Extracción De M étodo de

DNA M iller

Salting out

Desproteinización/
Lisis de células nucleadas Resuspención de DNA
precipitación

-Una vez lisadas las células, -Agregar al tubo 2 volumenes

-Resuspender las células se dejaron disolver a 37 SDS: Actua de etanol invirtiendo el tubo
nucleadas obtenidas con EDTA EDTA:Protege grados celcius con 0.2 ml a como agente hasta precipitar el DNA
en tubos de centrifugación al DNA 10% de SDS y 0.5 de
solubilizante de
acción en PKA(1mg PKA en 1% SDS proteínas y de
endonucleasas y 2 mM Na2EDTA) componentes TE: solución
-Remover la capa de DNA amortiguadora
de mebrana
precipitado con una espátula de de pH protege
-Agregar 3ml deTampón de HCl: prevenir la -1ml de NaCl(aprox. 6M), plástico
lisis sanguínea" (tris-HCl contaminación el DNA
movimientos NaCl: ayuda
10mM, 400mM NaCl y afectando la vigorosos/15seg. a precipitar el
2mM Na2EDTA pH 8.2 pureza del -Transferir a un tubo de
DNA bajo
DNA. acción de microcentrifuga de 15ml
TRIS: Tampón fuerzas 100-200 microlitros de tampón
-Centifugar la muestra a
biológico en TE (tris-HCl 10mM Na2EDTA
25000rpm/ 15min. centrífugas
modificación 0.2 mM PH7.5
El pellet obtenido se deja
con el HCl. al fondo del tubo y el
sobrenadante(DNA) se
decantará a otro tubo ALÍCUOTAS DE
260/280 DE 1.8-2.0