SURFACTANTES BIOLÓGICOS

EN LA BIORREMEDIACIÓN DE AGUAS
CONTAMINADAS CON CRUDO LIVIANO
Ismenia Araujo, Antonio Gómez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo,
Gustavo Morillo, Carmen Cárdenas y Lenín Herrera

RESUMEN

Se investigó el efecto de los biosurfactantes en la eficiencia
de los procesos de recuperación de aguas contaminadas con
crudo liviano. El biosurfactante utilizado fue producido a par-
tir de cepas bacterianas (MI9 y MI10) pertenecientes al grupo
de cepas del Laboratorio de Microbiología Industrial del Cen-
tro de Investigación del Agua, Universidad del Zulia, Venezuela.
Para el estudio de tratabilidad, durante tres meses, además del
biosurfactante utilizado, se preparó un cultivo mixto con las ce-
pas bacterianas MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11. Los tratamientos
aplicados fueron: agua del Lago de Maracaibo, hidrocarburo,
cultivo mixto y biosurfactante (ANHCB); agua del lago esteri-
lizada, hidrocarburo y cultivo mixto (AEHC); agua del lago, hi-
drocarburo y cultivo mixto (ANHC); agua del lago, hidrocarburo
y biosurfactante (ANHB); y agua del lago e hidrocarburo (ANH).
Los análisis físico-químicos y microbiológicos permitieron deter-
minar la eficiencia del biosurfactante y el cultivo mixto en la
biorremediación. Los resultados mostraron que el mejor ensayo
de tratabilidad fue el ANHCB, con una remoción del 81% de los
hidrocarburos totales y la mayor remoción del N y P presentes.
La adición del biosurfactante y utilización del cultivo mixto in-
fluenciaron positivamente la biodegradación del crudo liviano, lo
cual permite inferir que el uso de biosurfactante es una opción
que incrementa la eficiencia en los procesos de biorremediación
de aguas contaminadas con hidrocarburo.

esde hace décadas se han
empleado medidas bio-
correctoras en ambientes
contaminados, con importante éxito (Levin
y Gealt, 1997; Eweis et al., 1999). La aplica-
ción más frecuente de la biorremediación ha
sido en la limpieza de derrames de embar-
caciones y fugas de tanques que almacenan
productos petrolizados (Alexander, 1994; Co-
okson, 1995; Young y Gerniglia, 1995). Re-
salta el uso de microorganismos, en especial
bacterias y hongos, para ayudar a la descon-
taminación y recuperación de ambientes natu-
rales y para el tratamiento de efluentes indus-
triales o municipales (Nishino y Spain, 1993;
Landa, 1994; Wrenn, 1994). Muchos de estos
microorganismos producen agentes activos de
superficie (biosurfactantes) cuando crecen en
hidrocarburos (Cooper et., 1979; Duvnjak et
al., 1982; Kitamoto et al., 1993; Desai y Ba-
nat, 1997). El término ‘biosurfactante’ ha sido
amplimente aplicado a compuestos de origen
biológico con la capacidad de disminuir la
tensión superficial; muchos de ellos abarcan
un amplio rango de propiedades funcionales
como son emulsificación, separación de fases,
actividad superficial y reducción de la visco-
sidad de aceites crudos, y han sido aplicados
en las industrias agrícola, textil y petroquími-
ca. Ellos representan un amplio espectro de
biomoléculas donde se incluyen, entre otros,
ácidos grasos normales e hidroxilados, glico-
lípidos, lipopéptidos cíclicos, N-acilaminoá-

PALABRAS CLAVE / Biorremediación / Biosurfactante / Cultivo Mixto / Hidrocarburo /

Recibido: 14/09/06. Modificado: 27/02/2008. Aceptado: 28/02/2008.

Ismenia Araujo. Licenciada en Educación, Mención Ciencias Biológicas, La Universidad del Zulia
(LUZ), Venezuela. M.Sc. en Microbiología, University of Georgia, EEUU. Profesora, LUZ, Venezuela y Coordinadora, Laboratorio
de Microbiología Industrial, Centro de Investigación del Agua (CIA-LUZ), Venezuela. Dirección: CIA-LUZ, Ciudad Universitaria.
Núcleo Agropecuario. Lagunas de Oxidación. Código Postal 4005 - Venezuela. e-mail: ismenia_araujo@hotmail.com
Antonio Gómez. Ingeniero Químico, LUZ, Venezuela. Estudiante de Posgrado, CIA-LUZ, Venezuela.
Magleidy Barrera. Ingeniero Químico, LUZ, Venezuela. Estudiante de Posgrado, CIA-LUZ, Venezuela.
Nancy Angulo. Licenciada en Biología y Maestría en Microbiología, LUZ, Venezuela. Pro-
fesora, CIA-LUZ, Venezuela.
Gustavo Morillo. Ingeniero Agrónomo y Maestría en Ingeniería Ambiental, LUZ, Venezue-
la. Profesor, CIA-LUZ, Venezuela.
Carmen Cárdenas. Ingeniero Químico y Maestría en Ingeniería Ambiental, LUZ, Venezue-
la. Profesora, CIA-LUZ, Venezuela.
Lenín Herrera. Ingeniero Químico, LUZ, Venezuela. Maestría en Ingeniería Ambiental y
Salud, The University of Texas, Austin, EEUU. Profesor, CIA-LUZ, Venezuela.

APR 2008, VOL. 33 Nº 4 0378-1844/08/04/245-06 $ 3.00/0 245

 Tabla I
TRATAMIENTOS APLICADOS EN EL ESTUDIO
DE TRATABILIDAD
Tratamiento Agua del lago Hidrocarburo Cultivo Biosurfactante
mixto
Estéril No
estéril
ANHCB + +
AEHC + +
ANHC + +
ANHB + +
ANH + +
AN: agua no estéril del lago, AE: agua estéril del lago, H: hidrocarburo,
C: cultivo mixto, B: biosurfactante
cidos, lipopéptidos, mono- y diglicéridos, y
fosfolípidos (Kosaric, 1993). Desde el punto
de vista químico, los biosurfactantae presen-
tan gran diversidad estructural, poseen una
efectiva selectividad y son estables a elevadas
temperaturas, pH y salinidad.
Los biosurfactantes son
más biocompatibles, más fácilmente bio-
degradables y por lo tanto menos tóxicos,
menos perjudiciales al ambiente y más ac-
tivos a bajas concentraciones (Rosenberg
y Ron, 1999; Lang, 2000). Además, pro-
porcionan un mayor contacto con el con-
taminante, facilitando su degradación. Los
contaminantes hidrofóbicos presentes en
los hidrocarburos del petróleo requieren su
solubilización para poder ser degradados
por las células microbianas; por lo que la
presencia de biosurfactantes incrementa la
degradación microbiana de los contaminan-
tes. El criterio utilizado para seleccionar
los microorganismos productores de sur-
factantes es, principalmente, su habilidad
para reducir la tensión superficial (Bodour
y Miller-Maier, 1998; Cooper et al., 1979).
Este estudio persigue op-
timizar el proceso de biorremediación de
un agua contaminada con crudo liviano
utilizando surfactantes biológicos y un cul-
tivo mixto de cepas bacterianas. El traba-
jo fue realizado en dos etapas; la primera
etapa consistió en la producción del biosur-
factante, mientras que en la segunda etapa
se realizó un estudio de tratabilidad para
determinar el efecto del biosurfactante so-
bre la eficiencia del cultivo mixto integra-
do por cepas bacterianas aisladas de aguas
contaminadas con hidrocarburos.
Materiales y Métodos
Producción del biosurfactante
Se seleccionaron seis
cepas bacterianas del grupo de cepas ais-
ladas en el Laboratorio de Microbiología
Industrial del Centro de Investigación del
Agua de la Universidad del Zulia (MI3,
MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11). Cada una
de ellas fue transferida con un asa de pla-
246
Tabla II
PARÁMETROS FÍSICOQUIMICOS Y MICROBIOLÓGICOS
Parámetro
Hidrocarburos totales
S.A.R.A.
Nitrógeno total
+ + Fósforo total
+ Metales pesados
+ pH
Tensión interfacial
+
Heterótrofos mesófilos
Tinción de Gram
*APHA (1998)
tino a un medio fresco de caldo Tripticasa
Soya y se incubó a 37ºC durante 24h en
una incubadora Mem­mert B-50 para su
activación. Luego, 1ml de cada una de las
cepas se transfirió a 9ml de caldo Triptica-
sa Soya y se incubaron a 37ºC hasta alcan-
zar un crecimiento superior a 1×108UFC/
ml (Gerhardt et al., 1981; Kerr, 1981). Los
cultivos se centrifugaron a 2000xg en una
centrifuga MSE Med Oil-58199 por 10min
para separar las células del medio de cul-
tivo. Se descartó el sobrenadante y el cen-
trifugado fue lavado y resuspendido en so-
lución salina estéril. La nueva suspensión
fue centrifugada a 2000xg por 10min, se
descartó el sobrenadante y el centrifugado
se resuspendió en un medio mínimo mine-
ral, constituyendo así el inóculo (Duvnjak
et al., 1982).
Se agregó cada inóculo
(3% v/v) en fiolas que contenían un medio
mínimo mineral (MMM) (89% v/v) y gasoil
(8% v/v) como única fuente de carbono para
un volumen total de 1 litro. El MMM usado
para la biosíntesis del surfactante estuvo inte-
grado por 1,2g NH4CL, 2,4g KNO3, 0,0005g
CaCl2.6H2O, 2,4g NaSO4, 1,2g MgSO4, 0,6g
K2HPO4 y 0,002g FeSO47H2O por litro de
agua destilada. El MMM fue esterilizado a
121ºC y 15lb de presión durante 15min. El
gasoil utilizado fue esterilizado por filtra-
ción. Seguidamente, la mezcla se colocó en
una incubadora Memmert B-50, por 144h a
37ºC. Luego de la incubación, la mezcla fue
centrifugada a 2000xg por 15min en una
centrífuga MSE Med Oil-58199, para separar
las células del sobrenadante (biosurfactante).
Se tomó el sobrenadante y se adicionó, en
diferentes concentraciones, a una mezcla de
gasoil con agua para determinar la tensión
interfacial, utilizando el tensiómetro de Le-
comte Du noüy (Duvnjak et al., 1982; Ro-
berts et al., 1991). Las cepas, cuyo sobrena-
dante obtenido a las 144h fue más eficiente
en la disminución de la tensión interfacial de
la mezcla gasoil-agua (MI9, MI10 y un cul-
tivo mixto de ambas) fueron escogidas para
la producción de surfactante en un período
de incubación de 192h, siguiendo la metodo-
logía descrita inicialmente.
Método
*5520-Gravimétrico
ASTM D2007-75 Gravimétrico
*4500-NH Volumétrico
3
*4500-C Ácido ascórbico
Espectrofotómetro
*4500-H+ Electrodo selectivo
Tensiometro de Lecomte Du noüy
9215-Plate count
Kerr, 1981; Gerhardt, 1981
Estudio de tratabilidad
A partir de las cepas MI5,
MI7, MI9, MI10, MI11 activadas, se preparó
el cultivo mixto para realizar el montaje de
los diversos tratamientos del estudio de trata-
bilidad, como se muestra en la Tabla I. Cada
tratamiento se preparó agregando el biosur-
factante obtenido de las cepas MI9 y MI10
(20% v/v), cultivo mixto (10% v/v) y el
hidrocarburo liviano (1% v/v) en fiolas que
contenían agua del lago y fosfato de amo-
nio para un volumen total de 100ml (Atlas,
1984). Los diferentes tratamientos fueron
incubados en una incubadora con agitación
New Brunswick G25 durante 30, 60, y 90
días. Se realizaron análisis fisicoquímicos y
microbiológicos (Tabla II), según la metodo-
logía establecida en APHA (1998).
Para el análisis estadístico
de los resultados se aplicó análisis de va-
rianza, utilizando un diagrama de bloque al
azar y mediante la aplicación de las pruebas
de comparación entre pares de medias por el
método de Dunnett, que comparó todos los
tratamientos con un control (SAS, 2002).
Resultados y Discusión
Macro y micromorfología
de las cepas bacterianas
Las características macro-
morfológicas y micromorfológicas de las colo-
nias de cada una de las cepas bacterianas uti-
lizadas para la producción del biosurfactante
y el estudio de tratabilidad fueron registradas
según el formato sugerido por Kerr (1981).
Las cepas resultaron cocos y bacilos, siendo
la mayoría Gram negativas (Tabla III).
Tensión interfacial del gasoil-agua
con diferentes concentraciones
de biosurfactante
La Figura 1 muestra la
tensión interfacial de la mezcla gasoil-agua
cuando se adicionaron diferentes concentra-
ciones (0, 10 y 20% v/v) del biosurfactante
obtenido a las 144h de incubación. Puede ob-
servarse que la tensión interfacial de la mez-
cla gasoil-agua para las seis cepas estudiadas
APR 2008, VOL. 33 Nº 4
 TABLA III interfacial, de 29
MACRO- Y MICROMORFOLOGÍA a 1,3dyn·cm-1, uti-
DE LAS CEPAS BACTERIANAS lizando una cepa
Cepa Macromorfología Micromorfología
de Pseudomonas
aeruginosa.
La Figura 2
MI3 Borde entero, blanca, circular, Cocos Gram +, muestra la reduc-
convexa y lisa. cadenas aisladas y agrupados.
ción de la tensión
MI5 Borde entero, amarillenta, Bacilos Gram –, interfacial con
circular, umbonante. delgados aislados y en pares. las cepas MI9,
MI7 Borde entero, beige, circular, Cocobacilos Gram –, MI10 y el cultivo
convexa, lisa. delgados aislados y en pares. mixto de ambas
MI8 Borde lobulado, grisácea, Bacilos Gram –, (MI9+MI10) a
filamentosa, umbonante. alargados y en pares. concentraciones
MI9 Borde entero, beige, circular, Cocobacilos Gram –, diferentes con un
convexa, lisa. agrupados en cadenas. período de incu-
bación de 192h.
MI10 Borde entero, blanca, circular, Bacilos cortos Gram –,
convexa, lisa. aislados y en racimos. A una concentra-
ción del 10% v/v
MI11 Borde entero, blanco, circular, Cocos Gram –, del surfactante,
convexa, lisa. aislados y agrupados. la tensión inter-
facial fue de 13,5
Figura 3. Densidad bacteriana (a) e hidrocarburos
(MI3, MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11) a una y 14dyn·cm-1, mientras que a 20% v/v los totales remanentes (b) durante el estudio de tra-
concentración de 10% v/v estuvo comprendi- valores disminuyeron a 8,5 y 9,5dyn·cm‑1. tabilidad. AN: agua no estéril del lago, AE: agua
da entre las 19,5 y 21,5dyn·cm-1, resultando Al comparar los valores obtenidos en los estéril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mix-
en una disminución de la tensión interfacial dos ensayos, la tensión interfacial de la to, B: biosurfactante.
(16 y 19dyn·cm-1) cuando se incrementó la mezcla gasoil-agua con el biosurfactan-
concentración a 20% v/v. Los surfactantes te producido por las cepas MI9 y MI10 a
producidos por las cepas MI9 y MI10 fueron las 192h de incubación fue menor, que la cepas bacterianas aisladas de suelos con-
los que lograron la mayor reducción de la producida por todas las cepas bacterianas taminados con diesel, obtuvieron disminu-
tensión interfacial, 16 y 16,5dyn·cm-1, respec- a las 144h de incubación. Ello fue debido ciones de la tensión superficial de 56,4 y
tivamente, seleccionándose ambas cepas bac- probablemente a una interacción entre las 41,4 a 24 y 7,4dyn·cm-1 después de 168h
terianas para el ensayo de tratabilidad. Estos cepas que les impedía lograr una etapa de de incubación.
valores mostraron mayor actividad superficial máxima actividad o a que no habían llega-
de las cepas a los reportados por Batista et do a completar su etapa de adaptación y Estudio de tratabilidad
al. (2006) en un estudio de aislamiento y aclimatación. También se puede notar que
caracterización de bacterias productoras de al adicionar al 20% v/v el biosurfactante Determinación microbioló­gi­
biosurfactantes procedentes de sitios conta- producido por cada una de las cepas bac- ca. Los valores de densidad poblacional para
minados con hidrocarburos, en los cuales terianas, la tensión interfacial de la mezcla cada tratamiento durante el ensayo de trata-
los sobrenadantes de dos cepas bacterianas gasoil-agua fue menor a las obtenidas con bilidad se muestran en la Figura 3a, donde
causaron disminuciones en la tensión superfi- menor concentración. Es posible inferir que se aprecia que dichos valores estuvieron entre
cial de 36,2 a 35,8 y de 46,5 a 41,8dyn·cm-1. a mayor tiempo de incubación se logra una 129×106 y 1480×106UFC/ml. Todos los trata-
Por su parte, Benincasa y Accorsini (2007), mayor disminución de la tensión superficial mientos mostraron un aumento progresivo
en una solución acuosa con hexadecano lo- de la mezcla gasoil-agua, lo cual puede de- en la densidad poblacional a excepción del
graron una mayor disminución de la tensión berse a que se produce una mayor cantidad tratamiento ANH, donde la población bacte-
del biosurfactante. Menezes et al. (2005), riana decreció. Los tratamientos con una ma-
utilizando el sobrenadante de cultivos de yor densidad poblacional al final del ensayo
fueron ANHCB, ANHC y AEHC, con 1480,
1318 y 1108×106UFC/ml, respectivamente, y
en ellos se encontraban los microorganismos
aportados por el cultivo mixto. Al observar
el comportamiento de estas curvas se puede
inferir que hubo una mayor actividad meta-
bólica en el tratamiento ANHCB, evidencia-
do por la densidad poblacional, mientras que
en el tratamiento ANH ocurrió lo contrario
(7UFC/ml); los microorganismos autóctonos
del agua del Lago de Maracaibo no logra-
ron adaptarse al crudo liviano como única
fuente de carbono. Este resultado sugiere
que una gran variedad de microorganismos
pueden subsistir en ambientes contaminados
con petróleo aunque no todos son capaces
Figura 1. Tensión interfacial a diferentes concen- Figura 2. Tensión interfacial a diferentes concen-
de asimilar hidrocarburos y adaptarse a estas
traciones del biosurfactante obtenido a las 144h de traciones del biosurfactante obtenido a las 192h condiciones (Cook y Westlake, 1972; Prince,
incubación. de incubación. 1993; Levin y Gealt, 1997).

APR 2008, VOL. 33 Nº 4 247

 El análisis de varianza de hidrocarburo presentes en el crudo liviano
mostró que existen diferencias altamente fueron 5746 de saturados, 125 de aromáticos,
significativas, con un 99% de confiabili- 1467 de resinas y 109 de asfaltenos, mientras
dad, en la densidad bacteriana tanto para que al final del ensayo fueron 3.821, 123, 340
los diferentes tratamientos, como a lo largo y 74 mg/l, respectivamente. Estos resulta-
del tiempo. Al aplicar el método de Dun- dos muestran que el crudo estaba constituido
nett se encontró que existen diferencias principalmente por hidrocarburos saturados y
significativas en la densidad bacteriana de resinas. El análisis de varianza demostró que
los tratamientos AEHC y ANHB, ambos existen diferencias altamente significativas en
con respecto al control (ANH) con un 95% las fracciones de hidrocarburos (saturados,
de confiabilidad. Se encontró, además, que aromáticos, resinas y asfaltenos) tanto para los
existen diferencias altamente significativas Figura 4. Porcentajes de remoción de crudo livia- diferentes tratamientos, como a lo largo del
en la densidad bacteriana de los tratamien- no. AN: agua no estéril del lago, AE: agua esté- tiempo, con un 99% de confiabilidad.
tos ANHCB y ANHC, ambos con respecto ril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: En la Figura 5 se presenta
al control (ANH). biosurfactante. la remoción de las fracciones de hidrocar-
buros, apreciándose una mayor remoción de
Hidrocarburos totales. Las concentraciones mientos ANHCB y ANHB, con 81 y 50%, hidrocarburos saturados en los tratamientos
de hidrocarburos totales encontrados al inicio respectivamente, seguidos por los tratamien- ANHCB (78%) y ANHB (43%), mientras
del ensayo estuvieron entre 7467 y 8265mg·l-1, tos ANHC y AEHC con 36 y 29%. El me- que en los tratamientos AEHC y ANHC la
mientras que al final resultaron entre 1394 y
7726mg·l-1 (Figura 3b). Las mayores concen-
traciones de hidrocarburos remanentes al final Tabla IV
del ensayo pertenecieron al tratamiento ANH FRACCIONES DE HIDROCARBUROS SATURADOS,
AROMÁTICOS I Y II, RESINAS Y ASFALTENOS AL INICIO Y AL FINAL
(7726mg·l-1) y los valores de hidrocarburo re-
DEL ESTUDIO DE TRATABILIDAD
manentes más bajos se reflejaron en el trata-
miento ANHCB (1394mg·l-1). Al correlacionar Concentración (mg·l-1)
estos resultados con los valores de densidad Tratamiento Días
poblacional se observa que a mayor densidad Saturados Aromáticos I Aromáticos II Resinas Asfaltenos
poblacional menor concentración de hidro- ANHCB 0 5633 152 141 1414 119
carburos remanentes. Así, el tratamiento AN- 90 1226 34 40 67 2,66
HCB tuvo los mayores valores de densidad AEHC 0 5695 175 154 1337 99
90 4740 157 154 168 85
poblacional, mientras que los valores más ba- ANHC 0 5676 188 148 1321 114
jos fueron los del tratamiento ANH. Las con- 90 3745 128 116 175 108
centraciones (mg·l-1) de hidrocarburos de los ANHB 0 5289 105 93 1870 89
tratamientos ANHCB (1394), AEHC (5305), 90 3016 129 123 416 54
ANH 0 6434 158 136 1390 124
ANHC (4746) y ANHB (3771) estuvieron 90 6378 152 196 872 121
muy por debajo de los resultados obtenidos AN: agua no estéril del lago, AE: agua estéril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: biosurfactante.
en el control ANH (7726). Esta diferencia se
debió a la baja actividad metabólica de los or-
ganismos presentes en el tratamiento control. nor porcentaje de remoción (7%) fue el del remoción obtenida fue de 17 y 34%, respec-
De igual manera, se observa que las concen- tratamiento control ANH. tivamente. El tratamiento ANH (1%) perma-
traciones de crudo disminuyeron rápidamente Los tratamientos ANHCB neció sin cambio significativo en la cantidad
durante los primeros 30 días, período durante y ANHB presentaron remociones superio- de saturados, siendo este tratamiento el que
el cual los microorganismos degradaron entre res a ANHC y AEHC que contenían cultivo presentó un menor porcentaje de remoción
un 50 y 60% del hidrocarburo. mixto, debido a que el biosurfactante adicio- de crudo liviano. Se observó una remoción
El análisis de varianza nado influenció positivamente la emulsión en las fracciones de resinas en todos los tra-
mostró que existen diferencias altamente sig- creando una superficie de contacto mayor tamientos; encontrándose en los tratamientos
nificativas en la cantidad de hidrocarburos re- (Zhaozhe et al., 2003). Whang et al. (2007) ANHCB (95%), AEHC (87%), ANHC (87%)
manentes, tanto para los diferentes tratamien- en un estudio de degradación de diesel con y ANHB (78%) los cambios más significati-
tos, como a lo largo del tiempo, con un 99% la utilización de un biosurfactante obtuvieron vos; mientras que el control removió el 30%.
de confiabilidad. La aplicación del método 100% de degradación de los hidrocarburos Con respecto a los asfaltenos, se observó una
de Dunnett reveló que existen diferencias no totales, mientras que en el
significativas en las concentraciones de hidro- tratamiento sin el biosurfac-
carburo remanentes del tratamiento AEHC y tante, se obtuvo el 64% en
el control (ANH). Existen diferencias signifi- 200h de tratamiento.
cativas en las concentraciones de hidrocarburo
remanentes del tratamiento ANHC y el con- Saturados, aromáticos, re-
trol, con un 95% de confiabilidad; y, además, sinas y asfaltenos. La Tabla
existen diferencias altamente significativas en IV presenta los valores de
las concentraciones de hidrocarburos rema- fracciones de hidrocarburos
nentes de los tratamientos ANHCB y ANHB presentes en el crudo (satu-
con respecto al control, ambos con un 99% rados, aromáticos, resinas y
de confiabilidad. asfaltenos) al inicio y final
La Figura 4 muestra los del ensayo. Al inicio las
valores de remoción de crudo liviano. Los concentraciones promedio
valores más altos los presentaron los trata- (mg·l-1) de las fracciones Figura 5. Remoción de fracciones de hidrocarburos (SARA).

248 APR 2008, VOL. 33 Nº 4

 incrementando los valores la concentración disminuye en mayor propor-
de estas fracciones (Young ción para el N que para el P, lo que pudie-
y Gerniglia, 1995; Levin y ra ser atribuido a que en la mayoría de las
Gealt, 1997). células bacterianas el N representa ~10-14%
de la masa microbiana y el P un 0,5-2%, y
Nitrógeno y fosforo al momento de formar nuevos individuos
los microorganismos necesitan más de estos
Las Figuras 6a y b constituyentes para la asimilación y la sínte-
presentan las concentra- sis del nuevo material celular.
ciones totales de N y P. Se
observa una disminución Metales pesados
de sus concentraciones du-
rante todo el estudio. Las Los metales pesados ge-
concentraciones iniciales neralmente presentan un moderado índice
para el N estuvieron alre- de toxicidad en los microorganismos. En la
dedor de 460 y 684mg·l‑1 Tabla V se muestran las concentraciones de
en los tratamientos y dis- metales pesados para cada tratamiento al ini-
minuyeron hasta 246 y cio del ensayo. Los resultados determinaron
329mg·l-1, mientras que que los niveles de metales analizados esta-
las concentraciones inicia- ban por debajo de lo establecido en la norma
les para el P estuvieron vigente para límites y rangos máximos per-
Figura 6. Concentraciones de nitrógeno (a) y fósforo (b) totales. AN: alrededor de 10 y 42mg·l-1 mitidos de calidad de vertidos líquidos, que
agua no estéril del lago, AE: agua estéril del lago, H: hidrocarburo, en los tratamientos y dis- sean o vayan a ser descargados, en forma
C: cultivo mixto, B: biosurfactante. minuyeron hasta 0,07 y directa o indirecta a ríos, estuarios, lagos y
14mg·l-1. Los mayores con- embalses (Gaceta Oficial, 1998), por lo que
mayor remoción en los tratamientos ANHCB sumos de N y P se observan en el tratamien- no se continuaron realizando los análisis a lo
(98%) y ANHB (39%); mientras que en los to ANHBC. El análisis de varianza mostró largo del estudio.
tratamientos AEHC y ANHC fue 14 y 5% que existen diferencias altamente significati- La Tabla VI muestra el pH
respectivamente y el tratamiento ANH (2%) vas en las concentraciones de P, tanto para en los tratamientos durante todo el estudio.
presentó el menor porcentaje de remoción. El los diferentes tratamientos, como a lo largo Los valores de pH en los tratamientos AN-
tratamiento ANHCB (75%) alcanzó la mayor del tiempo, con un 99% de confiabilidad, y HCB, AEHC, ANHC y ANHB estuvieron
remoción de hidrocarburos aromáticos, se- diferencias significativas en las concentracio- alrededor de 9 y 9,5, mientras que en el tra-
guido de ANHC (28%) y AEHC (5%). Los nes de N, tanto para los diferentes tratamien- tamiento control (ANH) se encontró en 7,3 y
tratamientos ANHB y ANH mostraron un tos, como a lo largo del tiempo, con un 95% ~8,8. Los valores de pH en cada uno de los
incremento en los aromáticos con respecto de confiabilidad. tratamientos fueron bastante cercanos y es-
a los valores iniciales, comportamiento que Hubo un mayor consu- tables, lo cual favoreció el proceso de degra-
se debe a la biotransformación de resinas y mo del N y P durante los primeros 30 días dación en cada tratamiento. El rango óptimo
asfaltenos, que al degradarse parcialmente del ensayo. Esto se debió a que durante este para que muchos microorganismos se esta-
dan lugar a la acumulación de derivados más tiempo se degradó la mayor cantidad de cru- blezcan en sistemas de tratamientos biológicos
sencillos como los saturados y aromáticos, do y los organismos utilizan los nutrientes se encuentra entre 7 y 9 (Atlas, 1984), ya que
los niveles de pH ligeramente alcalinos favo-
Tabla V recen el crecimiento biológico.
CONCENTRACIONES DE METALES PESADOS
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APR 2008, VOL. 33 Nº 4 249

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BIOLOGICAL SURFACTANTS IN THE BIOREMEDIATION OF LIGHT OIL CONTAMINATED WATER

Ismenia Araujo, Antonio Gómez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo, Gustavo Morillo, Carmen Cárdenas and Lenín Herrera
SUMMARY

The efficiency of biosurfactants in the bioremediation of light
crude oil in contaminated waters was studied. The biosurfactant
used was produced by selection of bacterial strains (MI9 and MI10)
from the laboratory stock of the Industrial Microbiology Labora-
tory, Centro de Investigación del Agua, Universidad del Zulia, Ven-
ezuela. For the study of different treatments, lasting three months,
besides the biosurfactant used a mixed culture was prepared with
the bacterial strains MI5, MI7, MI9, MI10, and MI11. The applied
treatments were: Maracaibo Lake water, hydrocarbon, mixed growth
and biosurfactant (ANHCB); sterilized lake water, hydrocarbon and
mixed growth (AEHC); lake water, hydrocarbon and mixed growth
(ANHC); lake water, hydrocarbon and bisurfactant (ANHB); and
lake water and hydrocarbon (ANH). Physico-chemical and microbi-
ological analyses allowed to determine the efficiency of the biosur-
factant and mixed cultures in the bioremediation. The best treatment
essayed resulted to be the ANHCB, with an 81% removal of total
hydrocarbons and the highest removal of N and P. The addition of
the biosurfactants and the use of the mixed cultures influenced posi-
tively the biodegradation of the light crude oil. This indicates that
the use of the surfactants increases the efficiency of bioremediation
in hydrocarbon-contaminated waters.

SURFACTANTES BIOLÓGICOS NA BIORREMEDIAÇÃO DE ÁGUAS CONTAMINADAS COM PETRÓLEO LEVE

Ismenia Araujo, Antonio Gómez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo, Gustavo Morillo, Carmen Cárdenas e Lenín Herrera
RESUMO

Investigou-se o efeito dos biosurfactantes na eficiência dos pro-
cessos de recuperação de águas contaminadas com petróleo leve. O
biosurfactante utilizado foi produzido a partir de cepas bacterianas
(MI9 e MI10) pertencentes ao grupo de cepas do Laboratório de
Microbiologia Industrial do Centro de Investigação da Água, Univer-
sidade del Zulia, Venezuela. Para o estudo de tratabilidade, durante
três meses, além do biosurfactante utilizado, se preparou um cultivo
misto com as cepas bacterianas MI5, MI7, MI9, MI10, e MI11. Os
tratamentos aplicados foram: água do Lago de Maracaibo, hidrocar-
boneto, cultivo misto e biosurfactante (ANHCB); água do lago este-
rilizada, hidrocarboneto e cultivo misto (AEHC); água do lago, hi-
drocarboneto e cultivo misto (ANHC); água do lago, hidrocarboneto
e biosurfactante (ANHB); e água do lago e hidrocarboneto (ANH).
As análises físico-químicas e microbiológicas permitiram determinar
a eficiência do biosurfactante e o cultivo misto na biorremediação.
Os resultados mostraram que o melhor ensaio de tratabilidade foi
o ANHCB, com uma remoção de 81% dos hidrocarbonetos totais e
a maior remoção de N e P presentes. A adição do biosurfactante e
utilização do cultivo misto influenciaram positivamente a biodegra-
dação do petróleo leve, o qual permite inferir que o uso de biosur-
factante é uma opção que incrementa a eficiência nos processos de
biorremediação de águas contaminadas com hidrocarboneto.

250 APR 2008, VOL. 33 Nº 4