Professional Documents
Culture Documents
RESUMEN
El propósito del estudio fue demostrar el efecto antibacteriano del extracto etanólico de propóleo
(EEP) de Oxapampa-Perú evaluando in vitro su acción antibacteriana frente al S. mutans y S.
Correspondencia aureus para enfrentarlas a las soluciones: Propóleo 10% y 30% y compararlas con los testigos
clorhexidina 0,12 y 0,05%, listerine® y agua destilada. Se evaluó la actividad antimicrobiana
Frank Roger Mayta Tovalino. mediante el método de Kirby-Bauer. El diseño del estudio fue de tipo experimental in vitro y el
Calle Santa Maria Reyna Mz. Q Lt. 30 Urb. San tamaño muestral fue 16. Para el análisis de los datos se utilizó la prueba t de Student. Se
Diego - Lima 31, Perú determinó que para el S. aureus, el EEP al 30% presentó mayor eficacia con una media de
Teléfono: 99117-8533 / 573-0527 11,77mm±0,19 y se encontró que las dos concentraciones de propóleo a las 24 y 48 horas
e-mail: comunez18@hotmail.com
mostraron diferencia significativa p=0,007. Además, se determinó que para el S. mutans, tanto
el EEP al 10% y 30% a las 24 y 48 horas no mostraron diferencia significativa. Se concluye que
el EEP al 30% tuvo mayor efecto antibacteriano que el Listerine® contra el S. mutans p<0,001
e igual en efectividad que la clorhexidina 0,05% frente al S. aureus.
Recibido : 26 de setiembre del 2008
Palabras clave: PRÓPOLIS / Streptococcus mutans / Staphylococcus aureus.
Aceptado : 15 de abril del 2009
Evaluation in vitro of antibacterial effect of ethanolic extract of propolis of Oxapampa
- Peru against Streptococcus mutans (ATCC 25175) and Staphylococcus aureus (ATCC
25923)
ABSTRACT
The purpose of this study was to demonstrate the antibacterial effect of ethanolic extract of
propolis of Oxapampa-Peru, evaluating in vitro its antibacterial action against S. mutans and S.
aureus to compare with the solutions: Propolis 10 and 30%, Clorhexidine 0.12 and 0.05%,
Listerine® and distilled water, using the Kirby-Bauer method. The study design was experimental
in vitro and the sample size was n=16. For the analysis of data we used the Student t test. It was
found that for S. aureus, the EEOP-30% was more effective with an average of 11.77±0.19
mm and found that both concentrations of propolis at 24 and 48 hours showed significant
difference p=0.007. Furthermore, it was determined that for S. mutans, the EEOP 10 and 30%
at 24 and 48 hours showed no significant differences. In conclusion, the EEOP 30% had the
greatest antibacterial effect than Listerine® against S. mutans with p<0.001 and EEOP 30%
had the same activity that chlorhexidine 0.05%, over S. aureus.
Key words: PROPOLIS / Streptococcus mutans / Staphylococcus aureus.
19
Artículo Original
Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del extracto etanólico de propóleo...
Por lo tanto este trabajo de alcohólicos, al 10% y al 30% por MHA, 100ml de BHI y 100ml de
investigación se enfoca en maceración durante 8 días a 37ºC MHB, 100ml de Thioglicolato y 50ml
determinar la acción antibacteriana en estufa; luego se filtró varias veces de H2O destilada.
del extracto etanólico de propóleo con papel filtro whatman número 40 La preparación de los discos con
(EEP) de Oxapampa - Perú frente y se obtuvo la solución etanólica del EEP, fue con los discos de papel filtro
a dos cepas de microorganismos de propóleo. whatman número 3 estériles, los
la cavidad oral como el Después fue sometido a un cuales fueron embebidos con 60µl
Staphylococcus aureus y el rotavapor a 40ºC para extraer el de EEP al 10% y al 30% respectiva-
Streptococcus mutans. etanol, luego de este proceso, aun mente y como pruebas de control se
queda residuos de etanol dentro del utilizaron discos de papel filtro
Material y métodos extracto el cual tiene que ser whatman embebidos en agua
El presente estudio, de tipo eliminado totalmente. Todo este destilada y clorhexidina al 0.12%,
experimental in vitro, estuvo proceso fue llevado a cabo en un clorhexidina al 0,05%, Amoxicilina
conformada por 16 cultivos de las Instituto de Investigación y listerine solución que fueron
cepas de Streptococcus mutans Farmacéutica de Recursos colocados inmediatamente para el
(ATCC 25175) y Staphylococcus Naturales. enfrentamiento bacteriano en los
aureus (ATCC 25923). Procedimiento microbiológico: El medios de cultivo específicos para
Obtención del EEP: El propóleo Cultivo de las cepas se realizó en el cada tipo de bacteria.
fue extraído de la región de laboratorio de microbiología de la Para el análisis de la actividad
Oxapampa - Perú, con la ayuda de UPCH, por el investigador principal, antimicrobiana del EEP, los discos
un especialista con experiencia en bajo la supervisión de una con EEP al 10% y 30% fueron
la recolección de este recurso microbióloga antes de realizar el colocados en placas petri estériles
natural de un Centro de Apicultura. cultivo de las cepas, estas fueron conteniendo el agar nutriente
Se recolectaron 1500 Kg. y se reactivadas debido a que se especifico para cada cepa,
procedió a envasarlo para su encontraban a -80ºC, para lo cual, incubadas a 37ºC, por 24 y 48 horas,
transporte. fueron sometidos a dos pasos de la actividad antimicrobiana fue
El propóleo fue recolectado reactivación a las 24 y 48 horas antes determinada por la formación del
mediante condiciones de higiene, las del experimento y fueron colocadas halo inhibitorio alrededor de los
cuales impidieron la contaminación a 37ºC. Posteriormente se realizó el discos medida mediante una regla
de esta, se separaron algunos sembrado selectivo mediante la vernier, el cual, nos determinó la
componentes que no forman parte técnica del hisopado sobre los cantidad en milímetros del diámetro
de ella como restos pequeños de medios de cultivos respectivos. del halo de inhibición.
madera, de hojas y otros, que puedan - Agar Müller Hinton (MH): Los datos fueron registrados
alterar su composición. Staphylococcus aureus (ATCC mediante una ficha de recolección
El transporte del propóleo desde 25923). de datos.
el lugar de recolección hacia un - Agar Brain Heart Infusion (BHI): Una vez terminada la
Instituto de Investigación Farmacéu- Streptococcus mutans (ATCC elaboración de la prueba piloto, se
tica de Recursos Naturales; se 25175). procedió a verificar las mediciones
realizó en frascos de vidrio estériles Para la preparación de los de los halos de inhibición entre el
para evitar la contaminación del medios de cultivo, se prepararon 10 investigador principal y la
propóleo. tubos de ensayo con Caldo Brain especialista en microbiología, para lo
Para el procesamiento del EEP, Heart Infusión (BHA), 10 tubos de cual de uso la prueba de Coeficiente
el propóleo fue extendido sobre una ensayo con Caldo Müller Hinton de correlación intraclase (0,9) para
mesa y se seleccionaron aquellos (MHB) y 10 tubos de ensayo con determinar la calibración del
que no presenten impurezas, luego Thioglicolato. investigador principal.
fue cortado en trozos pequeños y Además se prepararon 12 placas Consideraciones éticas: El
posteriormente pulverizado en un de medio BHI con 20ml de medio y presente estudio in vitro que trabajó
mortero de porcelana y fue extraído 12 placas de medio MH con 20ml con cepas bacterianas fueron
con alcohol de 70ºcsp 100ml. Se de medio, para los cuales se registradas y se obtuvo la aprobación
prepararon dos extractos emplearán 250ml de BHA, 250ml de del Comité de Ética de la UPCH.
Análisis estadístico: Los datos antibacteriana contra el S. aureus, bacteriana contra el S. mutans, se
fueron procesados y analizados se encontró que el propóleo al 10% encontró que el propóleo al 10%
mediante el programa SPSS versión presentó una media de 9,95mm de presentó una media de 11,47mm de
15. Para el análisis univariado, se halo de inhibición con una desviación halo de inhibición con una desviación
procedió a obtener la media y estándar de 0,62. Al comparar se estándar de 0,57. Al comparar se
desviación estándar de las variables encontró que el EEP al 10% fue encontró que el diámetro del halo de
en estudio, registrada en una tabla mayor al compararlo con el de inhibición del propóleo al 10% fue
de frecuencia. listerine® p<0,001. Además, se mayor al compararlo con el de el
Para conocer si la muestra tenia encontró que el diámetro del halo de listerine® con un p<0,001. Además,
distribución normal se utilizó la inhibición del EEP al 10% fue menor se encontró que el diámetro del halo
prueba de Shapiro-Wilk y la prueba al compararlo con el de la de inhibición del propóleo al 10% fue
de Levene y para el análisis clorhexidina al 0,05% con un menor al compararlo con el de la
bivariado, se observó la relación de p=0,010. Y se encontró que el clorhexidina 0,05% con un p<0,001.
las variables dependiente e diámetro del halo de inhibición del Y se encontró que el diámetro del
independiente; se realizó la Prueba EEP al 10% fue menor al compararlo halo de inhibición del propóleo al
t de Student con una significancia con el de la clorhexidina al 0,12% 10% fue menor al compararlo con
estadística de p=0,05. (p=0,001). Al analizar la acción el de la clorhexidina 0,12%
antibacteriana contra el S. aureus, (p=0,001). Al analizar la acción
Resultados se encontró que el propóleo al 30% antibacteriana contra el S. mutans,
Al analizar la acción anti- presentó una media de 11,77mm de se encontró que el propóleo al 30%
bacteriana contra el S. aureus de halo de inhibición con una desviación presentó una media de 11,57mm de
los EEP, se encontró que el propóleo estándar de 0,19. Al comparar se halo de inhibición con una desviación
al 10% presentó una media de encontró que el diámetro del halo de estándar de 0,97. Al comparar se
9,95mm de halo de inhibición con inhibición del propóleo al 30% fue encontró que el diámetro del halo de
una desviación estándar de 0,62 mayor al compararlo con el de inhibición del propóleo al 30% fue
mientras que el propóleo al 30% listerine® con un p<0,001. Además, mayor al compararlo con el de el
presentó una media de 11,77mm de se encontró que el diámetro del halo listerine® con un p<0,001. Además,
halo de inhibición con una desviación de inhibición del propóleo al 30% fue se encontró que el diámetro del halo
estándar de 0,19. Al comparar se mayor al compararlo con el de la de inhibición del propóleo al 30% fue
encontró que el diámetro del halo de clorhexidina al 0,05% con un menor al compararlo con el de la
inhibición contra el S. aureus de las p=0,237. Y se encontró que el clorhexidina 0,05% con un
dos concentraciones de propóleo diámetro del halo de inhibición del p<0,001.Y se encontró que el
mostraron diferencia significativa propóleo al 30% fue menor al diámetro del halo de inhibición del
(p=0,007) (Tabla 1). compararlo con el de la clorhexidina propóleo al 30% fue menor al
Al analizar la acción al 0,12% (p=0,001) (Tabla 3). compararlo con el de la clorhexidina
antibacteriana contra el S. mutans Al analizar la acción anti- 0,12% (p<0,001) (Tabla 4).
de los EEP, se encontró que el Tabla 1. Evaluación in vitro de la acción antibacteriana de los extractos
propóleo al 10% presentó una media etanólicos de propóleo de Oxapampa - Perú frente al Staphylococcus
de 11,47mm de halo de inhibición con aureus (ATCC 25923). Halo a las 24 horas.
una desviación estándar de 0,57 Grupo Media Mediana Min Max DS
mientras que el propóleo al 30% Propóleo 10% 9,95 9,95 9,30 10,60 0,62
presentó una media de 11,57mm de Propóleo 30% 11,77 11,82 11,50 11,95 0,19
halo de inhibición con una desviación Prueba T (p=0,007); Shapiro-Wilk=0,454; Prueba de Levene=0,005.
estándar de 0,97. Al comparar se
Tabla 2. Evaluación in vitro de la acción antibacteriana de los extractos
encontró que el diámetro del halo de etanólicos de propóleo de Oxapampa - Perú frente al Streptococcus
inhibición contra el S. mutans de las mutans (ATCC 25175). Halo a las 24 horas.
dos concentraciones de propóleo no Grupo Media Mediana Min Max DS
mostraron diferencia significativa Propóleo 10% 11,47 11,55 10,8 12,0 0,57
(p=0,865) (Tabla 2). Propóleo 30% 11,57 11,40 10,6 12,9 0,97
Al analizar la acción Prueba T (p=0,865); Shapiro-Wilk=0,734; Prueba de Levene=0,535.
21
Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del extracto etanólico de propóleo...
descritos por Eguizábal et al. (8) microorganismos. Al analizar y sirve como base para que
quien encontró que el EEP mostró comparar estos resultados fueron posteriormente se continúe
mayor actividad antibacteriana que distintos a los mencionados por ampliando los conocimientos sobre
la Clorhexidina 0,12%. Sin embargo, Moreno et al. (19), quien encontró el propóleo y su uso potencial en la
en el presente estudio al analizar y que el extracto de propóleo prevención y tratamiento de ciertas
comparar los resultados obtenidos se incrementaba su acción pasado las patologías de la cavidad oral. Por lo
encontró que la actividad 48 horas. Según Bankova (3) y tanto, la acción antibacteriana
antibacteriana del EEP al 30% Farré (1) una posible explicación observada del EEP sugiere como
contra el S. mutans fue superior para estos resultados diversos es que importancia su uso como un
frente al listerine® (p<0,001), pero la composición del propóleo es complemento en el control de ciertos
menor ante la clorhexidina al 0,05%, variable dependiendo de la región y patógenos orales.
al analizar y comparar los resultados estación de la recolección.
para el S. aureus se pudo apreciar Consecuentemente, la actividad de Agradecimientos
que la acción antibacteriana del EEP los componentes no podría presentar A la microbióloga Dra. Dora
al 30% fue mayor frente al listerine® el mismo comportamiento. Maurtua por el incondicional apoyo
p<0,001 y alcanzo en efectividad a Los EEP 10% y 30% empleados en la parte experimental del trabajo
la clorhexidina 0,05% debido a que en el presente estudio evidencian el de investigación y al Departamento
no hubo diferencia entre ambas potencial de uso del EEP en la de Microbiología de la Facultad de
(p=0,211). estomatología. Sin embargo, una de Ciencias (UPCH). Asimismo, a la
Al analizar y comparar los las limitaciones del propóleo es su Dra. Carmen García por su apoyo y
resultados obtenidos se observó que variabilidad en composición y acción al Dr. Alexis Evangelista por su
el EEP tiene una actividad como consecuencia de variaciones colaboración en el análisis
antibacteriana contra S. mutans y en la flora de la región donde es estadístico del presente trabajo de
el S. aureus y estos fueron similares producido, pero de acuerdo con investigación.
a los descritos por Elaine et al., Bankova et al. (2002) (3), la acción
Popova et al., Cihangir et al., antibacteriana siempre estará Referencias bibliográficas
Fernandes et al., Fernandes et al., presente porque es de vital 1. Farré R, Frasquet I, Sánchez A.
Gonsales et al., Agra da Silva et al., importancia como agente anti- El própolis y la salud. Ars
Soares et al., Alencar et al., microbiano de las abejas, Pharmaceutica. 2004; 45(1):21-
Yaghoubi et al., Muli et al.,Yi H et independientemente de la región 43.
al., Packer et al., Moreno et al. y donde el propóleo es producido. Sin 2. Koo H, Rosalen PL, Cury JA,
Eguizábal et al., quienes también embargo, según Sforcin et al. (22), Park YK, Ikegaki M, Sattler A.
encontraron que el EEP tiene una en un reciente estudio, no encontró Effect of Apis mellifera propolis
actividad antibacteriana, indepen- efectos diferentes debido a la from two Brazilian regions on
dientemente del origen y de la estación de recolección en el caries development in desalivated
concentración del EEP (6)(7)(9-21). propóleo. Otra de las posibles rats. Caries Res. 1999;
Por otro lado, al analizar los limitaciones en el uso del EEP sería 33(5):393-400.
resultados para todas las muestras su toxicidad aunque no hay estudios 3. Bankova V, Popova M,
se evidenció una máxima acción que afirmen o refuten su Bogdanov S, Sabatini AG.
antibacteriana a las 24 horas de biocompatibilidad en la Chemical composition of
incubación comparándola con las Estomatología. European propolis: expected and
demás muestras, sin embargo, el De esta manera, al contrastar los unexpected results. Z
tiempo de exposición de las bacterias resultados obtenidos por los autores Naturforsch C. 2002; 57(5-
al propóleo es una variable mencionados con los del presente 6):530-3.
importante en la evaluación de la trabajo de investigación se establece 4. Tolosa L, Cañizares E.
actividad antibacteriana frente a S. la acción antibacteriana del EEP, lo Obtención, caracterización y
mutans y S. aureus. Además, al que confirma la hipótesis, evaluación de la actividad
evaluar la acción antibacteriana del encontrándose una relación antimicrobiana de extractos de
EEP a las 48 horas, esta disminuye significativa entre ambas. Por lo propóleos de Campeche. Ars
en su capacidad para inhibir antes expuesto, el presente estudio Pharmaceutica. 2002; 43(1-
23
Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del extracto etanólico de propóleo...