PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELECTRICO DE PROTEINAS

Sección 2. Grupo 3FM2

Integrantes del equipo: Arellano Juarez Rodolfo

Hernández Valdez Paola

Profesora: Elizabeth Navarrete Ramírez

Introducción:

La solubilidad de la mayor parte de las TABLA 2. PRECIPITACION POR EFECTO DEL

proteínas se debe a la interacción hidrofilica PH Y SOLVENTES.
de las moléculas polares del agua y los TUBO NO. 1 2 3
grupos ionizados de las proteínas. Los CLARA DE 3 3 3
HUEVO DIL. 1:3
agentes que modifiquen esta interacción, (Ml)
afectaran, por lo tanto, la solubilidad de las HCL 0.1N (ML) 1
NaOH 0.1N (ML) 1
proteínas. Los factores principales que REGULADOR DE 1
afectan la solubilidad de las proteínas son: La ACETATOS 0.1M,
PH 4.7 (ML)
fuerza iónica, el Ph, la temperatura y la
OBSERVACIONES NO SE SE NO SE
constante dieléctrica del disolvente. La SOLUBILIZA SOLUBILIZA SOLUBILIZA
modificación de estos parámetros a ETANOL 96° 3 3 3
(ML)
soluciones proteicas heterogéneas, permite OBSERVACIONES PRECIPITA NO PRECIPITA
purificarlas en virtud de su diferente PRECIPITA

solubilidad.

Objetivos: TABLA 3. PRECIPITACION POR METALES

PESADOS.
Analizar el efecto que produce la
TUBO NO. 1 2 3 4 5 6
modificación de factores fisicoquímicos Clara de 1 1 1 1 1 1
sobre la solubilidad de las proteínas. huevo filtrada
diluida 1:3
Determinar el punto isoeléctrico de la (ml)
Cloruro 0.25
insulina, basándose en sus propiedades de Mercúrico 5%
solubilidad a diferentes valores de Ph. (ml)
Nitrato de 0.25
Plata 2% (ml)
Resultados: Acetato de 0.25
Plomo 5% (ml)
TABLA 1. RESULTADOS DE SALTING-OUT Cloruro de 0.25
Bario 5% (ml)
BIURET INTERPRETACION Cloruro de 0.25
FILTRADO1 POSITIVO PRESENCIA DE Sodio 5% (ml)
PROTEINAS Agua (ml) 0.25
PRECIPITADO 1 Observaciones + + + ̅ ̅ ̅
POSITIVO PRESENCIA DE
PROTEINAS +  Se observa precipitación.
FILTRADO 2 NEGATIVO NO HAY
PROTEINAS ̅ No se observa precipitación.
PRECIPITADO 2 POSITIVO PRESENCIA DE
PROTEINAS
 TABLA 4. DETERMINACION DE PUNTO [0.08]
𝑝𝐻 = 4.74 + 𝑙𝑜𝑔 =≈ 4.56
ISOELECTRICO DE LA INSULINA. [0.12]
TUBO ACIDO ACETATO INSULINA* pH OBSERVACIONES Tubo No. 3
NO. ACETICO DE SODIO 40U/ML
0.2M 0.2M (ML)
(ML) Ácido acético
1 0.23 0.02 6U 3.67
(0.06ML) 0.2M0.25ML
2 0.15 0.10 6U 4.56 = [0.04]
(0.06ML
3 0.05 0.20 6U 5.34
X0.05ML
(0.06ML
4 0.01 0.24 6U Se observa Acetato de Sodio
(0.06ML precipitación.
5 0.00 0.25 6U 0.2M0.25ML
(0.06ML = [0.16]
X0.20ML
Cálculos: [𝐵𝐴𝑆𝐸]
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐴𝐶𝐼𝐷𝑂]
Para determinar el pH en la tabla 4.
[0.16]
Tubo No.1 𝑝𝐻 = 4.74 + 𝑙𝑜𝑔 =≈ 5.34
[0.04]
Ácido acético

0.2M0.25ML
= [0.184]
X0.23ML

Acetato de Sodio

0.2M0.25ML
= [0.016]
X0.02ML
[𝐵𝐴𝑆𝐸]
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
[𝐴𝐶𝐼𝐷𝑂]
[0.016]
𝑝𝐻 = 4,74 + 𝑙𝑜𝑔 =≈ 3.67
[0.184]
Tubo No.2

Ácido acético

0.2M0.25ML
= [0.12]
X0.15ML

Acetato de Sodio

0.2M0.25ML
= [0.08]
X0.10ML
[𝐵𝐴𝑆𝐸]
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + 𝑙𝑜𝑔 [𝐴𝐶𝐼𝐷𝑂]