Practica 8.

Aislamiento y Cuantificacion de Microorganismos

EQUIPO 6
Rojas Morales Alberto

Análisis de Resultados
Muestra Evaluar: Pulque
Tabla 1
Medio de Cultivo Descripción:
Agar EMB Dilución: N/A

24HRS: 0 UFC 48 HRS: 0 UFC

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de

bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas
exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae

Agar nutritivo Dilución: 10-3

24HRS: 0 UFC 48 HRS: 0 UFC

Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para

el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo
que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso está descripto en muchos procedimientos para el
análisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria.
Agar nutritivo Dilución: 10-4

24HRS: 0 UFC 48 HRS: 3 UFC

Morfología colonial: ver tabla 2

Agar nutritivo Dilución: 10-5

24HRS: 0 UFC 48 HRS: 2 UFC

Morfología colonial: ver tabla 2

Agar nutritivo Dilución: 10-6

24HRS: 0 UFC 48 HRS: 2 UFC

Morfología colonial: ver tabla 2

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Tabla 2 Morfología colonial

Medio (agar nutritivo) Notas:
M.O.: N/A La morfología colonial esta reportada para
Tamaño: 2mm las siguientes muestras, ya que presentaron
Forma: circular el mismo tipo de características
Color: amarillo pálido macroscópicas:
Borde: entero
Elevación: convexa
Superficie: lisa Agar nutritivo Dilución: 10-4
Luz transmitida: opaca Agar nutritivo Dilución: 10-5
Luz reflejada: mate Agar nutritivo Dilución: 10-6
Otros:
Pigmentación: amarillo pálido

El pulque:

El pulque por si solo tiene una cantidad considerable de flora microbiana acompañante por lo que es
necesario describir un poco mas este tipo de bebida:

El pulque es una bebida tradicional Mexicana que se obtiene por la fermentación de la savia azucarada
conocida como aguamiel obtenida a partir de diferentes especies de maguey. Se caracteriza por ser una
bebida alcohólica, blanca, con olor fuerte y viscosa.

El proceso de fermentación inicia en el maguey, donde se encuentran microorganismos autóctonos como

levaduras, bacterias lácticas, bacterias productoras de etanol y bacterias productoras de exopolisacaridos
La literatura reporta que a partir del pulque se pueden recuperar diversos grupos microbianos clasificados
como:

Subdivisión: Subdivisión: hongos levaduriformes

Bacillus-Lactobacillus-Streptococcus proteobacteria pertenecientes a los
géneros
Lactobacillus cepa ASF360 AF157050 Acetobacter pomorium AJ001632 Sacharomyces cerevisiae
Lactobacillus acidophilus M99740 Zymomonas mobilis AF281034 Saccharomyces sp
L. hilgardii M58521
L. plantarum D79210
y Leuconostoc mesenteroides spp
mesenteroides

Dentro de los géneros recuperados con un 98% de probabilidad del pulque se destacan los géneros
Zymomonas sp, Lactobacillus sp y Saccharomyces sp.

Por lo tanto es posible recuperar alguno de estos microorganismos a partir del pulque, además de los
microorganismos que puedan llegar a contaminarlo; en este caso podemos hablar de falta de higiene en la
preparación de esta bebida lo que conlleva a la aparición de de microorganismos patógenos o incluso a que
esta bebida allá sido preparada con aguas contaminadas con enterobacterias, en especial coliformes que
supondrían alguna contaminación fecal en el agua.
estas enterobacterias podrían haber sido identificadas en el Agar EMB por medio de sus características
macroscópicas (morfología colonial) algunos ejemplos:

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Microorganismos Tipo de Colonia

Escherichia coli ATCC 25922 Verdosas con brillo metálico y centro negro
azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa púrpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras

También cabe destacar que el medio reporta un plazo de 24hrs - 48hrs para reportar esta clase
microorganismos; por lo que al no presentarse en nuestro Medio Agar EMB podemos suponer que no se
encontraban enterobacterias ni coliformes en nuestra muestra de pulque.

En cuanto al agar nutritivo la cantidad de colonias aisladas en 48 hrs, no es estadísticamente significativo

(rango 30- 300 UFC ) por lo que se omite el conteo de estas; y la morfología colonial se reporta en la tabla 2;
siendo, esta prueba, insuficiente para llevar a cabo la identificación de cualquier microorganismo contenida
en ella.

A manera de ejemplo se muestra como se llevaría a cabo la determinación de viables en la técnica de

diluciones seriadas y vertido en placa.

-1 -2 -3 -4 -5 -6
10 10 10 10 10 10

-1 -2
Se omiten las placas donde el numero de colonias es superior a 300 (10 y 10 ) y donde es menor a 30
-4 -5 -6 -5
(10 10 y 10 ) para que el conteo sea estadísticamente significativo; se toma el recuento de 10 donde el
recuento son 159 colonias y se multiplica por su factor de dilución que es el reciproco de la dilución
3
empleada; el cual es 10 ; el resultado de esta multiplicación se expresa en UFC/ml; el resultado es 1.59 x
5
10 UFC/ml que se encontraban en la muestra original.

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Conclusión:

Se puede concluir a partir de la de la placa de Agar EMB que la muestra de pulque estaba exenta de
enterobacterias y también de coliformes aunque estos resultados podrían apoyarse en técnicas especiales
para coliformes como la del numero más probable o el de filtración de membrana; para determina que en
verdad no corrupto con agua contaminada.

A partir de las placas de Agar Nutritivo se puede concluir que el numero de colonias son estadísticamente
insignificantes , por lo que no se llevo a cabo un recuento estadístico, no se pudo determinar el tipo de
microorganismo a partir de la morfología colonial aunque se sospecha que sea algún microorganismo de los
géneros Zymomonas sp, Lactobacillus sp y Saccharomyces sp. ya que estos son parte de la biota natural del
pulque pero se necesitaría. hacer tinción de gran y pruebas bioquímicas para determinar si esto es cierto.

En cuanto a las colonias contabilizados parecen ser de crecimiento lento, lo que explicaría porque a las 24
hrs no existía crecimiento y porque a las 48 hrs solo había unas pocas, aunque aparentemente por los
-3
resultados podría existir algún error en la dilución de 10 ya que no se apreciaban colonias después de
24hrs, siendo que diluciones menores tenían por lo menos 2 UFC , aunque esto no afecto el conteo ya que
no se realizo el estadístico y aparentemente la muestra estaba libre de microorganismo del genero
Enterobacteriaceae.

En cuanto al método de diluciones seriadas y vertido en placa se deben tomar en cuenta que la
determinación de microorganismos viables no solo depende del tamaño del inoculo si no de lo adecuado
que sea el medio de cultivo y de las condiciones de incubación, así como su duración de la misma.
por lo que los microorganismos depositados tendrán velocidades de crecimiento diferentes y colonias muy
pequeñas pueden pasar desapercibidas. una recomendación muy citada en libros y artículos es hacer las
placas por duplicado y realizar un promedio de las colonias contadas.
este método es bastante fiable y se usa ampliamente en la industria alimentaria, la industria láctea,
medicina y microbiología acuática.

Este método tiene una elevada sensibilidad, se pueden contar muestras con pocos microorganismos, el uso
de medios selectivos permite determinar viables de microorganismos particulares en una población mixta.

Referencias:

1. Index of /esp/productos/b02. Available at: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/

[Accedido Septiembre 3, 2009].
2. Enterobacterias. Available at: http://www.slideshare.net/guestbc1024/enterobacterias-288418
[Accedido Septiembre 3, 2009].
3. Madigan, M., 2004. Brock biología de los microorganismos 10º ed., México: Prentice Hall
Hispanoamericana.
4. Patríck R. Murray, Microbiología médica, Versión en español de la 5.a edición de la obra en inglés
Medical Microbiology, Copyright © MMV Elsevier Inc., an Elsevier Imprint
5. Benson H. Microbiological applications : laboratory manual in general microbiology : complete
version. 8º ed. Boston [etc.]: McGraw-Hill; 2002
6. Cervantes-Contreras, et al, El pulque: características microbiológicas y contenido alcohólico
mediante espectroscopia Raman. Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología-Instituto
Politécnico Nacional, Ticoman, México D.F , Departamento deMicrobiología. Pontificia Universidad
Javeriana

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