Universidad San Francisco de Quito

Biotecnología de Animales
Carolina Cazco, María Belén Ortíz, Izan Chalen y Gladys Quinapanta

Producción de anticuerpos a partir de llamas para seroterapia

1. Definición del producto

La empresa que se fundará para la elaboración de anticuerpos es una farmacéutica con

nombre Camel Antibody Pharmaceutic (CAP). Esta empresa elaborará anticuerpos a partir de
llamas para su utilización en seroterapia. Los anticuerpos o inmunoglobulinas son producidos
por las células B del plasma y ocurren naturalmente como parte del sistema inmunológico de
los mamíferos al reconocer los antígenos en un modelo de ajuste de "cerradura y llave"
(Anexo 1). La estructura de un anticuerpo comprende de dos fragmentos de unión al antígeno
(Fab) y una región constante (Fc), involucrada en las funciones efectoras y la biodistribución
del anticuerpo, unidas a través de la región de una bisagra la cual es flexible (Klutz et al.,
2016). Cada cadena pesada y ligera tiene una estructura similar con regiones constantes y
variables. Las principales diferencias observadas en las regiones variables están ubicadas en
tres pequeñas secuencias hipervariables, responsables de la unión al antígeno, las
denominadas regiones determinantes complementarias (CDR), y correspondientes a las
regiones N-terminales de las cadenas ligeras y pesadas (porción Fab) (Roque et al., 2004)
(Anexo 1). Los anticuerpos se unen a moléculas diana con alta afinidad y especificidad.
Aunque el sistema inmunitario lo produce de forma natural, la necesidad de anticuerpos con
una especificidad única a gran escala ha fomentado la generación de nuevas tecnologías para
la producción de preparaciones de anticuerpos de grado biofarmacéutico (van Dijk y van de
Winkel, 2015). El anticuerpo producido consiste en una proteína de un tamaño de
aproximadamente 15 kDa formado por dos cadenas pesadas (Anexo 2).

2. Antecedentes

La utilización de anticuerpos producidos en animales está ampliamente aceptada como

tratamiento para diversas enfermedades en las cuales este tipo de inmunización pasiva puede
contribuir a un tratamiento eficaz y de bajo costo (Nadler et al., 1980). La seroterapia es más
comúnmente utilizada para combatir toxinas provenientes de animales como serpientes o
escorpiones, pero también se utiliza para cáncer y otros tumores (Nadler et al., 1980). Desde
la comercialización del primer producto terapéutico de anticuerpos monoclonales en 1986,
esta clase de productos biofarmacéuticos ha crecido significativamente, de modo que, desde
el 10 de noviembre de 2014, se han aprobado 47 productos de anticuerpos monoclonales en
los Estados Unidos y Europa para el tratamiento de variedad de enfermedades, y muchos de
estos productos también han sido aprobados para otros mercados globales. Con el índice de
aprobación actual de 4 nuevos productos por año, 70 productos de anticuerpos monoclonales
estarán en el mercado para 2020, y las ventas mundiales combinadas serán de casi $ 125 mil
millones de dólares (Ecker et al., 2015). Por lo tanto, el objetivo de esta investigación
preliminar y lo que Camel Antibody Pharmaceutic plantea es la utilización de treinta llamas
adultas cada una de ellas con un buen estado de salud con el propósito de producir
nanoanticuerpos policlonales contra el antígeno de serpientes, que podrían ser utilizados en
seroterapia en animales infectados por este veneno.

La fabricación de un anticuerpo terapéutico implica varios pasos, que están regulados por
procedimientos bien establecidos y toman alrededor uno 10 años o más para llegar al
mercado como un producto comercial aprobado (Roque et al., 2004) (Anexo 3). El primer
paso para la producción de anticuerpos es determinar la proteína target a la que se quiere
llegar (punto 1, anexo 3). El punto 2 y 3 del anexo 3 se van a omitir en este caso, ya que nos
enfocaremos un poco más en la producción, purificación y pruebas clínicas. El punto 4
(producción) (anexo 3) es uno de más importantes, y uno de los que nos enfocamos con
mayor detalle. El proceso de producción de anticuerpos se realizará por medio de la
inoculación del antígeno de una serpiente obtenido previamente en el animal que servirá para
la producción de los anticuerpos, en este caso las llamas. La mayoría de veces este proceso se
lo completa en 4 meses pero sin embargo depende directamente de la síntesis del péptido y
del proceso de inmunización del animal.

El ciclo de inmunización para la obtención de antisuero en camélidos es de unos dos meses,

y su coste económico es sensiblemente mayor que la producción de anticuerpos policlonales
en conejo, rata o cabra. Sin embargo, algo importante de escoger al camello para la
producción de anticuerpos es porque el camello produce hcIgG. En estas hcIgG el dominio
de unión al antígeno puede estar compuesto por una región tan pequeña como un fragmento
de 15 kDa, lo que permite a estas regiones acceder a espacios a los que no llegaría una IgG
(Ecker et al., 2015). Luego, después de varias inoculaciones del antígeno, la llama como
parte de su respuesta inmunitaria adaptativa comenzará a producir inmunoglobulinas
específicas para el antígeno inoculado (Key et al., 1983).

A cada una de las llamas se les realizará controles de salud una vez al mes para minimizar los
efectos de la exposición crónica a antígenos, y si es que es necesario se le suplementará
vitaminas A y C para un mejor funcionamiento de su sistema inmune. A cada una de las
llamas se les aplicará por separado un antígeno específico, el cual se le inocula de forma
intravenosa una vez por semana. Así mismo una vez por semana se le extraerá dos pintas de
sangre a la llama y una muestra adicional. A partir de la muestra adicional se realizarán
controles para asegurarse que la llama no sea portadora de enfermedades infecciosas
zoonóticas, así como también se confirma la actividad inmunológica del animal. Una vez
obtenida la sangre de la llama, esta debe ser separada por centrifugación para obtener el
suero.

Una vez obtenidas las inmunoglobulinas, estas pueden ser purificadas para usarse de forma
clínica (Key et al., 1983). La purificación de anticuerpos aisla las inmunoglobulinas de
interés a partir del plasma. El método que se aplicará será uno proporcionado por la empresa
Abbiotec para purificar proteínas G, seguido de una prueba de afinidad del antígeno y
finalmente fraccionar la IGg para aislar fracciones de IGg1, IGg2 e IGg3 (Abbiotec, 2018).
Después de esto se hará una validación in vitro mediante prueba molecular como ELISA, esto
se realizará con el objetivo de asegurarnos que los anticuerpos producidos sean los que en
efecto van a unirse al antígeno de serpiente. Como último paso se harán pruebas in vivo en
animales ratones de laboratorio (Mus musculus) con el fin de comprobar la eficacia del suero
antiofídico. Esto se lo hace mezclando una cantidad fija de veneno con cantidades variables
de antiveneno. Esto se incuba por 30 minutos a 37 grados centígrados y se inyectan alrededor
de 18 gramos intraperitoneal en ratones y se los observa por 48 horas. La neutralización se da
por la última dilución que va a proteger a los ratones de que mueran y finalmente se informa
la potencia como la cantidad de veneno neutralizado por cada mililitro de antiveneno (Forero
y Wasserman, 1984).

La utilización de inmunoglobulinas producidas en animales como un método para terapia,

tiene sus riesgos, es posible que por su naturaleza proteica los mismos anticuerpos tengan
actividad inmunogénica y sean rechazados por el paciente (Benjamin et al., 1986). Incluso el
alto grado de conservación en las cadenas pesadas, no es garantía para que el cuerpo vaya a
aceptar las proteínas ajenas (Benjamin et al., 1986). Los resultados de la aplicación de
seroterapia en pacientes clínicos también se debe al antígeno target que se utilizó para la
producción del anticuerpo (Cobbold et al., 1985). Los nanoanticuerpos se proponen como
una alternativa moderna a la utilización de anticuerpos regulares producidos en animales
como caballos o cerdos (Goldman et al., 2006). Los nanoanticuerpos son inmunoglobulinas
ligeras cuyo peso molecular y capacidad de inmunogenicidad son menores a las
inmunoglobulinas regulares, esta tecnología se basa en los anticuerpos producidos por
camélidos, en los cuales no se presenta la cadena ligera (Goldman et al., 2006).

3. Economía

Los anticuerpos y los derivados de anticuerpos constituyen el 20% de los productos

biofarmacéuticos actualmente en desarrollo y, a pesar de los fallos iniciales de los productos,
los anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados son ahora terapias viables. Los
desafíos críticos planteados por la producción de nuevas terapias de anticuerpos incluyen
mejorar la economía y la eficiencia del proceso, reducir costos y cumplir con los criterios de
calidad cada vez más exigentes para la aprobación de la Administración de Alimentos y
Medicamentos (FDA) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) y en los requerimiento
de Agrocalidad (Roque et al., 2004). Los anticuerpos producidos por Camel Antibody
Pharmaceutic (CAF) se elaborarán en un laboratorio en la ciudad de Quito, el cual uno de los
investigadores de CAF va a brindar una infraestructura hasta recuperar la inversión y tener
ganancias. Los equipos para la implementación del laboratorio así como ciertos reactivos van
a ser importados. El mercado al cual irá dirigido nuestro producto serán veterinarias y
hospitales veterinarios de Pichincha, principalmente en la ciudad de Quito; sin embargo
nuestro mercado target serán en la Costa y Oriente del Ecuador donde los animales son
mucho más propensos a una picadura de una serpiente. Sin embargo, el objetivo a futuro es
exportar a los Estados Unidos donde la gente compra un antídoto hasta los $14.000 ya que el
tratamiento de mordeduras venenosas de serpientes y arañas era un problema de salud
pública.
En esta sección se mencionan los insumos necesarios tanto en equipos como implementos
para cada paso desde la obtención del antígeno de serpiente hasta la purificación del antídoto
(anticuerpos) y ensayos in vivo. Los costos relacionados a estos insumos se y el precio del
producto encuentran en la siguiente sección.

a. Target: obtención del antígeno

El antígeno de serpiente se comprará en la compañía Merck desde un distribuidor localizado
en la ciudad de Quito.
b. Producción del anticuerpo
Para la producción del anticuerpo se utilizarán 30 llamas, jeringuillas para la inoculación de
antígeno, jeringuillas para extraer el anticuerpo, centrífuga, tubos, una congeladora para
mantener las inmunoglobulinas purificadas. En este paso se incluye los insumos necesarios
relacionados al estado de salud del animal, dentro de estos incluyen, biometrías hemáticas,,
vacuna antirrábica, y de ser necesario pruebas microbiológicas para determinar patógenos
riesgosos infecciosos que podrían tener las llamas. (Los controles de salud del animal se
realizará una vez al mes)
c. Purificación
Para la purificación del anticuerpo se requiere de la importación de un kit de purificación de
Abbiote (empresa biotecnológica).
d. Validación in vitro
Se utilizará un kit de ELISA (Abbiotec)
e. Ensayos in vivo
Se utilizarán 15 ratones, en cada ratón se inocula 9 g de antisuero.
f. Distribución del producto
Para la distribución del antisuero se contratar camiones con congeladores incluidos dentro de
sus cabinas, así como el chofer del camión. Los viajes a provincia se realizarán cada 5 meses
ya que la producción de anticuerpos en camélidos tiene una duración aproximada 4 meses, y
el índice de mordeduras en el Ecuador es bajo.

4. Costos
Los costos asociados desde la producción hasta distribución al mercado de nanoanticuerpos a
partir de llama se detallan en la siguiente tabla.

Tabla 1.- Costos necesarios para la producción de nanoanticuerpos policlonales a partir de

llamas.

Producto Cantidad Costo ($) Total por ciclo

(aprox 4 meses)

Inmunización con 30 2.865 28.080

antígeno
 Llamas 30 Total: 6.800 6.800 (una sola vez)

Terreno para 1 100.000 100.000

mantener a las
llamas

Centrífuga 1 94.49 94,49

Control de salud 30 15 450

Vacuna antirrábica 30 3 90

Exámenes para 30 60 1.800

detección de
patógenos
(hemocultivos)

Suplemento 1 20 20
vitamínico

ELISA 30 100 300

Kit Purificación de 30 300 9.000

proteína G

Fraccionamiento IgG 30 800 24.000

Ratones (Mus 15 1,15 17,25

musculus)

Congeladora 1 334 340

Compra Camión 1 total: 28.000 28.000 (una sola

vez)

TOTAL 200.859,74

Nota: Los precios de las llamas, el terreno, la centrífuga, la vacuna, el suplemento

vitamínico, la congeladora y el camión se obtuvieron de la página de web de mercado libre de
productos disponibles para Ecuador. Los precios del resto de insumos fueron obtenidos a
partir de la página de ABBIOTEC, from biology to discovery (2018). ´

Tabla 2.- Costos relacionados con el personal

Costos mensuales Costo ($) Costo mensual ($)

adicionales

Sueldo 384/ investigador (4) 1.536

Conductor del camión 160/ cada 5 meses 32

 Publicidad 200 200

Servicios básicos 100 100

TOTAL 1.868

Una llama promedio produce 4500 mg de antisuero, por lo que con las 30 llamas por ciclo
que se están inmunizando se llegan a producir 135.000 mg de antisuero. Una vez definidos
los insumos y costos de producción, y personal necesarios para la implementación de Camel
Antibody Pharmaceutic para la elaboración de nanoanticuerpos se determinó el costo total
para la implementación y producción de 135.000 mg de nanoanticuerpos a partir de llama es
$200.859,74. por lo que este valor se encuentra dentro del precio establecido ($250.000) por
Dr. Pedro Aponte. El % de ganancia establecido y decidido por cada uno de los
investigadores fue de 40 %. Finalmente, el precio de venta al público en base a los detalles
establecidos en la Tabla 1 y 2 y el 40% de ganancias es $20.85 por cada frasco de 10 mg.
Cabe mencionar que cada ciclo tiene un tiempo aproximado de 4 meses por lo que
anualmente se tiene 3 ciclos.

5. Ventas
Tabla 3.- Productos vendidos en cada ciclo y anual

Número de Costo x Unidad ($) Venta x ciclo ($) Venta anual ($)
Unidades vendidas

13.500 20.85 281.475 844.425

Las ventas de Camel Body Pharmaceutic asumiendo que se vende el 100 % de los productos
elaborados (13.500 frascos) es de $281.475, 00 durante el primer ciclo es decir al 3 mes de
producción.

6. Amortización

Tabla 4.- Tabla de amortización durante un año de producción (3 ciclos/año)

Detalle 1er ciclo 2 do Ciclo Tercer ciclo

Ingresos 281.475,000 281.475,000 281.475,000

Egresos 200.859,74 65.535,25 65.535,25

Ganancia neta 80.615, 26 215.939,75 215.939,75

En el primer ciclo se recuperará la inversión inicial de 200.859,74 dólares considerando que

las ventas sean de un 100%. Debido a que es un producto nuevo en el mercado la tabla
considera que en el primer ciclo ya se recupera la inversión inicial, sin embargo, en el caso de
que las ventas no sean del 100% esto no ocurrirá. En la tabla se observa que la inversión
inicial es más de el doble que la que se hace en los ciclos siguientes, por lo tanto en los
siguientes ciclos al primero se tendrá una ganancia del 330% aproximadamente, demostrando
que la producción de anticuerpos es un negocio muy rentable. Hay que tomar en cuenta que
se tienen en algunos ciclos costos variables de mantenimiento del camión, abono del terreno
para que la hierba se mantenga y las llamas tengan siempre alimento, y si una llama muere o
cae enferma terminalmente hay que reponerla. De igual manera los equipos empleados
requieren mantenimiento al igual que el laboratorio en el cual ocurre el proceso.

7. Rentabilidad
Una vez amortizado el negocio, el emprendimiento producirá una ganancia de 215.939,75
por ciclo hasta terminar el pago total de la deuda inicial y con una muy buena rentabilidad
analizando tanto los egresos de producción y el ingreso de las ventas proyectados. De
acuerdo a este análisis hay una ganancia anual de 647.819,25 dólares, del total de las
ventas mensuales en un año. Este emprendimiento es muy rentable ya que es una
investigación muy innovadora y confiable para los tratamientos con la utilización de
inmunoglobulinas producidas en animales como un método de terapia o seroterapia eficiente
para enfermedades aquejantes y dolorosas. Este emprendimiento también se proyecta o se
incentiva su distribución a nivel mundial y se estima mantener una rentabilidad sustentable.

8. Anexos
Anexo 1.- Estructura convencional de un anticuerpo

Anexo 2.- Nanoanticuerpo producido a partir de suero de llama (posible resultado a obtener)
Anexo 3.- Descripción del diagrama de flujo del proceso de fabricación paso a paso para
anticuerpos.

Fuente: Roque et al., 2004

Anexo 4.- Frasco de 10 mg de antisuero (producto de venta al público).

9. Referencias Bibliográficas

Abbiotek. (2018). Llama Polyclonal Antibody Production. Recuperado el 22 de noviembre de

2018 desde: https://www.abbiotec.com/page/llama-polyclonal-antibody-production-
services

Benjamin, R. J., Cobbold, S. P., Clark, M. R., & Waldmann, H. (1986). Tolerance to rat
monoclonal antibodies. Implications for serotherapy. Journal of Experimental
Medicine, 163(6), 1539-1552.

Cobbold, S. P., Martin, G., Lovat, P. E., & Waldmann, H. (1985). Immunosuppression with
monoclonal antibodies—rules for effective serotherapy. In Microenvironments in the
Lymphoid System (pp. 789-795). Springer, Boston, MA.
Ecker, D., Dana, S., Howard, L. (2015). The therapeutic monoclonal antibody market. mAbs,
7:1, 9-14.

Forero, M., Wasserman, M. (1984). Comparación entre las técnicas de neutralización en ratón
y ELISA para determinar la potencia del anti-veneno Crotalus Durissus Terrificus.
Biomedica, 4 (3 y 4).

Goldman, E. R., Anderson, G. P., Liu, J. L., Delehanty, J. B., Sherwood, L. J., Osborn, L. E.,
... & Hayhurst, A. (2006). Facile generation of heat-stable antiviral and antitoxin
single domain antibodies from a semisynthetic llama library. Analytical chemistry,
78(24), 8245-8255.

Key, M. E., Bernhard, M. I., Hoyer, L. C., Foon, K. A., Oldham, R. K., & Hanna, M. G.
(1983). Guinea pig line 10 hepatocarcinoma model for monoclonal antibody
serotherapy: in vivo localization of a monoclonal antibody in normal and malignant
tissues. The Journal of Immunology, 130(3), 1451-1457.

Klutz, S., Holtmann, L., Lobedann, M., Schembecker, G. (2016). Costo evaluation of
antibody production processes in different operation modes. Chemical Engineering
Science. ELSEVIER.

Monzavi, K., Kieber, E. (2001). Current cepts in cancer in cancer vacccine strategies.
Biotechniques.

Nadler, L. M., Stashenko, P., Hardy, R., Kaplan, W. D., Button, L. N., Kufe, D. W., ... &
Schlossman, S. F. (1980). Serotherapy of a patient with a monoclonal antibody
directed against a human lymphoma-associated antigen. Cancer research, 40(9),
3147-3154.

Roque, A., Lowe, C., Taipa, A. (2004). Antibodies and genetically Engineered Related
Molecules: Production and Purification. University of Cambridge. V

Van Dijk y Van de Winkel. (2015). Human antibodies as next generation therapeutics.
Chem. Biol.