EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

EXTRACTION AND DETERMINATION CASEIN ISOELECTRIC POINT

Ardila Greilly (05242097)

Corporación tecnológica de Bogotá, Tecnología en Química Industrial

Bogotá, Colombia
12/11/2015

Una característica de las proteínas y otros

RESUMEN
Se llevó a cabo el procedimiento de
extracción y separación de la caseína de una
muestra de leche común, La caseína es una
proteína conjugada de la leche del tipo
fosfoproteína que se separa de la leche por
acidificación y forma una masa blanca. Se
realizó la determinación experimental del
punto isoeléctrico de la proteína separada
(5,2) haciendo preparación de soluciones a
diferentes concentraciones y medida su
absorbancia en el espectrofotómetro.
Palabras clave: Proteína, caseína, extracción,
Punto isoeléctrico.
ABSTRACT
Carried out the process of extraction and
separation of casein from a sample of regular
milk, Casein is a milk protein conjugate of
the type phosphoprotein which is separated
from milk by acidification and forms a white
mass. Experimental determination of the
isoelectric point of the separated protein
(5.2 ) was performed by preparing solutions
at different concentrations and the absorbance
measured in a spectrophotometer .
INTRODUCCION
biopolímeros es que la carga total que
adquieren depende del pH del medio. De la
misma manera las proteínas tienen una carga
neta dependiendo del pH del medio en el que
se encuentren y de los aminoácidos que la
componen. La caseína es una proteína
conjugada de la leche del tipo fosfoproteína
que se separa de la leche por acidificación y
forma una masa blanca. Las fosfoproteinas
son un grupo de proteínas que están
químicamente unidas a una sustancia que
contiene ácido fosfórico. En la caseína la
mayoría de los grupos fosfato están unidos
por los grupos hidroxilo de los aminoácidos
serina y treonina. La caseína en la leche se
encuentra en forma de sal cálcica (caseinato
cálcico). La caseína
representa cerca del 77% al 82% de las
proteínas presentes en la leche y el 2,7% en
composición de la leche líquida.
MATERIALES Y METODOS
Extracción de la caseína:
A una mezcla de agua destilada y leche
caliente se le agregó 1 mL de ácido acético
1M hasta formar un precipitado, se filtró y se
agregó etanol para volver a filtrar.
Determinación del punto isoeléctrico:
A 50 mg de caseína se le adicionó agua
destilada, Hidróxido de potasio y se preparó
una solución de 10 mL, los cuales se
distribuyeron los 10 tubos de ensayo (1 mL
en cada uno), a los cuales se les agregó los
volúmenes correspondientes a la tabla No. 1,
y se midió la absorbancia de cada uno de
ellos a 640 nm para realizar la posterior ácido
gráfica (Gráfica No. 1) de absorbancia Vs pH acetat ácido
acétic pH
o de acétic
Tubo o apro
RESULTADOS Y ANALISIS DE sodio o 0.1
0.01 x.
TESULTADOS 0.1m m
m
1 0.5 9.5 3.2
Extracción de la caseína:
2 1 9 3.6
Al adicionar el ácido acético a la leche se 3 1.5 8.5 3.8
observa un cambio en su composición, 4 2 8 4
evidenciándose una precipitación completa, 5 3 7 4.2
ya que la fase líquida es traslúcida y la fase 6 4 6 4.5
sólida completamente blanca. Se puede 7 6 4 5
explicar ya que de acuerdo al cambio de pH 8 8 2 5.1
experimentado por la leche, inicialmente
9 6 4 5.5
entre 6,5 y 6,7, allí la proteína (caseína) se
10 8 2 6.1
encuentra cargada negativamente solubilizada
BLANC
con sal cálcica, al acidificarse el pH se acerca 2 8 4
O
al punto isoeléctrico de la proteína, al llegar a
Tabla No. 1. Fracción para preparación de
pH aproximado a 4,2 y 4,7 se neutraliza la
soluciones según sus componentes a pH
caseína (los grupos fosfatos se protonan), así aproximado.
se precipita debido a que hay menos
repulsiones intermoleculares, evidenciándose Se obtuvieron los siguientes resultados
la separación de estos compuestos por medio correspondientes a la medición de la
de densidad ya que la densidad del agua es 1 absorbancia de la muestra de caseína a
g/ml quedando arriba por tener densidad más diferentes pH en diferentes tubos de ensayo
baja que la caseína que es de 1.3g/ml, esta (10) a 640 nm:
separación se da debido a que cuando las
proteínas en este caso la caseína se encuentra pH
a pH de punto isoeléctrico son menos Tubo Experimenta Absorbancia
solubles en agua y se da la separación de la l
proteína y el agua. 1 2,81 0,081
2 3,01 0,058
Ca2 + Caseinato + CH3COOH Caseína +
CaCOOH
3 3,12 0,004
4 3,21 0,002
Después de precipitada la caseína, se procede 5 3,35 -0,004
a lavado para eliminar el suero y grasas 6 3,54 0,008
forzando a la parte soluble de la caseína con 7 3,85 0,010
la lactosa a cristalizar. 8 4,18 0,014
9 5,20 0,040
10 7,5 0,011
Tabla No. 2 Medidas de las absorbancias de
Determinación del punto isoeléctrico: la caseína a diferentes pH en solución.
Con la preparación previa de las siguientes
soluciones se prepararon la solución para Con los anteriores datos se realizó una gráfica
medir su correspondiente absorbancia: pH Vs Absorbancia, en la que se muestra el
comportamiento de las soluciones:
 alejados a su punto isoeléctrico, en el tubo
pH Vs absorbancia que se observa una ligera precipitación está
indicando que la proteína se ha
0.1
insolubilizado.
0.05
Se observa la disminución de la actividad de
la proteína (caseína) con referencia a su pH
0
2 3 4 5 6 7 8 debido a que cuanto está a pH alejados de su
-0.05 punto isoeléctrico se comporta diferente,
igual se puede notar en su inestabilidad
Gráfica No 1. PH Vs absorbancia después de pasar por el punto en que sus
cargas son neutras.

Derivada de absorbancia
15

10

0
2 3 4 5 6 7 8
CONCLUSIONES
Gráfica No. 2 derivada de absorbancia
Se logró la debida separación de la proteína
Según la gráfica el punto isoeléctrico se de la leche (caseína) con el proceso de
encuentra en (5,2), ya que se puede observar acidificación.
un aumento de la absorbancia por respecto al
pH. Se determinó el punto isoeléctrico
experimental de la caseína (5,2) con la
Al utilizar un porcentaje de error interpretación de la gráfica de pH Vs
tenemos que: Absorbancia

teorico−experimental Se evidenció error en el procedimiento de

de error=
teorico medición de las absorbancias ya que el
porcentaje de error alcanza el 10%.
4,7−5,2
de error= ×100=10,6 Se adoptaron conocimientos teóricos y
4,7 prácticos con respecto a las proteínas.

La prueba para determinar el punto

isoeléctrico de la caseína no es aceptable, ya BIBLIOGRAFIA
que el porcentaje indica que se hicieron
Lehninger principios de bioquímica. Nelson,
errores en el proceso pero que son aceptables,
David L., Michael M. Cox.
ya que están cerca del rango en que precipita
la caseína. las soluciones de acetato de sodio Fisicoquímica de moléculas. Extracción de
y ácido acético al 0.1 y 0.01 se usaron como caseína y determinación de punto
soluciones amortiguadoras que permitieron isoeléctrico. Licenciatura de Biotecnología.
identificar la proteína ya que la caseína se
solubiliza fácilmente en valores de pH