articulos Optimizacién del proceso de tratamiento enzimatico de la flor del cempasuicnil para la extraccion de xantofilas. Claudia, L Range+Cruz. J. Enrique Botelio-Alverez. Hugo Jimener-tslas. Remiro Rico- Martinez. José Luis Navarrete-Bolafos” Departements de Ingenieria Quimics-Eioquimica, Instituto Tesnoligico de Celaya, AV. Tecnoligico win, CP. 38010 Gelays, Gio, Mézxico. E-mail: inb@ite.mx. Palabras clave: tratamientos enzimeiscos, for dal compasichi sxraccdn de xartofias. RESUMEN Estuds prevos han demostade qe a ‘eatamiento eaimdtco de fores de cempasichd on eracios de encimas produciies in fu por ‘hizopus nigicons panmte obtener harnas con contend de ratafice por ama de cuaiquor oo mitodo de raamierto, Sn ertbayo. a pasa eo y mis ali de los problemas de escalariento frecueniemente ascciado al maniads, al ‘rotamiento enzimico no es econtmicamente wable de ser escalado debido a los castes de proceso, especisimente en i producciin dal ‘eeetn ercinsce. En este esto, 22 sSseho un mado de cuties [Ratna Se paps (8.2 gl) ssearees (124 gl) y sabiosa (5 gy] y opsmzaon ts variables [ASC de temperatura, sieaciin de 12 WWM yy agitacién de 50 rom] que masimizan la cbtencii de exractos ensimitions con actividad de catulasas. y fas verisbies [BEC de temperatura y 108 opm de aptaciin) asociadas al tatamienio womiess qs macnn 2 contenie de seanteiss en Ronnas. Los resutades mestoren sue usando of matio de eto cicada 2 condiciones Gas parte obtener harnas con un soetarid io areata: del 26% (promaxio) mayor comparad on of conte (Bor sin Wat) en 20 min ce Berrpo Ge tratamiento y rendimenios dl O5% (promo) en la extraccdin de xantoblas totals. Valores que. commerados con los publicados, represenian en reduociin de 90% (promadio) en al fempe de ‘ratarient, de! 50% en ol nimere de eapas en ia wcrzcciin y dal 98% (gromadic) en of costo da medio de cutive. Jo que permite un ahoro ‘Soniicaivo en los requenmienios de servos ¢ insumas que incden deectamente en ol costo de proceso. ‘Keywords: enzymatc treatments, margold Sower, sranthophyfis exracson ABSTRACT Previous studies have demonstrated that the ecuyraic treatment of marigod fowes wih ergyme exracts produced in si from Ahinoous nigricans allow to obtain fours with xanthoshyis content higher than any other ‘restment method. Howaver, Sespts these resuts, and beyond the essinup problems fequanty ssssostes to mong, the enzymatic teatmert & not economicaly wable to be scaledup due i the process cost in paricuar the enzymatic extract production. ln this ‘Study, 2 outure medium was designed [potato four (8291). sucuse (124 gl) and ockuose (5 gL) he variables that macmze the yied for the qryrsts Stat wh celulsss acuy use determined [SC of temparsturs, 12 WM of ‘ireason, and £0 rpm of agtason} as wall 25 the variables associated to the erzymatie testment that maxérize the contant of xarthaphyis inflows [23°C Of temperatwe and 190 pm of sgtaton]. The resus show fat using the designed cule medum and the aforemenioned optimal ccondiions, leads to cbizin fours mith a:xanthoshyis content G5% (average) higher than the control (lowers witout wrestmerg in 20 min of testmentarticulos processing tie and yieiing 3 05% (average) on fetal xarthochy/ls extraction. Values that when compared with the previously published results, represent a reducfon of 03% (average) on tbeatment time, 50% on number of stages required in the extraction and 06% (average) in culture ‘medium cost allowing significant savings on both operational cost and raw materais, rectly affecting the overall process economy: INTRODUCCION Actuarenta, 2 nivel industial fa flor de cempasichil ©: utlizada para la cbtenciin de harna y cleoresina (mectia de xantofias ‘estericadas con Sckdos grascs) que es destinada a dos grandes mercados: (1) matera prima en Is Sormulacién de aimerios balanceadas destinados 3 ts aveutra para acanzar al nivel de pigmentacién requerido por ef consumidor que £5 ‘ascciado a la caltdad © inocuidad de kos productos que de eles se cbtienen y (2) obtenciin de vantofias puras. para sex usadas como adiives en la formulacién de alimentos de consumo recto para dl humano 0 en suplemenias mubicionales ebido a su capacitad antoxtdante. increments’ Is capackdad de respuesta del sistema imunoligico. preven el cSncer y is Gapeneraciin de is msculs (Seddon ef al. 1204: Fulmer & Shao, 2007) ‘Sfecas bendices que crignaron ef desarofa de procesos para la producctin de xantofitas basadas en Sintesis Qumea y Tecnoogia de Fesmentaciones (Gierhart 1964: Krisenbubl et al ‘2000: Ssosbson ef al. 2000). Sin embargo. ninguno de estos procesos. reportan producciones de yantofias en cantided y calidad comparctic al proceso de obtenciin = pat de la for del cempasichil En breve a proceso radiional pare la obtenciin de xantofias de flor del cempanichil destiacin, saponifcactin y puicacidn 0 integreciin, dependiendo del fin del producto. Esto 5 la poniicacién se reaiza cusnd los productos Ss comerciaizan como aticives imentaros 0 fammandutoos. y ia integracéin se resliza cuando tos productos se comerilizen come asioves para ta formuaciin de simertos ibalanceados (Ausich & ‘Sanders, 1067; Khachik 2001; Madhavi & Kagan, ‘202: Navarete-Golahas et al. 2005). De tas operaciones uritaias impicadas en a! proceso de cblercidn, ef ensiads 8 la etapa citca que determina of vendimiento global del proceso al liritar Ia eBcenca de la leivacin y regstar perdidas hasta del 20% de santofias. Durante ensiado los microorganismes saproftes asociades ‘al cempasichd sintotzan enzimas hidroliicas que degradan el material estructural de la pared ostular de los pltalos de ia for que favorece ls extraccién de xantofias (Nawarete- Boiafios etal. 2003). Con base a lo, se desamoliaren miiodos de ‘ratamiertes enziméticos coma atemativa para incrementar los rendimientos de ls exiacodn y susttur la etapa del ensisdo (Osigadc-Varzas & Paredes-idper 1007; Bamana ef af, 2002 Navarete-Golafos ef al, 2004). Los resutades rostaron que es posible obtener harinas de for de cempasichd con un conterisio mayor al 100% de vaniofias con respect a su contenido orginal (Delgado-Vorgas & Paredes dpe 1907: Barzana ef al. 2002: NavereteBotaics af af. 2008) © incrementos nel rendimiento de Is scracodn (Gazena ef al, 2002 Navarete-foiafos ef al. ‘200+: Navarrete Solas et af. 2005). De estes, ef ‘ratamiento erzimético con extractes obtenides in ‘siu por ol metaboismo de R nigtoans permite obtener harinas con un contenido de xantofias de 29.24 gg de hens (peso seco) en 5h de tratamiento (Navarrete Solatos et al. 2008). valor de concentasiin simior al obteniéo por el watamierto enziméioo © usndo, enzimas ‘comerciales (Eeonase-oep, que 65 una preparankinarticulos de endo1ApDgicanasa, celobichidrotass. y exo-1.4$-0-gucosidasa) en 120 h de tratamiento (Delgado-Vargas & Paredes-Lipez. 1007) pero con una reduociia sigeicatva en a tempo de ‘ratariento requerids. Asi mismo, se demosté que cl ratamiento ercimisco con exractos obterices in stu por R. nigricans presenta valor mayor dal coafcsenta de transterencia de masa (Ks), que irnpica mayor efcsercia en ka Iniviacién (Navarrete. Bolafos t al, 2005). Sin embargo y a pasar de estas resutads. el tratamiento encimioe de for e comeasichl con extactos abtenidos iv su de FR. nigicens no es econémicerrente vistle de ser escalado dabido al costo da su produccién, al raalicarve usando medio de cutivo comercial (caida papa dexdrosa, PDB Dito Lab. Sparks. MO 21152 USA) que ene un costo: promadio de $2.80 por (ramo y 52 requieren 24g para producir un ro de ecaco evindico. lb que imgica un costo Promado de § 60.00 pases por ita. Per fr tad, se ene bs imtante en a rendirienta de peeducoién in stu de enzimas por hongos fiamentasas al presentar un desarrollo morfoligice de crecimiento remral en fomma compacts que limita los mecanismes de Gfusén para la ‘ransterencis de masa entre los componentes del medio de cutiva y i microorparisma. En este contexts se ha demostrade que a desanclo y credreiento moridkigco esta basado en les condiciones hidrodindmicas en las que opera el sistema de resecién © boreactor y que la produscén de ercimas se ve favorestia cmndo ol icroorganismos. ereoe en forma dispersa 0 on pequefins agomerados (GotlloAhare: af af. 2006) Con base 2 lo anterior, an sie estos se ‘ralzaron los componentes: del madi de cutivo comerial (FOE) 2 fm de disetsr uno més ‘evondmico que permita Ia producciin de exractos ‘enciméticos in stu por R. nigricans oon scdiviad de calulasas equinarable al obtenide usando FOB. Asi misma, s¢ ansizaron y optimizaron las variables de operon (lemeersurs, are y sptetiée) cars 1 producciin in sir de extromns ‘encimations con actividad cebicitca y tas variates aasociadas al tratamiente enzimdtico (temperatura y ‘aptaciin) para madeizsr el contenida de xartofias en hasnas tratadas de for del cempasichl En todos los casos de estudio, kos ensayes experimentaies fueron realizados en biomeactores & ‘ive! Laboratori (7 L) y ol ands. cuantticaciin y optirizacén de veriables fe efectuadla usando Ncricas estadisicoatemssco basadas en expermentos Gisefads estadistcamente 6 objetivo de estos: estucios fue al desarrollo de un proceso Wenica y econdmicamente viable para {ratamriento enaimdico de for de cempasichd que pemita obtener harinas con alto contenido de vantifias 2 incrementar la efciencia de su ‘exracciin en i Bxviaciin. MATERIALES Y METOOOS: Flor de cempasichil Un le de for de campasichl (Tagetes erecta) 2 un mama cxtvo fue usado para todas kes expermantes Ente coreana flores ezn soloracién amarlionararja en rscin de 1000 y 20% promada en peso en el mcapticuo: Meroorgeniama, Riizopus nigioans, hongo flamentaso sistado de a flor de cemeasichl fue empleato como indado para la producciin del exracio enzaneico de acuerdo 2 Navarre Bdlsfos et a (2003 y 2004, (Cbienciin del exrocto emimition. Estudos prevos han devastate que las ercimas hidroliicas pmducidas por R nigecans son excrotadas ai maf de culiwo (Novarcio- Bolaos ef al, 2008). Farle tant, para 2 evakar el facto de la composiiin del mati de cave en la produoeiin de eniras in su por F nigricans, a! hhongo fe sembrado en tubo incinado corteniendo ‘agar papa dexosa (PDA Difco Lab. Spars. MD 21162 USA) = incubado 2 FC por 2th y propagado 228 °C y 100 rpm en un agtadar-articulos incubador ocbital Forma Sclentife, model 4520) en ‘caida papa dexrasa (POS: Déco Lab. Sparks. MO 21182 USA) y medics de cutivo Nquidos formdados con dlerenies composiciones para ‘efectos de evaluaciin de componentes y disehi de un medio de cutive econémice para la produccién de wcractos enzimaticns por R. nigricans. El cada ‘ensayo experimental de propagaciéa. el producto fue frado, colectado al sobrenadarte y evakiado ‘con base a su capacidad para reduc la visoosidadl de soluciones de Carboximesi ostloss (Fhica Biochemie, Sigma-Aldech Chemie GMBH. ‘Steinem Germany). (Eneims comercial. (Celulasa comercial sintefizada por Aspergilus niger con actividad de endo-1.46-0-gucanass: (6000 U. Sigma Chemical Co. San Luts. MO) fue: stu y determina is actvided de la encima ‘Sntefcada de acuerdo a Naverreie-Botaios et af (2003 y 2008). Carbonimett oetuoss (CMG). ‘Soluciones: de carboximesi cobiosa al 525% (pv) fueron preparadas obtendndose una ‘Wscosifad promedo de 2400 op y usadas para vevahar Ie actividad encimitca con base 2 ba reducciin de la viscosidad (Erockfeld digtal theometer model DVAlls} de scuerda 3 Navarrete [Bokaos et al. (2003 y 2004) wistet erotall Ailmantas de 10 ml de extracts envimitinn <= ‘adicionaran a2 150-mL de solucién de CMC (5.25% (phy). Las menrias enzms-OMC se oobcarn 3. ‘condiciones constanies de temperatura a8" C y 175 mpm en un agitadorincubador ortital (Forma ‘Scientific, model 4520) por 24h Las soluciones: resutontes fueron evaluates para determina: I. ‘actwidad exzimétca como funcién de la reduccién ide Ia viscosidad de la soluciin (Navarrete-Belafios etal, 2008 y 2008). Anis de componentes del medio de cutivo. Con base at contenido: del medic de cultio ‘comercial (PDB) se reaizaron y Géerentes, ormulaciones con fécula de papa. tapioca, almickn: de maiz hana de maiz papa deshidratada, vedractos de pana, glucosa, fuctosa, sacerosa y decrosa. Ademds, se adciond celbiosa (susirato} ‘coma un tercer componente para anaizar sia, encima es induce 0 consthtia 6 andiss y uartiicaciin de os comporertes en las. fommudaciones fueron realzadas usando esiraiogias: expermentsies basaios en expermentos. descfados estadisicamente con valores de: variables defindtas con tase la formutaciin del media comercial (4g. de almidén de paps y 20 9 de. \dextrosa) pequofias cantdades decahiosa. Andisis de variables pare produccia de extrac: sencimitions en bicresctores. Para evahor las variables y niveles de operacién qe maxon lb adda de edocs ercimiseos tasaio en i sintesis de ences. hidrolicas en biomaaciores se seleccionaran las: variables A: temperature (20-36°C) Bf de aire (1.1535 WWM (volumen de aire por volumen de: medio) y ta C: agitacién (50-100 epi, con base 3 ssa rafaciin con fa transfarencia de masa y calor, impicados en ef crecimiento mocrcbiano, ‘ransformaciin de sustrato y sinless dal producto. Los nivales: de operaciia fueron sstablecidos con base 2 esudcs reves de esti (Q.12 gL (promedo) y ef volumen gel meio d= ‘culivo (2.0L), y sin contol del pH.articulos Aniisis de variables pare el tratsmients enzimitico en biomeactores. ‘A fe de cuantticar las variables del ratamrierta ercimitco en bioresctores para maxirizar ol contenido de xantoflas en los productos tratados. ‘se consideraron las variables A: Temperatira y agtaciin. Variables sscciadas a la actividad ercimdtica (temperate) © interacain encima ‘sustrato inducita por mecanismos conmectvos (ogtacidn) inactvaciin por esfueco de corte. Los niveles de operaciin para coda variable fueron establecios en A: 32.96 C y &: 160-40 rom, con base a estutios previos de escrutnio de warisbies. ‘Seleccionadas las variables y sus riveles. se coreiye wn eaquema eiperimental de composicién central para austar los resutados ‘experimentaies 2 modelos matemscos de segundo ‘orden. En todos los ensayos expermentales se manu costae la rezcin forecacto escimdoo en 1-32 (py (Gotensiin de harinss. Muestras de for de cempasuctaltratadas con el ‘etracto eremétco furan fracas y separacas las faces séida (péaies) y liuda (ecacn ‘encimésco}. En todos kos casos, las muestas ssdidas fueron secadas bajo concciones suswes de temperatura (55°C) en una estula de vacio (Sep (ab. Modelo 1430) hasta alcanzar un contenido de fumedad del 10% (21) en promeda. Parte de muestas secas fueron moidias para obtener una hans con un tamaiia de paniculs promesio de (0.372 mm (al pasar por mata No. 40'yretenidas por rola No. 60). recomendado para resizer fos andiss de conventraciin de xantofias totales en Irarinas (método G70.04 del ACAC, 1084). Estrategia de optimizaciin de varisbles: En todas los casos de stun, el andisis de as variables independienies fue resizado ussndo métodas. esindisSoomatemitioas con base a modes matemitoos de segundo onien cconstnitdos por d algorima de minimos ouatrados. La caractetzacién del punto estacionaito que maxmiza la variable de respuesta 0 funin de ‘sada fye caloulada usando andiss de regresiin imiliple mediate la generacién de un sistema de ecuaciones Gierenciales btenidas del modelo ‘constuido. La solucin al sistema fue computed usando méiodos numéroos. basados en el algodime de Newton-Rhapson (Montgomery. 2005) ‘7para fines de comprobackin de los resutades que ‘madmizan las funciones de salida Se uso ol mitodo de opterizacsin wa IMSL v 401 de ia korea del ssoftrare FORTRAN (Visual Numerics Ie). Especiicacin dela veistle de respueste o hincién de sak (los funciones de saida fueron evaluadas para Is optimizaciin del proceso. Para Ia optimizacién ‘del macho de caftwory ella producciin de exractos de exracios enméicos en bioweacores la viable de respuesta evahada fue ls acivdad eraimdsca en los extracios obtenidos. y para Ia ‘optimizaciin del tratamiento enziméico is varable de respuesta fue ls concentracién de xantofias en hacia tratads de for del cempasichd -Sistoms de fementsoxin. Bioveactores de fpo teque agtado de \ilerertes capacdades fueron ufizados para Ia produccn de extacios encmiicos y ef tratamiento de la for del cempasichl A nivel leboratorio un Bioreactor avtomstizads con ‘copaciiad de 7 L (ADI autoclavable bioreactor, ‘Apion Dependable Instruments, Schiedam. Nefreriands) fue utiizado tanto para la optimizacién ‘del macho 62 cutive, ol andisis de variables para produccién de extacios eimitioos y of ‘watamiento enzinéico. Para las pueias de escdamieto se ui un bioweador con ‘copaciiad de TOOL propiedad de Prodemex. y uno ide 1500 L propiedad de AVT Thomas para las prcbas industiales.articulos RESULTADOS ¥ DISCUSION Anéisis de componentes del medio de cultivo A fm de Geehar un medio de cutvo ‘econdmicamente viable para la produccién de emacs encmiicos por R nigricans. divers equinus egermertas G2 componndn cereal para tes variables (X= fcula de papa, tapioca, ‘simisiin de maiz, hens de maiz pops deshidratada 0 exractos de papa X= guoosa, fructosa, sacarosa © dextrasa: X.-celuosa) fueron rasizatos Oe estos, los madios de cuts formulades @ base de Koda de papa, tapioca, ‘imisdin oe maiz faring de maiz, exkactos de papa, gluonsa. fuctoss y Gexrosa mostaron una escasa produccién de biomass y baja capacidad pars Glsminut Is vecosided de las eolusionas de OMG, que es Grectamente cometscionado a Is scbided de ceblsest en loz seracts En contraparie. los medias de culiwo formufadas con hada de papa, sacarcss y cellos preseniaren usr desareio de biomass y sur exractos enindtcos Is mayor sctvided para reduci Ia Vecotides de solusionss de CMC smisr a is actividad encimdsca de exractos obtenidos usando ol medio de cutive comenial PDS (72.1%) Can base 2 ello, se dicefo un esquema experimental de composicién central (Tsbis 1) pars evsluar les ecpermentes isp resutsses chtenes utes ‘cohumna de la tabla 1), fueron usados para descrbir (a retacién existente entre las varabies indepencientes (Xe %) y is aotvidad del exracto ‘erzimétco, ewaluada por el carbio ena viscosidad de sousones de CMC (7), medante is constucciin de un modelo matemdtica potnomial de segund onfen construe utands ef métsto de rminimes cuadrados. Como resuttado, el siguiente made fue obtenido. Y=-6207 +543%,477.1%—122%—-28 1OX% + 15-28 KF OO HG T4 IE La eeusode supone inplctemente que it Gependdencia de Ia wariabie de respuesta (actividad erzimdica) con respecte alos faciores €5 no lineal que bos efectos de los factores son seftves. El modelo fue usado para estatiecer Ia localizacién Gol gpeme a ubea en un sates mubsmensensl punto de convergencia de las variables, que $= ethene al generar un sistema de eovaciones nesies resutares de seme pcamerts cos variable: FF]. s45-s2x,s10x,8-152,-0 au ? Flo = 771-10, -5.6%, +062, -0 ak, : . . PF) _i22eisx.soor,-ter, ar, : Tee OSO—OSESC“‘(CS™N™SCNSEOOOCOC‘“‘NSCWC™*”W % TTT oo or 7 20 7 20 7 2 72 a no 10 mo 30 no no 30 ow et)articulos La schon af sistema ce ecuaciones, obtenida usando ef mitodo de Newion-Raphson, establece que kos valores de las variables que mancmizan la efidad de oakiasas en los exracios ercimdioos som X, = 82 pl: Hy = 124 pk: ¥% 05 gL El procedimianto descrto indica que la produccién da ercimas se maimiza cuarda el mesa de cutive ‘esta formado con 8.2 g/L de harina de papa, 124 pl de sacarosa y 05 gl de cobiosa 5 ensayo eopeimental de comprobactin mosid que ef exracio ercimifco obtenido presentan una copacidad de reduc ta viscosidad de una soluciin de CMC dal 75% en promedo, valor que se compara favorabiemerte conta ef valor tedsca recicho (75.5%) por madelo matemdive y el valor ‘btenido usando medio de cua comer! PDB m1 Qpomizsciin 2 varsbles pare Is produenin ce ‘ecractos encimiicos. Dsefiads of medio de cutiva, se analizaron las veiables de opersciin © (Astempersturs: ‘Brareacén y C=agtactin) en biowesctores para manirizar [a sofividad de cobiasas en extracins ercimatoes ia fu por RL nigscans, mediante un exquema experimental de ipo Box-Gehnikcen (Tabla 2) para niveles de Ac (28-22°O):B (1.1525 Way 1a C: (60-100 ppm). En todos fos ensayos so uso el 18 et 10 ory 10 m3 10.3182 19 CI 13.8818 10 707 arse10s 733 13408 a7 19 mao medio de cutive optimizade y 52 mantuvieron constantes la concentracin incial dl indo (0.12 GIL (promesal), reac 1-20 ente a volumen del ‘medio y ol volumen dal incoulo, sin control del pH. y 1a morioiogia del cutive inciador fue de forma polleSzada (pequeiizs esferas). Nuevamente. los resultados obtenidos (ultima columna de la taba 2) fueron usados para desorbir la retacién existerte etre las variables indepercientes (lerpersturs, Areaotn y agtaodn) y la actwdad de ceutasas, evouada por @ cambio en la wscostiad de solusiones de CMC (Y,), metfante la constuccién de un modelo rratemésco poinomial de segundo conden via mines cusdrades. Como resitado, ef ‘Siguiente modelo fue obtenido. Y,= $46.25 + 5625+ 41758-1158 -O8447- 100 AB + O04.AC-3:8.87+.0168C-0.003C" ‘Siguiendo el procsdimiento descr, ol modelo se tiiod para generar un sistems de eosacionss nesies resutante de desivar parciaimeste cade vanabie: t 2B) asssantacoies sotine-aarticulos ‘Tabla 2. Osetia de Sox Sehneken pars el andisis de varables para ls preduccidn de extractos enzimatioos Typ A 8 Oo. rr se KBISRASRKRB RRB 145 235 145 as 115 2225 a a5 235 as 238 2295 2205 2295 100 ® 5 cs % 4 % 0 2 2 6 B 2 8 % «8 % B 100 B 2 n 100 3. 2 2 100 a Nuevarerte, 2 sobcin af sistema de ecuaciones. china usando ol mitnd de Newn- Raphson,establace que ls valores elas varies ‘que maxirizan la concentracn de oeblasas enlos: ebacios encimdéons son: A = 30; B= 1.2.WM ¥C=50 pm. BI procediienta desorto indica que ka producciin de enzmas se madmza cuando ls condiciones de operaciin en biorscioes po tanque agtado son fads constantes en ls valores de 35°C de tempera atesodn de 1.2 Wy agiacin de 50 mpm. 5 ensayo experimental de comprotasin masté que a exrado exzimiico cbierido presents una capaciad de reduce la Wsonsifad de una soon de CMG del 78% (promesio, valor que se compara fevorsblemente conta al valor teérica precicho (77.6%) par el rradelo materia Adcionalmente se resizaron ensayos experimeniaies. en estes conficones cpimizadas usando PDE como medio de culivo, los resutades mostraron una capacidad de reduc Ib vscostdad de una sobaiin de CMC dal 60.1% (promesio}, que es menor 3 ls sctvided sibanzats usando s medio de cttvo opsmizado. Aparenterente esta dferenca en ia actvdad encima 2 favor en los enssyos con ol mesio opfimizads es el resuitado del po de crecirierto rmarfokigioo del hongo que es en fama cispessa ¥ conirasta con el desarolo moxiokigco en forma compacta en los ensayes usando POS como meso deostive, Ghiices de prockcotn de ecroctas enemas Detridas tas condiciones de operscin qe mastic ta produccin de extacks encindicos y estate al meio de culivo, se reskzarn extados indices 2 fn de estableos el ferpo de proceso. Los resutecs mestann un ioemeno gadis! en is Producciin de enamas hides hasta starar Su rebarmoa ls 2th de proceso, a tempos postsiores is ‘Sided del eciacio no mosis conbios sipifcaties (gua 1) Adora, ards veusl da proceso mosis ue ol cecimierin de hargo es en forma de mioelo depeso a pasa de que el modo ical Ena rmaviologa de forma de poles. Gon base alo antic, 2 temps de proceso pss prosuesin de eeracis eceiétons fue deo en 2tharticulos ig 1 Cnsten so pacino arsine marmeas y carota marge cel ange pean = zo : i * . fs Cptmizasiin oe vanish pare! tatemiento ercinicco. Estslendas Ins consiones que maemisan ls ‘cided de cshiasas en exractes encimitcos ‘produces in slu por R nigricans. s¢ anaizaron las variables de operadin en Bomaactores (Deterearatwa y Exagtasin) Bajo un aeauema ‘experimental de conposicién central para niveles de D: GRC) y E (100-200 opm. En todos lo ‘ersayos experimentaies se manana constants ba lacin fovetracto eramiico a 1-22 (pHi. [Nueramerte, ls resutados (itima colurna de ba “Tabla 3 fueron aicados para describe a alain ‘existe one las waiabes indopendientes(D.&) y Is concertracién de xanifias (Kt) mediante ls consiunsién de un madelo matemssico poinomial de segundo orden via miinos csadrados. Como ‘esutado, ol siguiente madi fue obtenido. Me = 10214 +€49040, 136-0080" 000306- opomet Numvamerta, La lecaizaciin del dptimo se defn par al generar un sisters de ecussiones bbasado en eouaciones diterenciles parales: F ‘Tabla 3. Dsefo de composiciin central y resutadas para tratariento erzimdtco. Ea a leeeaus Eagan Dar 7 H 20 Tae 2 2 100 m2 2 = 120 an 4 2 0 208 5 z 4 a2 6 au 20 aor 7 82 200 maa 8 u 14343 maT ® x 2 am 0 “ 20 aur * Concerasin de Kaniciss nse [p Ge Naratisnlg Ge harra (ase sca] Le selusin gal stems de enussenes fe chvenida basado en al méiado de Newion-Raphson. yy ssiablece ave los valores dptimos som: OM y [B=100. Bl prooediricnio incioa que ol tratamiento lercindtso on consisiones de tempersturs #2 23°C yy aptacn de 190 rpmse maxmiza el conten de roridfias en harnas teindes Ol ena experimencal de corprobasin mond quearticulos ‘ratamiento encimdtco en bomeacioes 3 las condiciones optima pennite obtener harnas con un contenido de xantofias de 288 kg (base 26a), lor que Se compara favorablerente contra aor tabi preticho [770g de xantfias pork \deharna (base seca] por el modelo materdtcn. (Cinscas de tratemiento enzimisco. ‘Gon estos resutades se resizaron estusios de ‘ratamiento eraimdtco y 5e evalu e cambio en ef connie Ge xantofies en harina tatadas con respecto al Sampo. a fn de establecer el Sempo de varias en mussias waatas duane bs primeres 25 min de tratamiento (Fy 2) con respecto al contol (muestra sin tata). Trenpos posteioves de tretaméento mostaron incrementos 10 sigifcatves en # contenido de antoéias en las hharnas tratadas. Ademiés, ls inspecoin visual det proceso most la presencia de paricuas fines de os pétalos suspendidas en el sobrenadant a los 10 min de watarierto y que son resatado de la ‘ctv hidrliica de las exciras presendes en ef ‘ecvactn, fendmeno simiar al observado y deserto por NavereteBisios ef al (2004) A tempos (osteriores se abserv un increments gradual en ef material sdido suspentido. y aproximadamente 3 les 120 min de tatamionto ts depradaciin aicanza ‘su mao y la maa candid santos en ef producto tratzdo es sicarzada Sn entero, ef bance de masa mussrs que Is dferencis en el contri de xantofias en mess ratadas 2 25 y 120 min es del 5% (promeio), y un bance de Sereo muesia uns dierenca dl &5"u/pomesio). ‘Adonis, o ands de proceso en las operaciones posters al rteriento ensimdsco mosiraron que ls havin tratadas hasta 120 min refenen mayor humediad y souta a opereciin de senadn debido a la desintegrasin total dela estructura de fa for por ceo de is acted) ermimitca. Adcionaimente, J andiss dl proceso de ceciaociin en as muses tatatas 3 20 y 120 min ‘no most cambios signicatwos en ia efcienca de ecuperacin de xanichlas. Con base a la ante. tempo de tratamiento dels for del compasicht ebioreactoes fue estableo en 25 min. Fig. 2. Chota de watartrto erciraca 3 Sees det ‘cemeaetcil a condones tetas. were a Ensayos 8 nivel planta poo © india Defrido of medio de cuties, las condiciones par la producciin de extractos erzinicos y del Tratamiento enzimsico de la tor dal compasichi ‘que permiten cbiener hari con ato contenido de vantofiss, se realiah Ia protectin de extactos cexzimétons yl water de for en Borresctores de 100 y 1000 Ls La secuencis de operaciones impicads en bs producciin de exractos enciéons or esoala incluye:e-caliwo del hango Fiza m. tubo incinado contenido agar papa dexcrass (Dik) ¢ inoubado 3 25°C por 24h. La biomasa de catia tubo es coletata y wancterdis 2 matrsoes Evenmeye: de 250 mL conteniendo 100 mi de PDB (Dito) e inostasos a 28°C y 100 pm en un ineubador agtador oft (Forma Stinttc, mode 4500), condiciones que indocen el crecimiento del bhango en forms de pabetr 6 producto obtnido es ineau inciador y 2s torevasado al bioreactor delaborators (7 L). conterienda el medio de civ schado (22 g/L de harma de papa. 124 glL de secarsa y 05 gl de csbiosa). en reizcén 1.20articulos (ot) y condiciones de proceso a 33°C. 1.20 WA de areacin y 50 opm de agtactn (valores pheros), manteniéndose constantes durante 24 h Muevamente, <1 producto cbtenido del bioreactor 3 ef inmeculo inicador y es tanmvasado al Iomeactor planta pioto (100 L) conteniendo meso e culve disehado en retacion 1-20 (wv). a este ‘nivel se ajustron las variables de operaciin parata areacin (18 WAR) y agitacibn (100 mpm mantenséndose constante la temperatura (25°C) despuls de 24 h de proceso, el producto obtenido foe fade y recuperado al sobrenadante (exracto ‘erzimdéco) que fue ufiizado para reaizar ensayos e tratariento encima. Para los ensayos a nivel planta industial bioneactores de 1500 L. se sie ol mismo procedmierto hasta la planta picto. donde el producto (binrasa y sobrenadante) es el inocuio iniciador y es transvasado al bioreactor (1500 L) conteniendo el medio d= cutivo dsehado en relaciin 1:20 (wy), ajustando nuevemente las variables de stescon (24 WWW) y aptaciin (150 ‘pm manteniendo constante la temperatura (25°C) despuis de 24 h de proceso. el producto obteniéo fe ftrado y recuperado i sobrenacaree (exranto ‘erzimtco) que fue utiizade para reaizar ensayos de tratamiento ereimiico. Los esos de tratamiento exzimdico en for de cempasichil independiente del nivel de escsla (plots 0 ‘na.atis) tue reaizaco 3 conssenes de operanén cconstantes de temperatura (24°C) y aptacsén (168 ‘n) (valores Gms) y fempo de tratamiento de 25 min. En todos los procesos resizados. las hhatinas cbteniias presentaron un contenido de _ratofias da 95% (promedio) mayor con respecto al contoly una efcienca de reouperatn de! C27 (promed) en la elapa de leven con hexano. Estusios de extraccién en etapas miles most ie Ib recperaciin de sontniias en bas hovinas watatas mequce séo Ia mitad de las etapas izadas an hams de cempasichl sin ‘rotemienio enzimdica. Los resultados objenies. mestarn al proceso desarolido com ‘econdmicamente viable y acible para la exraccién de xantafias totales de laf del cemrpasichil, CONCLUSIONES Un protocolo expenmental tienca y econdmicamente mis vable que cusleuer obo proceso previamerte descrto para el tratamiento ‘erzimico de for de cermpasichil con excractos de ‘erzimas producdos in su por R-nigicans ha sido tesarroiado. En este. harinas con ato contenido de santofias (05%. promecso mayor del contenido crgnal) en peredos coras de tempo de tratamiento 20 min) pueden ser obfeniias Ademés, tas harinas watacks pemiten ia recuperaciin del 02% (promadio) de xantofias an un sistema de Keviacin a contraconiente usando Grectamerte en ol costo de proceso. Sia elo se le _xSciona ls producciin de exiractos enzimsoes in stu por R nigcens en medics de cutivo no comerciales de bajo costo (harna de papa (82 gf). (124 gl) y calulosa (05 gl) con ita se aoentia el impacto en ccpefowes del proces desaroliase (Caracteristcas que muesiran al prvese desonto en este estudio como ls mejor allemstva de tratamiento de for de cempesichl pars ba exraosiin de xantofias comparado con cusiquier tp proceso prevismente desaroEato. actividad REFERENCIAS AOAC (1884) Oficial Methods of Analysis, 4thed- Aesociaton of Oficial Anaiysical Chemists: ‘Petar, VA. ‘Ausich RL & Sanders DJ (1997) Process for the ‘formation, isolation and puriicaion ofarticulos ‘comestile xarthophyl crystals from plants USA Patent 8804 (Biczana Rubio D, Santamaia Rt, GacieConea ©. Garcia F, Redawra Sanz VE 8 Lépas- Munguia A (2002) EneymeMedated Solvent Extraction of carotenoids om marigeld Flows (Tagetes erecta’. J. gst Food Chem saan (Boteto-AWarer JE. 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