú

2018
I. INTRODUCCION
Según el modelo estructural propuesto por Watson y Crick en 1953, la molécula de ADN
está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble
hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se
mantienen unida, porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas
que quedan enfrentadas, de este modo podemos comparar una molécula de ADN con una
escalera de mano en la que las barras laterales están constituidas por series alternantes de
moléculas de desoxirribosa y ácido fosforito y los peldaños por pares de bases
nitrogenadas completamente unidas entre sí por puentes de hidrogeno. La unión de las
bases o apareamiento está condicionada químicamente de forma de adenina (A) solo se
puede unir con la Timina (T) y la guanina (G) con la citosina (C).
La información genética de ADN reside en la secuencia de las bases nitrogenadas. El
orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el ADN es, por
tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del
programa genético de los organismos. Conocer esta secuencia de bases, es decir,
secuenciar un ADN, equivale a descifrar su mensaje genético.
El ADN como molécula biológica presenta características físicas y químicas con las que
les puede identificar. Una de ellas, y de fácil aplicación es la absorbancia. Esta
característica mide la concentración del ADN en función de la cantidad de luz de 260nm
de longitud de onda, que es absorbida por las moléculas en la solución. La molécula
dúplex presenta menor absorbancia.
Como quiera que las proteínas absorben luz a 280 nm, se puede calcular la pureza de la
solución con la proporción 260/280.
Cualquier aplicación de las técnicas moleculares, implica necesariamente la extracción
de ADN, por lo que su ejecución en las prácticas básicas de laboratorio, es de importancia
en la formación de cualquier estudiante de ciencias.
II. OBJETIVOS
 Extraer el ADN a partir de una muestra biológica.
 Comprobar la existencia de ADN mediante espectofotometría.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

1. Se trituro 10gr de hígado de pollo con la ayuda del mortero y se agregó 15ml de
solución salina fisiológica, de esta manera se logra el rompimiento mecánico de
las membranas citoplasmáticas.
2. Se filtró la mezcla triturada usando 3 capas de gasas.
3. . Se agregó a la solución de NaCl 2M en igual volumen del filtrado, permitiendo
la liberación del agua de las células, ayudando al rompimiento de las membranas
celulares, asimismo se añadió 2 gr de detergente común y se agito fuertemente
con una varilla de vidrio durante 10 minutos aproximadamente.
4. Se vertió la solución anterior en un vaso de precipitación, agregando alcohol de
96% por las paredes del vaso hasta que se formen dos capas o fases; asimismo se
agito con una varilla de agitación suavemente llegando a observar cómo se adhiere
una fibra blanquecina transparente a simple vista en la varilla, (la fibra
blanquecina es la molécula de ADN).
5. Se tomó una muestra de las moléculas de ADN obtenidas en los pasos anteriores,
y colocamos etanol absoluto y leímos en el espectrofotómetro de UV a 260 nm.
Luego leímos la misma solución a 280 nm. Establecimos la proporción
ADN/CHON.

IV. RESULTADOS
ADN= 0,503 CHON=0,349
Reemplazamos los datos obtenidos en la fórmula:
ADN / CHON

0,503 / 0,349

1.44

 Nos dimos cuenta que si hay ADN, pero no es puro.

V. DISCUCIONES
Quesada, S. (2007) menciona que para la extracción de ADN del núcleo de las células,
es necesario homogeneizar las levaduras en hidróxido de sodio (NaOH) y sodio duocil
fosfato (SDS). Este tratamiento favorece la ruptura de la pared y de la membrana
celular, además de contribuir a la desnaturalización de las proteínas. El ADN se
encuentra en el núcleo de las células asociadas a las proteínas, con el fin de liberar el
ADN de las proteínas, se utilizan una serie de agentes desnaturalizantes. Después de
agregar los gases desnaturalizantes, se centrifuga la solución y se obtienen dos fases:
una orgánica y una acuosa, separadas por una interfase de proteínas desnaturalizadas;
en la fase acuosa se encuentra el ADN. La mezcla de cloroformo y alcohol no solo
desnaturaliza las proteínas, sino que disuelve los lípidos de la muestra y aumenta la
separación de las fases.
El ADN de la fase acuosa se recupera por precipitación. La precipitación con etanol
absoluto en presencia de una sal es un método muy utilizado en los procesos de
extracción de ADN. Luego, el ADN se disuelve en solución salina y puede ser
almacenado para utilizarlo en experimentos posteriores.
Todo lo dicho por la autora, se pudo comprobar con el experimento realizado en el
laboratorio.

VI. CONCLUSIONES
 Se pudo extraer el ADN gracias a la muestra biológica del hígado de pollo.
 Se comprobó la existencia de ADN que se extrajo del hígado de pollo;
concluyendo que la muestra que se utilizó no se extrajo ADN puro por no
encontrarse en la proporcionalidad adecuada de buena calidad de ADN.

VII. BIBLIOGRAFÍA
 Quesada, S. (2007). Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica.
Edit: EUNED. Edic: Primera edición. San José. Costa Rica.
VIII. CUESTIONARIO
1. ¿Qué otras muestras biológicas podrían utilizarse para extraer ADN?
En la práctica de laboratorio se utilizó como muestra el hígado de pollo porque están
en constante cambio el tejido de sus células; pero otras muestras que se pueden utilizar
para extraer ADN son: saliva, pelo, dientes, huesos, sangre, semen, uñas, cera de las
orejas y su método de recogida puede ser un kleenex, maquinilla de afeitar, colillas
de cigarro, condón, cepillo de dientes… Todas las muestras garantizan la misma
precisión y exactitud en el resultado.
Sin embargo, tener presente que algunas no son aptas, como la muestra de orina pues
no contiene información genética y por tanto no es apropiada para su análisis del ADN

2. ¿Cuál es el modelo estructural del ADN?

La identificación de la estructura del ADN está considerada el descubrimiento más
importante de nuestro siglo en el campo de la biología. De acuerdo con este modelo,
el ADN es una macromolécula constituida por dos hebras o filamentos enrollados uno
sobre otro en sentido dextrógiro (es decir, en el del movimiento de las agujas del
reloj), formando así una doble hélice. Cada hebra está constituida por una larga
secuencia de nucleótidos, que forman el esqueleto de la macromolécula de ADN. Los
nucleótidos se unen entre sí por un enlace fosfodiéster entre los azúcares (es decir,
entre un grupo fosfato, PO4-3, enlazado a un azúcar y un hidroxilo, OH, del azúcar
del nucleótido precedente). La información genética está contenida en las distintas
secuencias de nucleótidos del esqueleto del ADN. Las dos hélices de ADN se
mantienen unidas por enlaces débiles de naturaleza física, los enlaces de hidrógeno,
y por enlaces químicos débiles, los enlaces de Van der Waals. Los pares de bases son
perpendiculares al eje principal de la molécula: una vuelta completa de la hélice sobre
sí misma comprende diez pares de bases. Las dos hélices están polarizadas, es decir,
poseen una dirección, que viene determinada por el extremo libre del último
nucleótido, el cual puede ser el carbono número 3 o el número 5 de la molécula de
desoxirribosa; en consecuencia, cada hebra de ADN poseerá una extremidad 5' - 3' y
la otra en dirección 3' - 5', y se dice que son antiparalelas.
3. ¿El ADN que se extrae siguiendo el procedimiento planteado es puro? ¿Por
qué?
No es puro, porque se considera ADN de buena calidad si la proporción 260/280 está
entre 1.8 y 20; siendo así que nuestro resultado de acuerdo con la práctica de
laboratorio nos sale 0.503/0.549= 0.916 lo que significa que no está en la proporción
establecida por ende nuestra muestra sale que no se extrajo ADN puro.

4. Explique la aplicación de la característica estudiada en la técnica aplicada.

La primera técnica utilizada para la identificación de fragmentos de ADN fue el

Southern blot. Se transfiere al ADN de un gel de agarosa a una membrana donde se
hibridiza con una sonda marcada radioactivamente.