ESPECTOFOTOMETRÍA

DE INFRARROJO Y
MASA

 HUARANCA ANCEVALLE SAMUEL

 FLORES MARCOS CAMILA
INTRODUCCIÓN

El descubrimiento de diferentes tipos de espectrofotómetros ha revolucionado la

química estructural. Las técnicas espectrométricas permiten determinar la
estructura de compuestos desconocidos sin necesidad de llevar a cabo
reacciones químicas. Además, algunos intermedios inestables como los
carbocationes y los radicales que no pueden aislarse, en ocasiones resultan lo
bastante estables en disolución como para hacer posible su detección
espectroscópica.

En esta monografía se introducen dos tipos importantes de técnicas

espectroscópicas: La espectrometría de masas (que suministra información
acerca de la fórmula molecular de un compuesto y las subunidades estructurales
que lo constituyen y la Espectroscopía infrarroja que proporciona pistas sobre la
naturaleza de los grupos funcionales de la molécula.

ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO (IR)

La espectroscopia infrarroja es una técnica de análisis, que se aplica para
obtener información acerca de los procesos de absorción y emisión sobre las
moléculas que se encuentran en la materia. Esta parte de la espectroscopia trata
con la parte infrarroja del espectro electromagnético.

USOS Y APLICACIONES
La espectrometría infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en
la investigación científica, porque es una técnica rápida y fiable para medidas,
control de calidad y análisis dinámicos. Los instrumentos actuales son pequeños y
pueden ser transportados, incluso para tomar medidas de campo. Algunas
máquinas incluso dicen automáticamente qué sustancia está siendo analizada a
través de miles de espectros de referencia almacenados en la memoria.
Haciendo medidas a una frecuencia específica a través del tiempo, se pueden
seguir los cambios en la naturaleza o la cantidad de un enlace en particular, lo
que es especialmente útil para medir el grado de polimerización en la fabricación
de polímeros. Las máquinas modernas pueden medir en el rango de interés con
gran frecuencia, como 32 veces por segundo. Esto se puede hacer mientras se
toman medidas simultáneas con otras técnicas. Así las observaciones de
reacciones químicas son procesadas con mayor rapidez, y de forma más precisa
y exacta.

POR LONGITUD DE ONDA

La radiación electromagnética es una forma de energía que se propaga como

ondas y puede ser subdividida en regiones de longitudes de onda características.
Asimismo, puede ser considerada también como un flujo de partículas
denominadas fotones (quanto). Cada fotón contiene determinada energía cuya
magnitud es proporcional a la frecuencia e inversamente proporcional a la
longitud de onda. La longitud de onda (λ) es generalmente especificada en
nanómetros, nm (10-9 metros) y en algunos casos en micrómetros, µm (10-6
metros). En caso del infrarrojo la radiación electromagnética puede ser también
descrita en términos de número de onda y expresada en cm-1 . Los rangos de
longitud de onda de energía electromagnética de interés para el infrarrojo se
describen en:

 Infrarrojo mediano: el más utilizado (670 – 4000 cm-1) que son utilizados
para análisis cualitativos y cuantitantivos
 Infrarrojo cercano: (4000 – 14000 cm-1) Determinación de rutina de agua,
dioxido de carbono, azufre y muchos otros compuestos sencillos que tienen
interés en agricultura y en industrias.
 Infrarrojo Lejano: Determinación de estructuras de especies inorgánicas y
organométricas que utilizan medidas de absorción
CARACTERÍSTICAS DE UN ESPECTRÓMETRO INFRARROJO

El espectrómetro infrarrojo se basa en la absorción de radiación

electromagnética para provocar transiciones vibratorias en las moléculas, puede
reconocer el grupo de elementos que están presentes en una muestra. Los
componentes de un espectrómetro infrarrojo son los siguientes:

 Fuente de radiación: en forma de varilla

de un material cerámico que produce
radiación cuando es calentando
eléctricamente a aproximadamente 1600 º
C.
 El Choper o espejo giratorio, donde la
radiación se bifurca en dos rayos de luz que
aproximadamente tienen la misma
intensidad. El choper se usa para recoger
alternativamente el haz de medida y el haz
de referencia que pasan por las cubetas de
muestra y referencia.
 Monocromador o sistema óptico de dispersión: situado detrás de las
cubetas de muestra y referencia , selecciona los haces angostos de
radiación de pequeños intervalos de frecuencia y los hace incidir sobre el
detector.
 El sistema de detección: son térmicos y térmicos piroeléctricos.
 El registrador del espectro El termoelemento que sirve como detector y
resta a la señal analítica de la muestra la de la referencia hallando la
transmitancia.
 Las cubetas portamuestras

TIPOS DE ESPECTRÓMETRO INFRARROJO

Entre espectrómetros infrarrojos podemos destacar los siguientes:

 Espectrofotómetro dispersivo de red: Estos espectrómetros infrarrojos son

utilizado principalmente para análisis cualitativos, en la espectroscopia
infrarroja se utilizan instrumentos con haz doble y estos es debido a las posibles
interferencias que podrían ocurrir entre los elementos. Los espectrofotómetros
dispersivos incorporan un cortador de baja frecuencia, que permite que el
detector separe las señales de la fuente y las señales de radiación extrañas,
tales como la emisión de radiación de infrarrojo de objetos que rodeen al
detector. En el espectrofotómetro dispersivo de red el portador de la muestra y
 de la referencia se encuentra entre la fuente y el monocromador, y esto se
debe a que las radiaciones de infrarrojos no son suficientemente energéticas
para descomponer la muestra.
 Espectrofotómetro no dispersivo de red: Estos espectrómetros infrarrojos son
menos complicados, más resistentes, más económicos y más fácil de
mantener.
 Los espectrofotómetros con transformada de Fourier: Es el espectrómetro
infrarrojo más moderno en comparación con el espectrofotómetro dispersivo.
Los espectros se obtienen con gran rapidez ya que la energía absorbida por la
molécula es medida a la vez que todas las longitudes de onda en la zona
espectral del infrarrojo, permite hacer múltiples barridos. Además, la
identificación de longitud de onda que incide es mucho más exacta, la
perdida de intensidad de la radiación en su recorrido a la muestra es mucho
menor pues posee menos elementos por los que pase la radiación
electromagnética.
IDENTIFICACIÓN DE UN COMPUESTO

Para identificar un compuesto orgánico en espectro consta de 2 etapas:

 Determinar grupos funcionales examinando la región de frecuencia de

grupos 3600 cm-1 a 1200 cm-1
 Comparando con espectros de compuestos puros que contienen todos los
grupos funcionales

INTERPRETACIÓN DE ESPECTRO IR

Un espectro consiste en una representación de la energía emitida por la molécula

(transmitancia) frente a longitudes de onda o al número de ondas.

Los espectros IR de absorción no son registrados como una función de la longitud

de onda, sino del número de onda. En el contraste al espectro UV - visible, en el
espectro IR: se representa la transmitancia T y se registra en la dirección de
número de ondas creciente (Las cifras van descendiendo hacia la derecha pero
el sentido físico es el mismo en cuanto a la energía de los fotones). Por tanto existe
otra diferencia entre la manera de representar el espectro UV – visible y el
espectro IR : Si hay una fuerte absorción , aparece una señal grande, que es un
pico negativo con respecto a la línea base. La ubicación de las bandas en un
espectro se caracteriza por el número de onda y la intensidad. De tal manera que
a través de la interpretación de las bandas de un espectro se puede identificar
una substancia siempre que esta esté pura (Análisis cualitativo)
TABLAS DE CORRELACIÓN

Son usadas para interpretar espectros IR. En estas tablas están ya marcadas las
regiones donde puede ocurrir las bandas de absorción de un grupo atómico
particular. Las tablas de correlación para sustancias o grupos de sustancias
sospechosas de estar presente en la muestra pueden ser consultadas en la base
de datos del ordenador para evaluar la diferenciación del espectro problema.
Esta tarea de comparación antiguamente se hacía manualmente y era tediosa
pero hoy día las computadoras juegan aquí un papel importante. Las tablas de
correlación y la asignación exacta pueden hacerse a partir de la extensa
colección de espectros disponibles que en formato digital en bases de datos.

 En la zona del espectro electromagnético IR con longitudes de onda del

infrarrojo medio (entre 4000 y 1300 cm-1) se suelen observar una serie de
bandas de absorción provocadas por las vibraciones entre únicamente
dos átomos de la molécula. Estas vibraciones derivan de grupos que
contienen hidrógeno o de grupos con dobles o triples enlaces aislados.
 En la zona del espectro electromagnético IR con longitudes de onda
comprendidas entre 1300 y 400 cm-1 (infrarrojo lejano), la asignación de las
bandas de absorción a vibraciones moleculares es más difícil de realizar,
debido a que cada una de ellas está generada por absorciones
individuales sumadas (multiplicidad de las bandas). Es la denominada zona
de la huella dactilar (flexión de enlaces CH, CO, CN, CC, etc..). En esta
zona de longitudes de onda, pequeñas diferencias en la estructura y
constitución de las moléculas dan lugar a variaciones importantes en los
máximos de absorción.
Para Alcoholes

Para Aromáticos
 ESPECTROMETRÍA DE MASA (MS)
¿QUÉ TAMAÑO Y QUÉ FÓRMULA?
El espectrómetro de masas es un instrumento que permite analizar con una gran
precisión la composición de diferentes elementos químicos e isótopos atómicos,
separando los núcleos atómicos en función de su relación masa-carga (m/z).
Puede utilizarse para identificar los diferentes elementos químicos que forman un
compuesto o determinar el contenido isotópico de diferentes elementos en un
mismo compuesto. Con frecuencia se encuentra como detector de un
cromatógrafo de gases, en una técnica híbrida conocida por sus iniciales en
inglés, GC-MS.

El espectrómetro de masas mide razones carga/masa de iones, calentando un

haz de material del compuesto a analizar hasta vaporizarlo e ionizar los diferentes
átomos. El haz de iones produce un patrón específico en el detector que permite
analizar el compuesto químico.

LA ESPECTROMETRÍA DE MASAS ES DIFERENTE QUE LA ESPECTROCOPÍA: En la

espectroscopia está implicada la absorción (o emisión) de luz en un
intervalo de longitudes de ondas. En la espectrometría de masas no se usa
luz.

Es una técnica de análisis que permite determinar la distribución de

las moléculas de una sustancia en función de su masa.

FUNDAMENTO TEÓRICO DEL (EM) O (MS)

Hoy en día, esta técnica continúa teniendo los mismos fundamentos que en su
origen, aunque el espectrómetro de hoy en día poco tenga que ver con su
predecesor.
La espectrometría de masas se fundamenta en la separación de partículas
moleculares o atómicas por su diferente masa.
El proceso de la espectrometría de masas comprende básicamente cuatro
etapas:

 Ionización de la muestra:

La ionización de la muestra se consigue por bombardeo mediante electrones (e-)

 Aceleración de los iones por un campo eléctrico.

Convertimos una fracción significativa de los átomos formados en la etapa 1 en

un flujo de iones, generalmente positivos y de carga única.
  Dispersión de los iones según su masa/carga.

Dado que la mayoría de los iones formados en la segunda etapa tienen una sola
carga y que el resto de parámetros se mantienen constantes, la relación m/e
suele ser la masa del ión.
La utilidad analítica de un espectrómetro de masas depende de la resolución del
instrumento, o capacidad del mismo para separar dos partículas de diferente
masa.

 Detección de los iones y producción de la correspondiente señal eléctrica.

El ordenador al que está conectado el aparato recoge las distintas señales y las
reproduce en forma de espectrograma, formato de fácil interpretación.

DIAGRAMA DE (MS) El diagrama de bloques, muestra los componentes

principales de los espectrómetros de masas.
BÁSICAMENTE UN ESPECTRÓMETRO DE MASAS COSTA ESENCIALMENTE DE
LAS SIGUIENTES PARTES:

 Sistema de entrada de muestras

En el sistema de entrada de muestras, 1micromol = 0.7 ml o menos de muestra se

convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400ºC y se introduce
lentamente en la cámara de ionización.
La finalidad del sistema de entrada es permitir la introducción de una muestra
representativa en la fuente de iones con la mínima perdida de vacío.

 Cámara o Fuente de ionización

Convierte los componentes de la muestra en iones. Esto puede conseguirse por

bombardeo con electrones, moléculas o fotones. Alternativamente también
puede lograrse la ionización mediante energía térmica o eléctrica. En muchos
casos la fuente de ionización y el sistema de entrada están combinados en un
único componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o
negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior
del analizador de masas o sistema separador a través del acelerador.

La formación de iones del analito es el punto de arranque de un análisis por

espectrometría de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas
especies moleculares, depende en gran medida del método utilizado para la
formación de los iones. Estos métodos los podemos dividir en dos categorías:

 Fuentes de fase gas: la muestra es primero volatilizada y después ionizada

 Fuentes de desorción: la energía se transmite directamente a la fase sólida o
líquida, produciéndose la ionización y la transferencia de los iones al estado
gaseoso.

 Analizadores

Para la separación de iones con diferente relación m/e se dispone de varios

dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre
diferencias muy pequeñas de masa. Además, los analizadores deberían de
permitir el paso del número suficiente para producir corrientes iónicas fáciles de
medir.

ESPECTRÓMETROS DE DOBLE ENFOQUE: magnético utilizan un electroimán para

dispersar simultáneamente todos los iones en función de su relación m/z..

ESPECTRÓMETRO DE MASA CUADRUPOLAR: en determinadas condiciones sólo

dispersan una banda estrecha. El corazón del espectrómetro son cuatro barras
cilíndricas paralelas que actúan como electrodos. Los iones se aceleran en el
espacio entre las barras. La mayor parte de ellos inciden en las barras, solo los que
tienen un determinado valor de m/z alcanzan el detector. Variando las
condiciones puede hacerse un barrido más amplio. Estos analizadores son más
simples, robustos y rápidos que los primeros.

Diagrama de un
espectrómetro de masa
cuadrupolar,
que es uno de los tipos de
analizadores de masa más
utilizados en
espectrometria de masas
dado su bajo precio y robustez

 Detector

El detector convierte el haz de iones en una señal eléctrica que puede ser
procesada y almacenada. El detector más empleado es el multiplicador de
electrones. El haz de iones incide sobre un cátodo, arrancando electrones.
Después una serie de dínodos colocados a potenciales cada vez más altos
amplifican la corriente de electrones. Los espectros de masas se almacenan y
procesan en un ordenador. Es muy frecuente la construcción de bibliotecas de
espectros de masas que permiten la identificación casi inequívoca de cualquier
compuesto por comparación.

INTERPRETACIÓN DE LOS ESPECTROS DE MASA

 Como consecuencia del bombardeo electrónico en la cámara de

ionización, las moléculas se rompen en una serie de fragmentos, siempre
que una misma molécula se rompa en las mismas condiciones nos dará el
mismo tipo y número de fragmentos y constituyen la fragmentación patrón.

 Gracias a esto se pueden determinar que es la muestra por comparación y

por otra parte, la intensidad relativa de los distintos picos, permite deducir
la proporción en que cada componente se encuentra en la muestra.

 El pico del espectrograma que aparece con valor más elevado de m/e
corresponde a la molécula ionizada sin fragmentar y recibe el nombre
 de masa patrón. Esta masa patrón nos permite determinar con rapidez y
precisión la masa molecular, siempre que se opere con una tensión de
ionización no excesivamente elevada, la cual produciría la fragmentación
total de la molécula.

 El pico mayor del espectrograma de masa se llama pico base.

Normalmente la altura de este pico se toma como valor cien. Las
intensidades de los demás picos se expresan en porcentajes de la
intensidad del pico base.

Aspecto clásico de un
espectrograma de masas,
en el que se señalan su
pico base
y su ión molecular más
importante. La tabla
situada a la derecha nos
indica la concentración
y la relación m/z de cada
uno de los elementos
presentes en el analito

APLICACIONES DE MS

Las aplicaciones son tan numerosas y abarcan tantos campos que resulta
complicado citarlas todas, a continuación, veremos las más características:

 Elucidación de la estructura de moléculas orgánicas y biológicas.

 Determinación del peso molecular de péptidos, proteínas y oligonucleicos.
 Identificación de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel.
 Determinación de secuencias de aminoácidos en muestras de polipéptidos
y proteínas.
 Detección e identificación de especies separadas por cromatrografía y
electroforesis capilar.
 Identificación de drogas de abuso y sus metabolitos en sangre, orina y
saliva.
 Control de gases en enfermos respiratorios durante los procesos quirúrgicos.
 Pruebas para confirmar la presencia de drogas en sangre de caballos de
carreras y en atletas olímpicos.
 Datación de ejemplares en arqueología.
 Análisis de partículas en aerosoles.
 Determinación de residuos de pesticidas en alimentos.
  Control de compuestos orgánicos volátiles en el agua de suministro

Vamos a ver ahora de un modo más extenso las principales aplicaciones de esta
técnica.

Aplicaciones cualitativas

 Determinación del peso molecular de todas las sustancias que pueden

volatilizarse por la posición del pico correspondiente a la masa patrón.
 Determinación de la formula molecular. Si el instrumento es de gran
resolución bastará la determinación precisa de su masa molecular para
poder atribuirle una fórmula empírica. Otras veces puede determinarse por
la relación entre las alturas del pico correspondiente a la masa patrón y la
de los picos de los isótopos. Existe una tercera forma que sería con la regla
del nitrógeno, según la cual todas las sustancias orgánicas con peso
molecular par deben de contener un número par o ningún átomo de N y
los de número impar deben de contener un número impar. Por el contrario,
los fragmentos moleculares por rotura de enlace, tienen una masa impar si
contienen cero o número par de átomos de N y masa par si el número de
átomos de N es impar.
 Identificación de compuestos por su fragmentación patrón: la
fragmentación de la mayor parte de las moléculas produce un gran
número de picos que permiten la identificación de numerosos compuestos
y el reconocimiento de ciertos grupos funcionales de ellos. Se han descrito
una serie de reglas generales que rigen los procesos de fragmentación, los
cuales son de gran utilidad para la determinación de los espectros.
 Identificación de productos de reacción o de productos metabólicos: se
usa en cinética química y en farmacología pudiéndose llegar a identificar
impurezas y metabolitos a concentraciones de pocas partes por millón.
 Caracterización y análisis de polímeros: el polímero se piroliza en
condiciones controladas y los productos volátiles se hacen pasar a un
espectrómetro para su análisis.
 Análisis de sangre: gracias a la rapidez del método, se puede emplear
incluso como control durante un proceso quirúrgico. Así se puede
determinar a gran velocidad las concentraciones hemáticas de monóxido
y dióxido de carbono, oxígeno, nitrógeno, gases anestésicos (como el NO).
 Estudiar la abundancia de isótopos: Esta fue la finalidad con la que fue
creada la técnica y en la actualidad se usa para análisis por dilución de
isótopos, estudios con trazadores isotrópicos, estudiar la edad de las
muestras por su proporción de isótopos con la ventaja frente a los
radiactivos que se pueden medir los isótopos no radiactivos.
 Aplicaciones cuantitativas

 Para la determinación cuantitativa de los componentes de una mezcla es

conveniente que cada uno de ellos presente por lo menos un pico que
difiera claramente de los demás. La calibración se realiza por comparación
de los picos con patrones adecuados. Las alturas de los picos son
directamente proporcionales a las presiones parciales de los componentes
volatilizados en la muestra.
Las aplicaciones cuantitativas de la espectrometría de masas para análisis
cuantitativo son de dos tipos:

 Determinación cuantitativa de especies moleculares o tipos de especies

moleculares en muestras orgánicas, biológicas y ocasionalmente
inorgánicas: normalmente tales análisis se llevan a cabo haciendo pasar la
muestra a través de una columna cromatrográfica o de electroforesis
capilar y posteriormente por el espectrómetro.
 Determinación de la concentración de elementos en muestras inorgánicas
y, en menor medida, de muestras orgánicas y biológicas: las
concentraciones de analito en este caso se obtienen directamente a partir
de las alturas de los picos de los espectros de masas. Se crean curvas de
calibrado que nos permiten el análisis cuantitativo gracias a la existencia
de picos únicos para cada componente y cada valor de m/z.

Características más importantes

 Aplicaciones principales: Determinación de la estructura e identidad de

compuestos orgánicos.
 Fenómeno molecular: Ionización y rompimiento de la molécula en fragmentos
de iones.
 Ventajas en el análisis cualitativo: Peso molecular preciso, masas de partes
integrantes de la molécula, muy alta sensibilidad, detección de impurezas.
 Ventajas en el análisis cuantitativo: Alta sensibilidad.
 Muestra promedio deseable: < 10(-6) g
 Limitaciones del método: No siempre pueden diferenciar entre estructuras
isómeras.
 Limitaciones para la muestra: Ninguna
EJERCICIOS

1.

2. CALCULAR LA MASA ATÓMICA PROMEDIO DEL CLORO

3.