Fermentación de lactosa a  Para evitar la inhibición en el Commented [SRV1]: No lo pongan en formato artículo y

desarrollo de la fermentación ABE, unan los dos archivos, tanto batch y continuo. Revisar las
través de Clostridium
Acetobutylicum.
Evaluación de la cinética en
cultivo Batch
 Danilo Burgos Ortega
 Mónica Caballero
 Deisy Milena Martínez
 Luisa Marina Ortiz
 Cristina Rojas Marconi
1. Biomasa seleccionada: Presentar el nombre
de la cepa, curva de crecimiento microbiano,
factores ambientales (T, pH, necesidad de
gases)
Clostridium acetobutylicum:
Bacterias gram positivas, estrictamente
anaerobias, su crecimiento se favorece a pH
ligeramente ácidos (4.5 – 5.5) y a
temperaturas de alrededor de los 37°C,
metaboliza gran variedad de sustratos
(monosacáridos y polisacáridos) que luego
serán convertidos en acetona, butanol y
etanol.
2. Fuente de carbono seleccionada
será necesario fijar la concentración referencias.
de sustrato que será alimentado,
evitando de esta manera la baja
productividad de solventes, en
estudios previos se ha demostrado
que a concentraciones entre (5-20
g/L) de lactosa posibilitan la mayor
formación de ácidos, mientras que a
(60– 80 g/L) mejoran la formación de
solvente. Commented [SRV2]: Referencia de los estudios.
 El limite por encima del cual el
metabolismo celular se detiene, esto
ocurre alrededor de una
concentración de 20 g/L de solventes,
(ABE) de ellos el más tóxico es el
butanol, por tanto estudios
anteriores han reportado que la
producción de los solventes termina
cuando la concentración de este
solvente alcanza los 13 g/L [1]
 El cambio entre las dos fases
fuertemente dependerá de la
variación del pH. Este variable puede
influir tanto en la tasa máxima de
crecimiento y la potencial inhibición
en la producción de los solventes.
4. Presentar una tabla de datos a partir de la
cual se determinan los parámetros cinéticos
(biomasa, sustrato, producto, velocidad de
dilución y otros que considere pertinentes)

 Lactosa: Disacárido formado por la

unión de una molécula de glucosa y
otra de galactosa OPERACIÓN BATCH

3. ¿La materia prima de su bioproceso tiene Tiempo Biomasa Tiempo Biomasa Tiempo Biomasa
[h] [g/L] [h] [g/L] [h] [g/L]
algún compuesto que pueda inhibir el
0 0 50 0,85 100 0,31
bioproceso?, Explique y justifique su
5 0 55 0,8 105 0,3
respuesta tanto si es afirmativa como
10 0,1 60 0,71 110 0,29
negativa.
15 0,2 65 0,64 115 0,27
20 0,4 70 0,59 120 0,27
25 0,81 75 0,52 125 0,23
 30 0,9 80 0,48 130 0,21 Experimento:
35 0,96 85 0,42 135 0,19
40 0,95 90 0,39 140 0,18 Para el desarrollo de esta operación se hizo
45 0,9 95 0,35 uso del microorganismo Clostridium
Acetobutylicum, El medio de cultivo adoptado
consistió en extracto de levadura a 5 g / L y de
D-lactosa a una concentración oscilante entre
2 y 100 g / L. El medio fue esterilizado en
autoclave. Durante este ensayo los pre-
Tiemp Sustrat Tiemp Sustrat Tiemp Sustrat cultivos se realizaron en tubos de ensayo 15
o [h] o [g/L] o [h] o [g/L] o [h] o [g/L]
ml. La conversión del sustrato a producto por
0 50 50 38 100 33
medio del microorganismo fue investigado
5 50 55 37 105 33
10 50 60 36 110 33
por lotes en botellas con tapón de rosca (250
15 50 65 36 115 33
ml) alojados en una sala con un termostato a
20 48 70 35 120 33 35 ° C.
25 46 75 34 125 33
30 45 80 34 130 33 El inoculo fue preparado a partir de 2 ml del
35 43 85 34 135 33 cultivo de reserva con 5 ml de lactosa
40 40 90 33 140 33 complementada con un medio sintético por
45 39 95 33 alrededor de 2 días, para el caso de la
operación batch, típicamente la
concentración inicial de los microorganismos
fue de 4 mg/L.
Tiempo Producto Tiempo Producto Tiempo Producto
[h] [g/L] [h] [g/L] [h] [g/L]
Métodos Analíticos: Commented [SRV3]: Hagan una sola tabla, que relacione
0 0 50 2 100 2,8 las tres variables con el tiempo. Referencias.
5 0 55 2,2 105 2,8
Las muestras de cultivo se llevaron a un
10 0 60 2,4 110 2,8
proceso de centrifugación a 11000 rpm
15 0 65 2,5 115 2,8
durante 10 min. La fase sólida se caracterizó
20 0 70 2,6 120 2,8
para determinar la concentración de biomasa.
25 0,2 75 2,7 125 2,8
La fase líquida se caracterizó para determinar
30 0,6 80 2,8 130 2,8 la lactosa y las concentraciones de
35 1,1 85 2,8 135 2,8 metabolitos y carbono orgánico total. La
40 1,5 90 2,8 140 2,8 presencia de los microorganismos fue
45 1,7 95 2,8 determinada a partir de la medición de la
absorbancia a 600 nm con un
Tabla 1, 2, 3. Variación de x, s, p durante el espectrofotómetro, el análisis para la
tiempo de fermentación del lactosuero, medición de la concentración de lactosa se
tomadas del artículo Development of an realizó por medio de un kit enzimático. Se
Integrated Process for Butanol production, utilizó un cromatógrafo de gases equipado
Fabio Napoli. con una columna capilar para evaluar los
ácidos y alcoholes y sus concentraciones. [2]

5. Describir el método experimental que

utilizo la bibliografía para determinar los
datos presentados anteriormente 6. Presentar algoritmo de solución para
determinar los parámetros cinéticos en
OPERACIÓN BATCH
operación batch y continua (incluye los Operación Batch
modelos matemáticos seleccionados) Parámetro
µmax 0,335
Ks 235,83
Yx/s 0,1775
Qp 0,1187 Commented [SRV6]: Unidades.

Para el cálculo del parámetro de la velocidad

máxima de crecimiento de la biomasa, se
modelaron los datos pertenecientes a la fase
exponencial anteriormente presentados en el
cuarto numeral, por medio del modelo de
contois debido a que este toma en
consideración la formación de biomasa
acompañada por la producción de
metabolitos o inhibidores tóxicos.

1 𝐾𝑠 𝑥 1
𝜇
= 𝜇𝑚𝑎𝑥 ∗ 𝑠 + 𝜇𝑚𝑎𝑥 (Linealización modelo
de contois)

CURVA DE CRECIMIENTO
CELULAR
18.000
16.000 y = 703.97x + 2.9845
R² = 0.9103
14.000
12.000
1/ M

10.000
8.000
7. Herramienta computacional empleada 6.000
4.000
La herramienta computacional usada para el 2.000
cálculo de los parámetros cinéticos de la 0.000
operación batch fue Excel, a partir de la cual 0 0.005 0.01 0.015 0.02
por medio gráfico y gracias al modelo de X/S
contois el cual relaciona el crecimiento
celular, se pudo determinar la velocidad
máxima de crecimiento de la biomasa y Grafica 1. Curva de crecimiento de la
demás parámetros. biomasa durante la fase exponencial. Commented [SRV4]: Utilicemos otros programa que no
sea Excel y que no sea una regresión lineal.
8. Presentar una tabla comparativa de los
parámetros cinéticos en operación batch y
continua Commented [SRV5]: Hay que presentar los balances
tanto en batch como en continuo.
 3 9. ¿Cuál modo de operación (batch/continuo)
es más favorable para su proceso? Justifique
2.5 su respuesta
concentracion [g/l]

2 El modelo de operación más favorable para el

proceso será de modo continuo, puesto que
1.5 el modo batch presenta las siguientes
desventajas:
1
 La necesidad de crecimiento en cada
0.5 ciclo de la carga de biomasa para la
producción de disolvente.
0  La baja concentración de ABE que se
-10 40 90 140
alcanza al final de la fermentación.
tiempo [h]
 El largo tiempo de inactividad
Biomasa Butanol
característica de la fermentación
discontinua.
 Una vez terminado el proceso la
cantidad de solvente puede inhibir el
53 cultivo.
51 S…  Para las otras inhibiciones existe
49
concentracion [g/l]

47
mayor dificultad para su control.
45 
43
41
39
37
35
33
31
-10 40 90 140 10. Bibliografía
tiempo [h]
[1] Castellanos M. Reynel, P. Martha Liliana,
Grafica 2, 3. Comportamiento del sustrato, Optimización y ajuste de parámetros cinéticos Commented [SRV7]: Cambiar los nombres de gráficas
biomasa y producto durante el proceso de para la fermentación acetona-butanol-etanol por figuras.
fermentación del lactosuero en presencia del (abe) a partir de jarabes de almidon de yuca
microorganismo Clostridium Acetobutylicum. empleando Clostridium acetobutylicum atcc
824. Recopilación de tesis Universidad
Industrial de Santander.

[2] Napoli Fabio, Development of an

Integrated Process for Butanol production,
pag 41- 42. Commented [SRV8]: Organizar la bibliografía según APA
o ICONTEC