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Practica 2: Determinación de Proteínas Totales Plasmáticas

Resumen: La sangre es un medio importante para conocer el estado general de un paciente debido a la multitud de
funciones que realiza, como el transporte de metabolitos. Es por esta función de transporte que los exámenes
sanguíneos son importantes, pues transporta una gran cantidad de elementos importantes para el cuerpo, entre los
cuales contamos con las proteínas plasmáticas. Estas son una serie de proteínas que desempeñan sus funciones al ser
transportados a diversos lugares por medio de la sangre. La manera de medir estas es a través de una proteinograma,
el cual después de realizarlo da como resultado una serie de 5 fracciones en una gráfica. La primera fracción habla de
la albumina, cuya función es mantener la presión oncótica. Las porciones alfa y beta, aunque distintas, tienen de
manera general una función similar que es regular otras proteínas proteolíticas, es decir, son antiproteolíticas. La
porción beta posee algunas proteínas plasmáticas importantes para el transporte, mientras que la gamma brinda las
proteínas de defensa especifica en el cuerpo humano. Algunas maneras de obtener estas proteínas, consta de utilizar
colorantes, que mas tarde son comparados con una medida estándar a través de un espectrofotómetro y nos dará como
resultado la concentración. Los alumnos realizaron la prueba de Biuret y de Verde bromocresol en suero obtenido en
clase. AL final obtuvieron resultados favorables tanto para las proteínas totales como para la albumina contenido en
el suero.

Objetivos: Que los alumnos sean capaces de comprender la importancia de las proteínas plasmáticas en el área de la
salud. Además, el alumno será capaz de manejar los datos obtenidos de la proteinograma para una finalidad clínica.

Introducción por la Albumina, que no posee actividad hormonal ni


enzimática conocida. Posee una gran carga a pH de 7,4
La sangre es un elemento altamente importante para con -20 cargas. Con una vida media de 20 días y
los profesionales de la salud, tanto por sus funciones gracias a esta carga, es responsable de unirse a una
como por ser una fuente excelente para conocer el gran cantidad de sustancias, así como mantener la
estado del medio interno del paciente. La sangre está presión oncótica. No es una glucoproteína y no
constituida por dos elementos, uno compuesto por las aumenta la viscosidad de la sangre. Ayuda a verificar
células y denominadas en su conjunto como elementos el estado nutricional del paciente. (2)
formes, y que abarcan cerca del 45% de la sangre.
Cerca del 99 % de estas células está constituido por los Entre algunas de las globulinas de la fracción α1 es la
eritrocitos, celas que poseen la proteína hemoglobina α1 – antitripsina, una proteína sintetizada en los
y del intercambio de CO2 por O2. El resto son los hepatocitos y macrófagos y se encarga principalmente
leucocitos entre los que se encuentran las células de inhibir la serina proteasa, la tripsina, elastasa entre
granuladas, monocitos y los linfocitos. Estos últimos otras proteínas. Esto con la finalidad de evitar que las
se encargan de las funciones de defensa del organismo. proteasas generen un daño importante durante las
El segundo de estos hace referencia al liquido donde infecciones. El grupo α2, posee como algunas de sus
se encuentran suspendidas estas células, denominado principales proteínas la haptoglobina, la α2 –
plasma. Este es el sobrenadante resultante de la macroglobulina y ceruloplasmina. La primera de estas
centrifugación de la sangre presencia de un es una glucoproteína cuya función es unirse a la
anticoagulante y representa cerca de 55% del volumen hemoglobina con la finalidad de unirse a la
de la sangre. A su vez este tiene presente agua en hemoglobina para evitar la pérdida de Hierro por la
aproximadamente 90% de su peso y sirve como muerte de eritrocitos. La segunda, es también una
disolvente para una serie de solutos que representan el glucoproteína que transporta cerca del 10 por ciento de
porcentaje restante. (1). Zn, incluye proteínas del complemento C3 y C4 y es
inhibidor de proteinasas. Por su parte la
Entre estos solutos se encuentran principalmente las ceruloplasmina se une al 90% del Cobre, donándolo
proteínas plasmáticas. Para realizar el análisis de esta con menor facilidad que la albumina. Por su parte las
se utiliza la electroforesis. El resultado de este es el de β – globulinas tienen como principal representante a la
5 bandas distintas, designadas como fracciones glucoproteína Transferrina. Esta se encarga del
proteicas. Las bandas son la fracción albúmina, α1, α2, transporte de hierro hacia las células. (2).
β y γ. La mayoría de estas proteínas son sintetizadas
en el hígado y la última de estas representa las Por su parte, la fracción γ está comprendida por las
inmunoglobulinas sintetizadas por linfocitos. Cerca inmunoglobulinas o anticuerpos, que son producidos
del 50% de las proteínas plasmáticas está representado por los Linfocitos B. Estas son estimuladas por
sustancias llamadas antígenos y reconocen una amplia Ninguna de las dos técnicas tiene una alta sensibilidad.
cantidad de estructuras antigénicas especificas (6).
llamados epítopos. Poseen forma de Y con dos
unidades idénticas llamadas cadenas pesadas (H) y dos La albumina reacción con el colorante verde de
idénticas llamadas cadenas ligeras (l). Las cadenas bromocresol, formando una sustancia color verde
largas son diversas α, γ, δ, µ y ε. Cada una de estas son proporcional a la concentración de albumina en la
respectivamente para la IgG, IgA, IgM, IgD e IgE. Por muestra. (7)
otro lado, solo poseen dos tipos de cadenas cortas κ y Metodología
χ. La IgG es la principal de las inmunoglobulinas en
adultos, principal responsable de la opsonización de Materiales:
bacterias, fija el complemento y neutraliza toxinas. Es
capaz de cruzar la placenta. La IgA impide la fijación  Aguja Vacutanier
de bacterias y virus a mucosa. La IgM se produce en  Capsula vacutanier
la respuesta primaria a antígeno, fija el complemento  3 tubos de recolección de muestra
 6 tubos de ensayo
y es receptor de antígenos sobre la superficie de
 8 pipetas
células B. No logra cruzar la placenta. La IgD es un
 8 propipetas
receptor de antígenos en células B, sin embargo, no se
 Micropipeta
conoce su función. Finalmente, la igE libera
 Puntas para micropipeta
mediadores de células cebadas y basófilas en presencia
 Celdillas para espectrofotómetro
de alérgenos. También se interfiere en la liberación de
 Solución salina al 0.9 %
eosinófilos en presencia de parásitos. (3)
 Solución preparada de reactivo de Biuret
Los valores normales para cada una de las proteínas  Solución de verde de bromocresol
mencionadas son (4)(5):  Suero control
 Suero sanguíneo no hemolizado
Proteínas plasmáticas totales: 6-8g/dL
Método:
 Albumina: 3,2-5 g/dl
 α1 – antitripsina: 150-350 mg/dl  Extracción de sangre
 α2 – macroglobulina: Dato no encontrado.
La persona a la que se le realizara el procedimiento se
 Ceruloplasmina: 22-61 mg/dl sentara una altura apropiada para la persona que lo
 Transferrina: 200-370 mg/dl llevara a cabo. La primera debe estar sentada recta y
 Inmunoglobulinas extender el brazo levemente hacia abajo y hacia la
o IgG: 680-1.530 mg/dl persona que realizara el procedimiento. La persona
o IgA: 70-400 mg/dl sentara comenzara a abrir y cerrar los dedos sobre la
o IgM: 40-240 mg/dl palma. Tras esto se le debe colocar una banda elástica
o IgD: Hasta 15 mg/dl aproximadamente 10 cm arriba de donde se tomará la
o IgE: <100 Ul/ml sangre, que será en la vena mediana cubital. Después
de colocar la banda, el área debe de recibir asepsia con
En cuanto a la obtención de los valores de proteínas
una torunda con alcohol al igual que el agua. La
plasmáticas se utilizaron dos técnicas muy
persona deberá cerrar el puño, y se le introducirá la
importantes. En primer lugar, se utiliza la técnica de
aguja unido a la capsula vacutanier con el bisel
Biuret, en la cual los enlaces peptídicos, por medio de
señalando hacia arriba y una inclinación de
los grupos carbonilos e imínicos, reaccionan con sales
aproximadamente 45 grados respecto al brazo. La
de cobre cuando están en un medio alcalino para
aguja debe entrar un poco y tras comenzar a observar
formar un complejo. Este complejo es de color azul-
la sangre pasando por la aguja, se debe colocar el tubo
morado, que se intensifica con la cantidad de
de recolección, siempre manteniendo el complejo
proteínas. Otra de las técnicas utilizadas para obtener
aguja – capsula estable y sin movimientos mientras se
las proteínas plasmáticas es el de la técnica de
coloca y reemplaza cada uno de los tubos de
refracción, en la cual se compara el índice de
recolección. Finalmente, debe retirarse
refracción de los sueros, suponiendo que solo varían
cuidadosamente el Vacutanier y mientras la aguja sale,
por las concentraciones de las proteínas plasmáticas.
colocarle una torunda con alcohol. Las muestras
recolectadas deben ser etiquetadas correctamente. Se
deberá esperar 15 minutos para la coagulación de la
sangre y tras esto se procederá a centrifugar durante 10
minutos a 2500 RPM.

 Técnica de biuret

Se tomarán 3 tubos de ensayo, que serán marcados


para su reconocimiento. Uno de los tubos será el
blanco, otro el estándar y el ultimo el problema. A
todos los tubos se les añadirá, con ayuda de una pipeta,
5.0 mL de reactivo de Biuret. Posteriormente se les
agregara respectivamente y con ayuda de una
micropipeta la cantidad de 0.1 mL (100 µL) de
solución salina, suero estándar y suero sanguíneo del
paciente. Se agitará con suavidad, y reposarán por 15
minutos tras los cuales serán llevados al
espectrofotómetro. Este será ajustado con el tubo de
ensayo blanco a 550 nm. Posteriormente, medirán las
longitudes de onda del tubo de ensayo con la solución
estándar y con el suero sanguíneo.

 Método de verde bromocresol


Figura 1. Técnica de Biuret. De izquierda a derecha:
Se tomarán 3 tubos de ensayo que serán marcados de Solución blanco, solución estándar y solución
la misma forma que en la anterior técnica. A cada uno problema.
se le agregaran 3 mL de verde de bromocresol.
En cuanto a la técnica de Verde bromocresol, tal como
Posterior a esto, se le agregaran 0.05 mL (µL) de
se esperaba, el tubo blanco no tuvo ningún cambio de
solución salina, solución estándar y suero plasmático
coloración, mientras que los otros dos notaron un
respectivamente. Se dejará reposar aproximadamente
cambio de color a uno verde. El tubo Estándar tenía un
10 minutos tras los cuales se llevará al
color más profundo que el de la solución Problema. En
espectrofotómetro. Este debe ser ajustado a 640 nm y
la figura 2 podemos observar el cambio mencionado.
Resultados

En el caso de la extracción de sangre, se obtuvieron


correctamente 3 muestras de sangre obtenidas del
paciente. Sin embargo, este procedimiento fue llevado
a cabo por una persona ajena al equipo.

En el caso de la técnica de biuret, los tubos de ensayo


Estándar y Problema cambiaron a una tonalidad
levemente azul – morada, mientras que en el tubo
Blanco no se mostró ningún cambio notable. El
primero tenía un color más marcado que el segundo.
Esto se puede observar en la figura 1, donde estos se
observan.
3.49 𝑔/𝑑𝐿
= 56.5%
6.187 𝑔/𝑑𝐿

Podemos hacer una relación de la cantidad de


albumina con respecto a las proteínas totales de un
56.5%.

Discusión

En primer lugar, se debe hablar acerca de las técnicas


utilizadas. Tal como se mencionó anteriormente, la
técnica de Biuret no tiene una gran sensibilidad. La
causa de esto podría ser el hecho de que la presencia
de cada enlace peptídico aumenta la concentración de
la coloración. Esto indica que si existe una proteína
con una gran cantidad de aminoácidos se volverá
bastante marcada la coloración. En cuanto a la otra
técnica, en las fuentes no se habla acerca de su
sensibilidad. Por lo tanto, se debe en primer lugar
dudar acerca de que tan fiables son las pruebas. Claro
de que además siempre existe la posibilidad de que la
técnica haya sido realizada incorrectamente.
Figura 2. Verde de bromocresol. De izquierda a En segundo lugar, al obtener los resultados,
derecha: Solución blanco, solución estándar y solución suponiendo que son lo suficientemente fiables, se
problema. pueden comparar para obtener diversos datos. Las
Tras realizar la obtención de datos en el proteínas plasmáticas totales fueron de 6.187 g/dL,
espectrofotómetro se observó que tras la técnica de que, aunque ronda cerca del valor mínimo (6-8 g/dL),
Biuret la solución estándar tenía una absorbancia de sin embargo, sigue estando dentro de los limites. Se
794 mientras que el problema de 692. En cuanto a la puede comparar también la albumina, que alcanzó
solución verde de bromocresol, la primera tenía una niveles de 3.49 g/dL de los 3.2 – 5 g/dL que tienen de
absorbancia de 1.161 y la solución problema de .548. permisibilidad. Tras haber mencionado esto, se puede
La solución estándar tenía una concentración conocida retomar el tema de la relación de la albumina en
de 7.1 g/dL de proteínas plasmáticas totales y 7.4 g/dL contraste con las proteínas plasmáticas totales es de
de albumina. Al final se realizó una operación 56.5%, que tal como nos dicen los valores
(formula 1.1) para obtener el valor de proteínas totales mencionados anteriormente se encuentran de un rango
en la sangre a partir del valor ya conocido. La fórmula aceptable, pues este va del 50 al 60%.
1.2 permite conocer el valor de albumina en las Por lo tanto, todo esto nos indica que, el paciente
proteínas. debería tener una condición sana, puesto que todos los
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑔 𝑔 valores se encuentran del rango. Ambos valores rozan
𝑥 71 = 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎𝑠 𝑝𝑙𝑎𝑠𝑚𝑎𝑡𝑖𝑐𝑎𝑠
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝐿 𝑑𝐿 dentro de los limites más bajos, sin embargo, siguen
siendo aceptables. Probablemente los bajos niveles de
𝐹𝑜𝑟𝑚𝑢𝑙𝑎 1.1
albumina se deban a una hiperhidratación, y esto a su
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑔 𝑔 vez afecta en los valores de proteínas totales.
𝑥 74 = 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎𝑠 𝑝𝑙𝑎𝑠𝑚𝑎𝑡𝑖𝑐𝑎𝑠
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑑𝐿 𝑑𝐿
Conclusión
𝐹𝑜𝑟𝑚𝑢𝑙𝑎 1.2
Las proteínas plasmáticas son un conjunto de proteínas
Si se sustituyen los valores obtenidos en cada una de presentes en la sangre y que nos ayudan a determinar
las pruebas del espectrofotómetro se obtiene que las el estado de salud de una persona. Por lo tanto, es
proteínas totales de la muestra fueron de 6.187 g/dL necesario que el alumno aprenda a medir los valores
mientras que la albumina fue de 3.49 g/dL. normales para determinar enfermedad y salud. En el
experimento realizado se determinaron valores dentro
Al realizar la siguiente operación:
de lo normal para la proteína plasmática y albumina de 2. ¿A que puede deberse un nivel por arriba de
una persona, asumiendo que su estado general es el los valores normales de proteínas totales?
adecuado.
A deshidratación, en el caso de la albumina,
Bibliografía una enfermedad infecciosa en el caso de la
gamma, al igual que la porción alfa 1 y 2. La
1. Brüel,A. Christensen, E.I., Tranum-Jensen, porción Beta para compensar el transporte, o
J., Qvortrup, K., Geneser, F. (2001). la necesidad de mayor transporte. (2)
Histologia. (3ra edición). Madrid, España:
Editorial Medica Panamericana. 3. ¿Cuáles son las 2 clases de proteínas que
2. Bender, D.A., Botham, K.M., Kennelly, P.J., generalmente se cuantifican?
Rodwell, V.W., Weil, A. (2010). Harper.
Bioquimica ilustrada. Distrito Federal, Albumina y globulinas.
Mexico: Mcgraw- Hill Interamericana
Editores.
3. Baynes, J.W., Dominiczak, M.K. (2015). 4. ¿Cuál es el fundamento de la técnica de
Biuret?
Bioquimica Medica. Barcelona, España:
Elsevier. El fundamento ya fue dado en la
4. Vives Corrons, J.L., Aguilar i Bascompte, introducción.
J.L. (2014). Manual de técnicas de
laboratorio en hematología. Barcelona, 5. ¿En que parte del organismo se comienza la
España: Elsevier. digestión de las proteínas?
5. Díaz Portillo, J., Fernández del Barrio, M.A.,
Paredes Salido, F. (1997). Aspectos básicos En el estomago, a través del HCL que rompe
de bioquímica clínica. Madrid, España: la estructura de las proteinas, y la pepsina
Ediciones Diaz de Santos. rompe enlaces para formar péptidos. (7)
6. Sanchez Enriquez, S. (2014). Manual de
practicas de laboratorio de bioquímica. 6. ¿Cuál es la función del ácido clorhídrico en
el jugo gástrico y cuál es su pH normal?
Mexico, Distrito Federal: McGRAW-HILL
INTERAMERICANA EDITORES.
Desnaturalizar las proteinas por el cambio de
7. Lieberman, M., Marks, A., Peet, A. (2013). pH. Su pH normal es de 1.5. (7)
Marks. Bioquimica medica básica. Un
enfoque clínico. Barcelona, España: Wolters 7. ¿De que se compone el jugo gástrico y en que
Kluwer. porcentajes?
8. Ross, M.H., Pawlina, W. (2015). HIstologia.
Texto y Atlas. Barcelona, España: Wolters Agua y electrolitos que corresponden al
Kluwer. solvente, ácido clorhídrico (HCl) en una
9. Blanco Gaitan, D., Garrida Pertierra, A., concentración que oscila entre 150 mmol/l y
Mendoza Oltras, C., Ramirez Rodriguez, J., 160 mmol/l, pepsina, moco y factor
Teijon Rivera, J.M., Villaverde Gutierrez, C. intrínseco. (8)
(2006). Fundamentos de bioquímica: la vida
a nivel molecular. Madrid, España: Tebar
8. Mencione los posibles mecanismos de
Cuestionario absorción de aminoácidos y péptidos a través
de la mucosa intestinal.
1. ¿Para qué nos sirve la determinación de
proteínas totales? A través de sistemas cotransportadores
dependientes de Na+ asi como de transporte
Para determinar la salud de un paciente, facilitado. (7)
específicamente aquello relacionado con
infecciones, enfermedades hepaticas, renales, 9. Explique el comportamiento del equilibrio
estado nutricional, entre otros. (3). nitrogenado cuando hay una ingesta excesiva
de proteínas y como se mide este.
Cuando la cantidad de proteinas ingeridas es
excesiva, estas comienzan a emplearse como
fuentes de energía, al convertirse en glucosa
o acidos grasos. Los altos niveles de (9)

10. ¿Cómo se clasifican las proteínas?

Se clasifican como simples si no tienen


ningún grupo externo unido y como
complejas si poseen un grupo como
carbohidrato o lípidos unidos. (2)
Caso clínico función hepática, y renal fueron normales. El estudio
del líquido ascítico, obtenido por punción registró una
Se trata de un recién nacido de sexo masculino, concentración de proteínas de 1 g/dL y células 4 por
producto de la segunda gesta (la primera fue un aborto) acampo, con características de trasudado; tinción de
de una mujer de 24 años vista en tres ocasiones para Gram y cultivo negativos. Se le hicieron dos
su control prenatal. A las ocho semanas de la paracentesis extrayéndole 200 y 300 mL. Mejoró de su
gestación, presentó, de manera progresiva, edema en dificultad respiratoria y permaneció
miembros inferiores hasta el último trimestre del hemodinámicamente estable. Se le inició alimentación
embarazo. Ingresó al hospital por registrar una tensión por vía oral. El cariotipo reportó ser 46 XY. TORCH
arterial de 170/120 y haber tenido mediciones de negativo en el niño y la madre; al niño se le hizo uno
albúmina sérica (en tres ocasiones distintas) de 2.4, 1.9 más a las tres semanas resultando negativo. El estudio
y 2.2 gramos por decilitro; una biometría normal. Un de sus inmunoglobulinas y complemento fue normal.
estudio de ultrasonido reportó un producto vivo de 33 VDRL negativo y electro y ecocardiograma normales.
semanas de gestación, el que mostraba un aumento
importante del diámetro abdominal, hidrocele, Bibliografia:
oligohidramnios acentuado y una placenta grado II-III.
Islas Domínguez, L.P., Verduzco Gutiérrez,M. (2003).
El niño se obtiene por cesárea registrándose: Hidropesía fetal por hipoalbuminemia materna.
placenta normal, membranas íntegras, líquido Reporte de un caso. Revista Mexicana de Pediatría,
amniótico escaso. Al nacer pesa 2,900 g, su longitud Vol. 70 (No. 6), pp. 291 - 293.
es de 43 cm, perímetro cefálico de 33 cm, de torax de
31 cm, abdominal de 42 cm, segmento superior de 25
cm y pie de 6.5 cm. A partir de su nacimiento se le Resumen:
observa distensión abdominal por líquido de ascitis y
red venosa colateral visible. El abdomen se palpa Varon recién nacido, cuya madre presento edema
blando y no doloroso, sin visceromegalias, peristalsis progresivo a partir del 3er mes y hasta el ultimo
disminuida y diastasis de los rectos. En el escroto se trimestre. La madre entro al hospital con niveles bajos
aprecia hidrocele a tensión que no permite palpar los de albumina, pero uan biometría normal. El varon al
testículos, pene de 1.5 cm de longitud; nacer, presentaba hidrocele, y un aumento del
transiluminación positiva. Sus extremidades inferiores diámetro abdominal sin visceromegalia pero si
eran simétricas, hipotróficas, con edema; el tono distensión abdominal. Tambien había hidrocele en el
muscular estaba disminuido y presentaba pie varo escroto. Presentaba extremidades inferiores
bilateral. hipotroficas, con edema. Presentaba dificultad
respiratoria pero no restricción pulmonar o derrame
Presenta datos de dificultad respiratoria que pleural, tampoco presentaba cambios en el area
se confirman con una imagen radiológica que mostró cardiaca. Se le mantiene en ayuno con líquidos
restricción pulmonar sin datos de derrame pleural; área parenterales y ventilación (con FiO2 60%).
cardiaca normal. Abdomen con gran distensión de la Dobutamina 8 µg/kg/minuto, furosemide a 1
pared y sin presencia de aire intestinal. Se le mantiene mg/kg/dosis. Por un reporte de tiempo de protrombina
en ayuno con líquidos parenterales y ventilación (con de 60 segundos TPT >120, se administra vitamina K 1
FiO2 60%). Dobutamina 8 µg/kg/minuto, furosemide mg/kg y se le transfunde plasma fresco. La biometría
a 1 mg/kg/dosis. Por un reporte de tiempo de reportó leucopenia, neutropenia y plaquetopenia, por
protrombina de 60 segundos TPT >120, se administra lo que se le administra ampicilina 100 mg/kg/día y
vitamina K 1 mg/kg y se le transfunde plasma fresco. cefaloxime 50 mg/kg/dosis por 14 días.
La biometría reportó leucopenia, neutropenia y
plaquetopenia, por lo que se le administra ampicilina Tras el trataimento, que evoluciono bien, y con
100 mg/kg/día y cefaloxime 50 mg/kg/dosis por 14 resultados de cultivos negativos, el paceinte mejoros.
días. Evoluciona bien y los cultivos fueron negativos. El total de proteinas totales fue mejorando, además de
que los estudios hepáticos y renales no se vieron
Las proteínas totales fueron de 4.6 g/dL, alterados. La respiración se normalizo y el hemograma
globulina 1.8 g/dL, y la albúmina de 2.87 g/dL resulto normal. TORCH negativo en el niño y la
aumentando esta última alrededor de 5 g/dL, diez días madre; al niño se le hizo uno más a las tres semanas
después. Los estudios de bioquímica sanguínea y de la resultando negativo. El estudio de sus
inmunoglobulinas y complemento fue normal. VDRL
negativo y electro y ecocardiograma normales.