Clase 2 Biolixiviación

UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS, BIOQUÍMICAS Y

BIOTECNOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA
ASIGNATURA: OPERACIONES UNITARIAS II
BIOLIXIVIACIÓN
Ing. Cinthia Córdova Barrios

cinthia.biotech@yahoo.es
BIOLIXIVIACIÓN
OBJETIVO
Explica los principios básicos y fundamentos de las operaciones unitarias que se

llevan a cabo en el proceso de recuperación de metales por biohidrometalurgia,
formulando y conduciendo experimentos para el diseño de cada bioproceso,
valorando su importancia en el área de la biominería.
BIOLIXIVIACIÓN
1. Introducción.
2. Definición.
3. Microbiología de la biolixiviación.
4. Mecanismos de la lixiviación.
5. Aislamiento de microorganismos biolixiviantes.
6. Cultivo de microrganismos biolixiviantes.
7. Caracterización de microorganismos biolixiviantes.
8. FODA de la biolixiviación
9. Referencias bibliográficas.
INTRODUCCIÓN
“La actividad bacteriana sobre diversos tipos de minerales ha tenido
lugar en la naturaleza desde tiempos remotos”
INTRODUCCIÓN
Acidithiobacillus ferroxidans
Sulfuro Metálico (MFeS2) Sulfato de cobre
“Es la solubilización de metales de un mineral”

INTRODUCCIÓN
¿Qué mecanismos utilizan para
¿Cómo realizan el proceso?
evadir la toxicidad del metal?
¿Qué componentes biológicos ¿Cómo crecen y funcionan las

tienen para digerir el mineral? células microbianas?
¿Qué mecanismos utilizan en el ¿Qué fuentes naturales existen

proceso de biolixiviación? para lograr su aislamiento?
INTRODUCCIÓN
“Desde las células microbianas a la obtención industrial de metales”

INTRODUCCIÓN:
MICROBIOLOGÍA
BIOLOGÍA
METALURGIA
MOLECULAR
Biohidrometalurgía
ING.
BIOPROCESOS
BIORREACTORES
DEFINICIÓN:
Biolixiviación
Un proceso natural de disolución

que resulta de la acción de un
grupos microorganismos
específicos para lixiviar, o extraer,
metales o concentrados
minerales presentes en las
minas.
El resultado es una solución

ácida que contiene el metal en
su forma soluble.
MICROBIOLOGÍA DE LA BIOLIXIVIACIÓN:
CARACTERÍSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS BIOLIXIVIANTES
El habitad presenta escasos nutrientes.
Condiciones de pH muy ácidas.
La distribución de la fuente de carbono y energía es heterogénea.
Inicio y termino del proceso con escasa densidad celular.
El metabolismo predominante es quimiolitoautótrofo
Escasa materia orgánica para biosíntesis celular.
Alto estrés celular.

Procariotes Eucariotes
Eubacterias: Acidithiobacillus y Leptospirillum. Eucariotes: Euglena y Fusarium.
Arqueobacterias: Sulfolobus, Ferroplasma y

Acidianus.
DIVERSIDAD DE LOS
MICROORGANIMOS BIOLIXIVIANTES
Oxidantes de Hierro Oxidantes del azufre

• Acidithiobacillus ferrooxidans. • Acidithiobacillus ferrooxidans.
• Leptospirillum spp. • Acidithiobacillus thiooxidans.
• Ferroplasma acidarmanus. • Acidithiobacillus caldus.
• Acidimicrobium ferrooxidans. • Sulfolobus sp.
• Ferromicrobium acidophillus. • Thermoplasma acidophilum.
• Sulfolobus metallicus. • Picrophilus oshimae.
• Metallosphaera sp. • Sulfobacillus acidophilus.
• Acidianus sp. • Metallosphaera sp.
• Acidianus sp.
Acidithiobacillus ferroxidans
Thiobacillus sp.
Presenta forma bacilar.
Bacteria gramnegativa de 0.5 - 1x3 um.
Quimioautotrófico,
Es aerobio.
Acidófilo (pH: 1.5 – 3.0).
Mesófilo (25 - 35°C).
Genoma secuenciado.
Ej: Acidithiobacillus ferroxidans, Acidithiobacillus thioxidans

Leptospirillum sp.
Vibrios o espirilos .
gramnegativos de 0.2-0.6 x 0.9-
3.5 µm
Oxidan fierro. No oxidan azufre

ni tiosulfato. Autótrofo.
Mesófilo.
Ej: Leptospirillium ferroxidans, Leptospirillim thermoferrooxidans, Leptospirillium

ferriphilum
Sulfobacillus sp.
Bacilos grampositivos formadores

de esporas
Oxida azufre. Pueden ser

autótrofos y quimioorganotrofos.
Termófilo moderado (40 -60 ̊C)
Ej: Sulfobacillus acidophilus, Sulfobacillus thermosulfidooxidans

Sulfolobus sp.
Arquea gramnegativa esférica de

0.8-2 µm o de forma irregular
Oxida azufre. Autótrofo y

heterótrofo
Termófilo (75 -80 ̊C) y acidófilo.
Ej: Sulfolobus acidocalcarius, Sulfolobus solfataricus

Ferroplasma sp.
Arquea irregular y pleomórfica,

gramnegativa de 1-3 x 0.3 a 1µm
Oxida fierro. No oxida azufre,

tiosulfato ni tetrationato.
Autótrofo.
Mesófilo. Aeróbico y anaeóbico

facultativo.
Ej: Ferroplasma acidiphilum, Ferroplasma thermophilum, Ferroplasma acidarmanus

MECANISMOS DE LA BIOLIXIVIACIÓN:
Directo o en contacto
Indirecto y sin contacto

• Por tiosulfato.
• Por polisulfuros o ataque de protones
• Mediado por la acción • Mediado por la acción de los

CONTACTO
CONTACTO
DIRECTO O EN
INDIRECTO O SIN
bacteriana. iones férricos en la disolución
• Contacto físico. del mineral sulfurado.
• Ocurren reacciones químicas • No necesita la adherencia de
enzimáticas. las células al sulfuro mineral.
• La lixiviación se produce por • Las bacterias regeneran los
un oxidante biológico. iones férricos y/o los protones.
• Evaluar el crecimiento • Concentrar los iones en la
bacteriano sobre el mineral en interfase mineral/agua o
relación con la velocidad de mineral/célula.
lixiviación del mineral. • 𝑀𝑆 + 2𝐹𝑒 3+ → 𝑀2+ + 𝑆 +
• 𝑀𝑆 + 2𝑂2 → 𝑀2+ + 𝑆𝑂4 2𝐹𝑒 2+
Silverman y Ehrlich (1964)

FeS2 + 3.5 O2 + H2O→ Fe2+ + 2SO42- + 2H+
FeS2 + 14Fe3+ + 8H2O → 15Fe2+ + 2SO42- + 16H+
Fe2+ + 1/2O2 + 2H+ → 2Fe3+ + H2O

Los Sulfuros de metal que solo son atacables a través de un
agente oxidante como el fierro (III) se pueden clasificar de
acuerdo a los mecanismos de disolución:
Sulfuros de metal Sulfuros de metal

insolubles en ácido hidrolizables en ácido
FeS2, MoS2, WS2. ZnS, NiS, CuS y Cu2S.
Vía ataque hierro férrico. Vía ataque de protones.
Formación de tiosulfato como producto Se produce azufre elemental vía

intermedio. formación de polisulfuros.
MECANISMOS DE LA LIXIVIACIÓN:
MECANISMO DEL TIOSULFATO
MECANISMOS DE LA LIXIVIACIÓN:
MECANISMO DE LOS POLISULFUROS
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
BIOLIXIVIANTES:
Toma de muestra
BIOLIXIVIANTES:
Toma de muestra
BIOLIXIVIANTES:
Zammit, C y cols (2009).
El cultivo debe asegurar que siempre haya suministro de fuentes energéticas (Fe2+, S°,
etc), fuentes de carbono (CO2) fuente de Nitrógeno (sales de amonio), oxígeno
(aireación). Todo debe estar a pH ácido y en agitación constante (180 RPM) para
asegurar la homogenización de los nutrientes.
El medio de cultivo líquido de las bacterias lixiviantes (9K)

CULTIVO DE MICROORGANISMOS
BIOLIXIVIANTES:
REQUERIMIENTO
N, P, Mg, Ca.
Micronutrientes
Dióxido de constituyentes.
carbono.
Oxígeno Fuente de carbono
Aceptor final de celular
Sulfato ferroso. electrones en la
Sustrato que reacciones del
proporciona metabolismo
energía. energético.
Rendimiento en base al Sulfato ferroso es de 1.2 mg de peso seco de células por g de

FeSO4 . 7H2O oxidado.
BIOLIXIVIANTES:
INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
pH O2
Afecta a los grupos ionizables presentes en las

La oxidación del Sulfato ferroso.
enzimas del citoplasma y periplasma.
Valores cercanos a 1.0 presentan una fuerte No se requiere de una concentración de oxígeno
inhibición del crecimiento. disuelto excesivamente alta.
Valores mayores a pH 2 favorecen la precipitación El valor límite de la concentración de oxígeno se

de jarosita y solubilidad de Sulfato ferroso, encuentra entre 0.20 mg O2/L (Liu et al.) y 0.35
dificultando la oxidación de los sulfuros del mineral. mg O2/L (Myerson)
El oxígeno es el sustrato limitante en la velocidad

Varia según el consumo de protones.
de crecimiento bacteriano.
BIOLIXIVIANTES:
INFLUENCIA DEL pH
4Fe2+ + O2 + 4H+ 4Fe3+ + 2 H2O

Fig. 1
La oxidación del Sulfato ferroso determina un

incremento del pH.
Fe3+ + H2O + 4H+ FeOH2+ + H+
FeOH2+ + H2O Fe(OH)2+ + H+
Fe(OH)2+ + H2O Fe(OH)3 + H+

Fig. 2
La hidrolisis del Fe (III) produce ácido, reduciendo

el pH hasta un valor aproximado de 2.4.
BIOLIXIVIANTES:
INFLUENCIA DEL O2
𝐶𝑢𝑆 + 2𝑂2 → 𝐶𝑢𝑆𝑂4

Oxidación de covelita.
𝐶𝑢2 𝑆 + 2.5 𝑂2 +𝐻2 S𝑂4 → 2 𝐶𝑢𝑆𝑂4 + 𝐻2

Oxidación de calcosina.
2𝐶𝑢𝐹𝑒𝑆2 + 8.5𝑂2 +𝐻2 S𝑂4 → 2 𝐶𝑢𝑆𝑂4 + 𝐹𝑒2 𝑆𝑂4 3 + 𝐻2 O

Oxidación de calcopirita.
BIOLIXIVIANTES:
Referencia pH
MacDonald et al. (1970) 2.5 - 3.5
Buchanan et al. (1974) 2.5 - 5.8
Nakamura (1986) 1.5 - 2.5
Ingledew (1986) 2.0
Smith et al. (1988) 2.0 - 2.3
García et all. (1989) 1.25 - 1.75
Referencia T (°C) pH
MacDonald et al. (1970) 29 - 33 1.5 - 2.5
Gómez y Cantero (1998) 31 1.8 - 2.0
Smith et al. (1988) 30 1.8 – 2.1
* En cultivo sumergido
T (°C), pH 2.5 O2 (mg/L)

25 0.877
28 0.390
31 0.368
34 0.345
Referencia: Myerson (1981)
BIOLIXIVIANTES:
INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
Temperatura CO2
Por encima de 35°C decrece la velocidad de Fuente de carbono que acompaña al aire
crecimiento. suministrado.
La temperatura óptima de crecimiento depende

La asimilación se lleva a través del ciclo de Calvin.
del pH del medio.
Determina la solubilidad del oxígeno. La concentración está en el rango de 7-8%

BIOLIXIVIANTES:
BIOLIXIVIANTES:
Toxicidad por metales en A. ferroxidans
Metal Nivel inhibitorio (mg/L) Tolerancia
reportada
Zn2+ > 10000 15 – 72 g/L
Ni2+ > 10000 12 – 50 g/L
Cu2+ > 10000 15 g/L
Mn2+ > 10000 __
Co2+ > 10000 3 g/L
Al3+ > 10000 6 g/L
Ag+ < 50 1 ppm
UO22- < 700 200 - 500 g/L
AsO43- < 200 __
MoO42- <5 90 mg/L
SeO2 < 100 __
BIOLIXIVIANTES:
TOXICIDAD POR ANIONES
Anión Concentración (M) %Inhibición

oxidación de Fe2+
F- 2.5 x 10-4 100
CN- 2.4 x 10-4 99
NO3- 9.4 x 10-2 100
NaCl 8.6 x 10-2 50
KCl 2.6 x 10-1 90
Selección de cepas con cierta resistencia a estos iones, aisladas en los sitios donde se
extrae el mineral a tratar, o bien la construcción artificial de cepas con estas
características mediante técnicas de Ingeniería Genética.
BIOLIXIVIANTES:
INMOVILIZACION
La inmovilización se define como el confinamiento físico de las células intactas a una
región del espacio, con la conservación de la actividad biológica .
Confinamiento de microorganismos
Atrapamiento en los intersticios dentro de la red
de un polímero.
Adherencia natural e inducida a

Adsorción superficies sólidas o
microorganismos.
BIOLIXIVIANTES:
INMOVILIZACIÓN
Referencias Soporte Reactor
Nikolov et al. (1987) Cloruro de polivinilo Discos rotatorios
Grishin et al. (1989) Esferas de vidrio Lecho fijo
Grishin et al. (1989) Esferas de resina Lecho fijo
Grishin et al. (1989) Carbón activo Lecho fluidizado
Karamanev et al. (1991) Poliestireno expandido Lecho fluidizado inverso
García et al. (1989) Mineral sulfurado Lecho fijo
Carranza et al. (1990) Arena Lecho fijo
Carranza et al. (1990) Mineral de cobre Lecho fijo
Carranza et al. (1990) Carbón activo Lecho fijo
Sonta et al. (1990) Lana de vidrio Lecho fijo
Armentia et al. (1992) Espuma de poliuretano Lecho movil
Nemati y Webb (1997) Espuma de poliuretano Reactor de goteo
Gómez et al. (2000) Fibra de níquel Lecho fijo
BIOLIXIVIANTES:
BIOPELICULA
JAROSITA
Hidroxisulfatos
básicos de Fe (III) La velocidad de crecimiento
MFe3(SO4)2(OH)6 del microorganismo es menor
que las de suspensión.
M: K+, Na+, Ag+,
Pb2+, NH4+, H3O+
Incrementa la velocidad de
oxidación de Fe (II).
Está conformada de jarosita y

bacterias
La cantidad de células es proporcional al volumen de jarosita.

BIOLIXIVIANTES:
BIOPELICULA
Aspectos importantes:
• Las jarositas se pueden encontrar en los sedimentos de
los drenajes ácidos de minas.
• Su precipitación depende del pH, la composición iónica
y la concentración del medio.
Efectos negativos:
• Barrera física en el biorreactor.
• Depósito en las matrices de inmovilización.
• Bloqueo de bombas, válvulas, tuberías y demás
dispositivos.
CARACTERIZACIÓN DE
MICROORGANISMOS BIOLIXIVIANTES:
La cepas de Acidithiobacillus ferroxidans desarrollan colonias coloreadas

en un plazo de 1- 2 semanas en medio 9K modificado con agarosa.
CARACTERIZACIÓN DE
Colonias de A. ferroxidans ATCC 19859
El medio de cultivo de las bacterias lixiviantes permite conocer la morfología de la

colonia y es aplicable para poder purificar las cepas, así como hacer análisis de recuento
de viables cultivables.
CARACTERIZACIÓN DE
Caracterización
microscópica
Aislamiento de A.ferroxidans y caracterización microscópica

CARACTERIZACIÓN DE
TINCIÓN DE GRAM
CARACTERIZACIÓN DE
BIOMONITOREO MICROBIOLOGICO
Recuento celular:
Tiene como objetivo conocer el numero total de microorganismos por unidad de
volumen en una muestra o el numero de microorganismos capaces de formar
colonias.
Viabilidad celular:
Determinar el porcentaje de células viables presentes en una muestra Se basa en una
tinción de bacterias viables y no viable con fluoroforos (yoduro de propidio, para
microorganismos no viables y rodamina 123 para microorganismos viables), utilizando
el microscopio de fluorescencia (Metodo biocrómico)
Respirometría:
Tiene como objetivo medir el consumo de oxigeno basal en una muestra, así como la
actividad oxidante frente a un sustrato especifico como hierro o azufre. Esta técnica
sustituye estudios de oxidación.
CARACTERIZACIÓN DE
RECUENTO CELULAR
RECUENTO EN CÁMARA DE PETROFF-HAUSSER/NEUBAUER

CARACTERIZACIÓN DE
RECUENTO CELULAR
RECUENTO DE COLONIAS
CARACTERIZACIÓN DE
RECUENTO CELULAR
RECUENTO DE COLONIAS: SIEMBRA POR EXTENSIÓN

CARACTERIZACIÓN DE
VIABILIDAD CELULAR
DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP)
Se analiza el título de la oxidación de una serie de diluciones por los microorganismos viables.
CARACTERIZACIÓN DE
BIOMONITOREO GENOMICO
qPCR:
Amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el
producto en tiempo real. Mide la velocidad de la amplificación y
no la cantidad de producto formado al final.
BMS (Biomining Microarray Screening):

Placas de silicio, vidrio u otro material de unos centímetros de
tamaño, a cuya superficie se han adherido según una disposición
ordenada, conocida, diversas moléculas cortas de DNA (sonda)
DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis):

Es un tipo de electroforesis que permite la separación de
fragmentos de ADN del mismo tamaño pero con diferente
secuencia de nucleótidos.
CARACTERIZACIÓN DE
BIOMONITOREO GENOMICO
Secuenciación:
Determinación de la secuencia de nucleótidos del
fragmento 16S rRNA. Permite establecer el orden exacto de
los nucleótidos.
ARDREA
Analisis de enzimas de restriccion del fragmento 16S rRNA

amplificado.
FISH:
Hibridación in situ con sondas específicas marcadas con

fluorescencia
CARACTERIZACIÓN DE
DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS METABOLICAMENTE ACTIVOS
Es un método rápido, seguro y eficaz para la detección de la presencia de microorganismos

acidófilos en soluciones de biolixiviación en pilas o botaderos y en drenajes ácidos de minas.
Con esta técnica se detecta el nivel de microorganismos lixiviantes activos mediante la
medición del ATP presente en ellos. Esto se realiza mediante una reacción enzimática con
Luciferina/Luciferasa, enzima que poseen las luciérnagas para producir su luz característica.
En esta técnica, la luz emitida es proporcional a la cantidad de microorganismos presentes en
la solución.
FODA: FORTALEZAS DE LA
BIOLIXIVIACIÓN:
Requiere poca inversión de capital.
Bajos costos de operación en comparación con los

procesos convencionales.
Relativa ausencia de polución o contaminación

ambiental durante el proceso.
Flexibilidad en cuanto al tamaño de las

instalaciones.
Permite el beneficio de minerales marginales y la

exploración de botadores.
FODA: DEBILIDADES DE LA
BIOLIXIVIACIÓN:
Sensible al costo de energía, agua y consumo de acido.
Lentitud del proceso
Recuperaciones bajas.
Generación de efluentes ácidos.
Complejidad del sistema afecta a los microorganismos.

FODA: OPORTUNIDADES Y AMENAZAS DE
LA BIOLIXIVIACIÓN
Oportunidades y amenazas
Tratamiento de Minerales Tecnologías

Calcopiríticos. medioambientalmente mas
confiables.
Tratamiento de minerales de
baja ley. Nuevas tecnologías y Patentes.
Lixiviación de concentrados. Prohibición de las operaciones
de lixiviación (residuos
solubles).
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
 Acevedo BF, Gentina MJ. Fundamentos y perspectivas de las
tecnologías Biomineras. Chile: Ediciones universitarias de
Valparaíso; 2005.
 Rawlings D. Biomining. Theory, Microbes and Industrial
Processes. German: Springer-Verlag; 2012.
 Esparza MM, Holmes D, Jedlichi E. Fijación de CO2 en la
bacteria biolixiviante A. ferrooxidans: Función del regulador
transcripción CbbR durante la Fijación de CO2 en la bacteria
biolixiviante A. ferrooxidans. Chile: Editorial académica
Española; 2012.

Clase 2 Biolixiviación

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FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS, BIOQUÍMICAS Y

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ASIGNATURA: OPERACIONES UNITARIAS II

Ing. Cinthia Córdova Barrios

Explica los principios básicos y fundamentos de las operaciones unitarias que se

5. Aislamiento de microorganismos biolixiviantes.

6. Cultivo de microrganismos biolixiviantes.

7. Caracterización de microorganismos biolixiviantes.

Sulfuro Metálico (MFeS2) Sulfato de cobre

“Es la solubilización de metales de un mineral”

¿Qué componentes biológicos ¿Cómo crecen y funcionan las

¿Qué mecanismos utilizan en el ¿Qué fuentes naturales existen

“Desde las células microbianas a la obtención industrial de metales”

Un proceso natural de disolución

El resultado es una solución

Condiciones de pH muy ácidas.

La distribución de la fuente de carbono y energía es heterogénea.

Inicio y termino del proceso con escasa densidad celular.

El metabolismo predominante es quimiolitoautótrofo

Escasa materia orgánica para biosíntesis celular.

Alto estrés celular.

Eubacterias: Acidithiobacillus y Leptospirillum. Eucariotes: Euglena y Fusarium.

Arqueobacterias: Sulfolobus, Ferroplasma y

Oxidantes de Hierro Oxidantes del azufre

Presenta forma bacilar.

Bacteria gramnegativa de 0.5 - 1x3 um.

Acidófilo (pH: 1.5 – 3.0).

Mesófilo (25 - 35°C).

Ej: Acidithiobacillus ferroxidans, Acidithiobacillus thioxidans

Oxidan fierro. No oxidan azufre

Ej: Leptospirillium ferroxidans, Leptospirillim thermoferrooxidans, Leptospirillium

Bacilos grampositivos formadores

Oxida azufre. Pueden ser

Termófilo moderado (40 -60 ̊C)

Ej: Sulfobacillus acidophilus, Sulfobacillus thermosulfidooxidans

Arquea gramnegativa esférica de

Oxida azufre. Autótrofo y

Termófilo (75 -80 ̊C) y acidófilo.

Ej: Sulfolobus acidocalcarius, Sulfolobus solfataricus

Arquea irregular y pleomórfica,

Oxida fierro. No oxida azufre,

Mesófilo. Aeróbico y anaeóbico

Ej: Ferroplasma acidiphilum, Ferroplasma thermophilum, Ferroplasma acidarmanus

Indirecto y sin contacto

• Mediado por la acción • Mediado por la acción de los

Silverman y Ehrlich (1964)

FeS2 + 3.5 O2 + H2O→ Fe2+ + 2SO42- + 2H+

FeS2 + 14Fe3+ + 8H2O → 15Fe2+ + 2SO42- + 16H+

Fe2+ + 1/2O2 + 2H+ → 2Fe3+ + H2O

Sulfuros de metal Sulfuros de metal

FeS2, MoS2, WS2. ZnS, NiS, CuS y Cu2S.

Vía ataque hierro férrico. Vía ataque de protones.

Formación de tiosulfato como producto Se produce azufre elemental vía

El medio de cultivo líquido de las bacterias lixiviantes (9K)

Rendimiento en base al Sulfato ferroso es de 1.2 mg de peso seco de células por g de

Afecta a los grupos ionizables presentes en las

Valores mayores a pH 2 favorecen la precipitación El valor límite de la concentración de oxígeno se

El oxígeno es el sustrato limitante en la velocidad

4Fe2+ + O2 + 4H+ 4Fe3+ + 2 H2O

La oxidación del Sulfato ferroso determina un

Fe3+ + H2O + 4H+ FeOH2+ + H+

FeOH2+ + H2O Fe(OH)2+ + H+

Fe(OH)2+ + H2O Fe(OH)3 + H+