UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

MÉDICO CIRUJANO

GRUPO: 1107

MICROBIOLOGÍA LABORATORIO. EL HOMBRE Y SU AMBIENTE

PRÁCTICA 6: ANÁLISIS BACTERIOLÓGICO DE

AGUAS PARA LA DETECCIÓN DE COLIFORMES
MESA: 3

EQUIPO:

Flores Méndez Sonia

Guerrero Chávez Jessica Fernanda
Lara Rodríguez Cinthia
Martínez Benítez Lennis Getsemaní
Ortiz Rivera Miriam
Ortega Gómez Héctor Jesús
Ramírez Gómez Rogelio
Villagrán Sánchez Betsabe

Fecha de entrega: 27 de Febrero de 2014

 OBJETIVOS

Conocer las características del agua potable y como definirlas altamente satisfactoria,
satisfactoria, sospechosa, insatisfactoria
Diferencias las bacterias encontradas en el agua contaminada mediante los medios de
cultivo selectivos
Definir el concepto de coliforme y los tipos de coliformes

INTRODUCCIÓN

El agua líquida es incolora, inodora e insípida. En realidad, el agua se

considera incolora, pero analizada con un espectrofotómetro se observa una ligera
coloración verde azulada. Aunque el azul del mar se debe a reflejos del cielo también
contribuye esta propiedad del agua.
· Incolora, inodora e insípida.
· Densidad: 1 g/cm3 a 4ºC
· Punto de fusión: 0ºC
· Punto de ebullición: 100 ºC.
· Constante dieléctrica: 78,3
· pH = 7
· Conductividad eléctrica muy baja y Resistividad muy alta.

El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente

actúa como vehículo de transmisión de microorganismos entéricos. La materia fecal
puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma más
común el ingreso a través de los sistemas de pozo ciego a napas profundas. El Código
Alimentario Argentino (CAA), la Organización Mundial de la Salud (OMS) en sus Guías
para la calidad del agua potable, la normativa establece que el agua es apta
bacteriológicamente para consumo si se encuentra exenta de microorganismos
patógenos de origen entérico y parasitario intestinal.

Ellos transmiten enfermedades tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis

(Shigella), colera (Vibrio Cholerae), amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones
gastrointestinales (Aeromonas mesófilas, Helicobacter pylori, Campylobacter);
giardiasis (Giardia lamblia), cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis
(Schistosoma), desórdenes hepáticos (virus de hepatitis), etc.

La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida es un riesgo

que se incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas
sin disponibilidad de agua potable.
La seguridad que un agua contaminada puede ser causal de enfermedades, ha
conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad microbiológica de
muestras de diversos orígenes los controles rutinarios de la totalidad de los
microorganismos hídricos, potencialmente riesgosos para la salud, resultan difíciles de
llevar a cabo debido a la gran variedad de bacterias patógenas cultivables, a la
complejidad de los ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentración de
varias especies altamente agresivas, sin que el orden detallado indique prioridad.
Por esta razón, los análisis bacteriológicos apuntan a la búsqueda de microorganismos
indicadores de contaminación fecal y se centralizan en la cuantificación de coliformes.
Este grupo está integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el indicados
universal de contaminación fecal.

La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida es un riesgo que se

incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin
disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser
causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la
calidad microbiológica de muestras de diversos orígenes.

El grupo de coliformes fecales, está constituido por bacterias Gram-negativas

capaces de fermentar la lactosa con producción de gas a las 48 h de incubación a 44.5
± 0.1°C. Este grupo no incluye una especie determinada, sin embargo la más
prominente es Escherichia coli.
La demostración y el recuento de organismos coliformes, puede realizarse
mediante el empleo de medios de cultivo líquidos y sólidos con características
selectivas y diferenciadas.

DESARROLLO O TÉCNICA

Siembra en Medio Inclinado

1. Comenzamos realizando la asepsia en nuestra área de trabajo.
2. Asegurar que los tapones de los tubos se abrieron fácilmente, posteriormente.
3. Sostener el tubo del cultivo y el que se va a inocular con la mano izquierda,
(tomar el de Staphylococcus aureus).
4. Esterilizar el asa en el mechero, dejar enfriar. sin soltar el porta-asa quitar los
tapones de ambos tubos usando diferentes dedos de la mano derecha.
5. Flamear ligeramente las bocas de los tubos introducir el asa en el tubo de cultivo
y tomar una asada de bacterias.
6. Sembrar el tubo de agar inclinado por estría superficial, en ligeros movimientos
de zig-zag.
 7. Retirar el asa; flamear brevemente las bocas de los tubos y colocarles sus
tapones.
8. Esterilizar nuevamente el asa.
9. colocar el material en la gradilla.
10. Etiquetar los tubos.
11. incubar a 37°C por 24-48 horas.
Agar EMB (eosina, azul de metileno)

Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar enterobacterias en muestras

mixtas. Los colorantes de anilina (eosina y azul de metileno) inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas y a las Gram negativas exigentes. También se combinan
precipitando a pH ácido, actuando como indicadores de producción de ácidos. El medio
incluye lactosa, lo que permite la diferenciación de los fermentadores de lactosa de los
no fermentadores. Los fermentadores fuertes de lactosa, sobre todo Escherichia coli,
producen colonias de color negro verdoso con brillo metálico. Los productores más
débiles de ácidos, forman colonias de color violeta. Los no fermentadores de lactosa
forman colonias transparentes.

SIEMBRA EN CAJAS DE PETRI POR EL MÉTODO DE ESTRÍA CRUZADA

1. Se traza con al lápiz graso por detrás de una de las cajas de petri (EMB),
quedando tres cuadrantes. Figura A.
2. Esterilizar el asa.
3. Enfriar (dentro de la zona estéril).
4. Tomar el tubo con la cepa indicada.
5. Tomar la muestra y depositarla en el cuadrante 1.
6. Con la mano izquierda levantar parcialmente la tapa de la caja de petri.
7. Trazar una serie de zig-zags muy cerrados a lo largo del sector 1.
8. Esterilizar el asa.
9. Sin volver a tomar inóculo, trazar un zig-zag más abierto en el segundo
cuadrante sólo en las primeras líneas, no en las últimas. Figura B.
10. Esterilizar el asa.
11. Ein inóculo hacer un último trazo, invadiendo el sector 2 en las primeras lineas.
Sin tocar el primer cuadrante. figura C.
12. Esterilizar el asa.
13. Incubar a 37°C por 24-48 horas.
 RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Agar caldo
lactosado Agar EMB
rojo de
fenol
AGUA DE
LABORATORIO
DE
MICROBIOLOGÍA

No hubo
No hubo crecimiento de
fermentación de colonias de
lactosa ni coliformes en el
acidificación en el medio EMB
caldo lactosado
rojo de fenol
(campana
Durham)

AGUA DE LA
LLAVE DE CASA
EN IZTAPALAPA

Hubo acidificación Morfología

del medio (el medio colonial:
cambio de color a
amarillo) y Forma: circular
producción de gas Elevación:convexa
Borde:entero
(1.5 cm
Color:negro
aproximádamente) Luz: opaco
Superficie:lisa
Tamaño: 1 mm
Hubo presencia de
aureola amarillenta
alrededor de cada
colonia.

AGUA DEL
TANQUE DEL
EXCUSADO

No hubo una Morfología

acidificación del Colonial
medio pero si una
ligera producción Forma: Circular
Elevación: convexa
de gas el cual se Borde: entero
puede observar en Color: blanco
forma de una Luz: opaco
pequeña burbuja. Superficie: lisa
Tamaño: 1 mm
aprox.
CONCLUSIÓN

El desarrollo de la práctica muestra la calidad del agua de diferentes sitios, donde el agua
deberá cumplir con todas las características del agua potable, al finalizar la información
obtenida nos indicó que la cantidad de contaminación de nuestras muestras está por debajo de
ser un agua altamente satisfactoria.

El estudio de los organismos que están presentes en el agua de consumo humano es la base
fundamental para la prevención de una serie de enfermedades (gastrointestinales, infecciosos,
tóxicos, etc) en primer instancia y en segundo plano nos sirve como estudio de laboratorio para
el diagnóstico que nos brinda el conocimiento de las bacterias presentes en el agua ingerida en
un paciente o en una comunidad

Además nos da a conocer el amplio mundo de las coliformes y nos amplia la aplicación de un
correcto saneamiento en las poblaciones y el conocimiento y aplicación de procesos de
purificación de agua ya sea de forma química (cantidades de hipoclorito, luz ultravioleta, ozono)
y mecánicos (filtración) y la ebullición de agua

CUESTIONARIO

1. Describa tres aspectos importantes del análisis del agua

Búsqueda de materia sólida en el líquido

Presencia y cantidad de coliformes
Tipo de agua, sea superficial o profunda

2. ¿En qué consiste la técnica por filtración con Millipore y con qué fin se emplea?

La filtración es la separación de las partículas sólidas del fluido donde se encuentran,

mediante un medio permeable y poroso denominado filtro. Este vídeo es un material
docente en formato digital, para asignaturas de experimentación en química, en el que
se explica la técnica de la filtración.
Se denomina filtración al proceso unitario de separación de sólidos en suspensión en
un líquido mediante un medio poroso, que retiene los sólidos y permite el pasaje del
líquido

Las aplicaciones de los procesos de filtración son muy extensas, encontrándose en

muchos ámbitos de la actividad humana, tanto en la vida doméstica como de la
industria general, donde son particularmente importantes aquellos procesos industriales
que requieren de las técnicas químicas.

El medio filtrante es el elemento fundamental para la práctica de la filtración y su

elección es, habitualmente, la consideración más importante para garantizar el
funcionamiento del proceso.

En general, entre los principales criterios de selección del material de medio filtrante, se
pueden destacar:

● Compatibilidad y resistencia química con la mezcla

● Permeabilidad al fluido y resistencia a las presiones de filtración
● Capacidad en la retención de sólidos
● Adaptación al equipo de filtración y mantenimiento
● Relación vida útil y coste
La variedad de tipos de medios porosos utilizados como medios filtrantes es muy
diversa,15 en forma de telas y fibras tejidas, fieltros y fibras no tejidas, sólidos porosos o
perforados, membranas poliméricas o sólidos particulados, a lo que se suma la gran
variedad de materiales: fibras naturales, fibras sintéticas, materiales metálicos,
materiales cerámicos y polímeros

3.Cuál es el concepto de un coliforme? mencione tres

-Bacterias gramnegativas, son bacilos cortos que no poseen capsula,

no forman esporas y fermentan la lactosa a 35-37º con la producción de gas ácido
y aldehído en 24-48 horas. Se encuentran en la materia fecal.

-La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que

tienen ciertas características bioquímicas en común e importancia relevante como
indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

-Los coliformes fecales son microorganismos con una estructura parecida a la de una
bacteria común que se llama Escherichia coli y se transmiten por medio de los
excrementos. La Escherichia es una bacteria que se encuentra normalmente en el
intestino del hombre y en el de otros animales. Hay diversos tipos de Escherichia;
algunos no causan daño en condiciones normales y otros pueden incluso ocasionar la
muerte.

4. Enumere algunas técnicas para la obtención de agua con menos carga bacteriana
● filtración
● cloración
● destilación
● desmineralización
● Luz ultravioleta
 ● hervir el agua

5. ¿Qué es agua potable?, ¿qué características presenta?

El agua potable es el agua que puede ser consumida sin preocuparse de efectos
sanitarios adversos. El agua potable no tiene que saber bien; el agua potable puede
saber bien, pero no necesariamente se inocua para beber.
El agua potable es la que es apta para el consumo humano. O sea, puede ser ingerida
en cantidades normales sin que sea causa de enfermedad. Sus características son
múltiples. Un resumen es el siguiente:
*Calidad estética: incoloro, inodoro, insípido, turbiedad, pH, alcalinidad entre otras.
*Calidad microbiológica: debe estar libre de organismos coliformes fecales.
*Calidad química: debe estar dentro de límites establecidos por la Organización
Mundial de la Salud para sustancias tóxicas y plaguicidas. Algunos tóxicos importantes
son: plomo, mercurio, cadmio, cromo, arsénico, etc.

6. Enumere tres enfermedades transmitidas por agua

1. esquistosomiasis
2. malaria
3. cólera

7. Además del agua EMB, ¿Que otro medio diferencial puede usarse?

El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de

los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de entero bacterias según:
Fermenten o no glucosa.

Fermenten o no lactosa o sacarosa

Produzcan o no ácido sulfhídrico.

Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:

● Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a

amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de
glucosa, el medio permanecerá de color rojo.
● Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su
superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del
medio continuará de color rojo.
 ● Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se
presentará un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el
consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa
(fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es
fermentadora de glucosa.
● Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es
productora de gas.
8. ¿Cuales son los procesos utilizados en la purificación y desinfección artificiales en
los suministros de agua potable?
El método químico más conocido es la filtración por medio de diversos filtros que en la
actualidad son comerciales.
Entre los agentes químicos de desinfección más utilizados, se destacan el cloro
elemental gaseoso (Cl2), el hipoclorito (ClO-), la mezcla de cloro con amoníaco
(Cl2/NH3) que forman cloramina, el dióxido de cloro (ClO2), el ozono (O3) y el
permanganato de potasio (KMnO4). También se utiliza extensamente la luz ultravioleta.
Se han desarrollado también métodos modernos que se basan en la generación de
oxígeno por absorción de radiación por un colorante, la irradiación con rayos γ y la
fotocatálisis heterogénea UV/TiO2
Por último tenemos la ebullición del agua (100°C) para la eliminación de los diferentes
microorganismos
(Desinfección del agua, José Roberto Guimaraes)

BIBLIOGRAFÍA

Craun, Q y Castro, R. Desinfección del agua potable y subproductos de interés para la

salud. En: La calidad del agua potable en América Latina: Ponderación de los riesgos
microbiológicos contra los riesgos de subproductos de la desinfección química.
Washington, EUA, 1996:. 89-100.