Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo

Facultad de Ciencias Biológicas

Escuela Profesional de Biología

AISLAMIENTO DE VIRUS
INFORME DE PRÁCTICA

DESCRIPCIÓN BREVE
En la virología como ciencia que estudia
los virus, es importante primero obtener
el virus determinado para su análisis
posterior. Por ello es importante el
aislamiento del virus, lo cual se debe
seguir un proceso determinado para su
correcta identificación, como en este caso
ALUMNO : Hernández García Erwin Manuel. no se cuenta con un microscopio
electrónico para observarlo, sólo se
reconocerá el virus mediante la
DOCENTE : Graciela Albino Cornejo. observación de su acción sobre las células
bacterianas.

CURSO : Virología.

CICLO ACADÉMICO: 2018 – I

CÓDIGO: 1414551D

Lambayeque – Perú, 2018

 PRÁCTICA N° 2
ASILAMIENTO DE VIRUS
I. INTRODUCCIÓN
Los métodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden
clasificarse en DIRECTOS e INDIRECTOS, según persigan demostrar la
presencia del virus o de alguno de sus constituyentes (antígeno o genoma viral) o
bien la respuesta de anticuerpos específicos por parte del huésped en el curso de
la infección.
Gran parte de las técnicas utilizadas en el diagnóstico clínico se basan en pruebas
serológicas que identifican anticuerpos específicos frente a diversas proteínas
antigénicas. Sin embargo, existen circunstancias en las cuales son necesarias
pruebas que detecten precozmente la infección viral (tratamientos específicos,
medidas profilácticas, etc.). En algunas infecciones virales es posible detectar la
presencia de antígenos virales previamente al desarrollo de la seroconversión,
siendo esta prueba la única evidencia de la exposición al virus cuando no existe
aumento de los niveles de anticuerpos circulantes (pacientes inmunodeprimidos).
Igualmente, la detección del genoma viral puede favorecer la precocidad del
diagnóstico viral y su confirmación. En la última década se han desarrollado una
serie de técnicas para el diagnóstico viral basadas en la detección de ácidos
nucleicos. De ellas la Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es la más
utilizada.
En el momento actual, la tendencia en el diagnóstico virológico consiste en
emplear nuevas y más sensibles tecnologías de detección de antígenos y de
investigación de ácidos nucleicos con el propósito de lograr un diagnóstico viral
más rápido. El desarrollo de quimioterapia antiviral efectiva es responsable de
esta tendencia que hace de la identificación rápida, sensible y específica de los
virus, una necesidad.
La localización del virus puede aislarse de humanos o animales. Esto se puede
realizar mediante tres medios:
1. Mediante animales de laboratorio.
2. Mediante huevos embrionados.
3. Mediante cultivo de tejidos.
ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA
VIROLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

 Se aislará bacteriófagos de células bacterianas, en lo cual se observará la acción
del virus sobre la célula. Luego, estos virus se analizarán las propiedades físicas,
químicas y biológicas. Por último, se realizará una curva de crecimiento.
II. OBJETIVO
 Aislar la partícula viral de una célula bacteriana.
 Reconocer la acción del virus sobre la célula.
III. MATERIALES
MATERIAL BIOLÓGICO
 Cepa: Escherichia coli
 Agua residual.
MATERIAL DE LABORATORIO
 Medio de cultivo: Agar Triptosa.
 Caldo doble concentrado de Triptosa.
 Filtro bacteriológico.
 Placas Petri.
 Probeta.
 Tubos centrífuga.
 Embudo.
 Kitasato.
EQUIPOS
 Bomba de vacío.
 Centrífuga.
 Cámara de flujo laminar.
IV. PROCEDIMIENTO
1. Conseguir el agua residual, en este caso se consiguió en el distrito de Santa
Rosa.
2. Obtener cepa en estado vegetativo, viable y en fase S.
3. Coger 4 o 3 colonias de la cepa y sembrar en el frasco con caldo doble
concentrado de Triptosa.
4. Llevar a incubación por 4 a 8 horas a 37°C.
5. Filtrar el agua residual.
6. Retirar el frasco de incubación y agregar 50 ml del agua residual previamente
filtrada.
7. Refrigerar la mezcla.
8. Centrifugar la mezcla a 1800 rpm/30 min o a 5000 rpm/ 15 a 20 minutos.
ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA
VIROLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

 9. Filtrar la mezcla con filtro bacteriológico en un kitasato conectado a una
bomba de vacío.
10. El líquido sobrenadante verter a un frasco estéril y el filtrado llevar a un tubo
o frasco estéril.
11. Comprobar la presencia de virus en el filtrado.
12. Sembrar en caldo Triptosa (4-3ml) 2 o 4 colonias de la cepa a trabajar.
Incubar 4 – 8 horas a 35°C.
13. Sembrar la cepa del caldo con un hisopo estéril en una placa Petri con agar
Triptosa.
14. Inocular 1 gota del filtrado y marcarla en la placa.
15. Incubar la placa por 24 o 18 horas a 35°C.
16. Observar la reacción del virus.
17. Aislar el virus en un vial.
V. RESULTADOS
Se obtiene la cepa en estado vegetativo y viable, en este caso la cepa
Escherichia coli

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

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 Se filtra el agua residual.

Se agrega 50 ml del agua residual previamente filtrada al frasco con caldo doble
concentrado de Triptosa.

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

 Luego se lleva a centrifugación a 5000 rpm por 15 minutos.

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

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 Se conecta el Kitasato estéril a la bomba de vacío.

Se coloca el filtro bacteriológico en el Kitasato.

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

 Verter la mezcla en el sistema de filtración.

Se inicia el proceso de filtración.

Se vierte el filtrado final en un frasco estéril.

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

 Luego, se vierte una gota de filtrado en la placa de Triptosa sembrada con E.coli,
incubar hasta el siguiente día y observar la placa.
Observación de la acción del virus sobre la cepa Escherichia coli en placa:

VI. CONCLUSIÓN:
 Se comprobó la presencia de virus en el filtrado mediante la inoculación en
la placa de agar Triptosa con Escherichia coli, observándose la acción del
virus sobre las colonias de la cepa, observándose una amplia zona
transparente donde las colonias no crecen por la acción del bacteriófago
en los puntos de inoculación del filtrado.
 Por ser el reconocimiento del virus mediante una célula bacteriana como
Escherichia coli, se concluye que el virus es un bacteriófago.

VII. REFERENCIAS

Referencias
Murray, Rosenthal, Pfaller. Microbiología médica. 8° edición. España.

Sandin María. Métodos de estudio y diagnóstico viral. Blogspot.

http://www.biologia.edu.ar/viruslocal/diagnostico%20viral.htm

ERWIN MANUEL HERNÁNDEZ GARCÍA

VIROLOGÍA

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