Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Fisiología celular

Práctica 3. Estudio de la penetración de

sustancias a células normales

Grupo: 4FV1 Equipo:2

· Ávila Benítez Diana
· Cortés Zenteno María Fernanda
· Gómez Barrios Hugo
· Marcos Cruz Gerardo
Introducción
La célula es la unidad anatómicamente funcional de un ser vivo. Es importante
conocer las funciones que continuamente se realizan dentro de ella como el efecto
de sustancias dentro y fuera de la célula, por ello se debe estudiar la permeabilidad
celular.

Una célula eucariótica se encuentra rodeada por una membrana celular (membrana
plasmática) y el límite entre ella y su entorno es esa membrana. La membrana tiene
un espesor de más o menos 10 nm y está compuesta por una capa doble (bicapa)
de fosfolípidos y por proteínas, las cuales con frecuencia poseen cadenas de
oligosacáridos. En general, las membranas pueden ser: permeables, impermeables
y semipermeables. Las membranas permeables permiten el paso del soluto y del
disolvente, las impermeables impiden el paso de ambos y las semipermeables
permiten pasar el disol!ente pero impiden el paso de determinados solutos.

La permeabilidad de la membrana celular es la facilidad con la que un soluto se

desplaza a través de ella por difusión.
En ello intervienen dos factores:
* Celular: Dado por la estructura y composición de la membrana celular muestra
permeabilidad selectiva para diferentes sustancias, estas atraviesan la membrana
celular por diversos mecanismos de difusión.
* Fuerzas físicas y químicas que empujan a las sustancias a atravesar la membrana
celular como lo es el gradiente de concentración, la carga eléctrica, y la ósmosis.

La membrana celular se comporta de forma aproximada como una membrana

semipermeable, es decir dejando pasar el agua pero no los solutos.
Cuando se colocan soluciones de distinta concentración, separadas por una
membrana semipermeable, las moléculas de disolvente, pasan habitualmente desde
la solución con menor concentración de solutos a la de mayor concentración. Este
fenómeno recibe el nombre de ósmosis. Al suceder la ósmosis, se crea una
diferencia de presión en ambos lados de la membrana semipermeable, conocida
como, la presión osmótica.
La ósmosis tiene una gran importancia en los seres vivos. Las células de los
organismos están rodeadas por fluidos acuosos, como la sangre, la linfa, o la savia,
que contienen concentraciones de diferentes solutos. Las membranas celulares son
permeables al agua,oxígeno,nitrógeno, dióxido de carbono, y a otras moléculas
orgánicas de pequeño tamaño, como glucosa o aminoácidos, mientras que son
impermeables a las moléculas poliméricas, como proteínas y polisacáridos.
Las células también tienen la capacidad de transportar especies químicas a través
de su membrana desde una región de baja concentración de la especie a una región
de concentración más elevada, en sentido contrario al del flujo espontáneo,
transporte activo. F .
El transporte activo requiere de energía metabólica ATP, este transporte va en
contra de su gradiente de concentración se divide en:
Transporte activo primario: Si no está presente el ATP la proteína no permite la
entrada o salida de un soluto.
El transporte activo secundario no requiere ATP, utiliza el gradiente que genera el
transporte activo primario.
En ausencia de transporte activo, la membrana celular permite el paso de moléculas
de agua y de todos los solutos permeables hasta que se igualen sus respectivos
potenciales químicos a ambos lados de la membrana. No obstante, existe un gran
número de especies, tanto en el fluido que rodea la célula como en el fluido celular o
citoplasma, que no pueden atravesar la membrana. En una solución hipertónica hay
mayor concentración de solutos fuera de la célula que dentro, por lo que la célula se
deshidrata. En el caso de una solución hipotónica la concentración de soluto es
menor en el exterior que al interior de la célula lo que produce que entre mayor
cantidad de agua a la célula y esta se reviente o lise. Este fenómeno se conoce
como hemólisis. Esto se ejemplifica en la fig. 2.
También existe otro tipo de transporte que es el transporte pasivo.
El cual lleva una difusión de sustancias a través de la membrana; se produce
siempre a favor del gradiente. Este transporte puede darse por:
I) Transporte pasivo simple (difusión simple). Ciertas sustancias como las pequeñas
moléculas lipídicas (hormonas esteroideas, anestésicos, fármacos liposolubles) y
sustancias apolares (sin carga eléctrica). Este tipo de transporte no requiere un
gasto de energía.
II) Transporte pasivo facilitado (difusión facilitada). Las moléculas hidrófilas (agua,
iones, glúcidos, aminoácidos...) no pueden atravesar la doble capa lipídica por
difusión a favor del gradiente de concentración. Determinadas proteínas
transportadoras de la membrana actúan como "puertas" para que estas sustancias
puedan salvar el obstáculo que supone la doble capa lipídica. Este tipo de
transporte tampoco requiere un consumo de energía pues se realiza a favor del
gradiente de concentración.

Fig.1. Diagrama del transporte pasivo y el transporte activo.

Fig. 2.Efecto de la diferencia en presión osmótica en eritrocitos en plasma con
distintas concentraciones.

Mientras la tonicidad se refiere al efecto de las concentraciones en la célula,

isotónico, hipertónico e hipotónico; que la osmolaridad se refiere a la concentración
de soluciones e interiores de células.
Osmolaridad. Se considera con frecuencia en estudios fisiológicos de difusión a
través de membranas celulares, al ser la intensidad de la presión producida por un
soluto, proporcional a su concentración en número de iones o moléculas.
Una solución 1.0 osmolar es aquella que contiene un osmol de una sustancia en un
litro de solución.

La velocidad de difusión en una membrana semipermeable depende del coeficiente

de partición y el peso molecular de la substancia.
Mide la solubilidad de una substancia en aceite en comparación con el agua. A
medida que se eleva esta relación la facilidad de paso de la sustancia a través de la
membrana aumenta.” Esto tomando en cuenta que la membrana celular permite el
paso de sustancias liposolubles.
Un ejemplo de esto son los alcoholes moléculas polares solubles en agua, su
polaridad depende del tamaño de la molécula. Los alcoholes poseen un grupo OH
que le da polaridad a la molécula siendo muy soluble en agua pero a su vez es
restringida por el número de carbonos.
Objetivos

● Determinar los factores que intervienen en la penetración de algunas

 sustancias a través de la membrana celular por difusión simple.
● Determinar la concentración de soluciones electroliticas y no electrolíticas a la
cual una suspensión de glóbulos rojos llega a hemólisis.
● Determinar los tiempos de hemólisis de una serie de alcoholesisoosmoticos
para poder realizar una relación de éste con el coeficiente de partición de
dichos alcoholes.

Fundamento

● Se utilizan eritrocitos ya que al contener hemoglobina, ésta nos sirve como un

indicador por su característico pigmento rojo.
● Se utilizan soluciones electrolíticas y no electrolíticas a diferentes grados de
dilución para así poder observar que al tener una solución hipotónica, con
respecto a los eritrocitos, es decir una solución que tiene una concentración
menor de solutos que la presente en el citosol de los eritrocitos las moléculas
de agua entran en las células a mayor velocidad que las que salen, lo que
aumenta el volumen de los eritrocitos y, por último, su estallido (hemólisis).
● se utilizará una serie de cuatro alcoholesque son liposolubles e isoosmoticos
para al tener características similares se pueda hacer una correcta
comparación de la relación entre tiempo de hemólisis y el coeficiente de
partición de cada uno de éstos.

Desarrollo experimental

I. Preparación de la suspensión de glóbulos rojos.

II. Preparación de los patrones negativo y positivo de comparación.

III. Determinación de la concentración hemolizante para soluciones de electrolitos y

no electrolitos.

IV. Determinación de los tiempos de hemólisis para sustancias lipofílicas (serie

homóloga de alcoholes).

Resultados
FIGURA 1.- Concentración hemolizante de diversas soluciones. los
datos representan las medianas.
FIGURA 2.- Osmolaridad hemolizante de diversas soluciones. los datos representan
las medianas. Las diferencias en los valores medios entre los grupos de tratamiento
no son lo suficientemente grandes como para excluir la posibilidad de que la
diferencia se deba a la variabilidad del muestreo aleatorio; no existe una diferencia
estadísticamente significativa (P = 0,302).
 FIGURA
3.- efecto del aumento del peso molecular en el tiempo de hemólisis. los
datos representan la media ±e.e, n=6.

FIGURA 4.- efecto del aumento del coeficiente de partición en el tiempo

de hemólisis. los datos representan la media ±e.e, n=6
 .
FIGURA 3.- efecto del aumento del coeficiente de partición dividido
entre el peso molecular en el tiempo de hemólisis. los datos representan
la media ±e.e, n=6.

Discusión de resultados

Para el estudio de la permeabilidad en membrana celular de eritrocitos, se preparó

una suspensión de glóbulos rojos, al introducir sangre en una solución fisiológica
(NaCl 0.9%), con la finalidad de mantener forma y volumen de los eritrocitos,
posteriormente se prepararon patrones positivo y negativo, colocando la suspensión
en soluciones hipotónicas (en agua) e isotónicas respectivamente. El patrón
negativo conservó su estado, mientras que el patrón positivo se volvió turbio debido
al gradiente de concentración que se forma en la membrana, lo que induce una
fuerza motora provocando que moléculas de agua entren más rápido en la
membrana de lo que salen y a su vez un aumento en el volumen, que termina con
una ruptura, que recibe el nombre de hemólisis, este último patrón sirvió para
determinar mediante una comparación la hemólisis de eritrocitos en soluciones de
electrolitos y no electrolitos a las siguientes concentraciones: 0.2, 0.1, 0.05, 0.025
M.
El grupo de datos obtenidos para la concentración de hemolizante en cada solución
se muestran en la figura 1. los resultados indican que la hemólisis en soluciones de
electrolitos la concentración es mayor en NaCl y KCl, pero menor en BrCl 2, en
solución no electrolítica la concentración fue mayor que en los electrolitos, que es lo
que se esperaba por el número de partículas osmóticamente activas en la solución,
por este motivo algunas soluciones tenían que estar más diluidas para presentar
una menor cantidad de soluto que la del eritrocito, en contraste con los resultados
de la osmolaridad hemolizante figura 2. las cuatro soluciones llegan a hemólisis a la
misma osmolaridad, más o menos de 100 mOsm, que apunta a la disminución de
partículas osmóticamente activas que necesariamente debe ser menor a 300
mOsm, para poder afectar la tonicidad del eritrocito, por estas razones las
concentraciones podrían variar, por el hecho de tener que reducir el número de
partículas, pero la osmolaridad no ya que esta tiene que llevarse a cabo en
aproximadamente el mismo intervalo, porque como se sabe la osmolaridad es una
variable regulada.

Además del gradiente de concentración existen otros factores que influyen sobre la
permeabilidad de la membrana, para comprobar esto se determinó el tiempo de
hemólisis a una serie de alcoholes que difieren en peso molecular, coeficiente de
partición y permeabilidad.

La ley de Fick contempla la liposolubilidad, cuanto mayor sea ésta, mayor será la
rapidez de difusión en la bicapa lipídica, por lo tanto, a mayor coeficiente de reparto
mayor rapidez de difusión, el peso molecular también influye a mayor peso
molecular mayor tiempo de difusión, los resultados obtenidos no representan ese
comportamiento por lo que los tiempos de hemólisis probablemente fueron mal
registrados. La permeabilidad (relación peso y coeficiente), es un parámetro que sí
nos permite saber que alcohol en este caso, penetra con mayor facilidad , que es el
alcohol butilico, lo cual coincide con los datos experimentales y teóricos.

Conclusiones

● En solutos no penetrantes KCl, NaCl, Ba2Cl, Sacarosa, las soluciones son

hipoosmolares e hipotonicas.
● Los eritrocitos en soluciones hipotónicas tienen distinta concentración y
osmolaridad hemolizante, su osmolaridad dependerá del grado de disociación
del electrolito.
● El tiempo de hemólisis es directamente proporcional al peso molecular e
inversamente proporcional a la liposolubilidad de los alcoholes.
● El alcohol butilico tiene un tiempo de hemólisis menor al resto de los
alcoholes utilizados.

Bibliografía

● FISIOLOGÍA GENERAL-TRANSPORTE A TRAVÉS DE

 MEMBRANA Jesús Merino Pérez y María José Noriega,.
Universidad de Cantabria,recuperado de:
http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-
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● Tortora-Derrickson., Principios de Anatomía y Fisiología 13a Ed.-
México. Editorial Médica Panamericana., 2013. pag; 68-75.
● Giesse Arthur C. 1983 Fisiología celular y general Ed.
Interamericana, 5 ed., pp 427-450