OBTENCION DE INDICE MITOTICO EN APICES DE Allium cepa Commented [UdW1]: Nota: 4,0

Barros Arturo1, De Alba Paula1, Egea Federico1, Vidal Nataly1

Estudiantes de Biología, Universidad del Atlántico km 7 Antigua vía Puerto Colombia.

RESUMEN

Las células se forman duplican a través de una serie de procesosdimientos, que constituyen el ciclo Formatted: Justified
celular,. Eesta afirmación proviene de la teoría celular, que a su vez dice que todas las células se
dividen y generan dos células hijas después de pasar una serie de fases que hacen parte de la
división celular.

El desarrollo de las raíces de la cebolla es un claro ejemplo para poder observar células en estado
mitótico, debido a la alta actividad de mitosis que estás presentan en el ápice de las raíces. Como
requisito principal días antes, se colocaron dejarona crecer células de la raíz de la cebolla en un
recipiente con agua.

En el día de la práctica se realizaron pequeños cortes del meristemoápice de la raíz y se colocaron

en el portaobjeto y se procedieron a reconocer los diferentes estados que se encontraban en 10
campos visuales y se pudo ver que la mayoría de las células observadas se encontraban en interfase
debido que la célula frecuentemente esta en este estado.

Palabras claves: Mitosis, División celular, Cromosoma.

OBJETIVOS.

1. Enfatizar en el estudiante los conceptos de los mecanismos de la división celular.

2. Distinguir las diferentes etapas de la fase M del ciclo celular.
3. Adquirir destreza en el montaje de tejidos vegetales meristemáticos que se encuentran en
división celular.

INTRODUCCION.

Todos los organismos vivos utilizan la división celular, para multiplicación y crecimiento de tejidos
y reproducción o crecimiento, en los organismos unicelulares se da para la reproducción y
perduración de la especie, dividiéndose en dos células hijas idénticas entre sí, manteniendo su
número cromosómico e identidad genética.

En organismos pluricelulares, se convierte en un proceso cíclico destinado al crecimiento,

desarrollo y regeneración de tejidos de los organismos. Mediante la reproducción de dos células
idénticas entre sí, pero que posteriormente pueden derivar en una especialización y diferenciación.

En la división celular se observa en un proceso llamado Mitosis, en el cual, la célula madre se

divide en dos. Este proceso consiste en la duplicación de los cromosomas y la distribución
equitativa de este material genético en las células hijas.

Este proceso de división celular se lleva a cabo mediante mecanismos precisos, los cuales ocurren
dentro de una fases llamadas fase G1, S, G2 y M (Mitosis).
Fase G1: Es la primera fase del ciclo celular en el que existe crecimiento celular con síntesis de
proteínas y de ARN. En esta fase la célula contiene una sola copia de su ADN.

Fase S: Es la segunda fase del ciclo, donde la célula duplica su DNA. En esta fase, el núcleo
contiene el doble de proteínas nucleares y de ADN que al principio.

Fase G2: Es la segunda fase de crecimiento del ciclo celular en la que continúa la duplicación de
proteínas y ARN. En esta fase la célula contiene ya duplicado su material genético. En una
célula diploide, las cromátidas hermanas están unidas por el centrómero. Al final de este período se
observan al microscopio cambios en la estructura celular que indican el principio de la división
celular.

Fase de Mitosis: En esta fase las células pasan por diferentes etapas: Profase, metafase, Anafase,
Telofase, en donde los cromosomas se condensan con sus homólogos, se alinean en el plano
ecuatorial, se separan y se dirigen hacia los polos celulares para formar dos nuevos núcleos y luego
dividir el citoplasma en una etapa final muy breve llamada citocinesis.

Profase: En esta, la cromatina se condensa para formar los cromosomas y los dos centriolos migran
a polos opuestos organizando un sistema de micro túbulos, para permitir la migración de los
cromosomas.
Prometafase: Los cromosomas condensados migran hacia la placa ecuatorial del huso acromático.
Metafase: Los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial, y cada uno está unido por su
centrómero a una fibra del huso acromático.

Anafase: Las dos cromátidas de cada cromosoma se separan por fisión del centrómero y se dirigen
hacia polos opuestos. El movimiento de los cromosomas hijos hacia los polos se debe a un
acortamiento de las fibras cromosómicas y se alargan las fibras interzonales.

Telofase: es la última etapa de la mitosis, los cromosomas toman la forma de hilos, se alargan y
quedan como estaban al comienzo de la profase. El huso mitótico se rompe, reaparece el nucléolo y
se forma una membrana nuclear alrededor de los cromosomas, los cuales pasan a un estado no
condensado o cromatina.

En la telofase se forman dos núcleos hijos (cariocinesis) y el citoplasma también completa su

división (citocinesis) mediante un plegamiento de la membrana que comienza desde la periferia en
la parte media y progresa hacia el centro de la célula, de tal manera que finalmente se obtienen dos
células hijas con igual dotación de cromosomas y citoplasma (división ecuatorial).

METODOLOGÍA.

Materiales y Reactivos

 Bulbo de cebolla.
 Palillos de madera.
 Vaso plástico.
 Cuchillas.
 Porta objetos.
  Cubre objetos.
 Vidrio reloj.
 Pinza de disección.
 Mechero de alcohol.
 Encendedor.
 Gotero.
 Papel de arroz.
 Colorante acetorceína.

PROCEDIMIENTO.

Se colocó un bulbo de cebolla fresco a germinar en un vaso plástico, suspendido con unos palillos
de madera, de manera tal que la parte radical quedara inmersa en el agua para permitir que se
formaran las nuevas raíces. Se dejó durante tres días en un sitio fresco.

Con la ayuda de una cuchilla se cortó varios ápices de raíces recientemente germinadas de la
cebolla, se colocaron en un vidrio reloj con colorante de acetorceína y se llevaron a fijación del
colorante por medio de calentamiento con un mechero de alcohol. Se dejó enfriar un poco (durante
1 minuto aproximadamente) y se repitió dos veces más el calentamiento y enfriamiento, hasta que
las raíces quedaron completamente teñidas.

Con una pinza de disección se colocó cada ápice tinturado, en un portaobjetos, con una gota de
acetorceína y un cubreobjetos. Se realizó un barrido de la raíz, dando pequeños golpes y
extendiendo el material con una punta de goma, de tal manera que quedara bien esparcido para
observar en el microscopio óptico. Se montaron las diferentes muestras en el microscopio óptico, y
se observaron en un aumento de 40x cada una, luego se procedió a realizar el conteo de células en
10 campos y reconociendo fases mitóticas. Cabe resaltar que la práctica se realizó dos veces, sin
embargo, los resultados tomados, fueron obtenidos de la última práctica, ya que en la primera no se
pudo realizar el conteo mitótico porque todas las células se encontraban en interfase.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tras cuatro días en remojo e introducida en la nevera, la cebolla desarrollo un gran número de
adventicias con las cuales se llevó acabo la práctica. En las siguientes tablas se aprecian los
resultados que se obtuvo al observar células de ápices de las raíces de Allium cepa (cebolla
morada):

C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 total
Interfase 30 31 22 8 10 33 45 25 28 25 257
Profase 3 2 2 2 3 4 0 1 3 4 24
Metafase 0 0 1 0 0 0 2 0 3 3 9
Anafase 0 2 1 0 1 0 2 0 1 2 9
Telofase 0 0 0 0 0 1 0 2 0 0 3
Total 33 35 26 10 14 38 49 28 35 34 302
La fácil identificación de las diferentes fases del ciclo celular se logró gracias a una adecuada
tinción del tejido radicular. En los resultados se ve una clara superioridad numérica de células en
estado de interfase (I) que células en fase M. Esto indica que la mayor parte del tejido aún se
encuentra en periodo de síntesis celular. De las células mitóticas se puede evidenciar que se
encuentran en mayor cantidad las celular en profase. Esto se aprecia mejor en la siguiente gráfica.

50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10

Interfase Profase Metafase Anafase Telofase

Ilustración Gráfica 1 cantidadNúmero de células encontradas en los campos observados.

Con estos datos se pudo obtener el índice mitótico, el índice interfásico y el índice de fase concreta.
Estos valores se observan en la siguiente tabla

I. mitotico I. profasico I. Metafasico I. Anafasico I. Telofasico I. Interfasico

C1 0.091 0.091 0.000 0.000 0.000 0.909
C2 0.114 0.057 0.000 0.057 0.000 0.886
C3 0.154 0.077 0.038 0.038 0.000 0.846
C4 0.200 0.200 0.000 0.000 0.000 0.800
C5 0.286 0.214 0.000 0.071 0.000 0.714
C6 0.132 0.105 0.000 0.000 0.026 0.868
C7 0.082 0.000 0.041 0.041 0.000 0.918
C8 0.107 0.036 0.000 0.000 0.071 0.893
C9 0.200 0.086 0.086 0.029 0.000 0.800
C10 0.265 0.118 0.088 0.059 0.000 0.735
PROM 0.163 0.098 0.025 0.030 0.010 0.837
Los datos de los promedios se graficaron y se obtuvo lo siguiente:

1.000 Commented [UdW2]: En o posible s debe mantener el

color seleccionado como convención para cada fase, es
0.800 decir, usar los mismo colores por fase de la gráfica anterior

0.600

0.400

0.200

0.000
PROM

I. mitotico I. profasico I. Metafasico

I. Anafasico I. Telofasico I. Interfasico

Ilustración Gráfica 2 promedio del índice mitótico encontrado.

Por último se comprar los índices mitóticos total de todos los grupos, los cuales se tabularon y
graficaron de la siguiente manera:

Grupos I. M. total
1 0.149
2 0.362
3 0.08

En estos se muestra una clara diferencia entre el número de células en estado mitótico entre los
cortes de tres grupos de trabajo, el que presenta un mayor número de células en esta fase.

Los resultados que se obtuvo muestran claramente que la zona donde se extrajo el corte para hacer
el tejido se encontraba en una fase muy temprana del ciclo celular, esto se evidencia en el amplio
margen numérico que hay entre las células en fase I y células en fase M. esto puede indicar que el
corte que se hizo pudo haber no haber sido el indicado, por otro lado, el estado de la cebolla pudo
haber influenciado en el poco crecimiento de las raíces lo cual no permitió un buen desarrollo del
ciclo celular.

Conclusión

 La mitosis es un proceso por el cual los seres vivos dan origen a nuevas estructuras que
contienen células diploides, estas estructuras pueden crecer de manera acelerada si el ser
vivo así lo requiere y dependiendo del tipo de tejido, zona en la que se encuentre y especie,
esta se puede dar en mayor o menor cantidad.
  En la práctica se logró la distinción de las diferentes etapas de la mitosis y pequeñas
subetapas en las cuales se distinguieron estructuras.
 El uso de los ápices de las raíces de las Allium cepa (cebolla morada) es una estrategia útil
para el análisis de la dinámica celular. Esto demuestra que puede ser una estrategia útil la
cual vale la pena aprender.

 En esta práctica se logra una clara visualización de las células en distintos estados de
división celular. Estos datos en comparación a los datos de los demás grupos difirieron un
poco ya que los montajes realizados por los grupos de trabajo no contaron con las mismas
condiciones ambientales para promover la división celular.

ANEXOS

 Consulte si el índice mitótico es similar entre diferentes tejidos de un mismo organismo y

sustente a que se deben las diferencias.

Los diferentes tejidos crecen a ritmos diferentes debido a la exposición que estos tengan con el
ambiente, contacto mecánico o diferentes actividades a los que se encuentren sometidos. Esto puede
ser un factor importante a la hora de mantener una renovación celular ya que como se puede
evidenciar que tejidos como los que componen la piel (tejido epitelial) tiene una taza de renovación
mucha más alta en comparación a los tejidos nerviosos como las neuronas.

 Consulte sustancias que afecten el índice mitótico, como lo afectan y en qué fase de la
mitosis lo hacen.

Dentro de las alteraciones artificiales por administración de drogas, vamos a estudiar tres de ellas que son las
más utilizadas en Citogenética.

C-mitosis: Se produce por la administración de la droga Colchicina. Esta sustancia inhibe la formación del Formatted: Justified
huso acromático, al llegar a metafase los cromosomas están muy condensados y con los cromátidas separados
y en forma de "X" ya que las cromátidas han perdido la cohexividad entre ellas y sólo aparecen unidas por la
región del centrómero. Los cromosomas aparecen perfectamente individualizados y se puede apreciar
perfectamente su forma, y número. Esta droga se utiliza para resaltar la forma cromosómica y para facilitar el
contar el número cromosómico de una célula. Commented [UdW3]: Analizar sin copiar textualmente

Commented [UdW4]: ¿ y el Pie de foto y fuente?

Bi-mitosis: Se produce por la administración de cafeína a tejidos vegetales. La cafeína inhibe la formación
del fragmoplasto o tabique de separación celular, no se produce la citocinesis y los dos núcleos permanecen
separados pero dentro del mismo citoplasma. En la siguiente división los dos núcleos entran de nuevo en
mitosis y podemos ver Bi profases, bimetafases, bianafases y bitelofases. Esta droga se utiliza para estudiar
controles del ciclo celular y para determinaciones de la duración del ciclo. En una segunda ronda de división
bajo los efectos de la cafeína observaríamos la mitosis en células polinucleadas. Commented [UdW5]: Ídem
 Biprofase Bimetafase Bianafase Bitelofase

Células Polinucleadas
Profase Metafase Anafase Telofase Commented [UdW6]: Fuente? Derechos de autor?

Mitosis multipolares: Se produce mediante drogas tales como la carbetamida, que producen husos
multipolares, los cromosomas no emigran a dos polos opuestos, sino a varios, 3 o 4, produciéndose células
con distinto número de cromosomas.

La colchicina es un alcaloide que inhibe la polimerización de los microtúbulos del huso acromático y por lo
tanto impide que haya progresión del ciclo celular metafase-anafase (Segura, 2001). La macaina, alcaloide de
famaca, debe ser el responsable de inhibir el tránsito profase-metafase. Commented [UdW7]: Copiado textualmente

BIBLIOGRAFIA.REFERENCIAS

Karp, G. 2006. Biología Celular y Molecular: Compuestos y experimentos. 4ª ed. Ed. Mcgraw-Hill
Interamericana. pp. 1320-1340. De Robertis, E. Fundamentos de Biología celular y Molecular de
De robertis. 2004. 4ª ed. Ed. El atenco. Buenos Aires, Argentina. pp. 321-337.
LA MITOSIS (2018). Available at: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/05-
La%20Mitosis.pdf[Accessed 8 Seep.2018].

Revista de la Facultad de Medicina de la Universidad Ricardo Palma (2002).

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/rfmh_urp/v03_n1/a08.htm

Medición del ciclo celular (2014). Available at:http://www.ege.fcen.uba.ar/wp-

content/uploads/2014/05/Medicion-ciclo-celular.pdf.